一種同時製備甜菊苷和萊鮑迪苷a的方法
2023-05-28 05:51:06
專利名稱：一種同時製備甜菊苷和萊鮑迪苷a的方法
技術領域：
本發明涉及甜菊苷和萊鮑迪苷A的分離製備方法。
技術背景甜葉菊為菊科植物甜葉菊(StiviarebaudianaBertoni)多年生草本植物， 原產於巴拉圭東北部與巴西接壤的阿曼拜山脈，幾百年來，當地居民食用和治 療疾病的常用原料。1977年後我屬開始引種栽培，至今己有安徽、黑龍江、江 蘇等20多個省市種植。甜葉菊具有芬芳、清涼的甜味，是因為其含有一類高甜度的成分-甜菊苷類 成分，該類成分不僅甜度是蔗糖的300倍以上，並且具有安全、無毒、低熱量 等無可比擬的優點，因此甜葉菊被譽為世界"第三糖源"。當今世界，由於攝入 過多的高能量食物(尤其是還有蔗糖、胺基酸等傳統甜味劑)，而承受肥胖症、 冠心病、高血壓糖尿病等疾病困擾的人越來越多，因此，對於甜葉菊中甜味成 分-甜菊糖苷類成分的開發應用就顯得愈發重要和迫切。隨著對甜葉菊糖苷類成 分研究的深入，人們還發現此類成分還具有降血糖、降血脂、抗高血壓等藥理 活性。甜菊糖苷類成分越來越被人認為是一種接近理想的甜味劑。因此，建立一種適合工業化生產的分離製備甜葉菊苷類成分的方法是十分 必要的。我們經過對甜葉菊成分、製備工藝、檢測方法等進行研究後，申請了 專利《一種同時製備甜葉菊總甜菊苷和甜葉菊總黃酮的方法》(申請號200710111313. 4)，《甜葉菊甜菊苷類和黃酮類提取物及其製備方法》(申請號200710111314. 9)，本發明報導同時分離製備高純度甜菊苷和萊鮑迪苷A的方法。 發明內容本發明的目的在於提供一種同時製備高純度甜菊苷和萊鮑迪苷A的方法，甜 菊苷和萊鮑迪苷A的純度高於85%，適合工業化生產。 本發明是通過如下技術方案實現的本發明涉及的同時製備高純度甜菊苷和萊鮑迪苷A方法為a)以乾燥的甜葉菊(StiviarebaudianaBerto)葉或新鮮採集的甜葉菊葉或其它部位為原料，用選自水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇或它們 的至少兩種混合物為溶劑進行提取，提取方法可以是煎煮、加熱回流、超聲提 取、冷浸、滲漉、微波提取、高壓提取等，優選的提取工藝為原料加10 95%乙醇，回流提取1 3次，每次提取0.5 2小時，溶劑用量為5 15倍量(L/kg)。b)將a)提取物通過選自樹脂吸附、聚醯胺層析柱、大孔樹脂吸附法、聚醯 胺層析法、矽膠柱層析法、反相柱層析法或S印hadex LH-20柱層析法、Toypearl 柱層析法或萃取法以及結晶法的一種或多種方式進行分離，用氯仿、甲醇、丙 酮、乙酸乙酯、正丁醇、丙醇、水或它們的至少兩種混合物為溶劑作為洗脫劑 進行洗脫。C)將b)中洗脫液合併，乾燥，加適量氯仿、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、 丙醇、水或它們的至少兩種混合物為溶劑進行重結晶，可以在加熱、常溫或冷 卻狀態下進行。d)將b)中洗脫液合併，乾燥，採用選自溶劑萃取法、大孔樹脂吸附法、聚醯 胺層析法、矽膠柱層析法、反相柱層析法或S印hadex LH-20柱層析法、Toypearl 柱層析法等方法中的一種或多種方法進行純化，分別得到甜菊苷和萊鮑迪苷A 的結晶。根據本發明，在步驟b)中，針對樹脂吸附法，樹脂可以選用D101型吸附樹脂， AB-8型吸附樹脂，HPD400型吸附樹脂，X-5型吸附樹脂，S_8型吸附樹脂以及其它型號 的聚苯乙烯型大孔吸附樹脂。進一步講，將甜葉菊提取物的7jC溶液或上清液，通過大孔樹脂吸附，用水或稀醇 進行洗脫，稀醇為乙醇、甲醇或丙醇，濃度為5-85%，用量為柱體積的2-6倍，再用 高濃度的醇洗脫，濃度為85-100%，根據檢測情況，合併洗脫液，回收溶劑，濃縮， 乾燥，得甜菊苷和萊鮑迪苷A的粗品。