一種用啤酒廢渣生產環鏈擬青黴菌劑的方法

2023-05-27 23:56:51 1

專利名稱：一種用啤酒廢渣生產環鏈擬青黴菌劑的方法
技術領域：
本發明涉及一種生產環鏈擬青黴菌劑方法，具體地說是涉及一種用啤酒廢渣生產 環鏈擬青黴菌劑的方法。
背景技術：
環鏈擬青黴(ecilomyces cateniannulatus)能夠防治多種農作物害蟲，利用環鏈 擬青黴的真菌製劑進行農作物害蟲的防治具有巨大的潛力。已經進行了哺乳動物急慢性毒 理試驗，對哺乳動物安全，多名學者研究指出林間的環鏈擬青黴的存在量較大，對多種林間 田間的害蟲有生物防治作用。啤酒廢渣的主要成分是麥殼和殘留的澱粉、蛋白質等。啤酒廢水主要是啤酒廠的 偏鹼性的洗瓶、洗灌水，含有多種營養物質和微量元素，適宜微生物生長。據有關統計資料， 我國啤酒年產已達4000萬t，按每生產1萬t啤酒產幹渣280t計，啤酒行業每年的啤酒幹 渣產出量達112萬t以上，目前國內啤酒廠家的啤酒廢渣大多數沒有進行深加工利用，較多 情況是出售給農戶成為飼料使用，而根據研究指出，家禽甚至豬等動物食用啤酒渣後可能 會出現「啤酒渣中毒」現象。所以導致大量的啤酒渣被廢棄，汙染環境，甚至成為多種有害 微生物滋長的溫床。在現在的農作物生產中，廣泛使用化學農藥，雖然防治效果較好，但是化學農藥制 劑高毒性、高殘留的特性汙染環境，汙染農產品，農產品中農藥超標造成中毒，農產品被勒 令退回甚至罰沒銷毀的事件時有發生。農藥的生產又大量使用社會緊缺的資源和能源，造 成了大量的溫室氣體的排放。鑑於此，採用生物方法防治農作物害蟲代替傳統的化學防治 成了必然趨勢。由於啤酒渣中含有大量的沒有被完全利用的碳源氮源物質，且碳氮比較高，故被 微生物利用後前期產酸性就十分嚴重，嚴重抑制真菌的生長，故國內外均較少利用啤酒渣 作為培養基主體培養真菌等微生物。迄今尚未見有用啤酒廢渣作為原料生產環鏈擬青黴菌的相關報導。

發明內容
本發明的目的旨在提供一種用啤酒廢渣生產環鏈擬青黴菌劑的方法，解決了以啤 酒渣作為主體培養生防真菌的問題。該方法既可以提供高效無毒的生物防治菌劑，又可以 解決啤酒廢渣排放的問題。本發明解決其技術問題所採用的技術方案是一種用啤酒廢渣生產環鏈擬青黴菌 劑的方法，包括如下步驟步驟一一級培養，用馬鈴薯_葡萄糖瓊脂培養基PDA斜面上，裝成試管斜面，接種 環鏈擬青黴菌種，在20-25°C培養7-14天；得到純種斜面培養物；步驟二 二級培養，培養液按重量百分比計5-25%啤酒廢渣、75-95%啤酒廢水， 配比混合，調PH值5-9 ；經高壓滅菌後接種一級培養的純種斜面培養物，通氣震蕩培養，於
3在12-28°C下培養6-14天；得到純種液體培養物；步驟三三級培養，按重量百分比計，培養基組分為85-99%的啤酒廢渣、1-5%的 氯化鈉、5-15%的廢酵母泥提取物與2%碳酸鈣混合，溼度在RH40-75之間，接種二級培養 的純種液體培養物，於在12_28°C下培養6-14天；乾燥後成為餅塊狀或顆粒狀固體培養物。優選技術方案是，所述的一級培養是在24°C _26°C培養7-9天；所述的二級培養中 培養液是啤酒廢渣啤酒廢水的重量比為20 80 ；培養條件為24°C-26°C、PH 7-7.5，震 蕩培養7-9天；所述的三級培養是重量比為90%啤酒廢渣、氯化鈉和9%啤酒酵母泥培 養基，在溼度RH60-70培養10-12天。所述的步驟三中乾燥方法為自然晾乾或低於40°C低溫烘乾。