Il－12對不依賴t抗原免疫反應的增強的製作方法

2023-06-02 17:07:41 1

專利名稱：Il－12對不依賴t抗原免疫反應的增強的製作方法
相關申請本申請是1998年3月5日提交的編號為09/035，594的美國申請的部分繼續申請，原申請的全文通過在此引述而收入本篇。
年幼兒童和老年人特別容易受到莢膜細菌如肺炎球菌(Steptococcus pneumoniae)和腦膜炎球菌(Neisseriameningiditis)致命的感染。據疾病控制中心估計，在美國每年肺炎鏈球菌產生3000例腦膜炎，50，000例菌血症，500，000例肺炎，和七百萬例耳炎(中耳炎)。據世界衛生組織估計，每年在世界範圍內這種有機體產生一億例病例，每年有一千萬例死亡。同樣地，腦膜炎球菌是兒童和年輕成人患腦膜炎的主要原因，在美國每年有2，600例，世界範圍每年有310，000例，有35，000例死亡。
誘導對病原體如肺炎鏈球菌和腦膜炎球菌免疫的多糖疫苗可以獲得，但它們通常對小於兩歲的兒童無效，對年老的個體的功效有限。此外，在所有疫苗的受體中，甚至以綴合形式，只能誘導有限的同型轉換。很明顯地，需要一種接種抗含TI抗原的病原體疫苗的改進方法。
本發明的簡述申請人已發現在不依賴-T細胞的(TI)免疫反應期間，包括對目前使用在人體中的疫苗製備的反應，白細胞介素-12(IL-12)是引導免疫反應[如抗體(IgG)反應]非常強的佐劑。這樣，本發明涉及一種在宿主內增強對TI抗原(一種或多種)的免疫反應的方法。在一個具體實施中，本發明涉及一種在宿主內誘導對TI抗原的免疫反應的方法，其中包括給宿主服用有效量的IL-12和TI抗原。在另一個具體實施中。本發明是一種在宿主內增強對TI抗原的免疫反應的方法，其中包括給宿主服用有效量的IL-12和TI抗原。本發明的方法可用來在哺乳動物宿主內，如靈長類(如人類)，鼠科，貓科，犬科，牛或豬宿主，誘導和/或增強對TI抗原的免疫反應。本發明還涉及含IL-12和TI抗原的組合物。
本發明的方法可用來，如在宿主內誘導和/或增強體液免疫反應(如IgG2a和/或IgG3體液免疫反應)。TI抗原可以包括如，碳水化合物(如多糖)，脂質(如脂質體，磷酸膽鹼)，糖蛋白，半抗原-載體綴合物，或噬菌體(如T4)。在TI抗原和/或IL-12在體內表達的條件下，IL-12和/或TI抗原可以蛋白質或以多核苷酸服用。
在一個具體實施中，本發明涉及一種在宿主內誘導和/或增強對肺炎鏈球菌的免疫反應的方法，其中包括給宿主服用有效量的IL-12和肺炎鏈球菌的TI抗原。在另一個具體實施中，本發明涉及一種在宿主內誘導和/或增強對腦膜炎球菌的免疫反應的方法，其中包括給宿主服用有效量的的腦膜炎球菌的IL-12和TI抗原。
本發明還包括含IL-12和TI抗原的組合物。在本發明的方法和組合物中可使用一種或多種TI抗原。
如本文中所描述的那樣使用IL-12提供了可用來誘導和/或增強對TI抗原免疫反應的有效的方法和組合物。
本發明示圖的簡述

圖1A-1B是交互血清稀釋度和光密度(O.D.)關係圖，表示與注射了DNP-OVA和磷酸緩衝鹽水(PBS)(封閉線)的對照鼠相比，在注射了IL-12和50μg的二硝基苯基-卵清蛋白(DNP-OVA)(斷開線)的BALB/c鼠中，依賴T細胞(TD)抗原模型，二硝基苯基(DNP)-特異IgG2a(圖1A)和IgG3(圖1B)的增加量；每條線表示從個體鼠獲取的血清的結合。
圖1C-1D是交互血清稀釋度和光密度(O.D.)關係圖，表示與注射了DNP-菲可和磷酸緩衝鹽水(PBS)(封閉線)的對照鼠相比，在注射了IL-12和50μg的二硝基苯基-菲可(斷開線)的BALB/c鼠中二硝基苯基(DNP)-特異IgG2a(圖1C)和IgG3(圖1D)的增加量；每條線表示從個體鼠獲取的血清的結合。
圖2A-2F是交互血清稀釋度和光密度(O.D.)關係圖，表示用20μg Menomune A/C/Y/W-135和IL-12(斷開線)或者和PBS載體(封閉線)治療BALB/c鼠對IgM，IgG2b，IgG1，IgG2a，和IgG3抗體總含量的影響；每條線表示從個體鼠獲取的血清的結合。
圖3A-3E表示用PUN-免疫和IL-12(斷開線)或者和PBS載體(封閉線)一起治療BALB/c鼠對IgM，IgG1，IgG2a，和IgG3抗體總含量的影響；每條線表示從個體鼠獲取的血清的結合。
圖4A-4B是交互血清稀釋度和光密度(O.D.)關係圖，表示用DNP-菲可和IL-12(斷開線)或者和PBS載體(封閉線)治療的C57BL/6c鼠內的總量和IgG2a抗體含量；每條線表示從個體鼠獲取的血清的結合。
圖4C-4D是交互血清稀釋度和光密度(O.D.)關係圖，表示用DNP-菲可和IL-12(斷開線)或者和PBS(封閉線)治療的特異缺少T細胞的C57BL/6 T細胞受體剔除鼠(TCR KO鼠)內的總量和IgG2a抗體含量；每條線表示從個體鼠獲取的血清的結合。
圖5A-5B是交互血清稀釋度和光密度(O.D.)關係圖，表示用DNP-菲可和IL-12(斷開線)或者和PBS(封閉線)治療的(C57BL/6x CBA)F1對照鼠內的總量和IgG2a抗體含量；每條線表示從個體鼠獲取的血清的結合。
圖5C-5D是交互血清稀釋度和光密度(O.D.)關係圖，表示用DNP-菲可和IL-12(斷開線)或者和PBS(封閉線)治療的缺少T細胞和NK細胞的CD3ε鼠內的IgG2a和IgG3抗體的含量；每條線表示從個體鼠獲取的血清的結合。
圖6A-6D是交互血清稀釋度和光密度(O.D.)關係圖，表示用PBS載體(封閉線)或1μg IL-12(斷開線)治療及用肺炎球菌多糖血清型3免疫的第7天，14天，21天，28天的BALB/c鼠內的抗-肺炎球菌多糖血清型3(抗-PPS3)IgG2a的含量；每條線表示從個體鼠獲取的血清的結合。
圖7A-7B是交互血清稀釋度和光密度(O.D.)關係圖，表示用PBS載體(封閉線)或1μg IL-12(斷開線)治療及服用Menomune A/C/Y/W-135第161天和179天的BALB/c鼠內的抗-血清組C IgG2a的含量；每條線表示從個體鼠獲取的血清的結合。