針對聚醯胺層析法，可選用柱層析法或靜態吸附法，聚醯胺可以選用10-100目 聚醯胺，水、乙醇、丙醇或丙酮等一種或多種洗脫，洗脫可以採用等度洗脫也可以採用梯度洗脫；進一步講，將甜葉菊提取物的水溶液或上清液通過30-60目聚醯胺樹脂柱，用水 或醇進行洗脫，醇為乙醇、甲醇或丙醇，濃度為5-95%，用量為柱體積的2-6倍，根 據檢測情況，收集此部分洗脫液或部分洗脫液，回收溶劑，濃縮，幹'燥，即得含有甜 菊苷和萊鮑迪苷A的粗品。在b)中所用的矽膠柱層析法中，可選用常壓或加壓柱層析，洗脫溶劑可選用 氯仿、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、丙醇、水或它們的至少兩種混合物為 溶劑，可以採用等度洗脫，也可以選用梯度洗脫。進一步講，將甜菊苷提取物進行矽膠拌樣，上樣結束後，採用氯仿-甲醇系 統或氯仿-甲醇-水系統，或正丁醇-水等溶劑系統進行洗脫，根據檢測情況，合 並洗脫液，回收溶劑，濃縮，乾燥，即得甜菊苷和萊鮑迪苷A純品，純度均在 90%以上。反相柱層析法或S印hadex LH-20柱層析法、Toypearl柱層析法，可以採用 常壓或加壓柱層析法，洗脫劑可選用氯仿、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、 丙醇、水或它們的至少兩種混合物為溶劑，可以採用等度洗脫，也可以選用梯 度洗脫。進一步講，用洗脫劑溶解含有甜菊苷和萊鮑迪苷A的樣品，樣品溶液通過層 析柱，用含水甲醇、含水乙醇、含水丙酮或含水乙腈或相關的純有機溶劑等進 行洗脫,，可以採用等度洗脫，也可以選用梯度洗脫，根據檢測情況，合併部分 洗脫劑，回收溶劑，濃縮，即得甜菊苷和萊鮑迪苷A純品，純度均在90%以上。根據本發明，C)中重結晶的溶劑優選為不同濃度的醇和丙酮，包括甲醇、 乙醇、丙醇等，將粗品溶解在不同體積的溶劑中，於0-l(TC靜置，放置5 60小時，取出，過濾，結晶乾燥後，即為高純度甜菊苷，純度在90%以上；母液繼 續放置於0-l(TC析晶，或放置於常溫下揮去部分溶劑，48小時後，過濾，結晶 乾燥後，即為高純度萊鮑迪苷A，純度在85%以上。根據本發明，所述乾燥為本領域常用的乾燥方法，如常壓乾燥、減壓乾燥、 冷凍乾燥或噴霧乾燥。
具體實施方式
以下實施例用於進一步說明本發明，但不意味這對本發明的任何限制。實施例l:高純度甜菊苷和萊鮑迪苷A的製備乾燥甜葉菊1Kg，加10倍量50%乙醇回流提取3次，每次提取1小時，合 並提取液，回收乙醇，減壓濃縮至IOL，離心，上清液通過已處理的聚醯胺樹脂 柱(5L)，上樣結束後，用4倍樹脂體積水洗脫，再用50%乙醇洗脫，經檢測， 甜菊苷和萊鮑迪苷A主要集中在水洗脫部分，收集水洗脫液，回收，濃縮，幹 燥，得含有甜菊苷和萊鮑迪苷A的粗品。精密稱取粗品1. 0g,加甲醇10mL溶解， 於2。C放置，靜置48小時後，取出，過濾，結晶減壓乾燥後，經HPLC檢測為甜 菊苷，純度為91.12%;母液敞口室溫放置12小時後，重新於2"C放置，48小時 後取出，過濾，結晶減壓乾燥後，經HPLC檢測，為萊鮑迪苷A，純度為90.80%。實施例2:高純度甜菊苷和萊鮑迪苷A的製備乾燥甜葉菊1Kg，加10倍量50%乙醇回流提取2次，每次提取1小時，合 並提取液，回收乙醇，減壓濃縮至IOL，離心，上清液通過已處理的聚醯胺樹脂 柱(5L)，上樣結束後，用4倍樹脂體積水洗脫，再用50%乙醇洗脫，經檢測， 甜菊苷和萊鮑迪苷A主要集中在水洗脫部分，收集水洗脫液，回收，濃縮，幹 燥，即得含有甜菊苷和萊鮑迪苷A的粗品。粗品加甲醇溶解，拌樣於160-200目空白矽膠，取已經充分溶脹的矽膠，裝柱，將拌樣矽膠上樣，用氯仿-甲醇系統梯度洗脫，經薄層色譜檢測，將分別含有甜菊苷和萊鮑迪苷A的流份合併， 回收溶劑，乾燥，經HPLC檢測，分別得到高純度的甜菊苷和萊鮑迪苷A，純度 均在90%以上。