與已有技術相比，本發明有益效果體現在本發明的最大特點在於對啤酒廢渣中的營養成分的綜合利用，且由於採用三步法 培養，解決原本不適宜用在生產環鏈擬青黴菌劑的啤酒廢渣的問題。試驗表明，用此法生產的環鏈擬青黴菌劑，每克樣品含3X 108-9.5X 109孢子，按 照每平方米3克的使用量播撒到農田中，可有效降低蟲口密度。環鏈擬青黴菌劑作為一種 新型生物防治菌劑，可用於溫帶，亞熱帶、熱帶田間和寒帶、溫帶，亞熱帶、熱帶的溫室或大 棚的農作物害蟲防治中。有效的降低蟲口密度，提高農作物產量，減少化學農藥的使用，提 高農產品在國際市場的競爭力。並用啤酒的廢料製造該菌劑，使廢料資源化，減少環境汙染 壓力，提高啤酒廢渣利用率，增加其附加價值。下面通過具體實施例來進一步說明本發明。
具體實施例方式實施例1 用啤酒廢渣生產環鏈擬青黴菌劑將純化的環鏈擬青黴菌種接種到馬鈴薯-葡萄糖瓊脂培養基PDA斜面上，在 20-25 °C培養8天。用5克啤酒廢渣，95克啤酒廢水，鹽酸和氫氧化鈉調PH值至6. 5-7. 5，高 壓滅菌後接種一級培養的環鏈擬青黴，25°C培養8天。再取85克榨乾的啤酒廢渣、5克廢酵 母泥提取物、1克氯化鈉和1克碳酸鈣接種等量二級培養物，於25°C培養10天，溼度RH50。 風乾後成餅塊狀，乾燥方法為自然晾乾或低於40°C低溫烘乾。稱取1克菌劑，於組織搗碎機內加水攪散，定容至100ml，用血球計數板法計算得 出，每克含孢子3. 5X108個。實施例2 用啤酒廢渣生產環鏈擬青黴菌劑將純化的環鏈擬青黴菌種接種到馬鈴薯-葡萄糖瓊脂培養基PDA斜面上，在 20-25°C培養8天。用20克啤酒廢渣，80克啤酒廢水，鹽酸和氫氧化鈉調PH值至6. 5-7. 5， 高壓滅菌後接種一級培養的環鏈擬青黴，25°C培養8天。再取95克榨乾的啤酒廢渣、15克廢 酵母泥提取物、1克氯化鈉和1克碳酸鈣接種等量二級培養物，於25°C培養10天溼度RH50。 風乾後成餅塊狀。稱取1克菌劑，於組織搗碎機內加水攪散，定容至100ml，用血球計數板法計算得 出，每克含孢子5. 5X109個。實施例3 用啤酒廢渣生產環鏈擬青黴菌劑將純化的環鏈擬青黴菌種接種到馬鈴薯-葡萄糖瓊脂培養基PDA斜面上，在20-25 °C培養8天。用25克啤酒廢渣、75克啤酒廢水，鹽酸和氫氧化鈉調PH值至6. 5-7. 5， 高壓滅菌後接種一級培養的環鏈擬青黴，25°C _26°C培養8天。再取85克榨乾的啤酒廢渣、 15克廢酵母泥提取物、1克氯化鈉和2克碳酸鈣接種等量二級培養物，於25°C培養10天。 風乾後成餅塊狀。稱取1克菌劑，於組織搗碎機內加水攪散，定容至100ml，用血球計數板法計算得 出，每克含孢子8. 5X109個。實施例4 用啤酒廢渣生產環鏈擬青黴菌劑對蚜蟲的致病性試驗。用純化的環鏈擬青黴菌種集中到一級培養斜面，25°C培養7天，接種到二級培養， 再在25-27°C培養7天，接種到三級培養，26°C培養10天。風乾後成餅狀。經此培養後的1 克菌劑經血球計數板計數，每克含菌劑孢子9 X109個。將本實施例的菌劑1克倒入適量的 0. 05%土溫-80溶液，震蕩後稀釋成各濃度備用。人工飼料飼養得到2、3、4齡幼蟲。準備新鮮的離體甘藍葉片，並以吸足標準十字 花科營養液的棉球包裹葉柄，將20°C下飼養10日齡的桃蚜無翅成蚜移到葉片上，繁殖24h 後移去，保留若蚜飼養至2，3，4齡時供生物測定。
