一種西花薊馬成蟲的解剖方法
2023-05-27 23:52:31 1
一種西花薊馬成蟲的解剖方法
【專利摘要】本發明涉及一種西花薊馬成蟲的解剖方法，所述的方法包括以下步驟：步驟a，收集西花薊馬成蟲，短時浸泡於盛有PBS緩衝液的培養皿中，靜置，收集底部的蟲體；步驟b，用細毛筆將蟲體固定在盛有薄層緩衝液的凹玻片凹槽處，蟲體的腹面向上，放於解剖境下解剖；步驟c，用解剖針挑開腹部末端幾節的節間膜；步驟d，左手用鑷子按住頭部，右手用另一把鑷子夾往腹部末端輕輕向後拉開，這樣，整個生殖器官和消化器官就可以完整地暴露在外。採用本解剖方法，可以比較完整的得到西花薊馬成蟲的內部結構，便於了解銼吸式口器昆蟲內部器官的生理結構；對不同時期卵巢結構的觀察，便於了解卵巢的發育進程，為西花薊馬的預測預報提供了理論基礎。
【專利說明】-種西花薊馬成蟲的解剖方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及昆蟲解剖領域，尤其涉及一種西花薊馬成蟲的解剖方法。
【背景技術】
[0002] 西花薊馬Frankliniella occidentalis (Pergande)屬於糹嬰翅目，薊馬科，花薊馬 屬。西花薊馬的寄主範圍較廣，目前已知的有60個科的500多種植物，包括重要豆科、十字 花科、葫蘆科等蔬菜和菊科、鳳仙花科、薔薇科等花卉，隨著西花薊馬的擴散蔓延，其寄主種 類將會不斷增加。
[0003] 西花薊馬首次記載於1895年，源自美國和加拿大西部洛基山脈，20世紀80年代 後，隨著國際貿易迅速發展，西花薊馬隨著花卉、苗木、蔬菜等的調運，迅速向外擴散，成為 一種世界性的農業害蟲。已廣泛分布於美國、加拿大、夏威夷、澳大利亞、哥倫比亞、英國、匈 牙利、波蘭、斯洛伐克、日本、瑞典、中國等69個國家。2003年6月，西花薊馬在北京市海澱 區大棚辣椒上暴發，隨後該蟲在我國各地陸續有報導，目前已成為我國露地和溫室蔬菜生 產的重要害蟲，且危害逐年加重。
[0004] 西花薊馬以銼吸式口器刺吸寄主植物的葉、芽、花和果實，尤其喜歡取食寄主植物 的幼嫩部位。被取食葉片初呈白色斑點，正面似斑點病害，背面則有黑色蟲糞，嚴重為害時， 葉片變小、嫩葉皺縮捲曲，甚至黃化、乾枯甚至凋萎。西花薊馬還能傳播多種病毒病，其中危 害性較大的是番茄斑點萎蔫病毒和鳳仙壞死斑點病毒，這兩種病毒能感染多種重要的農作 物，造成重大的經濟損失。
[0005] 西花薊馬有很強的環境適應性，而且繁殖力也很強。近年來，隨著全球氣溫變暖， 再加上農藥的濫用，導致抗高溫、抗藥種群的泛濫，西花薊馬的泛濫帶來農業災害，需對其 進行研究，目前尚未存在有效的西花薊馬解剖方法。
[0006] 鑑於上述缺陷，本發明創作者經過長時間的研究和實踐終於獲得了本創作。
【發明內容】
[0007] 本發明的目的在於提供一種西花薊馬成蟲的解剖方法，用以克服上述技術缺陷。
[0008] 為實現上述目的，本發明提供一種西花薊馬成蟲的解剖方法，所述的方法包括以 下步驟：
[0009] 步驟a，收集西花薊馬成蟲，短時浸泡於盛有PBS緩衝液的培養皿中，靜置，收集底 部的蟲體；
[0010] 步驟b，用細毛筆將蟲體固定在盛有薄層緩衝液的凹玻片凹槽處，蟲體的腹面向 上，放於解剖境下解剖；
[0011] 步驟c，用解剖針挑開腹部末端幾節的節間膜；
[0012] 步驟d，左手用鑷子按住頭部，右手用另一把鑷子夾往腹部末端輕輕向後拉開，這 樣，整個生殖器官和消化器官就可以完整地暴露在外。
[0013] 進一步地，所述PBS緩衝液為無菌緩衝液，其配方的各化合物的濃度為：
[0014] NaH2P04 0. 2mol/L
[0015] Na2HP04 0. 2mol/L
[0016] PH 為 7. 4。
[0017] 進一步地，在上述步驟a中，蟲體在PBS緩衝液中浸泡時間為4?5min。