圖8A-8E是交互血清稀釋度和光密度(O.D.)關係圖，表示用PBS載體(封閉線)或1μg IL-12(斷開線)治療及服用DNP-菲可第21天，42天，91天，147天和287天的BALB/c鼠內的抗-二硝基苯基(抗-DNP)IgG2a的含量；每條線表示從個體鼠獲取的血清的結合。
本發明的詳細描述由於多糖疫苗的TI屬性，它們對英膜細菌如腦膜炎球菌和肺炎鏈球菌具有較弱的免疫原性。甚至當與外源蛋白質綴合轉化成T-依賴形式，多糖誘導反應在許多方面仍是不足的，如對鼠科動物IgG2a抗體，調節最佳補體固定作用和調理作用的同型的誘導作用。如本文中所描述的，用IL-12對鼠的治療誘導了顯著增加量的對模型TI抗原，即DNP-菲可，及含對含肺炎球菌和腦膜炎球菌的多糖的疫苗(如亞單位疫苗)的IgG2a抗體。使用缺少T細胞和/或NK細胞的免疫缺損鼠說明這樣的細胞與觀察到的抗體增加無關。而且，使用IFN-γKO鼠顯示IL-12對TI抗體反應的刺激僅部分地取決於IFN-γ。IL-12能顯著地增強TI抗原反應的能力說明IL-12可用作為有效的佐劑來誘導抵抗莢膜病原體的保護性免疫反應。
本發明涉及一種在宿主內增強對TI抗原的免疫反應的方法。在一個具體實施中，本發明涉及一種在宿主內誘導對(一種或多種)TI抗原的免疫反應的方法，其中包括給宿主服用有效量的IL-12和TI抗原。在另一個具體實施中，本發明是一種在宿主內增強對TI抗原的免疫反應的方法，其中包括給宿主服用有效量的IL-12和TI抗原。
如本文所使用的術語，「增強」和/或「增強(動名詞)」是指加強(增大)了存在的對病原體的免疫反應。這個術語還指對病原體的免疫反應的啟動(啟動或誘導)。
如本文所使用的，「不依賴-T細胞的(TI)抗原」，本文也稱為「不依賴-胸腺的抗原」，是在不需要T-細胞的情況下能在宿主內誘導免疫反應的抗原。因此，TI抗原包括由不成熟T-細胞(如CD1分子)識別的抗原，如脂阿拉伯甘露聚糖(lipoarabinomannan)。TI抗原還包括，如，碳水化合物(如多糖)，脂質，糖脂，載體綴合物(如H.流感綴合疫苗，多糖綴合物，脂質綴合物，噬菌體綴合物)，脂多糖和噬菌體[參閱，如聖狄亞哥E.Charles Snow學術出版有限公司的B和T淋巴細胞手冊(1994)343-370頁中Bondada和M.Grag的「不依賴-胸腺的抗原」]。TI抗原的具體實例包括細菌多糖，如細菌莢膜多糖(如肺炎鏈球菌莢膜多糖，如PNU-免疫23疫苗，腦膜炎球菌A，C，Y和W-135血清組)，和細菌細胞壁多糖(鏈球菌碳水化合物，磷酸膽鹼)，脂質體，磷酸膽鹼和T4。
TI抗原可從多種需要對其有免疫反應的病原體或有機體中獲得或衍生得到，如莢膜有機體(如細菌如肺炎鏈球菌，腦膜炎球菌，流感菌Haemphilus influenzae，布魯氏桿菌屬的Brucellaabortis)，病毒(如噬菌體)，寄生蟲，真菌和酵母。病原體的TI抗原可使用本領域中已知的技術獲得。如TI抗原可直接從病原體中分離(純化，基本上純的)，使用化學合成衍生，或使用重組方法獲得。此外，TI抗原可從商業源獲得，如在實施例中所描述的。
IL-12是最近定性的異源二聚體細胞因子，其具有的分子量為75 kDa，由二硫化物-鍵合的40 kDa和35 kDa亞單位組成。它由抗原提呈細胞如巨噬細胞製備，並與在激活的T，B和NK細胞上的受體結合[Desai，B.B.，等人，免疫學雜誌.，1483125-3132(1992)；Vogel，L.A.，等人，免疫學雜誌，81955-1962(1996)]；它有幾種作用，包括1)增強T細胞和NK細胞的擴增，2)增加T細胞、NK細胞和巨噬細胞的溶細胞活性，3)誘導IFN-γ產生，並在很小程度上誘導TNF-α和BM-CSF，和4)活化TH1細胞(Trinchieri，G等人，血液，844008-4027(1994))。在Th1克隆中，IL-12已顯示出是一種重要的擴增共同刺激劑(Kennedy等人，免疫學歐洲雜誌，242271-2278，1994)，並致使在血清中IgG2a產量增加[Morris，S.C.，等人，免疫學雜誌1521047(1994)；Germann，T.M.等人，免疫學歐洲雜誌，25823-829(1995)；Sher，A.等人Ann，N.Y.Acad.Sci，795202-207(1996)；Buchanan，J.M.，等人，國際免疫學，71519-1528(1995)；Metzger，D.W.，等人，免疫學歐洲雜誌，271958-1965(1997)]。服用IL-12還能臨時降低IgG1抗體的產量[Morris，S.C.，等人，免疫學雜誌，1521047(1994)；McKnight，A.J.，免疫學雜誌，1522172(1994)；Buchanan，J.M.等人，國際免疫學，71919-1528(1995)]，顯示對Th2反應的抑制作用。IL-12的擴增和克隆在PCT公開號為WO92/05256和WO90/05147中，以及在歐洲專利公開號為322，827(標為「CLMF」)的文獻中都有公開。
如本文中所使用的，術語「白細胞介素-12」和「IL-12」是指白細胞介素-12蛋白質，其個體亞單位，其個體亞單位的多聚體，IL-12的功能片段或部分，「白細胞介素-12」和「IL-12」的功能等同物和/或類似物。如本文所定義的，IL-12的功能片段是在宿主內調節對TI抗原的免疫反應的片段。如本文所定義的，「白細胞介素-12」和「IL-12」的功能等同物或片段包括被修飾的IL-12蛋白質，如導致IL-12產物具有與本文所描述的IL-12相同的活性(如誘導和/或增強對TI抗原的免疫反應)。「白細胞介素-12」的功能等同物和片段還包括其核酸序列(如DNA，RNA)和部分，它們編碼具有IL-12功能或活性(如誘導和/或增強對TI抗原的免疫反應)的蛋白質或肽。此外，這個術語包括通過遺傳密碼的簡併編碼與IL-12相似的肽基因產品並具有如本文所描述的IL-12活性的核苷酸序列。例如，「白細胞介素-12」和「IL-12」的功能等同物包括含「靜止」密碼子取代(編碼胺基酸的一個密碼子取代另一個編碼相同胺基酸的密碼子)的核苷酸序列或含「靜止」胺基酸取代(一個酸性胺基酸取代另一個酸性胺基酸)的胺基酸序列。