權利要求
1、一種同時製備高純度甜菊苷和萊鮑迪苷A的方法，其特徵在於所用的原料為菊科植物甜葉菊(Stivia rebaudiana Bertoni)的乾燥葉或植株中的任一部位，或新鮮採集的同屬其它植物的葉或其它部位。
2、 如權利要求1所述的高純度甜菊苷和萊鮑迪苷A的製備方法，其特 徵為將權利要求1所述原料用水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇 或它們的至少兩種混合物為溶劑提取，回收溶劑後將提取物通過選自溶劑萃 取法、大孔樹脂吸附法、聚醯胺層析法、矽膠柱層析法、反相柱層析法或 S印hadex LH-20柱層析法、Toypearl柱層析法的一種或者多種方式分離， 採用結晶、重結晶、柱層析等方法進行純化。
3、 如權利要求2所述方法，其特徵在於原料的提取是在室溫或加熱狀 態下提取、超聲波振蕩儀超聲提取、微波提取等，提取次數可以是一次，也 可以是多次。
4、 如權利要求2所述的萃取法可以液-固萃取法，也可以是液-液萃取 法；所用萃取溶劑可以是水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、丙醇 或它們的至少兩種混合物為溶劑。
5、 如權利要求2所述方法，其特徵在於所述大孔樹脂吸附法中所用的 樹脂為聚苯乙烯型大孔吸附樹脂，洗脫溶劑選自水、乙醇、甲醇、丙酮和 丙醇或由它們組成的混合溶劑。
6、 如權利要求2所述方法，其特徵在於所述聚醯胺分離製備方法為柱 層析或靜態吸附過濾法，洗脫溶劑可以是水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、 正丁醇、丙醇或它們的至少兩種混合物為溶劑，洗脫時可以是等度也可以是 梯度。
7、 如權利要求2所述方法，其特徵在於所述矽膠柱分離製備方法為柱 層析法，洗脫劑可以是氯仿、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、丙醇、水或 它們的至少兩種混合物為溶劑，洗脫時可以是等度也可以是梯度。
8、 如權利要求2所述方法，其特徵在於所述反相柱層析法或S印hadex LH-20柱層析法、Toypearl柱層析法為常壓或加壓柱層析，洗脫劑選自含水乙腈、含水丙酮、含水乙醇、含水甲醇、含水丙醇等組成的洗脫劑或相關的 純有機溶劑，洗脫時可以是等度洗脫也可以是梯度洗脫。
9、 如權利要求2所述方法，其特徵在於所述結晶、重結晶的方法為在 室溫、加熱或冷凍狀態下進行，所用溶劑為氯仿、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、 正丁醇、丙醇、水或它們的至少兩種混合物為溶劑，重結晶次數可以是一次 也可以是多次。
10、 如權利要求2所述方法，其特徵在於所述柱層析純化法可以是權利 要求2所述的各種柱層析法的反覆應用，純化次數可以是一次，也可以是多 次。
全文摘要
本發明公開了一種高純度甜菊苷和萊鮑迪苷A的製備方法。該方法以甜葉菊(Stivia rebaudiana Bertoni)的乾燥葉或植株中的任一部位，或新鮮採集的同屬其它植物的葉或其它部位為原料，採用溶劑提取法、大孔樹脂吸附法、聚醯胺層析法、矽膠柱層析法、反相柱層析法或Sephadex LH-20柱層析法、Toypear1柱層析法的一種或者多種方式分離，採用結晶、重結晶、柱層析等方法進行純化，並結合乾燥等方法製備高純度甜菊苷和萊鮑迪苷A，純度均在85％以上，工藝簡單易行，適宜於產業化生產。
文檔編號C07H15/00GK101220062SQ200810000579
公開日2008年7月16日 申請日期2008年1月23日 優先權日2008年1月23日
發明者劉惠媛, 姜豔豔, 石任兵 申請人:石任兵