一種含有環孢素的眼植入凝膠的製作方法

2023-06-13 15:29:46 2

專利名稱：一種含有環孢素的眼植入凝膠的製作方法
技術領域：
本發明屬於醫藥領域，涉及一種含有環孢素的眼植入凝膠及其製備方法和應用。
背景技術：
環孢素即環胞黴素(Cyclosporine)為一種特效的免投抑制劑，臨床常用環孢素A(CyclosporineA，CyA)是目前公認的抗器官移植排斥反應最為有效的藥物。它通過選擇性地抑制輔助淋巴細胞，幹擾淋巴細胞活性，阻斷參與排斥反應的體液和細胞效應機制，從而抑制排異反應及免疫反應。現在CyA的口服製劑和注射劑被廣泛用於器官移植手術後的排異治療，眼科使用CyA滴眼劑主要用於角膜移植排異反應、自身免疫性眼病以及乾眼症的治療，如CN99102848和CN02117619分別公開了含有CyA的眼外用溶液或凝膠的組方。由於CyA分子量較大，通透性差，局部使用對於眼內炎症的治療，如自身免疫性葡萄膜炎，難以實現治療效果，而全身用藥易產生高血壓和肝、腎毒副作用，多次眼內注射可造成眼內感染和出血併發症，因此開發局部使用的CyA緩釋製劑成為眼科應用CyA的突破口。CN00122863和CN200510066417公開了用於眼內緩釋製劑，前者用聚乳酸、殼聚糖及其混合物製成包埋有CyA的眼內植入緩釋製劑，後者用乳酸-羥乙酸共聚物、聚乳酸等高分子材料製成可供眼內注射用的緩釋微球。有資料報導，CyA用於青光眼濾過手術有與5-FU相似的促進濾泡形成作用，抑制濾泡成纖維細胞的增殖和過濾通道瘢痕化，提高青光眼手術的成功率，且術後低眼壓黃斑病變等後遺症較少[胡義珍等。環孢素A與5氟尿嘧啶用於青光眼濾過手術臨床對比觀察。美中國際眼科雜誌，2001，1(4)34～36]。其機理與CyA調控蛋白質合成，抗炎，抑制細胞因子產生和成纖維細胞活化，抑制局部血管形成造成局部缺血，誘導細胞凋亡等作用有關[王繼兵。環孢素A抗增殖作用的研究。國外醫學(眼科分冊)，1999，23(2)93～97]。
透明質酸(hyalouronic acid，HA)是構成皮膚、玻璃體、關節滑液和軟骨組織的一種重要成分，是由(1-β-4)D-葡糖醛酸和(1-β-3)N-乙醯基-D-氨基葡糖雙糖單位重複連接組成的鏈狀聚陰離子黏多糖，具有獨特的理化性質和生物學功能。其鈉鹽，即透明質酸鈉在臨床已應用多年，可作為黏彈劑用於眼科手術和骨科手術、關節腔注射可治療骨性關節炎和類風溼性關節炎、預防術後粘連，由於其良好的生物相容性和潤滑、保溼作用而又被作為一種藥物媒介應用於多種藥物製劑。交聯HA是HA的衍生物，它克服了天然HA在組織中易被降解和擴散、體內存留時間較短等缺點，進一步擴大了HA在醫藥領域的應用。自Balazs1987年公開第一個HA交聯產品hylan的製備(US4713448)，至今越來越多的HA交聯的技術及其應用被陸續公開，如鐵交聯HA防粘連膜(EP0507604，EP1593394)、磷交聯HA凝膠(WO9009401)、醯肼交聯HA(WO9515168)、醇交聯HA酯(EP1265116，EP0216453)、環氧樹脂交聯HA凝膠(WO8600912，WO0206350)等，多種交聯HA產品已經上市，被廣泛應用於醫療和美容臨床。目前，醯肼交聯的透明質酸主要應用於研究製備治療心肌缺血、骨關節炎、乾眼症、腫瘤和傷口癒合等疾病的透明質酸-鏈系藥物(US2003114406、WO03006068、US2004234497和WO0206373)，也用於製備青光眼濾過手術植入凝膠，保持房水濾過通道。
