喜馬拉雅杜鵑活性提取物的製法及美白抗衰老活性化妝品的製作方法

2023-06-02 05:50:16

專利名稱：：喜馬拉雅杜鵑活性提取物的製法及美白抗衰老活性化妝品的製作方法
技術領域：
：本發明涉及喜馬拉雅杜鵑活性提取物的製法以及具有美白和抗衰老功能的功能性化妝品，尤其涉及一種從喜馬拉雅杜鵑中提取脂溶性的中等極性活性成分的製備方法，以及應用該提取物製備而成的具有美白和抗衰老活性的化妝品。
背景技術：
：青藏高原亦稱西藏高原，中國最大的高原，也是世界上最高的高原，有"世界屋脊"之稱。面積240萬平方公裡(93萬平方裡)，平均海拔4,000公尺5,000公尺(13,123呎16,404呎)。由於海拔很高，青藏高原的空氣比較乾燥、稀薄，太陽輻射比較強，氣溫比較低；由於其地形的複雜和多變，青藏高原上氣候本身隨地區的不同而變化很大，總的來說高原上降雨比較少。喜馬拉雅杜鵑為杜鵑花科高山常綠灌木或小喬木，自然生長狀態下樹高約3米，生長在海拔2500至4000米山地陰坡的冷杉林中或林緣草坡上。喜馬拉雅杜鵑生長的環境，空氣比較乾燥，稀薄，太陽輻射比較強，氣溫比較低，降雨比較少。長久以來，生長在海拔3500多米高山地帶的喜馬拉雅杜鵑(Rhododendron)耐寒性強，抗旱性強，抗紫外線能力強。杜鵑花的花、葉、根、莖均可入藥，是傳統的藥用植物。杜鵑花性味酸甘，具有清熱解毒、和血、祛風溼等功效，主要作用是抗氧化性能、抗衰老和抑制酪氨酸酶活性。研究發現杜鵲含鞣質、還原性物質、強心甙、黃酮類、中性樹脂、酸性樹脂、油脂和揮髮油等多種活性成分；葉中含多種黃酮類、酚類等活性成分；嫩枝中還含熊果酸(Ursolicacid)等三萜類成分；莖和果實中也含鞣質；葉含揮髮油、黃酮類、香豆素及酚酸類化合物等。葉尚含杜鵑醇(rhododendrol)、氫醌(hydroquinone)、浸木毒素(andromedotoxin，rhodotoxin)及多種三鵬化合物。目前，已經公開的與杜鵑提取物相關的中國專利主要涉及杜鵑提取物在藥物方面及化妝品美白原料的應用。CN1569885A公開了一種提取熊果酸活性成分的製備方法，採用醫用活性炭吸附脫除雜質的方法製備純度較高的熊果酸活性成分；CN101310705A公開了一種祛斑美白化妝品添加劑及其製備方法，採用百裡香杜鵑、烈香杜鵑與其他植物的進行復配提取具有抑制酪氨酸酶活性的活性成分。上述專利主要針對的是杜鵑提取物進行藥理方面的研究，以及採用復配的方法提取活性較好的美白產品。因此，人們對杜鵑花的研究和利用非常有限，青藏高原杜鵑花資源豐富，且為可再生的極限環境自生植物，可以開發利用以獲得活性更好的活性成分。
發明內容本發明的目的旨在提供一種喜馬拉雅杜鵑活性提取物的製法及美白抗衰老活性化妝品，借鑑綠色植物的天然保護機制，從極限環境自生植物中提取天然、穩定的具有抗衰老和美白功效的中等極性活性成分，並將其應用於功能性化妝品中。本發明的技術解決方案是喜馬拉雅杜鵑的活性提取物的製備方法，其特徵在於包括以下步驟I、將乾燥的喜馬拉雅杜鵑製成粉末；II、將喜馬拉雅杜鵑粉末放入濾紙袋並置於索氏提取器的提取管內，向提取瓶中加入^l瓶體體積的甲醇及23粒沸石，以8(TC95t:恆溫水浴浸提，至提取管中甲醇呈無色，得到粗提液；III、將喜馬拉雅杜鵑甲醇粗提液減壓濃縮去除並回收甲醇，並用去離子水懸浮脫甲醇的提取物，得到懸浮液；IV、用石油醚萃取懸浮液，脫除葉綠素和鞣質，得到精提液；V、採用乙酸乙酯超聲萃取的方法從精提液中萃取活性提取物，濃縮回收乙酸乙酯後將活性提取物真空乾燥成膏體。