適合使用在本發明的方法和組合物中的IL-12可從多種來源獲得或使用本領域中已知的技術合成。如IL-12可從自然來源(如哺乳動物來源，如鼠科或人類源)中提純(分離，基本上純的)，通過化學合成製備，或通過重組DNA技術製備。此外，IL-12可從商業源獲得。
在本發明的方法中服用的有效量是在宿主內誘導和/或增強對TI抗原的免疫反應的量。這樣，如本文中所使用的那樣，「有效量的IL-12」是當給宿主服用時，它是指在宿主內產生對TI抗原的免疫反應的量，或產生與當沒有給宿主使用有效量的IL-12時在宿主內對TI抗原的免疫反應相比增強的免疫反應的量。也就是，「有效量」的IL-12是指相對於沒有使用IL-12時的對TI抗原的免疫反應，誘導了和/或增強了對TI抗原免疫反應的量。
IL-12和TI抗原可作為預防性疫苗或治療性疫苗使用。即，IL-12可在含已在宿主內表現和/或出現的TI抗原的病原體的影響前(預防)或影響後(治療)使用。這樣，IL-12可以給表現出由TI抗原從中獲得或衍生的病原體引起的疾病狀態的宿主使用，或給還沒有表現出由TI抗原從中獲得或衍生的病原體引起的疾病狀態的宿主使用。這樣，IL-12和TI抗原可在宿主表現出疾病狀態前或後給宿主使用，可預防，減輕，消除或延遲發作由TI抗原從中獲得或衍生的病原體引起的疾病狀態。
IL-12和TI抗原可以多種方式使用。常規的用藥方式包括真皮內用藥，經皮用藥(如緩釋聚合物)，肌肉內用藥，腹膜內用藥，靜脈內用藥，皮下用藥，口服，硬腦膜用藥和鼻內用藥途徑。任何其他傳統的用藥方式也可使用，如輸注用藥或巨丸注射，或經上皮或皮膚黏膜層吸收用藥。此外，IL-12和/或TI抗原可與其他組分或生物活性試劑一起服用，如佐劑(如明礬)，藥用可接受的表面活性劑(如甘油酯)，賦形劑(如乳糖)，載體，稀釋劑，脂質體，和媒介物。如果需要，某些甜味劑，調味劑和/或著色劑也可加入。
並且，IL-12和/或TI抗原可通過多核苷酸的體內表達將這些編碼到哺乳動物受試體內來使用。如，可使用活載體給宿主服用IL-12和/或TI抗原，其中含IL-12和/或TI抗原核酸序列的活載體在IL-12和/或TI抗原在體內表達的條件下服用。如宿主可用在體內編碼並表達TI抗原的載體結合IL-12蛋白質或肽一起注射，或結合在體內編碼並表達IL-12蛋白質的載體一起注射。或者，宿主可用在體內編碼並表達IL-12的載體結合與肽和蛋白質形式或蛋白質或肽模擬形式綴合的TI抗原一起注射，或結合編碼並表達TI抗原的載體一起注射。含編碼TI抗原和IL-12蛋白質的序列的單一載體也使用在本發明的方法中。
幾種表達載體體系可購得或可依據重組DNA及細胞培養技術再生。如載體體系如酵母或疫苗病毒表達體系，或病毒載體可使用在本發明的方法和組合物中[Kaufman，R.J.A.J.of Meth.In Cell and Molec.Biol.2221-236(1990)]。其他使用裸露質粒或DNA，在靶脂質體或紅細胞空胞內包含的克隆基因的技術，可用來將IL-12和/或TI抗原多核苷酸引入到宿主內[Freidman.T.，科學，2441275-1281(1991)；Rabinovich，N.R.等人，科學，2651401-1404(1994)]。表達載體的構建及將載體和核酸轉移到多種宿主細胞內可使用基因工程技術實施，如在手冊如分子生物學中分子克隆及當前方案中所描述的，這些文獻都通過在此引述而收入本篇，或通過使用購得的工具實施(Sambrook.J，等人，分子克隆，冷泉港出版社，1989；Ausubel.F.M.等人，分子生物學的當前方案，格林出版聯合會及Wiley-內部科學，1989)。
如本文所描述的，使用IL-12和TI抗原可引導或增強受體宿主內的免疫反應。具體地，在宿主內誘導或增強了對TI抗原的體液免疫反應。在一個具體實施中，與沒有接受IL-12和TI抗原的宿主相比，使用IL-12和TI抗原產生的體液免疫反應致使在受體宿主內增加了總抗體含量。在另一個具體實施中，使用IL-12和TI抗原產生的體液免疫反應致使在宿主內產生了TI-特異抗體。在一個特別具體實施中，TI-特異抗原反應在宿主內產生特異IgG2a和/或IgG3抗體。如在實例中所示，IL-12在增加產生IgG2a方面具有特別的活性，抗體同型在補體固定作用和調理作用中是最有效的，這兩種機理在細菌消除方面是最有效的。很可能的是IL-12誘導或增強了其他抗體同型如IgA和IgM。
宿主內對TI抗原的免疫反應可歸因於通常增強的特異免疫反應和/或歸因於對TI抗原的特異體液免疫反應。在宿主內誘導或增強對TI抗原的免疫反應的方法中，可給宿主使用治療上有效量的IL-12，這個量是在宿主內誘導或增強對TI抗原免疫反應並在宿主內產生改善的狀況(如由於存在TI抗原從中獲得或衍生的病原體引起的疾病或不適被預防，消除或減輕)的量。用來在宿主內誘導或增強對TI抗原免疫反應的IL-12的量取決於多種因素，包括宿主的大小，年齡，體重，通常的健康狀況，性別及飲食，服藥時間，疾病狀況的持續時間或具體情況。IL-12適當的劑量範圍通常為約0.5μg到約150μg每公斤體重。在一個具體實施中，劑量範圍為從約2.75μg到約100μg每公斤體重。在另一個具體實施中，劑量範圍為從約5μg到約50μg每公斤體重。有效劑量可從體外或單位模型試驗系統得到的劑量-反應曲線中推斷到。
在本發明的方法中，有效量的IL-12與TI抗原結合服用。即，IL-12在接近用TI抗原免疫宿主的時間服用，這樣相對於沒有服用IL-12的宿主內的免疫作用，在宿主內對TI抗原的免疫反應被誘導或增強。這樣，IL-12可以在免疫作用前，較好地恰在免疫作用前服用；在免疫作用進行時(即同時)；或在免疫作用後(隨後)服用。此外，IL-12可在TI抗原免疫作用前服用，接著在TI抗原免疫作用後隨後再服用IL-12。
