番茄紅素在製備治療腦缺血損傷藥物中的應用的製作方法
2023-06-21 08:24:01
專利名稱：番茄紅素在製備治療腦缺血損傷藥物中的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及番茄紅素在藥物製備領域的新用途，特別涉及番茄紅素在製備治療腦缺血損傷藥物中的應用。
背景技術：
番茄紅素是食用番茄中的一種脂溶性成分，其分子式為C4tlH56，分子量為536. 85。 其化學結構式中含有11個共扼雙鍵及2個非共扼雙鍵，這種多不飽和脂肪烴結構使得該化合物具有卓越的抗氧化性能，並成為天然胡蘿蔔素類中最有效的捕獲劑，其猝滅單線態氧的速率常數較胡蘿蔔素高2倍。1990年I^oIO等報導了類胡蘿蔔素和生育酚等30餘種生物抗氧化劑猝滅單線態氧的作用，番茄紅素是猝滅單線態氧最強的。此外，番茄紅素能通過化學反應消除其他形式的活性氧自由基，包括過氧化氫、亞硝酸根等，這些氧自由基能引起生物體中脂質、蛋白、生物酶及DNA等大分子的過氧化，而這種過氧化與人體老化、癌症發生、自身免疫病及神經退行性疾病等都有重大關係。已有研究表明，除抗氧化性能外，番茄紅素還可以通過影響生長因子受體、細胞間縫隙連接的信號傳導而抑制多種腫瘤細胞的生長、增殖和分化。
發明內容
本發明的一個目的是提供番茄紅素在製備治療腦缺血損傷藥物中的應用。本發明提供了番茄紅素在製備治療腦缺血損傷藥物中的應用；所述治療腦缺血損傷藥物為如下1)-3)中至少一種1)治療腦水腫的藥物；2)治療腦梗死的藥物；3)治療神經損傷的藥物。所述藥物為如下a)或b)所示a)所述藥物由番茄紅素、不飽和磷脂和二甲基亞碸組成；b)所述藥物由番茄紅素、水和二甲基亞碸組成。所述a)中所述番茄紅素、不飽和磷脂和二甲基亞碸的質量比為1 1 99 1 1 495 ；所述b)中所述番茄紅素、水和二甲基亞碸的質量比為1 1 49. 5 1:1:198。所述a)中所述不飽和磷脂為橄欖油。本發明的另一個目的是提供一種治療腦缺血損傷的藥物。本發明所提供的治療腦缺血損傷的藥物，其活性成分為番茄紅素。所述治療腦缺血損傷的藥物為如下1)-3)中至少一種1)治療腦水腫的藥物；2)治療腦梗死的藥物；
3)治療神經損傷的藥物。所述治療腦缺血損傷的藥物為如下a)或b)所示a)所述藥物由番茄紅素、不飽和磷脂和二甲基亞碸組成；b)所述藥物由番茄紅素、水和二甲基亞碸組成。所述a)中所述番茄紅素、不飽和磷脂和二甲基亞碸的質量比為1 1 99 1 1 495 ；所述b)中所述番茄紅素、水和二甲基亞碸的質量比為1 1 49. 5 1:1: 198。所述a)中所述不飽和磷脂為橄欖油。本發明為北京市自然基金資助項目，項目編號為7092009。本發明提供了一個新的在急性腦缺血再灌注損傷期具有治療和保護作用的藥物。本發明具有以下明顯優勢(1)本發明避免了預防性給藥面臨用藥的盲目性和長期用藥的問題。預防用藥的目的是用以預防未來可能發生的疾病，則首先面臨的問題是那些人需要用藥，即哪些人群是可能的疾病高發人群；對於這些人群來說疾病在未來可能發生也可能不發生，必然帶來用藥的盲目性；其次，即便針對高發人群，用藥預防不知未來何時的可能疾病，意味著需要長期用藥，必然出現用藥依從性差的問題，而且預防成本也不容忽視；(2)本發明提供了一個可能的臨床急需的急性期治療用藥，即在急性腦缺血再灌注損傷期具有治療和保護作用的藥物，具有很強的臨床針對性。在急性腦缺血損傷中，最缺乏的是急性治療藥物，尤其是在臨床常規採用血管擴張藥物急救的情況下，再灌注損傷在所難免。本發明的研究表明番茄紅素在急性腦缺血的再灌期給藥，仍然能夠發揮很好的抗腦梗塞和神經保護作用，因此本發明具有真正的臨床治療學意義和極大的臨床優勢。(3)本發明提供了可能的參考劑量範圍。在對抗大鼠腦缺血再灌損傷中，番茄紅素在50-200mg/kg(每日2次)的劑量範圍內有明顯對抗腦梗塞、腦水腫和神經行為保護作用，對臨床用藥具有一定的指導意義。