進一步地，上述的喜馬拉雅杜鵑的活性提取物的製備方法，其中——步驟I中，將喜馬拉雅杜鵑在自然環境下乾燥，然後再粉碎製成平均粒度在100目的粉末。步驟II中，將喜馬拉雅杜鵑粉末放入摺疊好的濾紙中，然後置於提取管中；提取瓶中加入l的甲醇；以89t:水浴浸提加熱提取至提取管中甲醇基本無色；步驟III中，將得到喜馬拉雅杜鵑甲醇粗提液減壓濃縮，回收甲醇，用去離子水懸浮該粗提液，體積約為100200mL，得到懸浮液；步驟iv中，石油醚與懸浮液按體積比3:i、2:i或i:i進行萃取，以較少量的石油醚儘可能的除去葉綠素和鞣質。步驟v中，乙酸乙酯與精提液按體積比3:i、2:i或i:i進行超聲萃取，濃縮活性成分，回收乙酸乙酯，並將活性成分於45t:的真空乾燥箱中乾燥。—種美白和抗衰老活性化妝品，該化妝品包含按照權利要求1所述方法製備獲得的喜馬拉雅杜鵑活性提取物，具有抑制酪氨酸酶活性和抗氧化活性的功效。該化妝品的劑型不限，可以為水劑、霜劑、油劑、洗液或乳狀液等。與現有技術相比，本發明具有如下優點1、在化妝品的功能性原料的選材上，喜馬拉雅杜鵑資源豐富，來源天然無汙染，生產所得的是高附加值產品，真正實現了開發極限環境自生植物，具有很高的經濟價值，並可在一定程度上調控生態環境；2、上述喜馬拉雅杜鵑的提取方案中，化妝品限用原料——甲醇已通過減壓濃縮脫除乾淨，消除了工藝製造中的隱患；3、在上述提取工藝中採用石油醚除葉綠素、鞣質等低極性化合物，相對於在提取之前除掉葉綠素和鞣質來說，葉綠素和鞣質脫除的完全度較高，而且抗氧化活性和美白活性成分損失較少，且石油醚可回收再利用，節省成本；4、在上述製備工藝中較高溫度提取，所提取出來的活性原料具有很好的高溫穩定性，可以添加在化妝品配製的任一階段，甚至在化妝品的高溫滅菌階段加入也不會影響其原有活性，因而無需顧忌化妝品冷配可能帶來的微生物汙染問題。具體實施例方式本發明將極限環境自生植物的保護機制應用於皮膚護理中，製備出具有美白抗衰老作用的化妝品，該化妝品選用喜馬拉雅杜鵑為主要原料，從中提取天然的中等極性活性成分，具有抗自由基、抗氧化和美白的功能。本發明從喜馬拉雅杜鵑中提取脂溶性活性成分的方法包括以下步驟步驟l、將乾燥的喜馬拉雅杜鵑花葉粉碎成粉末；步驟2、選用甲醇進行索氏提取，將喜馬拉雅杜鵑粉末放入濾紙袋並置於索氏提取器的提取管內，向提取瓶中加入4l瓶體體積的甲醇及23粒沸石，以8(TC95t:23恆溫水浴浸提，至提取管中甲醇呈無色，得到粗提液；步驟3、將喜馬拉雅杜鵑甲醇粗提液減壓濃縮去除並回收甲醇，並用100200mL去離子水懸浮脫甲醇的提取物，得到懸浮液；步驟4、將步驟3得到的去離子水懸浮液，用石油醚萃取，以石油醚與懸浮液混合萃取，合併萃取液，減壓濃縮回收石油醚；步驟5、將步驟4得到的精提液用乙酸乙酯超聲萃取，以乙酸乙酯與精提液混合萃取，萃取至乙酸乙酯基本無色為止，合併萃取液，減壓濃縮回收乙酸乙酯，將活性成分置於45t:的真空乾燥箱中乾燥24h得中等極性活性成分浸膏。