如本文所描述的，IL-12能以影響TD反應相同的方式顯著地增強TI抗體反應。使用DNP-菲可和細菌多糖作為模型TI抗原，可以發現IL-12特別地刺激了IgG2a和IgG3抗體反應。令人驚異地，在缺少T和NK細胞的鼠中觀察到了增強現象。並且，IgG3抗體表達的增強出現不依賴於IFN-γ，IgG2a表達的增強僅僅部分依賴於IFN-γ(見表)。這個結果說明IL-12可用來誘導對細菌病原體的保護性反應。
IL-12發現對DNP半抗原的TD和TI反應具有相同的作用。在兩種情況中，同時服用抗原和IL-12，特異IgG2a和IgG3抗-DNP血清含量被顯著地增加了，而在所分析的時間點上，IgG1表達沒有受到影響。使用TCRβ-δ-雙KO鼠證實對DNP-菲可反應的TI屬性，IL-12調節增強作用機理的事實沒有包括T細胞。然而，在WT和TCR KO鼠對DNP-菲可的反應中觀察到的IL-12的影響比在WT鼠對DNP-OVA的反應中觀察到影響數量級要小。這可能反映了具體DNP-菲可製備的屬性，而不是它是TI抗原的事實，因為使用其他TI抗原如細菌莢膜多糖產出的IL-2增強作用的量與用TD抗原觀察到的量相似[Germamm.T.，等人，歐洲免疫學雜誌，25823-829(1995)；Buchanan，J.M.，等人，國際免疫學，71519-1528(1995)]。最近也已證明如果在細胞轉移的時候用人類IL-12治療SCID鼠，用人類外周血淋巴細胞重建的SCID鼠會安裝上對腦膜炎球菌增血清組C多糖初次抗體反應[Westerink，M.A.，等人，傳染病雜誌，17584-90(1997)]。然而，在那些試驗中，不清楚的是，是否IL-12實際上刺激特異抗體-產生B細胞，或簡單協助嫁接轉移的群體。已確定的是IL-12由於蛋白質和半-載體抗原而增強體內IgG2a的TD產生[Morris，S.C.，等人，免疫學雜誌，1521047-1056(1994)；Germann，T.，等人，歐洲免疫學雜誌，25823-829(1995)；Buchanan，J.M，等人，國際免疫學，71519-1528(1995)；Wynn，T.A，等人，免疫學雜誌，1574068-4078(1996)；Bliss，J，等人免疫學雜誌，156887-894(1996)；Metzger，D.W.，等人，歐洲免疫學雜誌，271958-1965(1997)]。服用細胞因子抑制IgG1的產生，但這種抑制僅是臨時的，IgG1的產生最終也在一定程度上增強了[Germann，T.，等人，歐洲免疫學雜誌，25823-829(1995)；Buchanan，J.M，等人，國際免疫學，71519-1528(1995)]。然而TD抗原刺激常規的B細胞，TI抗原認為是擇優地激活具有B-1顯型的細胞[Cong，Y.Z，等人，國際免疫學，3467-476(1991)]並沒有誘導同型轉換。因為B-1細胞抑制常規B細胞的反應[Riggs，J.E.，等人，J.Exp，Med，172475-485(1990)]而IL-12抑制B-1細胞功能[Vogel，L.A，等人，歐洲免疫學雜誌，26219-223(1996)；Velupillai，P，等人，Infect.Immun，644557-4560(1996)]，所以IL-12的一種影響是容許常規B細胞對TI抗原反應，這樣致使觀察到IgG產生的增加。
一些組織已報導NK細胞在通過釋放IFN-γ刺激IgG TI反應中起了重要的作用。還已顯示以TI方式在體內或體外誘導的Ig分泌可隨著NK細胞的激活而增加[Wilder，J.A.，等人，免疫學雜誌，156146-152(1996)]，可隨著NK細胞的損耗而受到抑制[Snapper，C.M.，等人，免疫學雜誌，1524884-4892(1994)；Wilder，J.A.，等人，免疫學雜誌，156146-152(1996)]。IFN-γ的抗體中和作用逆轉了NK細胞的影響[Snapper，V.M.，等人，免疫學雜誌，1572229-2232(1996)]。最近，發現TNP-LPS和BCL1腫瘤細胞誘導的抗體反應受到IL-12中和作用的抑制，根據這項發現，Koh和Yuan建議了內生IL-12在TI反應中的作用[Koh，C.Y.和Yuan，D，免疫學雜誌，1594745-4752(1997)]。因為IL-12是已知的NK細胞激活劑，所以研究了這些細胞在IL-12調節的TI抗體反應的增強中的作用。為此使用了進行人類CD3ε基因轉基因處理的並且缺少T和NK細胞的鼠。可以發現將這些動物曝露在存在IL-12的TI抗原中產生增強的IgG2a和IgG3抗體反應。這樣，如本文中所描述的，對於IL-12刺激TI IgG產生，NK細胞是不需要的。然而，在延長的一段時間維持IL-12誘導IgG表達方面NK細胞確實顯示出重要性。雖然WT和CD3ε鼠在免疫後的第14天在對IL-12的反應上沒有區別，但與在第28天及以後的WT鼠相比，CD3ε鼠確實表現了較弱的IgG2a反應。因此，儘管對於IL-12的影響NK細胞不是嚴格必需的，但根據試驗的觀測時間它們可能是重要的。
