一種具有免疫調節作用的藥物組合物及其製備方法

2023-06-13 06:49:06

專利名稱：：一種具有免疫調節作用的藥物組合物及其製備方法
技術領域：
：本發明涉及一種具有免疫調節作用的藥物組合物，具體地，是以海蛇為原料提取製備的藥物組合物，屬藥物領域。
背景技術：
：從古至今海蛇被民間所習用，被譽為"祛風燥溼、通絡活血、攻毒和滋補強壯等功效的良藥"，常用於風溼痺症、四肢麻木、關節疼痛、疥癬惡瘡、體虛和小兒營養不良等症。首載於唐代陳藏器的《本草拾遺》，"主赤白毒痢，五野雞病，惡瘡。灸食，亦燒末服一、二錢匕"。現代研究表明其在治療心腦血管疾病、抗風溼、免疫調節等方面，也有著其他藥材無法比擬的療效。目前世界上己知海蛇約90種，而我國沿海分布有扁尾海蛇亞科和海蛇亞科的海蛇多達15種，主要生活在南海、北部灣及海南、臺灣、廣西、廣東和福建等省沿海。尤其是我國的北部灣熱帶海域，最適於海蛇生長繁殖，年產量約75噸，福建沿海也可達10噸。海蛇主要含有脂肪酸類，甾類，蛋白質，肽類，游離胺基酸以及豐富的微量元素等，其中脂肪酸、胺基酸總量、人體必需胺基酸含量、微量元素種類和含量均比陸地蛇高；約有30多種，佔總量的1.5%左右；其中軟脂酸、十六碳烯酸、十八碳烯酸、二十碳烯酸的含量較高，廿二碳六烯酸(DHA)、廿碳五烯酸(EPA)、硬脂酸、豆蔻酸等也很豐富；脂肪含量比陸地蛇平均高0.53%。海蛇的主要藥理作用有免疫調節作用、抗菌抗炎作用、對神經系統的影響、祛痰鎮咳作用、抗疲勞作用、改善記憶作用、抗腫瘤等。根據海蛇的作用開發了多種產品，如海王酒(海南椰島海口酒廠)複方海蛇膠囊(上海世康特製藥有限公司，華東醫院)、海蛇祛風勝溼膠囊(泉州製藥廠)、海蛇風溼靈膠囊(福建省泉州中僑有限公司藥業公司)、複方海蛇注射液(廣西北海人民醫院)、複方海蛇酊(湛江中藥廠)、海蛇天麻酒(福建省藥材公司中藥研究所)、海蛇脂質軟膠囊劑(保健品)、抗青環海蛇毒血清(廣西醫科大學與日本蛇學研究所合作)、油針療法(日本)以海蛇脂質為主要原料製成注射劑，在身體壓痛點和硬結部位注射，治療腰痛和頜，肩等部位疼痛。雖然目前蛇資源的利用前景良好，但對於海蛇的基礎研究卻一直停滯不前，尤其是對具體化學成分的探討並不多，在質量控制方面也存在著很大的空缺，這將會在一定程度上阻礙對海蛇的進一步開發和利用。即使是目前己經上市的海蛇產品，並沒有對有效成分或者指標成分的具體說明。
發明內容本發明的技術方案是提供了一種具有免疫調節的藥物組合物，本發明的另一技術方案是提供了該藥物組合物的製備方法和用途。本發明提供了一種具有免疫調節的藥物組合物，它是由海蛇乙酸乙酯提取物、水提取物中的一種或兩種混合為活性成分，加入藥學上可接受的輔料或輔助性成分製備而成的藥劑。其中，所述的海蛇乙酸乙酯提取物、水提取物的重量配比為海蛇乙酸乙酯提取物7—9份、水提取物0—3份。進一步優選地，所述的海蛇乙酸乙酯提取物、水提取物的重量配比為海蛇乙酸乙酯提取物8—9份、水提取物1一2份。更進一步優選地，所述的海蛇乙酸乙酯提取物、水提取物的重量配比為海蛇乙酸乙酯提取物8份、水提取物2份。其中，所述的乙酸乙酯提取物和水提取物是由下述方法製備海蛇用30%70%乙醇提取、過濾、減壓濃縮後，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分別得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位，其中乙酸乙酯部位為海蛇乙酸乙酯提取物、水部位為海蛇水提取物。所述的海蛇用50%乙醇提取。其中，所述的海蛇來源於青環海蛇坊^ro/力"cya/7oci/7c^/s和平頦海蛇Z鄰e邁/s力aroVich7的乾燥體。本發明使用的是海蛇的去掉頭部的幹體。其中，所述的藥劑是口服製劑。