擬青黴菌絲包圍的蟲數
致死率(％) =- X 100%
總蟲數摘取長有蚜蟲的甘藍葉柄用浸溼加營養液的脫脂棉球包裹葉柄，然後將葉片(葉 柄不浸入)浸入含有菌懸液的燒杯中2-3S立即取出，室溫下將蚜蟲和葉片晾乾，置於鋪濾 紙的培養皿內。每皿一片葉每片葉上15-40頭蟲，26°C恆溫培養。每3d給棉球加一次無菌 水，每日光照10h，鏡檢死亡率，連續8d。致死效果如表1所示。表一、環鏈擬青黴對不同蚜齡的蚜蟲致死率 本實驗表明，利用本實施例生產的環鏈擬青黴菌劑，對農作物害蟲中為害較為嚴 重的蚜蟲防治效果較好，其致死率和校正致死率均較高。實施例5 環鏈擬青黴菌劑的田間防治試驗將通過實施例1或2或3生產的環鏈擬青黴菌劑，于田間取地頭土按照生防菌和 土重量比1 5進行混合，碾碎，於播種前1-2天犁耕後撒播于田間，能有效防治田間蚜蟲， 白粉蝨、小菜蛾、菜青蟲等害蟲。利用此法進行田間防治，其防治效果可持續90天。實施例6 環鏈擬青黴菌劑的田間防治試驗將通過實施例1或2或3生產的環鏈擬青黴菌劑，碾碎後直接拌種，播撒至田間， 然後可直接進行其他標準的田間後續操作，本方法可有效防治地老虎等齧根莖害蟲。
權利要求
一種用啤酒廢渣生產環鏈擬青黴菌劑的方法，包括如下步驟步驟一一級培養，用馬鈴薯 葡萄糖瓊脂培養基PDA斜面上，裝成試管斜面，接種環鏈擬青黴菌種，在20 25℃培養7 14天；得到純種斜面培養物；步驟二二級培養，培養液按重量百分比計5 25％啤酒廢渣、75 95％啤酒廢水，配比混合，調PH值5 9；經高壓滅菌後接種一級培養的純種斜面培養物，通氣震蕩培養，於在12 28℃下培養6 14天；得到純種液體培養物；步驟三三級培養，按重量百分比計，培養基組分為85 99％的啤酒廢渣、1 5％的氯化鈉、5 15％的廢酵母泥提取物與2％碳酸鈣混合，溼度在RH40 75之間，接種二級培養的純種液體培養物，於在12 28℃下培養6 14天；乾燥後成為餅塊狀或顆粒狀固體培養物。
2.如權利要求1所述的用啤酒廢渣生產環鏈擬青黴菌劑的方法，其特徵是所述的一 級培養是在24°C _26°C培養7-9天；所述的二級培養中培養液是啤酒廢渣啤酒廢水的重 量比為20 80;培養條件為24°C-26°C、PH 7-7. 5，震蕩培養7_9天；所述的三級培養是重 量比為90%啤酒廢渣、氯化鈉和9%啤酒酵母泥培養基，在溼度RH60-70培養10-12天。
3.如權利要求1或2所述的用啤酒廢渣生產環鏈擬青黴菌劑的方法，其特徵是所述 的步驟三中乾燥方法為自然晾乾或低於40°C低溫烘乾。
全文摘要
本發明公開了一種用啤酒廢渣生產環鏈擬青黴菌劑的方法，先將純化後的環鏈擬青黴菌種接種在真菌培養基斜面上，經培養後再接種到由啤酒廢渣、啤酒廢水配成的液體培養基，震蕩培養擴繁後再接種到由啤酒廢渣為主要原料的固體培養基上，在12℃-28℃下培養6-14天，即得。製成的環鏈擬青黴固體菌劑作為一種殺蟲劑，可用於多種農作物的害蟲防治。有效地降低蟲口密度，提高農作物產量，減少化學農藥的使用。並且用啤酒的廢料製造該菌劑，使廢料資源化，減少環境汙染，提高啤酒廢渣利用率，增加其附加價值。
文檔編號A01N63/04GK101892161SQ20101016899
公開日2010年11月24日 申請日期2010年5月12日 優先權日2010年5月12日
發明者吳衛東, 張俊, 李豐伯, 杜繼龍, 魯超 申請人:黃山市迎客松生物科技有限公司;李豐伯