[0018] 進一步地，上述步驟d中，應保證凹槽處有薄薄的緩衝液，這樣就能藉助滲透壓和 表面張力將內部器官拉出。
[0019] 進一步地，解剖過程涉及的試劑和器材經高壓滅菌，即於122°C，0.4MPa的壓力 下，滅菌1小時。
[0020] 進一步地，收集卵巢，加入液氮後研磨，按照常規方法可以抽提出DNA或RNA，用於 分子生物學分析。
[0021] 與現有技術相比較本發明的有益效果在於：本發明的優點為：在PBS緩衝緩衝溶 液浸泡下，可使得蟲體變得軟化，很容易用解剖針挑破節間膜，且不會破壞內部結構；用鑷 子夾往腹部末端輕輕向後拉時能保證結構的完整程度。進而更全面深入的了解蟲體內部器 官的構造和卵巢的發育進程。
[0022] 採用本解剖方法，可以比較完整的得到西花薊馬成蟲的內部結構，便於了解銼吸 式口器昆蟲內部器官的生理結構；對不同時期卵巢結構的觀察，便於了解卵巢的發育進程， 為西花薊馬的預測預報提供了理論基礎。
【具體實施方式】
[0023] 以下，對本發明上述的和另外的技術特徵和優點作更詳細的說明。
[0024] 本發明西花薊馬成蟲的解剖方法，可以適用於不同發育歷期的蟲態，操作方便；而 且利用該方法得到的生殖系統的結構完整，沒有損傷。
[0025] 其具體過程為：
[0026] 步驟a，收集西花薊馬成蟲，短時浸泡於盛有PBS緩衝液的培養皿中，靜置，收集底 部的蟲體；
[0027] 步驟b，用細毛筆將蟲體固定在盛有薄層緩衝液的凹玻片凹槽處，蟲體的腹面向 上，放於Leica KL2000 LED解剖境下解剖；
[0028] 步驟c，用解剖針挑開腹部末端幾節的節間膜；
[0029] 步驟d，左手用鑷子按住頭部，右手用另一把鑷子夾往腹部末端輕輕向後拉開，這 樣，整個生殖器官和消化器官就可以完整地暴露在外。
[0030] 上述技術方案中，所述PBS緩衝液（磷酸緩衝液）的配方的各化合物的濃度為：
[0031] NaH2P04 0. 2mol/L
[0032] Na2HP04 0. 2mol/L
[0033] 溶液的PH值為7.4。
[0034] 上述技術方案中涉及的解剖器材包括：醫用鑷子、解剖針、培養皿、凹玻片、細針 管。
[0035] 上述方案中，用解剖針挑開腹部末端幾節的節間膜時，注意用力不要過大，否則會 傷到內部器官；用鑷子夾往腹部末端輕輕向後拉時，保證凹玻片凹槽處有薄薄的緩衝液，這 樣內部結構就能在滲透壓的作用下往外滲出，如果向後拉時沒有什麼變化，應用鑷子輕輕 的從腹部頂端向末端趕，然後再往外拉，這樣就能保證結構的完整程度。
[0036] 本發明所得的內部結構可以應用於生殖系統的構造和卵巢發育分級的初步觀察。 將解剖出來的卵巢在800倍Leica顯微鏡下進行觀察，根據卵巢管特徵，可確定卵巢的發育 進程。
[0037] 本方案所得的卵巢還可以應用於分子生物學分析領域，具體包括以下步驟：收集 卵巢，加入液氮後研磨，按照常規方法可以抽提出DNA或RNA，用於分子生物學分析。
[0038] 下面通過實施例對本發明的上述方案進行說明：
[0039] 其中涉及的解剖器材包括：
[0040] 醫用鑷子（11cm，尖度0. 1*0. 01)、解剖針、培養皿（9cm)、PBS緩衝液 (NaH2P040. 2mol/L，Na2HP040. 2mol/L)、細針管（5mL)、凹玻片；
[0041] 實施案例一：一種西花薊馬成蟲的解剖方法，用於消化系統分析。
[0042] 將西花薊馬成蟲放入盛有PBS緩衝液培養皿中浸泡4?5分鐘；用細毛筆將蟲體 固定在盛有薄層緩衝液的凹玻片凹槽處，蟲體的腹面向上；用解剖針挑開腹部末端幾節的 節間膜；左手用鑷子按住頭部，右手用另一把鑷子夾往腹部末端輕輕向後拉，用細針管吸取 緩衝液衝洗拉出的器官，然後用解剖針分離出消化道，在800倍Leica顯微鏡下觀察結構。 [0043] 實施案例二：一種西花薊馬成蟲的解剖方法，用於生殖系統分析。