已知IFN-γ是IgG2a和IgG3的開關[Buchanan，J.M，等人，國際免疫學，71519-1528(1995)；Snapper，C.M.，等人，J.Exp.Med，1751367-1371(1992)；Metzger，D.W.，等人，歐洲免疫學雜誌，271958-1965(1997)；Snapper，C.M.，等人，科學，236944-947(1987)；Collins，J.T.等人，國際免疫學，5885-891(1993)]，由IL-12誘導的主要同型，和高含量的IFN-γmRNA在注射TI抗原和IL-12的鼠的脾臟中檢測到。然而，在沒有產生IFN-的兩種細胞(T細胞和NK細胞)存在在情況下，IL-12仍顯著地增強了TI抗體反應。這說明IFN-γ要麼沒有涉及IL-12調節的TI抗體反應增強作用中，要麼是由其他細胞種類產生。已報導具體在用IL-12和IL-18刺激後，B細胞產生IFN-γ[Pang，Y.Y.，等人，血液，80724-732(1992)；Buschle，M.D.，等人，J.Exp.Med，177213-218(1993)；Yoshimoto，T.，等人，Porc，Natl，Acad，Sci.，美國，943948-3953(1997)]。並且，在已在體外用LPS和IL-12激活的CD3ε脾臟細胞中檢測到IFN-γmRNA。為了直接測定IFN-γ調節IL-12增強中的作用，檢測在IFN-γ剔除(GKO)鼠中的TI反應，發現由IL-12對IgG2a和IgG3的增強作用在這些鼠中仍然存在。事實上，應TI抗原免疫作用而產生的IgG3分泌顯示出與IFN-γ完全無關。在使用TD抗原的早期研究(Metzger，D.W.，等人，歐洲免疫學雜誌，271958-1965(1997))中，同樣發現IL-12會增強通常缺損IFN-γ表達的鼠中的IgG的產生。對TD抗原反應而產生抗體的量在GKO鼠中是較低的，但注射IL-12顯著地增加了IgG2b和IgG1的量。事實上，在某些情況中IgG1的量是由IL-12重建到與在WT鼠中所觀察到的量相同的量。雖然涉及在不存在IFN-γ的情況下IL-12增強作用的機理沒被了解，但可能包括其他中介細胞因子或B細胞的直接刺激作用。最近已有顯示IL-12與激活的人類和鼠科B細胞的表面相結合[Vogel，L.A.，等人國際免疫學，81955-1962(1996)]，這說明後-轉換細胞可直接對IL-12反應，這個機理與在TD和TI抗原體系中的結論是一致的。
本文中所記錄的發現是顯著的，因為肺炎鏈球菌和腦膜炎球菌是肺炎，腦膜炎和耳炎的首要致病因素，在美國每年引發估計約七百五十萬例病例，在世界範圍每年引發約一億例病例。此外，在發展中的目前可獲得的多糖疫苗和綴合疫苗只有有限的價值，特別在在刺激同型轉換方面。應疫苗接種IL-12誘導IgG2a抗體的事實是非常有意義的，因為這是鼠內調節最佳補體固定作用和調理作用的初級同型。本文所描述的結果是使用完全的Freund佐劑和明礬(核准用預人類的佐劑)作為佐劑得到的。並且，在疫苗製備中對具體血清類型的抗體特異性的初步分析顯示，抗與最有疑問的有機體有關的血清類型誘導了高含量的IgG2a。Robbins等人[Robbins，J.B.，等人，傳染病雜誌，1711387-1398(1995)；Robbins，J.B.，等人，Adv.Exp.Med.Biol.，397169-182(1996)]已提供證據抵抗莢膜細菌的保護作用與IgG抗體的循環量有關，這說明由IL-12誘導的血清IgG2a抗體在調節細菌清除方面是有效的。只有，本文所描述的結果顯示IL-12在增加當前的多糖疫苗以及可獲得的綴合疫苗的保護能力方面是有用的。
這樣，本文所描述的方法和組合物可用來治療和/或預防與含一種或多種TI抗原的病原體有關的疾病或狀況。本文所描述的方法和組合物可結合可從相同病原體中，或從病原體的不同菌株中，或從不同病原體中獲得或衍生的單一TI抗原或多種TI抗原一起使用有效量的IL-12。這樣，含IL-12和一種或多種TI抗原的組合物可用來預防和/或治療一種或多種與從中獲得TI抗原的病原體有關的疾病或狀況。
本發明用下列實施例演示，實施例不在任何方面意味著對本發明的限制。
在第0天將鼠在腹腔內用沉澱在明礬中的或乳化在完全的Freund佐劑(CFA；Gibco BRL，紐約州Grand島)中的抗原免疫，如在結果中所給出的。在明礬中的抗原的製備是通過混合含500μg抗原的300μl PBS和160μl 10％硫酸鋁鉀(Fisher科學，Pittsburgh，PA)，調節PH值到6.5，並用PBS衝洗沉澱三次實施的。抗原包括50μg/鼠DNP-OVA和DNP-菲可(都從生物研究技術有限公司獲得，San Rafael，CA)分別作為模型T-依賴(TD)和模型不依賴-T(TI)抗原。此外，使用下列購得的多糖疫苗1)115μg/鼠的PNR-免疫23(Lederle實驗處，美國Cyanamid公司，Pearl River，紐約州)，一種含有從23種肺炎鏈球菌的血清類型中獲得的提純的莢膜多糖混合物的多價肺炎球菌疫苗；2)20μg/鼠的Menomune-A/C/Y/W-135(Connaught試驗有限公司，Swiftwater PA)，一種含有從4種腦膜炎球菌的血清組中獲得的提純的莢膜多糖的腦膜炎球菌疫苗。在一些試驗中，在第28天通過腹腔內給鼠推進乳化在不完全的Freund佐劑(CFA；Gibco BRL，紐約州Grand島)中的115μg的PUN-免疫23。通過從眼窩血管叢放血製備血清。通過ELLSA檢測抗體含量抗-DNP抗體含量通過如前面所述的有一些修改的同型-特異ELISAs來測定[Buchanan，J.M.，等人，國際免疫學，71519-1528(1995)；Metzger，D.W.，等人，歐洲免疫學雜誌，271958-1965(1997)]。簡單地，微量滴定板(Nalge Nunc國際，Naperville，IL)用10μg/ml DNP-牛血清清蛋白綴合物(DNP-BSA；生物研究有限公司)的PBS溶液覆蓋過夜。用含0.3％Brij-35的PBS(Sigma，St.Louis，MO)衝洗板後，將板用含5％胎牛血清(Hyclone實驗室，Logan，UT)和0.1％Brij-35(Sigma)的PBS在室溫封閉1小時。然後在室溫下將板用系列鼠血清稀釋液溫育2小時，用為檢測總抗體的與山羊抗-鼠Ig(Sigma)綴合的鹼性磷酸酯酶，或為檢測具體同型的與特異山羊抗-同型抗體(南部生物技術聯合會，Birmingham，AL)綴合的鹼性磷酸酯酶檢測結合抗體。在生物溫育1小時後，加入p-硝基苯基底物，並在405納米用ELISA微量板讀數器(Bio-Tek儀器，Winooski，VT)讀取顯色。抗體-酶綴合物的同型特異性及適當的工作稀釋度通過對已知同型(Sigma)的標準骨髓瘤蛋白質的滴定來確定。對DNP檢驗的特異性因沒有鼠血清與BSA-覆蓋培養皿結合而確定。