本發明還提供了一種藥物組合物的製備方法，它包括如下步驟a、海蛇用30%70%乙醇提取、過濾、減壓濃縮後，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分別得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位，其中乙酸乙酯部位為海蛇乙酸乙酯提取物、水部位為海蛇水提取物；b、將海蛇乙酸乙酯提取物、水提取物中的一種或兩種混合為活性成分，加入藥學上可接受的輔料或輔助性成分製備而成的藥劑。其中，所述的a步驟海蛇用50X乙醇提取。本發明藥物組合物具有抗疲勞，調節免疫，祛風除溼、舒筋活絡；活血通絡，滋補健身的功效，可用於製備成藥品或保健食品；將其中的有效部位乙酸乙酯部分、水溶性部分配伍使用，具有協同增效作用，製備的藥品或保健食品安全、質量穩定、可控、療效可靠、攜帶方便、服用方便。顯然，根據本發明的上述內容，按照本領域的普通技術知識和慣用手段，在不脫離本發明的上述基本技術思想前提下，還可以作出其它多種形式的修改、替換和變更。以下通過實施例形式的具體實施方式，對本發明的上述內容再作進一步的詳細說明。但不應該將此理解為本發明上述主題的範圍僅限於以下的實例。凡基於本發明上述內容所實現的技術均屬於本發明的範圍。圖1海蛇有效部位提取流程圖具體實施例方式實施例1本發明藥物的製備取去除頭部的海蛇幹體5kg，粉碎。加入8倍量50%的乙醇回流提取2次，每次2h。合併提取液，減壓回收溶劑得到乙醇提取浸膏。將浸膏混懸於1000ml水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，減壓回收溶劑，得到石油醚部分SS-P(105g)、乙酸乙酯部分SS-A(33g)、正丁醇部分SS-B(28g)和水溶性部分SS-W(127g)。取乙酸乙酯部分32g、水溶性部分8g混合，加上藥學上常用的輔料或輔助性成分，製備成藥學上常用的製劑。實施例2本發明藥物液體製劑的製備酒劑將乙酸乙酯部分8g、水溶性部位2g，加入適量的白酒溶解，再加入100g蔗糖，攪拌溶解後，濾過，製成1000ml即得。實施例3本發明藥物液體製劑的製備酒劑將乙酸乙酯部分9g、水溶性部位lg，加入適量的白酒溶解，再加入100g蔗糖，攪拌溶解後，濾過，製成1000ml即得。實施例4本發明藥物固體製劑的製備①片劑將60g澱粉與50g糊精混勻，過篩，再與乙酸乙酯部位80g、水溶性部位20g用適量乙醇稀釋的浸膏混勻，製成顆粒，低溫千燥，加入3%滑石粉，混勻，整粒，壓製成1000片，即得。②膠囊劑將60g澱粉與50g糊精混勻，過篩，再與乙酸乙酯部位80g、水溶性部位20g用適量乙醇稀釋的浸膏混勻，過七號篩，於6(TC烘乾，裝膠囊，共製成1000粒。以下通過藥效學試驗進一步說明本發明的有益效果。試驗例l本發明海蛇活性部位的篩選1、實驗材料1.1藥材海蛇藥材由海南椰島集團海口酒廠提供(產地廣西北海)，經成都中醫藥大學李敏教授鑑定為眼鏡蛇科海蛇亞科青環海蛇場^rO/7力/sC7S/70C//7"W^D平頦海蛇/:a/7e邁^5力arok/ch'i去除內臟後的乾燥體。1.2樣品製備取去除頭部的海蛇幹體5kg，粉碎。加入8倍量50%的乙醇回流提取2次，每次2h。合併提取液，減壓回收溶劑得到乙醇提取浸膏。將浸膏混懸於1000ml水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，減壓回收溶劑，得到石油醚部分SS-P(105g)、乙酸乙酯部分SS-A(33g)、正丁醇部分SS-B(28g)和水溶性部分SS-W(127g)。1.3藥物與試劑1.3.1試劑生理鹽水(四川科倫藥業股份有限公司)中華墨汁(北京一德閣功貿公司)CMC-Na(中國醫藥集團上海化學試劑公司)肝素(齊魯製藥廠)1.3.2藥物人參皂苷，配置濃度為lmg/ml。石油醚提取部分、乙酸乙酯提取部分、正丁醇提取部分、水溶性部分1.4實驗動物昆明種健康小白鼠(18-22g)150隻，雄性2007年4月由成都中醫藥大學實驗動物中心提供。