上述方案的優選工藝為在上述方案的步驟l中，採用採摘的喜馬拉雅杜鵑花葉自然條件下乾燥，粉碎成平均粒度在IOO目的粉末。所述喜馬拉雅杜鵑僅限於採自於喜馬拉雅山脈的高山常綠杜鵑。在上述方案的步驟2中，甲醇索氏提取，將喜馬拉雅杜鵑粉末放入摺疊好的濾紙中，置於提取管中，提取瓶中加入l的甲醇，89t:水浴加熱提取至提取管中甲醇基本無色為止完成提取。在上述方案的步驟4中，將水懸液用石油醚萃取，以石油醚與懸浮液體積比為3:i、2:i、i:i萃取，萃取至石油醚基本無色為止，合併萃取液，回收石油醚。在上述方案的步驟5中，將步驟4所得水懸液用乙酸乙酯超聲萃取，以乙酸乙酯與精提液體積比為3:i、2:i、i:i萃取，萃取至乙酸乙酯基本無色為止，合併萃取液，回收乙酸乙酯，將活性成分置於45t:的真空乾燥箱中乾燥24h得中等極性活性成分浸膏。採用上述方案獲得的活性提取物具有良好的高溫穩定性，發明人對生產的中間產物以及最終製成的浸膏，進行抗氧化、抗自由基以及抑制酪氨酸酶活性檢測，發現在製備過程中活性成分得到很好的富集與保留，獲得的中等極性活性成分具有較高的活性。其功效檢測方法如下—、抑制酪氨酸酶活性的檢測方法1、取四隻試管分別標上1#、2#、3#、4#;2、參照表l，在四隻試管內分別加入相應各列所列的反應液；3、振搖混勻，37t:預熱10min;4、然後在各管分別加入酪氨酸酶溶液，37t:準確反應20min，迅速轉移至比色皿中，於475nm處測吸光度值(A);5、酪氨酸酶抑制率的計算按下式計算對酪氨酸酶抑制率。抑制率=[1-(A3-A4)/(A1-A2)]X100%式中Al、A2、A3、A4分別代表表1中1#、2#、3#、4#四個反應體系在步驟4中所測得的吸光度A^。表1:待測液的組成(單位ml)反應液1#2#3#4#酪氨酸溶液0.700.70美白劑溶液000.50.5美白劑的空白溶劑0.50.500PH6.8磷酸鹽緩衝液0.81.50.81.5二、活性物抗自由基能力的體外檢測方法1、準確稱取20mgDPPH(1，l-二甲基苄基苯肼，C18H12N506)，用無水乙醇定容於250ml容量瓶，濃度2X10—4mol/L;2、取若干試管編號，參照表2，添加試劑。表2:試劑添加量(單位:ml)組別DPPH樣品提取溶劑空白o2.001.0樣品溶液12.01.00樣品溶液22.01.00樣品溶液32.01.003、混合均勻，室溫下(25。C或水浴25。C)反應10min後，測定517nm波長下的吸光度值。4、根據下式計算抑制率抑制率(％)=(l-A/A空白)X100XA空自空白對照在517nm波長下的吸光度值At:樣品在517nm波長下的吸光度值三、活性物總抗氧化能力的體外檢測方法(—)溶液配製1、FRAP工作液6A-醋酸緩衝液取醋酸鈉5.1g，加冰醋酸20ml，再加水稀釋至250ml，即得PH3.6的"醋酸-醋酸鈉"緩衝液B-TPTZ溶液10mmol/LTPTZ+40mmol/LHCl(終濃度)C-三氯化鐵溶液20mmol/L的FeCl3.6H20D-FRAP工作液25mlA+2.5mlB+2.5mlC2、樣品溶液A:稱取樣品，用醋酸緩衝液配成10g/100ml的溶液；B:用醋酸緩衝液配製2mmol/L的Vc溶液。