白喉IgG抗體檢測卡的製作方法

2023-05-27 21:29:41

專利名稱：白喉IgG抗體檢測卡的製作方法
技術領域：
本實用新型涉及免疫檢測技術領域，特別涉及一種用於快速檢測接種白喉疫苗後人體內是否產生抗白喉類毒素的IgG抗體的白喉IgG抗體檢測卡。
背景技術：
白喉疫苗是用白喉類毒素加入氫氧化鋁佐劑後製成，用於預防白喉。目前用於檢測接種白喉疫苗後人體內是否產生抗白喉類毒素IgG抗體，多採用酶聯免疫法(市售試劑盒，白喉IgG抗體測定試劑盒(酶聯免疫法))，該方法是將免疫接種白喉疫苗的人血清進行稀釋後，加到包被白喉桿菌類毒素抗原的微孔板中，37°C孵育I小時後，洗滌數次，加抗人IgG酶標記物，再經過洗滌、加底物顯色，根據樣品OD值的大小，判斷人血清中是否含有抗白喉桿菌類毒素的IgG抗體。該方法存在的技術問題1、操作繁瑣試驗步驟較多。待檢血清或血漿需進行稀釋，前兩個反應步驟需進行數次洗滌，最後酶標儀讀取OD值；2、耗時長試驗過程中三個步驟(加樣品、酶標記物、底物)均需37°C孵育，加上洗滌時間，整個試驗需要耗時3小時。

實用新型內容本實用新型所要解決的技術問題是提供一種白喉IgG抗體檢測卡，它能快速檢測接種白喉疫苗後人體內是否產生抗白喉類毒素的IgG抗體，檢測操作簡便，生產成本低。本實用新型解決上述技術問題所採用的技術方案是一種白喉IgG抗體檢測卡，包括襯墊、樣品墊、玻璃纖維墊、層析膜和吸收墊；所述樣品墊、玻璃纖維墊、層析膜和吸收墊以水平方向順序相接並固定在所述襯墊上；並且所述玻璃纖維墊上噴塗有帶標記的彩色膠乳顆粒；所述層析膜上設置由白喉類毒素構成的試驗線、以及與所述試驗線平行的對照線；並且所述試驗線位於樣品墊和對照線之間。所述試驗線是將純化的白喉類毒素作為抗原固定在層析膜上形成。所述白喉類毒素是用白喉桿菌菌種在適宜的培養基中培養產生的毒素，經甲醛脫毒、精製而成。上述技術方案中，所述樣品墊和吸收墊均採用具有吸水性能的材料製備而成，可以均為市售的濾紙製成，優選吸水性能較強的定性濾紙，採用定性濾紙利於檢測，增加檢測速度。所述層析膜為市售硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜又稱NC膜，在膠體金試紙中用做C/T線的承載體，同時也是免疫反應的發生處。採用的硝酸纖維素膜型號135s、170s或180s(以秒為單位的定義每4cm膜，水的層析時間是多少秒)。所述玻璃纖維墊是玻璃纖維製品的一種。玻璃纖維是一種性能優異的無機非金屬材料。英文原名為Glassfiber,成分為二氧化矽、氧化鋁、氧化鈣、氧化硼、氧化鎂、氧化鈉等。它是以玻璃球或廢丨日玻璃為原料經高溫熔制、拉絲、絡紗、織布等工藝，最後形成各類產品，玻璃纖維單絲直徑從幾個微米到二十幾個微米，相當於一根頭髮絲的1/20-1/50，每束纖維原絲都有數百根甚至上千根單絲組成，通常作為復材料中的增強材料，電絕緣材料和絕熱保溫材料，電路基板等，廣泛用於國民經濟各個領域。[0008]所述玻璃纖維墊上均勻噴塗有帶標記的彩色膠乳顆粒，彩色膠乳顆粒一般採用紅色的膠乳顆粒，這樣顯色明顯；膠乳顆粒上進行標記的方法在本領域為常規技術手段，發明人在此不做贅述。彩色膠乳顆粒帶的標記可以與人血清樣品中的IgG抗體結合。作為優選,所述玻璃纖維墊為噴塗有帶金黃色葡萄球菌A蛋白(StaphylococalProtein A，SPA)標記的彩色膠乳顆粒的玻璃纖維墊。金黃色葡萄球菌A蛋白是一種從金黃色葡萄球菌細胞壁分離的蛋白質。