1.5實驗儀器UV-VIS分光光度儀(Perkin-ElmerLambda35)DT500電子小鼠稱(常熟市衡器廠)BP211S型(Max220g，d=0.1mg)Sartorius電子分析天平(瑞士)Finnpipette25ul移液器等2、預實驗與給予劑量的確定2.1預實驗劑量選擇根據成人日劑量換算為小鼠給予劑量低劑量組1.5g生藥/Kg小鼠體重/d，中劑量組3.0g生藥/Kg小鼠體重/d，高劑量組4.5g生藥/Kg小鼠體重/d，以此三劑量進行預實驗。2.2藥液的配製取50%乙醇總提取物，用0.5。/。CMC-Na水溶液分散，所配製濃度如下低劑量組溶液4.395mg/ml(87.9mg/Kg小鼠)，相當於1.5g生藥/Kg小鼠體重。中劑量組溶液8.790mg/ml(175.8mg/Kg小鼠)，相當於3.0g生藥/Kg小鼠體重。高劑量組溶液13.185mg/ml(263.7mg/Kg小鼠)，相當於4.5g生藥/Kg小鼠體重。2.3預實驗取小鼠30隻，隨機分為5組對照組、陽性藥組(人參皂苷lmg/ml)、低劑量組、中劑量組、高劑量組。每日灌胃給藥l次(0.2ml/10g小鼠重量)，連續給藥7天，末次給藥後禁食12小時，按碳廓清率試驗法測定不同劑量組對小鼠單核-巨噬細胞功能的影響。結果如下表l:海蛇50%乙醇總提取物提取物不同劑量對小鼠單核-巨噬細胞功能的影響(x士s)組別動物數(n)齊懂(mg/kg)校正廓清指數a(x土s)對照組65.851±1.037陽性藥組6208.288±0.956**低劑量組687.96.231±1.495中劑量組6175.88.023±1.426**高劑量組6263.78.798±0.984**注與生理鹽水組比較**P<0.01*P<0.052.4結論經方差分析實驗數據，多重比較表明與生理鹽水組相比，50%乙醇提取物中、高劑量組(PO.01)，均顯示顯著性差異，小鼠單核一巨噬細胞吞噬活性增強。3、活性部位的篩選3.1藥液的配製取石油醚部分SS-P、乙酸乙酯部分SS-A、正丁醇部分SS-B和水溶性部分SS-W，分別用0.5。/。CMC-Na水溶液分散，所配製濃度如下SS-P溶液3.15mg/ml(63.Omg/Kg小鼠)，相當於3.0g生藥/Kg小鼠體重。SS-A溶液0.99mg/ml(19.8mg/Kg小鼠)，相當於3.0g生藥/Kg小鼠體重。SS-B溶液0.84mg/ml(16.8mg/Kg小鼠)，相當於3.0g生藥/Kg小鼠體重。SS-W溶液3.81mg/ml(76.2mg/Kg小鼠)，相當於3.0g生藥/Kg小鼠體重。3.2對小鼠免疫器官重量的影響取小鼠60隻，隨機分為6組對照組、陽性藥組、石油醚部分組、乙酸乙酯部分組、正丁醇部分組、水溶性部分組。每日灌胃給藥l次(0.2ml/10g小鼠重量)，對照組給予含O.5。/。CMC-Na的生理鹽水，陽性藥組給人參皂苷。連續給藥7d，稱體重後，處死，取其胸腺和脾臟稱重，計算胸腺指數、脾臟指、K-數。胸腺指數(mg/g)=胸腺重量/體重脾臟指數(mg/g)=脾臟重量/體重3.3對小鼠單核一巨噬細胞功能的影響取小鼠60隻，隨機分為6組對照組、陽性藥組、石油醚部分組、乙酸乙酯部分組、正丁醇部分組、水溶性部分組。每日灌胃給藥l次(0.2ml/10g小鼠重量)，對照組給予含O.5%CMC-Na的生理鹽水，陽性藥組給人參皂苷。連續給藥7d,末次給藥後禁食12小時，於次日給藥1個小時後由尾靜脈注射10%墨汁O.lml/10g(體重)，於注射後1分鐘和6分鐘分別用吸管(預先用肝素溶液溼潤)從小鼠眼眶後靜脈叢取血O.025ml,立刻吹入到盛有2mi0.1%船20)3溶液的試管中，吸管於該液中吸入、吹出數次以充分洗出吸管壁附著之血液，取血完畢以O.025ml空白組正常小鼠血溶於2m10.1%胞20)3液校零，於分光光度計(680nm)測定吸光度。