採用交聯透明質酸包埋環孢素製備緩釋製劑的研究未見文獻公開。本發明將環孢素混於醯肼交聯的HA凝膠，製成緩釋製劑。本發明產品可用於青光眼濾過手術，與單純的交聯HA凝膠(WO9835640，WO9835639)相比，本發明產品不僅有凝膠的物理支撐、阻隔作用，而且還有環孢素抑制濾泡成纖維細胞增殖、促進濾泡形成、阻止濾過通道瘢痕化的作用，將顯著提高青光眼濾過手術的成功率。本發明產品也可用於治療和預防高危眼角膜移植的排斥反應以及慢性葡萄膜炎和白塞氏病等自身免疫性眼病，與使用聚乳酸等高分子材料製備的環孢素緩釋系統(CN00122863)相比，本發明產品具有更好的生物相容性，在體內的降解產物為肌體固有的成分，不會改變肌體局部的生理環境，具有安全性高的優點。

發明內容
本發明的目的是提供一種含有環孢素的眼植入凝膠及其製備方法，以及其在製備眼部植入藥物中的應用。
本發明為一種含有環孢素的眼植入凝膠，其特徵在於環孢素以非溶解狀態分散於交聯透明質酸凝膠中，按乾燥品計，交聯透明質酸與環孢素的質量比為1∶5～5∶1，優選質量比為1∶3～3∶1，更優選質量比為1∶2～2∶1。
所述的凝膠，其特徵還在於凝膠中含有的環孢素是環孢素A。
所述的凝膠，其特徵還在於交聯透明質酸凝膠來源於醯肼化合物交聯的透明質酸鈉，優選雙醯肼化合物交聯的透明質酸鈉，更優選丁二酸二醯肼、辛二酸二醯肼或己二酸二醯肼交聯的透明質酸鈉。
本發明還包括上述含有環孢素的眼植入凝膠的製備方法，該方法特徵在於環孢素先混懸於透明質酸鈉水溶液中，再與交聯劑混合反應形成凝膠，凝膠經純化後，切割，包裝，滅菌製得成品。
所述的製備方法，其特徵還在於反應使用的透明質酸鈉可以選用提取法生產的產品，也可以選用發酵法生產或其他方式生產的產品，平均分子量可以為10萬～300萬道爾頓，優選平均分子量為20萬～150萬道爾頓，更優選平均分子量為20萬～60萬道爾頓。
所述的製備方法，其特徵還在於反應中使用的交聯劑是醯肼化合物，可以是單醯肼、雙醯肼或多醯肼化合物，優選雙醯肼化合物，更優選丁二酸二醯肼、辛二酸二醯肼或己二酸二醯肼。
所述的製備方法，其特徵還在於反應液中加入羰基活化劑碳二亞胺，可以是單碳二亞胺或雙碳二亞胺，優選單碳二亞胺，更優選乙基(N，N-二甲基氨基丙基)碳二亞胺。
本發明凝膠具有以下優點(1)同時具有交聯透明質酸的物理支撐、阻隔作用以及CyA抑制濾泡成纖維細胞增殖、促進濾泡形成、阻止濾過通道瘢痕化的作用；(2)具有緩釋作用；(3)具有更好的生物相容性，交聯透明質酸的降解產物為肌體固有的成分，不會改變肌體局部的生理環境，安全性更高。
本發明凝膠應用於眼部植入藥物的製備，以本發明凝膠製備的藥物可用於青光眼濾過手術植入，促進濾泡的形成，防止房水濾過通道瘢痕化，維持術後眼壓穩定，提高青光眼手術治療的成功率；也可用於治療和預防高危眼角膜移植的排斥反應以及慢性葡萄膜炎和白塞氏病等自身免疫性眼病。
具體實施例方式
以下實施例是為了更好地說明本發明，不是限制本發明。