圖1為假手術(空白)對照組TTC染色腦片照片。圖2為模型對照組TTC染色腦片照片。圖3為番茄紅素小劑量組(20mg/kg) TTC染色腦片照片。圖4為番茄紅素中劑量組(50mg/kg)TTC染色腦片照片。圖5為番茄紅素大劑量組(100mg/kg) TTC染色腦片照片。圖6為依達拉奉組TTC染色腦片照片。
具體實施例方式下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。實施例1、番茄紅素在製備治療腦缺血損傷藥物中的應用一、製備治療腦缺血損傷的藥物以番茄紅素為主體藥物，與不飽和磷脂等乳化製成混懸劑，用於腦缺血再灌損傷的急性期與康復期治療。本實施例中，向IOOmg番茄紅素(含量> 99% )(購自西安博勝生物有限公司， 產品目錄號為13739-02-1)中加入0. Iml 二甲基亞碸(DMSO)快速研磨乳化，再逐漸加入 9. 9ml橄欖油，混勻後超聲混懸20分鐘，即得10mg/ml番茄紅素製劑。該10mg/ml番茄紅素製劑中，番茄紅素、不飽和磷脂和二甲基亞碸的質量比為1 1 99。在此基礎上用橄欖油稀釋得到5mg/ml番茄紅素製劑和2mg/ml番茄紅素製劑，以確保不同番茄紅素劑量下大鼠灌服的橄欖油溶劑為等體積。5mg/ml番茄紅素製劑中，番茄紅素、不飽和磷脂和二甲基亞碸的質量比為1 1 198。2mg/ml番茄紅素製劑中，番茄紅素、不飽和磷脂和二甲基亞碸的質量比為1:1: 495。二、治療腦缺血損傷的藥物的效果評價本發明採用了線拴法大腦中動脈阻斷模型造成大鼠急性腦缺血再灌損傷模型，並採用急性治療給藥方式(再灌注期間給藥)，從腦梗塞面積、腦水腫程度及動物行為評分三方面證明番茄紅素對急性腦缺血再灌損傷的急性治療作用和神經康復作用。1.實驗材料與方法動物與分組Wistar雄性大鼠M只，體重240_260g，購自北京華阜康生物科技股份有限公司。實驗分為6組，每組8隻⑴假手術(空白)對照組；⑵模型對照組；(3)番茄紅素小劑量組(20mg/kg)(即上述實驗一製備的2mg/ml番茄紅素製劑，用量為1. 0ml/100g)； (4)番茄紅素中劑量組(50mg/kg)(即上述實驗一製備的5mg/ml番茄紅素製劑，用量為 1. 0ml/100g) ； (5)番茄紅素大劑量組(100mg/kg)(即上述實驗一製備10mg/ml番茄紅素製劑，用量為1.0ml/100g) ； (6)依達拉奉組(3mg/kg)(購自Sigma公司，產品目錄號為 M70800)。番茄紅素組分別在再灌後即時和再灌後2小時灌胃給藥，依達拉奉組在同樣時間採用靜脈注射給藥，模型對照組在造模後相同再灌時間點給予等劑量溶劑(含DMSO的橄欖油)，空白對照組為不插入線栓的假手術動物。腦缺血再灌模型的製備參照ka Longa等的方法，Wistar雄性大鼠以3%戊巴比妥鈉Iml · kg—1麻醉後仰臥位固定，沿頸正中切開，分離暴露左側頸總動脈(CCA)與頸內(ICA)、頸外動脈(ECA)， 夾閉CCA，於ECA外端0. 7cm處結紮並切口，將以多聚賴氨酸處理過的尼龍線栓線(長2cm， φ = 0.沈讓，頂部光滑圓頭直徑0. 36mm)輕輕插入，並順勢經ECA、ICA入顱至大腦中動脈 (MCA)分叉處(尼龍線進入CCA分叉處約18mm)後結紮，阻斷MCA腦血流，同時放開夾閉的 CCA進行缺血。缺血2小時後，輕輕抽出尼龍線實現再灌注。之後將動物傷口縫合，獨籠飼養。整個實驗過程維持動物體溫34°C，室溫。神經行為評分各組動物在再灌M小時後取出，按照Bederson方法對動物的行為缺陷進行分級評分，其標準為0分未觀察到神經症狀，行為正常；1分提尾懸空時，動物的手術對側前肢表現為腕肘屈曲，肩內旋，肘外展，緊貼胸壁；2分將動物置於光滑平面上，推手術側肩向對側移動時，阻力降低；3分動物自由行走時向手術對側環轉或轉圈；4分軟癱，肢體無自發活動。腦梗塞面積和腦水腫檢測方法如下