由於SPA能與人、鼠、兔等的IgG的Fe端結合，成為免疫學上一種極為有用的工具。所述對照線是將SPA固定在層析膜上形成的對照線。所述對照線與標記物對應。作為優選，所述玻璃纖維墊為噴塗有帶鼠抗人IgG單克隆抗體標記的彩色膠乳顆粒的玻璃纖維墊。鼠抗人IgG單克隆抗體是一種較好的標記物。所述對照線是將羊抗鼠IgG抗體固定在層析膜上形成的對照線。羊抗鼠IgG抗體又稱羊抗鼠IgG多克隆抗體。羊抗鼠IgG (免疫球蛋白)多克隆抗體在膠體金法快速抗體診斷產品中用來固定於硝酸纖維素膜上，與膠體金標記的單克隆抗體發生特異性免疫反應並顯示一定的顏色，形成對照線進行免疫診斷。本實用新型的檢測原理是本實用新型的檢測是在層析作用的推動下完成的。當血清樣品被添加至樣品墊上後，通過層析作用到達玻璃纖維墊，血清樣品中的IgG抗體與標記的彩色膠乳顆粒結合形成結合顆粒，然後進一步至層析膜上，在層析膜的層析作用下，結合顆粒向前移動，如血清中含有抗白喉桿菌類毒素的抗體時(即接種白喉疫苗後應產生此抗體)，與相應的試驗線結合，呈現顆粒的顏色線條，未結合的顆粒會繼續向前移動，與對照線結合呈現顆粒的顏色線條，即顯示試驗線和對照線兩條顏色線；如血清中不含有抗白喉桿菌的抗體時，顆粒與相應的試驗線的抗原無法結合，試驗線不顯色，未結合的顆粒會繼續向前移動，與對照線結合呈現顆粒的顏色線條，即只顯示對照線一條顏色線。因膜層析速度較快，幾分鐘內帶標記彩色膠乳顆粒即可移動完整個層析膜條，立刻可以判讀結果，如試驗線和對照線均顯色，血清抗體為陽性；只有對照線一條線顯色，血清抗體為陰性。綜上所述，本實用新型的有益效果是(I)抗白喉桿菌類毒素IgG抗體是接種白喉疫苗後人體內產生的一種特異性保護抗體。人體內只有具有這種特異性保護抗體時，才能在人體接觸到白喉桿菌時將其產生的有強烈致病作用的白喉毒素中和而不被感染。本實用新型不僅填補了市場上沒有白喉IgG抗體檢測卡的空白，而且能快速、有效地檢測人接種疫苗後體內是否產生了這種特異性保護抗體。(2)只需將待檢樣品用生理鹽水1:1稀釋，直接加到本實用新型的樣品墊上即可，操作十分簡便；樣品加到本實用新型樣品墊上，10分鐘肉眼即可觀測檢測結果，進行判定，整個檢測耗時約15分鐘，耗時短。

圖1是實施例1的俯視圖；圖2是實施例1的剖視圖。圖中標記相對應的部件名稱是1_樣品墊，2-玻璃纖維墊，3-試驗線，4-對照線，5-層析膜，6-吸收墊，7-襯墊。
具體實施方式
下面通過具體實施例，並結合附圖，對本實用新型的技術方案作進一步的具體說明。實施例1如圖1和2所示，一種白喉IgG抗體檢測卡，包括襯墊7，襯墊7的主體為塑料墊，塑料墊的表面塗覆有不乾膠，所述襯墊7上沿水平方向依次固定具有吸水性能的樣品墊I(濾紙，上海金標生物技術有限公司)、玻璃纖維墊2 (Ahlstrom 8964玻纖，上海傑一生物技術有限公司，型號JY-J101)、層析膜5 (硝酸纖維素膜，Millipore公司，型號135s)和具有吸水性能的吸收墊6 (濾紙，上海金標生物技術有限公司)。所述玻璃纖維墊2為均勻噴塗有帶SPA標記的紅色膠乳顆粒(紅色聚苯乙烯膠乳顆粒，上海傑一生物技術有限公司，型號PSR030N)的玻璃纖維墊，膠乳顆粒進行標記的方法為本領域公知技術，在此不作贅述。所述層析膜5上設置試驗線3和對照線4，所述試驗線3和對照線4平行；並且試驗線3位於樣品墊I和對照線3之間。所述試驗線3是將滅活的純化白喉桿菌類毒素抗原(武漢生物製品研究所有限責任公司)固定在層析膜5上形成。