對肺炎球菌和腦膜炎球菌多糖特異抗體通過在37℃用100μg/ml聚-L-賴氨酸的PBS溶液(PLL，Sigma)開始覆蓋微量滴定板來測定。用PBS衝洗板，並向每個培養皿加入10μg/ml的Pnu-免疫23或MenomuneA/C/Y/W-135的PBS溶液過夜。檢驗的剩餘物如上所述實施抗-DNP抗體測定。使用僅用PLL覆蓋的板沒有觀察到抗血清結合。統計分析使用Mann-Whitney U試驗實施統計分析。使用Titercal軟體通過將數據調整配合歸納的四參數對數曲線測定滴定度。細胞因子逆轉錄酶-PCR(RT-PCR)使用Trizol試劑(生命技術有限公司，Gaithersburg，MA)從脾臟中分離全部RNA。cDNA合成使用逆轉錄酶工具(生命技術)採用寡(dT)16-18引物實施。採用IFN-γ的特異引物，及次黃嘌呤磷酸核糖轉錄酶(HPRT)擴增cDNA。正義和反義引物所具有的序列都如下所示IFN-γ，5』-CGACTCCTTTTCCGCTTCCTGAG-3』(SEQ ID NO2)；HPRT，5』-GTTGGATACAGGCCAGACTTTGTTG-3』(SEQ IDNO3)和5』-GATTCAACTTGCGCTCATCTTAGGC-3』(SEQID NO4)。PCR擴增通過混合2μl cDNA，10μl 300 mM Tris-Hcl(PH8.5)，75 mM硫酸氨，2.0 mM氯化鎂，5μl 2.05 mM dNTPs(Invitrogen公司)，0.5μl Taq DNA聚合酶(2.5U；GIBCOBRL)，2μl 20μM引物及DEPC水到總體積為50μl實施。混合物在95℃溫育5分鐘，然後進行下列擴增步驟1分鐘95℃，1分鐘56℃及1分鐘72℃，持續35個周期。接著在72℃最後延伸10分鐘。PCR產物在2.5％瓊脂糖上分離並用溴化乙錠著色。帶顯色並在UV透射下拍照。結果在用DNP-OVA或DNP-菲可免疫後IL-12增強DNP-特異IgG2a和IgG3含量
IL-12已顯示出通過增加的由T細胞和NK細胞分泌的IFN-γ刺激細胞-調節免疫性[Trinchieri，G.，Annu，Rev.免疫學，13251-276(1995)；Buchanan，J.M.，等人，Int.J.Pediat.Hematol.Oncol.，3123-131(1996)]。然而，在這些研究中IL-12對體液免疫性的影響是不清楚。IL-12能顯著地增強對T-依賴抗原的體液免疫反應，如蛋白質和半載體綴合物已在前面描述[Buchanan，J.M.等人，國際免疫學，71519-1528(1995)]。IL-12還能增強對不依賴T(TI)抗原的抗體反應現在在本文描述。如下面所述，觀察IL-12對IgG對TI抗原，DNP-菲可抗體反應的影響，並與用與OVA綴合的DNP的TD形式所觀察到的影響相比較。
在第-1，0，+1天用1μg IL-12或PBS載體腹腔內注射BALB/c鼠，在第0天用乳化在CFA中的DNP-OVA或DNP-菲可注射BALB/c鼠。可以發現與接受抗原和PBS載體的鼠相比，在用DNP-OVA免疫期間用IL-12治療的鼠在免疫後7天內產生增加量的血清抗體。觀察到的增強持續至少到第35天。用DNP-菲可免疫並用IL-12治療的鼠也顯示出抗體量的增加，儘管這種效果直到免疫後第21天才明顯。分析具體抗體同型顯示，與對照鼠相比，IL-12治療過的鼠內DNP-特異IgG2a和IgG3的量增加了(圖1A-1D)。在用DNP的TD或TI形式免疫過的鼠內觀察到顯著的增加，儘管這種效果在前一組中最顯著。在兩種情況中，在第21天IgG2a和IgG3抗體的增強達到最大並保持上升至少再有3周。結果顯示在TD和TI體液免疫反應中IL-12的影響是相同的，說明IL-12是TI多糖疫苗有效的佐劑。IL-12增強鼠對腦膜炎球菌多糖疫苗的體液反應下一系列試驗實施以確定IL-12如何刺激IgG1抗體對其他TI抗原的反應，特別是對人類具有醫療重要性的多糖抗原。使用腦膜炎球菌多糖疫苗實施試驗，一種對嬰兒只有有限功效的疫苗。為此，BALB/c鼠用含A，C，Y，和W-135莢膜血清組的腦膜炎球菌多糖疫苗(Menomune)免疫。疫苗與3天劑量的1μg IL-12或PBS載體一起腹腔內給成年BALB/c鼠服用。將鼠每周放血並通過ELISA檢測定義同型的多糖-特異抗體。可以發現與沒有使用IL-12的鼠相比，IgG2a和IgG3抗-多糖抗體的量通過服用IL-12被顯著地增強了(圖2A-2F)。事實上，鼠僅有很弱或沒有IgG2a反應，除非它們已用疫苗和IL-12一起接種過。總抗體量和IgG1的量一定程度上被IL-12增強了，IgM受到輕微抑制，對IgG2a的產生沒有顯示出可檢測到的影響。IL-12增強鼠對肺炎球菌多糖疫苗的體液反應檢測IL-12作為目前人類使用的TI疫苗的佐劑的應用，將鼠用肺炎球菌疫苗，PNU-免疫23，含從肺炎鏈球菌的23血清類型提純的莢膜多糖的混合物免疫。在第0天將BALB/c鼠用乳化在CFA的疫苗免疫。在第-1，0和+1天，用IL-12或1％PBS載體腹腔內注射動物。在第28天將乳化在IFA中疫苗和IL-12推進到鼠腹腔內，或在第27，28和29天推進1％NMS。每周通過ELISA測定抗-肺炎球菌多糖抗體的量。可以發現與對照鼠相比，用IL-12治療的鼠增強了總抗體的量。具體同型分析顯示出特異IgM和IgG1，IgG2a和IgG3的表達增強了(圖3A-3E)。IgG2A的增強早在第7天的初次反應時可觀察到，而IgM，IgG1和IgG3的量在第21天後增加。另一方面，IgG2b的量在整個試驗過程中在用IL-12治療過的鼠中和對照鼠中都檢測不到。在不存在T細胞的情況下IL-12對IgG2a的增強作用檢測T細胞在IL-12影響TI抗體反應方面的作用，分析在特異缺少T細胞的鼠(即C57BL/6β-δ-TCR KO鼠)中IL-12的影響。