動物進行完行為檢測後，斷頭處死，迅速取出完整大腦，以4°C的生理鹽水洗去血跡，-20°C凍1011^11後在距離嗅球5_、7_、9_、11_和13mm處將大腦橫斷為5個2mm厚的切片，置1 % TTC溶液中37°C水浴避光染色lOmin，取出後照相，計算機分析腦梗塞面積和水腫程度。每組8隻鼠，結果取平均值。腦梗死體積(％ )=(未損傷側大腦面積-損傷側非白色區面積)Λ2Χ未損傷側大腦面積)X 100%。腦水腫(％ )=(損傷側大腦面積-未損傷側大腦面積)Λ2 X未損傷側大腦面積)Χ100%ο結果見表1和圖1-圖6 ；圖1為假手術(空白)對照組TTC染色腦片照片；圖2 為模型對照組TTC染色腦片照片；圖3為番茄紅素小劑量組O0mg/kg)TTC染色腦片照片； 圖4為番茄紅素中劑量組(50mg/kg)TTC染色腦片照片；圖5為番茄紅素大劑量組(IOOmg/ kg)TTC染色腦片照片；圖6為依達拉奉組TTC染色腦片照片。表1番茄紅素橄欖油混懸劑對大鼠急性腦缺血再灌注導致的腦梗死體積、腦水腫及神經行為評分的影響(Mean士SD，η = 8)
權利要求
1.番茄紅素在製備治療腦缺血損傷藥物中的應用；所述治療腦缺血損傷藥物為如下 1)-3)中至少一種1)治療腦水腫的藥物；2)治療腦梗死的藥物；3)治療神經損傷的藥物。
2.根據權利要求1所述的應用，其特徵在於所述藥物為如下a)或b)所示a)所述藥物由番茄紅素、不飽和磷脂和二甲基亞碸組成；b)所述藥物由番茄紅素、水和二甲基亞碸組成。
3.根據權利要求2所述的應用，其特徵在於所述a)中所述番茄紅素、不飽和磷脂和二甲基亞碸的質量比為1 1 99 1 1 495 ；所述b)中所述番茄紅素、水和二甲基亞碸的質量比為1 1 49. 5 1 1 198。
4.根據權利要求2或3所述的應用，其特徵在於 所述a)中所述不飽和磷脂為橄欖油。
5.一種治療腦缺血損傷的藥物，其活性成分為番茄紅素。
6.根據權利要求5所述的藥物，其特徵在於所述治療腦缺血損傷的藥物為如下1)-3) 中至少一種1)治療腦水腫的藥物；2)治療腦梗死的藥物；3)治療神經損傷的藥物。
7.根據權利要求5或6所述的藥物，其特徵在於所述治療腦缺血損傷的藥物為如下 a)或b)所示a)所述藥物由番茄紅素、不飽和磷脂和二甲基亞碸組成；b)所述藥物由番茄紅素、水和二甲基亞碸組成。
8.根據權利要求7所述的藥物，其特徵在於所述a)中所述番茄紅素、不飽和磷脂和二甲基亞碸的質量比為1 1 99 1 1 495 ；所述b)中所述番茄紅素、水和二甲基亞碸的質量比為1 1 49. 5 1 1 198。
9.根據權利要求7或8所述的藥物，其特徵在於所述a)中所述不飽和磷脂為橄欖油。
全文摘要
本發明公開了番茄紅素在製備治療腦缺血損傷藥物中的應用。本發明提供了番茄紅素在製備治療腦缺血損傷藥物中的應用；所述治療腦缺血損傷藥物為如下1)-3)中至少一種1)治療腦水腫的藥物；2)治療腦梗死的藥物；3)治療神經損傷的藥物。本發明提供了一個可能的臨床急需的急性期治療用藥，即在急性腦缺血再灌注損傷期具有治療和保護作用的藥物，具有很強的臨床針對性。本發明的研究表明番茄紅素在急性腦缺血的再灌期給藥，仍然能夠發揮很好的抗腦梗塞和神經保護作用，因此本發明具有真正的臨床治療學意義和極大的臨床優勢。
文檔編號A61P9/10GK102302479SQ20111029986
公開日2012年1月4日 申請日期2011年9月29日 優先權日2011年9月29日
發明者徐平湘, 熊杰 申請人:首都醫科大學