並計算吞噬指數K及吞噬係數(校正廓清指數)a:K卄1gC，一lgCg-1、/y^WLS4/K其中C為血中碳粒濃度，T為時間，W為體重，WLS為肝脾合重(於第二次取血後迅速剖取肝、脾並於天平稱重)3.4結果與討論表2:海蛇提取物對小鼠免疫器官重量的影響(X士S)組別動物數(n)劑量(mg/kg)胸腺指數(mg/g)脾臟指數(mg/g)對照組103.07土1.135.11±0.86陽性藥組1020.05.08±0.32**6.90±0.47**SS-P1063.03.39±1.055.69±1.34*SS-A1019.84.14±1.50**5.78±1.21*SS-B1016.83.18±0.725.15±0.99ss-w1076.23.54±1,45*6.37±1.28**注與生理鹽水組比較**P<0.01*P<0.05表3:海蛇提取物對小鼠單核一巨噬細胞功能的影響(X土S)組別動物數(n)齊!J量(mg/kg)校正廓清指數a(x土s)對照組106.289±1.113陽性藥組1020.07.614±1.083*SS-P1063.06.977±1.005SS-A1019.88.635±1.504**SS-B1016.87.244±0.663SS-W1076.27.906±1.005*注與生理鹽水組比較*衝<0.01*P<0.05由表2、表3分析，乙酸乙酯部分組、水溶性部分組的脾指數和胸腺指數與對照組比均有升高，經統計檢驗有顯著性差異(p〈0.05或PO.01)，石油醚部分組能使小鼠脾指數升高(P<0.05)，但胸腺指數無顯著性差異。與對照組相比，乙酸乙酯部分組的校正廓清指數升高(PO.Ol)，水溶性部分組也有升高(P〈0.05)。綜上可知，乙酸乙酯部分和水溶性部分為海蛇免疫調節主要活性部位。4、乙酸乙酯部分不同劑量對小鼠免疫功能的影響4.1藥液的配製取乙酸乙酯部分提取物SS-A，用0.5。/。CMC-Na水溶液分散，所配製濃度如下低劑量溶液0.495mg/ml(9.9mg/Kg小鼠)，相當於1.5g生藥/Kg小鼠體重。中劑量溶液0.990mg/ml(19.8mg/Kg小鼠)，相當於3.0g生藥/Kg小鼠體重。高劑量溶液1.485mg/ml(29.7mg/Kg小鼠)，相當於4.5g生藥/Kg小鼠體重。4.2實驗方法4.2.1乙酸乙酯部分不同劑量對小鼠免疫器官重量的影響取小鼠50隻，隨機分為5組對照組、陽性藥組、SS-A低劑量組、SS-A中劑量組、SS-A高劑量組。每日灌胃給藥1次(0.2ml/10g小鼠重量)，連續給藥7天，稱體重後，處死，取其胸腺和脾臟稱重，計算胸腺指數、脾臟指數。4.2.2乙酸乙酯部分不同劑量對小鼠單核一巨噬細胞功能的影響取小鼠50隻，隨機分為5組對照組、陽性藥組、SS-A低劑量組、SS-A中劑量組、SS-A高劑量組。每日灌胃給藥1次(0.2ml/10g小鼠重量)，連續給藥7天，末次給藥後禁食12小時，按碳廓清率試驗法測定不同劑量組對小鼠單核-巨噬細胞功能的影響。4.3結果與結論表4:海蛇乙酸乙酯部分對小鼠免疫器官重量的影響tableseeoriginaldocumentpage9注與生理鹽水組比較**P<0.01*P<0.05表5:海蛇乙酸乙酯部分對小鼠單核一巨噬細胞功能的影響tableseeoriginaldocumentpage10注與生理鹽水組比較**P<0.01*P<0.05由表4、5可知與生理鹽水組相比，乙酸乙酯部分高、中、低劑量均能顯著提高小鼠的胸腺指數、脾臟指數(PO.01或P〈0.05)。高、中劑量組顯示小鼠單核一巨噬細胞吞噬功能顯著增強(P<0.01)，而低劑量組無顯著性差異。5、結論a.結合中醫傳統的用藥方法和現代醫學理論以及本實驗室的研究基礎，對其石油醚提取部分、乙酸乙酯提取部分、正丁醇提取部分、水溶性部分採用碳廓清率試驗法和免疫器官重量測定法進行了小鼠免疫活性篩選。b.乙酸乙酯提取部分、水溶性部分脾指數、胸腺指數以及校正廓清指數相對對照組均升高，初步確定為主要活性部位。c.對乙酸乙酯部位不同劑量考察，低、中、高劑量均能顯著增加小鼠免疫器官重量。中、高劑量能顯著增強小鼠單核一巨噬細胞吞噬功能，而低劑量無顯著影響。