實施例1將0.125克透明質酸鈉(平均分子量141.5萬道爾頓)溶解於5毫升Tris-HCl(pH4.5)緩衝溶液中，加入己二酸二醯肼(ADH)12.5毫克，加入環孢素A細粉0.25克，研勻；另取乙基(N，N-二甲基氨基丙基)碳二亞胺(EDCI)30毫克溶解於1毫升Tris-HCl(pH4.5)緩衝溶液中，然後倒入上述透明質酸鈉、ADH和環孢素A的混合溶液中，研勻，倒於潔淨玻璃板，展平，或灌入事先固定好的兩個潔淨玻璃板之間的縫隙中，將玻璃板水平放置，反應2～24小時，至反應液完全膠化。調節玻璃板的大小或兩個玻璃板之間的距離可以得到不同厚度的凝膠片，用於青光眼小梁手術植入的凝膠片厚度為0.45～0.5毫米比較適宜，用於眼內植入治療和預防高危眼角膜移植的排斥反應以及慢性葡萄膜炎和白塞氏病等自身免疫性眼病的凝膠片厚度為1～2毫米比較適宜。
反應液成膠後，用去離子水將凝膠衝離玻璃板，置潔淨容器中用大量去離子水浸泡純化2～4小時，再用pH7.2的等滲磷酸鹽緩衝溶液浸泡0.5～1小時，在潔淨環境中，將凝膠塊平鋪在潔淨玻璃板上，在解剖鏡下，用薄刀片切成要求的形狀。用於青光眼小梁手術植入的產品可切成邊長為3.5毫米的等腰三角形凝膠片，或切成高4.5毫米、底邊分別為0.5毫米和3毫米的等腰梯形凝膠片；用於眼內植入治療和預防高危眼角膜移植的排斥反應以及慢性葡萄膜炎和白塞氏病等自身免疫性眼病的產品可切成2毫米×3毫米的長方形凝膠片，或用衝模衝成直徑2.5毫米的圓形凝膠片。
將切好的凝膠片分裝於5毫升西林瓶中，加蓋，於121℃高壓滅菌15分鐘，即得成品。
實施例2將0.125克透明質酸鈉(平均分子量37萬道爾頓)溶解於4毫升Tris-HCl(pH4.0)緩衝溶液中，加入己二酸二醯肼(ADH)21.7毫克，加入環孢素A細粉0.25克，研勻，；混勻；另取乙基(N，N-二甲基氨基丙基)碳二亞胺(EDCI)30毫克溶解於1毫升Tris-HCl(pH4.0)緩衝溶液中，然後倒入上述透明質酸鈉、ADH和環孢素A的混合溶液中，研勻，之後按實施例一中描述的步驟操作，直至得到成品。
實驗數據發明體外藥物釋放試驗，以證明本發明環孢素凝膠片的緩釋作用和體外降解特性實驗方法(1)載藥量的測定採用高效液相色譜法測定環孢素A的含量，色譜條件如下用C18矽膠柱(4.6毫米×250毫米)，以0.1％磷酸-甲醇(7∶93)為流動相，檢測波長210nm，柱溫為50℃。樣品前處理方法取0.5克凝膠，加甲醇至5毫升，振搖提取15分鐘，靜置10分鐘，取上清液稀釋後進樣。採用高純度(99.3％)環孢素A原料藥作對照品，用流動相稀釋後進樣。按外標法以峰面積計算凝膠中環孢素A的含量。
(2)體外藥物釋放曲線繪製取凝膠片0.5克，置1×1.5釐米尼龍網(200目)制小袋，置於具塞試管底部。採用等距浸出法[王世亮等。一種新的長效製劑體外釋放方法--等距浸出法。中國新藥雜誌，2003，12(8)627～630]，每個試管加入釋放介質(等滲磷酸鹽緩衝溶液，pH7.2)3毫升，置35±2℃恆溫振蕩培養箱，調節轉速80rpm。固定時間點更換釋放液。
採用高效液相色譜法測定釋放液中環孢素A的含量，計算累計釋放量，以時間為橫坐標，繪製釋放曲線。釋放液的前處理方法取釋放液1毫升，加甲醇至5毫升，振搖1分鐘，10000rpm離心15分鐘，取上清液稀釋後進樣。