在第0天用乳化在CFA中的DNP-菲可免疫C57BL/6WT和TCR KO鼠，並在第-1，0，+1天用IL-12或PBS載體腹腔內注射C57BL/6 WT和TCR KO鼠。每周收集血清，並通過ELISA測定DNP-特異抗體。結果顯示WT和TCR KO反應的量基本上一致，在每種情況中IL-12對總抗體產生都有一點影響(圖4A-4D)。在IL-12增強IgG2a DNP-特異抗體產生能力上WT和KO鼠間也沒有區別。在第7天IgG2a的量可檢測到，在第21天達到最大。在兩個品系的鼠中IL-12的增強作用也可在第7天觀察到，並保持到第28天。這些結果證實反應的TI屬性，並說明IL-12調節其對TI抗體反應的影響的能力能產生在沒有T細胞的情況中。以前已顯示激活的鼠科和人類B細胞表達IL-12的受體[Vogel，L.A.等人，國際免疫學，81955-1962(1996)]，說明IL-12可直接激活B細胞。另外，IL-12能刺激天然殺傷細胞分泌後來產生觀察到效果的細胞因子。IL-12增強缺少T細胞和NK細胞的鼠中的TI抗體反應已證實NK細胞負責調節TI抗體反應[Bondada，S和Garg，M.，「不依賴-胸腺抗原」，B和T淋巴細胞手冊，E.C.Snow，編輯，學術出版社，聖狄亞格，340-370(1994)；Snapper，C.M.等人，免疫學雜誌，1524884-4892(1994)；Snapper，C.M.和Mond，J.J，免疫學雜誌，1572229-2232(1996)；Wilder，J.A，等人，免疫學雜誌，156146-152(1996)；Koh，C.Y.和Yuan，D.，免疫學雜誌，1594745-4752(1997)]。也已知道IL-12激活NK細胞[Trinchieri，G.，Annu.Rev.免疫學，13251-276(1995)；Trinchieri，G.，血液，844008-4027(1994)]。因此，為了研究NK細胞在由IL-12對IgG2a抗-DNP反應增強中的作用，將缺少T細胞和NK細胞的鼠用DNP-菲可和IL-12接種。使用在這個試驗中的動物是進行人類CD3ε基因轉基因(傑克遜實驗室)的(C57BL/6 x CBA)F1鼠。這種轉基因的引入使得受體鼠內T淋巴細胞和NK細胞的發育完全阻斷，但B細胞的發育是正常的[Wang，B.，等人，Proc.Natl.Acad.Sci.，美國，919402-9406(1994)]。預料不到地發現，在存在IL-12的情況下將這些動物曝露在DNP-菲可中產生典型的IgG2a抗-DNP抗體反應的增強(圖5A-5D)。與WT對照鼠相比，CD3ε鼠中增強量實際上更顯著，因為沒有接種IL-12的CD3ε鼠幾乎完全沒有產生的IgG2a抗體。儘管在這個試驗中在WT鼠中IL-12顯示了很小的對IgG3抗-DNP量的增強作用，但它明顯地刺激了CD3ε鼠中IgG3的產生(圖5A-5D)。對於其他同型，對WT鼠的IL-12治療致使IgG2b和IgG1抗-DNP抗體的產生減少，並對IgM抗體沒有影響。在另一個方面，在CD3ε鼠中IL-12對IgM產生抑制作用但對IgG2b和IgG1的含量沒有影響。歸納起來，結果提供了證據說明，IL-12對IgG2a和IgG3 TI抗體反應的影響機理中不包括NK細或T細胞，儘管這些細胞可能會影響其他同型的表達。以前已顯示激活的B細胞表達IL-12的受體[Vogel，L.A.，等人，國際免疫學，81955-1962(1996)]，說明IL-12直接激活B細胞。另外，LI-12能刺激細胞而不是T細胞或NK細胞分泌細胞因子，這些細胞因子然後能調節觀察到的效果。由IL-12增強的TI抗體產生僅部分依賴於IFN-γ由IL-12誘導的IFN-γ在TD免疫反應期間的IgG2a和IgG3的增強中起到根關鍵的作用[Germann，T，等人，歐洲免疫學雜誌，25823-829(1995)；Buchanan，J.M.，等人，國際免疫學，71519-1528(1995)；Metzger，D.，等人，歐洲免疫學，271958-1965(1997)]。為了研究在TI反應期間在刺激IgG2a和IgG3抗體產生方面IFN-γ的作用，如上所述用DNP-菲可免疫BALB/c鼠，並用PBS或者IL-12注射BALB/c鼠。12小時後對脾臟mRNA分析顯示，在使用IL-12後IFN-γ的含量被充分地增加了。不論使用明礬還是CFA作為佐劑這個結果都是一致的。在TI反應期間IL-12誘導大量IFN-γmRNA的能力說明，在所觀察到的抗體產生的增強作用中IFN-γ是很重要的。
為了直接闡明FN-γ的重要性，用Menomune或DNP-菲可免疫WT及GKO鼠並同時用PBS載體會IL-12注射。與僅接受抗原和PBS載體的鼠相比，用抗原和IL-12治療的WT鼠的血清IgG2a含量增加三到四倍(見表)。用用樣方式免疫的GKO鼠表現較小的增強，但仍然使IgG2a含量增加(約增加到兩倍)。對於IgG3，在WT和GKO鼠中觀察到由IL-12產生的兩到三倍的增強，除了用DNP-菲可免疫的GKO鼠不論它們是用IL-12治療還是用PBS載體治療都產生大量的IgG3抗體。這些結果說明IL-12對IgG2a的增強作用是部分而不是全部依賴於IFN-γ而IgG3量的增加完全不依賴於IFN-γ。表由IL-12對TI抗體反應的增強作用僅部分依賴與IFN-γ *每組四隻BALB/c WT鼠和GKO鼠的試驗組在第0天用Menomune或DNP-菲可的CFA溶液免疫，在第-1，0，+1天用IL-12的PBS載體治療。兩周後分別使用覆蓋Menomune或DNP-BSA的板通過ELISA檢測抗體含量。結果表示為每組鼠的平均滴定度，具體滴定度在圓括號內表示。與注射抗原或PBS的鼠相比+P＜0.05。對肺炎球菌疫苗和腦膜炎球菌疫苗的組分的免疫反應的增強在第-1，0，+1天，在腹腔內用PBS載體(封閉線)或1μgIL-12(斷開線)治療BALB/c鼠。在第0天在腹腔內用5μg肺炎球菌多糖血清類型3免疫鼠。鼠每周放血，並通過ELISA對從第7，14，21和28天獲取的血清進行抗-肺炎球菌類型3-特異IgG2a含量分析。參閱圖6A-6D。