所述對照線4是將SPA (市售，鄭州百基生物技術有限公司)固定在層析膜5上形成。純化白喉桿菌類毒素抗原、SPA固定方法均為本領域公知技術，在此不作贅述。本實用新型中，所述樣品墊1、玻璃纖維墊2、層析膜5和吸收墊6以水平方向順序相接。具體地，所述樣品墊1、玻璃纖維墊2、層析膜5和吸收墊6順序相接的方式是部分重疊的，即樣品墊I的尾端搭接在玻璃纖維墊2上，玻璃纖維墊2的尾端搭接在層析膜5的首端上，吸收墊6的首端搭接在層析膜5的尾端上。實施例2本實施例與實施例1基本相同，其不同部分僅在於所述玻璃纖維墊2為均勻噴塗有帶鼠抗人IgG單克隆抗體標記的彩色膠乳顆粒的玻璃纖維墊，所述對照線4為將羊抗鼠IgG抗體固定在層析膜5上形成。實施例3本實施例與實施例1基本相同，其不同部分僅在於所述樣品墊1、玻璃纖維墊2、層析膜5和吸收墊6的順序相接的方式是首尾連接並且沒有重疊的。實施例4本實施例與實施例3基本相同，其不同部分僅在於所述玻璃纖維墊2為噴塗有帶鼠抗人IgG單克隆抗體標記的彩色膠乳顆粒的玻璃纖維墊，所述對照線4為將羊抗鼠IgG抗體固定在層析膜5上形成。本實用新型使用時，只需將待檢樣品用生理鹽水1:1稀釋，直接加到本實用新型的樣品墊上即可，操作十分簡便；樣品加到本實用新型樣品墊上，10分鐘肉眼即可觀測檢測結果，進行判定，如試驗線3和對照線4均顯色，血清抗體為陽性；只有對照線4 一條線顯色，血清抗體為陰性。整個檢測耗時約15分鐘，耗時短。[0034]以上所述的實施例只是本實用新型的一種較佳的實施方案，並非對本實用新型任何形式上的限制，在不超過權利要求所記載的技術方案的前提下還有其它的變體以及改型。
權利要求1.一種白喉IgG抗體檢測卡，包括襯墊(7)，其特徵在於，還包括樣品墊(I)、玻璃纖維墊(2)、層析膜(5)和吸收墊￠);所述樣品墊(I)、玻璃纖維墊(2)、層析膜(5)和吸收墊(6)以水平方向順序相接並固定在所述襯墊(7)上；並且所述玻璃纖維墊(2)上噴塗有帶標記的彩色膠乳顆粒；所述層析膜(5)上設置由白喉類毒素構成的試驗線(3)、以及與所述試驗線⑶平行的對照線⑷；並且所述試驗線⑶位於樣品墊⑴和對照線⑷之間。
2.根據權利要求1所述的白喉IgG抗體檢測卡，其特徵在於，所述玻璃纖維墊(2)為噴塗有帶SPA標記的彩色膠乳顆粒的玻璃纖維墊(2)，所述對照線(4)為SPA固定在層析膜(5)上形成的對照線。
3.根據權利要求1所述的白喉IgG抗體檢測卡，其特徵在於，所述玻璃纖維墊(2)為噴塗有帶鼠抗人IgG單克隆抗體標記的彩色膠乳顆粒的玻璃纖維墊(2)，所述對照線(4)為羊抗鼠IgG抗體固定在層析膜(5)上形成的對照線(4)。
專利摘要本實用新型公開了一種白喉IgG抗體檢測卡，包括襯墊、樣品墊、玻璃纖維墊、層析膜和吸收墊；所述樣品墊、玻璃纖維墊、層析膜和吸收墊以水平方向順序相接並固定在所述襯墊上；並且所述玻璃纖維墊上噴塗有帶標記的彩色膠乳顆粒；所述層析膜上設置由白喉類毒素構成的試驗線、以及與所述試驗線平行的對照線；並且所述試驗線位於樣品墊和對照線之間。本實用新型白喉IgG抗體檢測卡不僅填補了市場上沒有白喉IgG抗體檢測卡的空白，而且能快速、有效地檢測人接種疫苗後體內是否產生了這種特異性保護抗體。
文檔編號G01N33/577GK202854151SQ20122059193
公開日2013年4月3日 申請日期2012年11月9日 優先權日2012年11月9日
發明者範亞民, 李曉霞 申請人:寧波天潤生物藥業有限公司