試驗結果按本發明實施例2製備厚度為0.5毫米的等腰梯形凝膠片，載藥量經測定為2.96％(每克凝膠含有29.6毫克環孢素A)。該凝膠在pH7.2的等滲磷酸鹽緩衝溶液中的釋放曲線見圖1，在釋放介質中加入透明質酸酶(30Iu/ml)的釋放曲線見圖2。


圖1為環孢素A凝膠在pH7.2的等滲磷酸鹽緩衝溶液中的體外釋放曲線，從圖1可以看出，環孢素凝膠在等滲磷酸鹽緩衝液中4周僅釋放藥物7.02％，說明本發明具有良好的緩釋作用。
圖2為環孢素A凝膠在30Iu/ml透明質酸酶磷酸鹽緩衝溶液中的體外釋放曲線，從圖2可以看出，當釋放介質中加入了透明質酸酶時，釋放速度加快，6小時釋放藥物59.1％，12小時釋放藥物86.2％，同時伴隨凝膠重量有相應趨勢的變化，說明藥物載體(交聯透明質酸)能在體內降解，不用取出，適合用於製備眼部植入緩釋製劑。
權利要求
1.一種含有環孢素的眼植入凝膠，其特徵在於環孢素以非溶解狀態分散於交聯透明質酸凝膠中，按乾燥品計，交聯透明質酸與環孢素的質量比為1∶5～5∶1，優選質量比為1∶3～3∶1，更優選質量比為1∶2～2∶1。
2.權利要求1所述的凝膠，其特徵還在所述環孢素是環孢素A。
3.權利要求1所述的凝膠，其特徵還在於交聯透明質酸凝膠來源於醯肼化合物交聯的透明質酸鈉，優選雙醯肼化合物交聯的透明質酸鈉，更優選丁二酸二醯肼、辛二酸二醯肼或己二酸二醯肼交聯的透明質酸鈉。
4.權利要求1所述凝膠的製備方法，其特徵在於環孢素先混懸於透明質酸水溶液中，再與交聯劑混合反應形成凝膠，凝膠經純化後，切割，包裝，滅菌製得成品。
5.權利要求4所述的製備方法，其特徵在於反應使用的透明質酸鈉為提取法或發酵法或其他方式生產的產品，平均分子量為10萬～300萬道爾頓，優選平均分子量為20萬～150萬道爾頓，更優選平均分子量為20萬～60萬道爾頓。
6.權利要求4所述的製備方法，其特徵在於反應中使用的交聯劑是單醯肼、雙醯肼或多醯肼化合物，優選雙醯肼化合物，更優選丁二酸二醯肼、辛二酸二醯肼或己二酸二醯肼。
7.權利要求4所述的製備方法，其特徵在於反應液中加入羰基活化劑單碳二亞胺或雙碳二亞胺，優選單碳二亞胺，更優選乙基(N，N-二甲基氨基丙基)碳二亞胺。
8.權利要求1所述的的凝膠在製備眼部植入藥物中的應用。
全文摘要
本發明涉及一種含有環孢素的眼植入凝膠及其製備方法和應用。所述凝膠特徵在於環孢素以非溶解狀態分散於交聯透明質酸凝膠中，按乾燥品計，交聯透明質酸與環孢素的質量比為1∶5～5∶1。所述凝膠的製備方法為環孢素先混懸於透明質酸鈉水溶液中，再與交聯劑混合反應形成凝膠，凝膠經純化後，切割，包裝，滅菌製得成品。所述凝膠應用於製備眼部植入藥物，可用於青光眼非穿透性小梁手術預防房水濾過通道粘連，提高濾過和維持濾過通道，使術後眼壓得到良好控制；也可用於預防眼角膜移植後的排異反應和某些眼科自身免疫性疾病。
文檔編號A61P37/00GK101085341SQ200710130668
公開日2007年12月12日 申請日期2007年7月13日 優先權日2007年7月13日
發明者凌沛學, 賀豔麗, 陳建英, 劉傑, 汪敏, 榮曉花 申請人:凌沛學