試驗例2本發明藥物組合物的藥效學試驗將實施例1製備乙酸乙酯提取部分、水溶性部分按重量配比為7:3、8:2、9:1的不同配比，按試驗例1的方法進行試驗，具體試驗結果如下表6:不同組成對小鼠免疫器官重量的影響tableseeoriginaldocumentpage10注與生理鹽水組比較**P<0.01*P<0.05表7:不同組成對小鼠單核一巨噬細胞功能的影響tableseeoriginaldocumentpage11注與生理鹽水組比較**P<0.01*P<0.05該試驗證明，乙酸乙酯提取部分、水溶性部分分別以7:3、8:2、9:1不同配伍，均能發揮協同作用，其中以8-9:2-l配伍時，效果較優，其中又以8:2的重量配比的藥效最佳。綜上所述，本發明藥物是將乙酸乙酯部分、水溶性部分配伍使用，具有協同增效作用，製備的藥品或保健食品安全、質量穩定、可控、療效可靠、攜帶方便、服用方便。權利要求1、一種具有免疫調節的藥物組合物，其特徵在於它是由海蛇乙酸乙酯提取物、水提取物中的一種或兩種混合為活性成分，加入藥學上可接受的輔料或輔助性成分製備而成的藥劑。2、根據權利要求1所述的藥物組合物，其特徵在於所述的海蛇乙酸乙酯提取物、水提取物的重量配比為海蛇乙酸乙酯提取物7—9份、水提取物0—3份。3、根據權利要求2所述的藥物組合物，其特徵在於所述的海蛇乙酸乙酯提取物、水提取物的重量配比為海蛇乙酸乙酯提取物8—9份、水提取物1一2份。4、根據權利要求3所述的藥物組合物，其特徵在於所述的海蛇乙酸乙酯提取物、水提取物的重量配比為海蛇乙酸乙酯提取物8份、水提取物2份。5、根據權利要求l-4任意一項所述的藥物組合物，其特徵在於所述的乙酸乙酯提取物和水提取物是由下述方法製備海蛇採用30%70%乙醇提取、過濾、減壓濃縮後，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分別得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位，其中乙酸乙酯部位為海蛇乙酸乙酯提取物、水部位為海蛇水提取物。6、根據權得要求5所述的藥物組合物，其特徵在於所述的海蛇採用50%乙醇提取。7、根據權利要求l-6任意一項所述的藥物組合物，其特徵在於所述的海蛇來源於青環海蛇辦fl(ro/7力isCy朋0"./2Cto或平頦海蛇Z砂柳/S/ajY3Vj.ch7的乾燥體。8、根據權利要求1所述的藥物組合物，其特徵在於所述的藥劑是口服製劑。9、一種製備權利要求l-8任意一項所述的藥物組合物的方法，它包括如下步驟a、海蛇用30%70%乙醇提取、過濾、減壓濃縮後，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分別得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位，其中乙酸乙酯部位為海蛇乙酸乙酯提取物、水部位為海蛇水提取物；b、將海蛇乙酸乙酯提取物、水提取物中的一種或兩種混合為活性成分，加入藥學上可接受的輔料或輔助性成分製備而成的藥劑。10、根據權利要求9所述的藥物組合物的製備方法，其特徵在於所述的a步驟海蛇用50%乙醇提取。全文摘要本發明提供了一種具有免疫調節的藥物組合物，它是由海蛇乙酸乙酯提取物、水提取物中的一種或兩種混合為活性成分，加入藥學上可接受的輔料或輔助性成分製備而成的藥劑。本發明還提供了該藥物組合物的製備方法。本發明藥物具有抗疲勞，調節免疫，祛風除溼、舒筋活絡；活血通絡，滋補健身的功效，可用於製備成藥品或保健食品，將其中的有效部位乙酸乙酯部分、水溶性部分配伍使用，具有協同增效作用，製備的藥品或保健食品安全、質量穩定、可控、療效可靠、攜帶方便、服用方便。文檔編號A61K35/56GK101628012SQ20091005905公開日2010年1月20日申請日期2009年4月24日優先權日2009年4月24日發明者亮熊,霞王,羽雷申請人:海口椰島酒廠有限公司