在第-1，0，1天用PBS載體(封閉線)或1μg IL-12(斷開線)注射BALB/c鼠。此外，在第0天給鼠腹腔內推進20μgMenomune A/C/Y/W-135。在第165天，通過同樣的途徑給鼠推進20μg Menomune疫苗。鼠每周放血，通過ELISA使用覆蓋腦膜炎球菌多糖C的板對第161天(推進前的4天)和第179(推進後的14天)天的血清進行血清組C-特異IgG2a含量分析。參閱圖7A-7B。
這些結果顯示抗肺炎球菌疫苗和腦膜炎球菌疫苗的具體(多組分)組分的抗血清的結合。IL-12誘導長時記憶在第-1，0，1天，在腹腔內用PBS載體(封閉線)或1μgIL-12(斷開線)治療BALB/c鼠。在第0天給鼠腹腔內注射50μgDNP-菲可明礬溶液。在第42天，給鼠腹腔內推進50μgDNP-菲可。每周收集血清，並通過ELISA使用覆蓋DNP-BSA的板對第21，42，91天(推進後7周)，第147天(推進後15周)和第287(推進後35周)天的血清進行DNP-特異IgG2a含量分析。如圖8A-8E所示，IL-12調節增強作用在初始接種疫苗9個多月後充分顯現。等同物雖然本發明已具體地演示並描述了有關其較好的具體實施，但本領域中的技術人員應該理解的是，在沒有背離如所附權利要求書所限定的本發明的精神和範圍的情況下，可作各種形式和細節上的變通。本領域中的技術人員僅採用常規的試驗就能識別或能確定許多本文特別描述的本發明的特別具體實施的等同物。這樣的等同物包括在權利要求書的範圍內。
權利要求
1．一種在宿主內誘導對不依賴T-細胞的抗原的免疫反應的方法，其包括給宿主服用有效量的白細胞介素-12和不依賴T-細胞抗原。
2．根據權利要求l的方法，其中不依賴T-細胞抗原是從下列基團中選取的，包括碳水化合物，脂質，糖脂，載體綴合物，脂多糖和噬菌體。
3．根據權利要求2的方法，其中碳水化合物抗原是多糖抗原。
4．根據權利要求3的方法，其中多糖抗原是從下列基團中選取的，包括細菌莢膜抗原和細菌細胞壁抗原。
5．根據權利要求1的方法，其中不依賴T-細胞抗原是從下列基團中選取的細菌中獲得的，包括肺炎鏈球菌，腦膜炎球菌和流感菌Haemophilus influenzae。
6．根據權利要求1的方法，其中免疫反應是體液免疫反應。
7．根據權利要求6的方法，其中體液免疫反應產生增強的IgG2a和IgG3抗體反應。
8．根據權利要求1的方法，其中白細胞介素-12在白細胞介素-12在體內表達的情況下作為多核苷酸服用。
9．一種在宿主內增強對不依賴T-細胞的抗原的免疫反應的方法，其包括給宿主服用有效量的白細胞介素-12和不依賴T-細胞抗原。
10．根據權利要求9的方法，其中不依賴T-細胞抗原是從下列基團中選取的，包括碳水化合物，脂質，糖脂，載體綴合物，脂多糖和噬菌體。
11．根據權利要求10的方法，其中碳水化合物抗原是多糖抗原。
12．根據權利要求11的方法，其中多糖抗原是從下列基團中選取的，包括細菌莢膜抗原和細菌細胞壁抗原。
13．根據權利要求9的方法，其中不依賴T-細胞抗原是從下列基團中選取的細菌中獲得的，包括肺炎鏈球菌，腦膜炎球菌和流感菌Haemophilus influenzae。
14．根據權利要求9的方法，其中免疫反應是體液免疫反應。
15．根據權利要求14的方法，其中體液免疫反應產生增強的IgG2a和IgG3抗體反應。
16．根據權利要求9的方法，其中白細胞介素-12在白細胞介素-12在體內表達的情況下作為多核苷酸服用。
17．一種在宿主內誘導對肺炎鏈球菌免疫反應的方法，其包括給宿主服用有效量的白細胞介素-12和肺炎鏈球菌的不依賴T-細胞抗原。
18．根據權利要求17的方法，其中免疫反應是體液免疫反應。
19．根據權利要求18的方法，其中體液免疫反應產生增強的IgG2a和IgG3抗體反應。
20．根據權利要求17的方法，其中白細胞介素-12在白細胞介素-12在體內表達的情況下作為多核苷酸服用。
21．一種在宿主內誘導對腦膜炎球菌免疫反應的方法，其包括給宿主服用有效量的白細胞介素-12和腦膜炎球菌的不依賴T-細胞抗原。
22．根據權利要求21的方法，其中免疫反應是體液免疫反應。
23．根據權利要求22的方法，其中體液免疫反應產生增強的IgG2a和IgG3抗體反應。
24．根據權利要求21的方法，其中白細胞介素-12在白細胞介素-12在體內表達的情況下作為多核苷酸服用。
25．一種組合物，其包括白細胞介素-12和不依賴T-細胞抗原。
26．根據權利要求25的組合物，其中不依賴T-細胞抗原是從下列基團中選取的，包括碳水化合物抗原，脂質抗原，糖脂抗原，載體綴合物抗原，脂多糖抗原和噬菌體抗原。
27．根據權利要求26的組合物，其中碳水化合物抗原是多糖抗原。
28．根據權利要求27的組合物，其中多糖抗原是從下列基團中選取的，包括細菌莢膜抗原和細菌細胞壁抗原。
29．根據權利要求25的組合物，其中不依賴T-細胞抗原是從下列基團中選取的細菌中獲得的，包括肺炎鏈球菌，腦膜炎球菌和流感菌Haemophilus influenzae。
全文摘要
本發明涉及一種在宿主內(如哺乳動物,包括人類)調節對不依賴T－細胞或胸腺的免疫反應的方法,包括給宿主服用有效量的白細胞介素－12(IL－12)和不依賴T－細胞的抗原。在一個具體實施中,本發明涉及一種在宿主(如哺乳動物,包括人類)內誘導對TI抗原的免疫反應的方法,其包括給宿主服用有效量的白細胞介素－12(IL－12)和TI抗原。在另一個具體實施中,本發明涉及一種在宿主內增強對TI抗原的免疫反應的方法,其包括給宿主服用有效量的IL－12和TI抗原。本發明的方法可用於如誘導或增強體液免疫反應(IgG2a和/或IgG3體液免疫反應)。
文檔編號A61P43/00GK1296414SQ9980367
公開日2001年5月23日 申請日期1999年3月4日 優先權日1998年3月5日
發明者丹尼斯·W·梅特澤傑, 雷內·M·巴查南 申請人:俄亥俄醫學院