[0044] 將西花薊馬成蟲放入盛有PBS緩衝液培養皿中浸泡4?5分鐘；用細毛筆將蟲體 固定在盛有薄層緩衝液的凹玻片凹槽處，蟲體的腹面向上；用解剖針挑開腹部末端幾節的 節間膜；左手用鑷子按住頭部，右手用另一把鑷子夾往腹部末端輕輕向後拉，用細針管吸取 緩衝液衝洗拉出的器官，然後用解剖針分離出卵巢，在800倍Leica顯微鏡下觀察卵巢結 構。
[0045] 實施案例三：一種西花薊馬成蟲的解剖方法，用於卵巢發育進程分析。
[0046] 將西花薊馬不同發育時期的成蟲放入盛有PBS緩衝液培養皿中浸泡4?5分鐘； 用細毛筆將蟲體固定在盛有薄層緩衝液的凹玻片凹槽處，蟲體的腹面向上；用解剖針挑開 腹部末端幾節的節間膜；左手用鑷子按住頭部，右手用另一把鑷子夾往腹部末端輕輕向後 拉，用細針管吸取緩衝液衝洗拉出的器官，然後用解剖針分離出卵巢，在800倍Leica顯微 鏡下觀察不同發育時間的卵巢結構，確定發育進程。
[0047] 實施案例四：一種西花薊馬成蟲的解剖方法，用於高溫處理蟲體卵巢發育分析。
[0048] 將高溫熱激的西花薊馬不同發育時期的成蟲放入盛有PBS緩衝液培養皿中浸泡 4?5分鐘；用細毛筆將蟲體固定在盛有薄層緩衝液的凹玻片凹槽處，蟲體的腹面向上；用 解剖針挑開腹部末端幾節的節間膜；左手用鑷子按住頭部，右手用另一把鑷子夾往腹部末 端輕輕向後拉，用細針管吸取緩衝液衝洗拉出的器官，然後用解剖針分離出卵巢，在800倍 Leica顯微鏡下觀察高溫處理的不同發育時間的卵巢結構。
[0049] 採用本解剖方法，可以比較完整的得到西花薊馬成蟲的內部結構，便於了解銼吸 式口器昆蟲內部器官的生理結構；對不同時期卵巢結構的觀察，便於了解卵巢的發育進程， 為西花薊馬的預測預報提供了理論基礎。
[0050] 以上所述僅為本發明的較佳實施例，對發明而言僅僅是說明性的，而非限制性的。 本專業技術人員理解，在發明權利要求所限定的精神和範圍內可對其進行許多改變，修改， 甚至等效，但都將落入本發明的保護範圍內。
【權利要求】
1. 一種西花薊馬成蟲的解剖方法，其特徵在於，所述的方法包括以下步驟： 步驟a，收集西花薊馬成蟲，短時浸泡於盛有PBS緩衝液的培養皿中，靜置，收集底部的 蟲體； 步驟b，用細毛筆將蟲體固定在盛有薄層緩衝液的凹玻片凹槽處，蟲體的腹面向上，放 於解剖境下解剖； 步驟c，用解剖針挑開腹部末端幾節的節間膜； 步驟d，左手用鑷子按住頭部，右手用另一把鑷子夾往腹部末端輕輕向後拉開， 這樣，整個生殖器官和消化器官就可以完整地暴露在外。
2. 根據權利要求1所述的西花薊馬成蟲解剖方法，其特徵在於，所述PBS 緩衝 液為無菌緩衝液，其配方的各化合物的濃度為： NaH2P04 0. 2mol/L Na2HP04 0. 2mol/L PH 為 7.4。
3. 根據權利要求2所述的西花薊馬成蟲解剖方法，其特徵在於，在上述步驟a中，蟲體 在PBS緩衝液中浸泡時間為4?5min。
4. 根據權利要求1所述的西花薊馬成蟲解剖方法，其特徵在於，上述步驟d中，應保證 凹槽處有薄薄的緩衝液，這樣就能藉助滲透壓和表面張力將內部器官拉出。
5. 根據權利要求1所述的西花薊馬成蟲解剖方法，其特徵在於，解剖過程涉及 的試劑和器材經高壓滅菌，即於122°C，0. 4MPa的壓力下，滅菌1小時。
6. 根據權利要求1所述的西花薊馬成蟲解剖方法，其特徵在於，收集卵巢，加入液氮後 研磨，按照常規方法可以抽提出DNA或RNA，用於分子生物學分析。
【文檔編號】A61B16/00GK104146735SQ201410418101
【公開日】2014年11月19日 申請日期:2014年8月19日 優先權日:2014年8月19日
【發明者】鄭長英, 馬亞斌, 張彬, 史光華, 孫麗娟, 王思芳, 李洪剛, 張瑜, 馮志國, 顧松東, 鄭伯平, 張乃芹, 王俊平 申請人:青島農業大學