(二)操作方法1、標準曲線的製作1)取新鮮配製的FRAP200yl(水浴預熱到37度)加入40y1去離子水，以分光光度計在593nm波長下做空白樣本吸光度校正；2)參照表3配製Vc標準溶液；3)分別將10ii1標準溶液和30ii1去離子水加入200y1的FRAP工作液中，混合均勻；4)由分光光度計記下0.5秒後的吸光值；5)根據吸光度值和Vc的含量製作標準曲線。表3:Vc標準溶液的配置tableseeoriginaldocumentpage72、樣品抗氧化能力的測定將配置好的樣品溶液利用1中的方法測定其光吸收值，在標準曲線上找到其對應的V含量，比較同等質量的樣品和Vc的抗氧化效果。通過以上活性檢測，發現本發明提取的活性物抑制酪氨酸酶的活性與同等質量的Vc接近，其抗氧化性與抗自由基功效也與Vc接近，但是此方法提取的活性物，具有良好的熱穩定性和光穩定性。四、黑色素細胞測試1、小鼠B16黑色素細胞培養用含質量分數為10X小牛血清的1640培養液在37t:、5%C02的條件下培養B16黑色素細胞，細胞接種量為3Xl(f個/L，每3d傳一次代。2、細胞增殖率的測定選擇對數生長期的B16黑色素細胞，用0.25%胰酶消化，調整細胞濃度為2X104個/mL，接種於96孔培養板，每孔180iiL，置於37。C、5%C02的培養箱內培養24h。鏡下觀察生長狀態良好的，分別加入受試物20iiL/孔，繼續培養48h。於結束前4h加入MTT30iiL/孔，4h後棄上清液，然後加入DMSO150iiL/孔，振蕩10min左右，用酶聯免疫檢測儀測定475nm波長處的吸光度。測試結果為三種活性物對黑色素細胞的增殖幾乎均無抑制作用，對細胞增殖的抑制率均低於10%，即三種活性物基本無細胞毒性。3、細胞內酪氨酸酶活力測定取B16黑色素細胞接種於25cr^的培養瓶，接種量為2X105個/瓶，培養48h後更換成加有受試物的培養基，繼續培養48h，以不加活性物作為對照。0.25%胰酶消化後，用pH6.8的PBS(磷酸緩衝液)吹打成細胞懸液，低溫離心後棄上清液，收穫細胞團塊。加入lmL0.5X的脫氧膽酸鈉，冰浴15min，裂解細胞製備含酪氨酸酶提取液。取該提取液0.5mL，於37t:預溫後加入0.3X多巴溶液0.5mL，37"水浴反應5min，用紫外分光光度計在475nm處測定吸光度。測試結果為喜馬拉雅杜鵑提取物的對酪氨酸酶的抑制率與Vc乙基醚、熊果苷相當。通過以上體外活性檢測，發現本發明提取的喜馬拉雅杜鵑提取物的美白、抗衰老活性，與Vc乙基醚、熊果苷相當，並且該活性物具有良好的熱穩定性和光穩定性。按照本發明技術方案製得的喜馬拉雅杜鵑中等極性活性成分，可以用作為美白和抗衰老化妝品的功能性原料，其使用形式沒有特殊要求，它可以被配製成的形式有水劑、霜劑、油劑、洗液、乳狀液等。作為本發明應用的典型基質，涉及的已知物質有動植物油、礦物油、蠟、高級醇、脂肪醇、矽油、表面活性劑、磷脂、醇類、多元醇類、水溶性聚合物、油溶性聚合物類、礦物質、去離子水等，另外，根據需要可適當加入PH調節劑、抗氧化劑、螯合劑、顏料、防腐劑和香精等。此外，也可以與具有美白作用、抗衰老作用或者護膚功效性作用的其它活性成分結合使用，如防曬劑、血液循環促進劑、消毒劑、消炎劑、細胞活化劑、維生素類、胺基酸類、潤溼劑、角質層分離劑。表4和表5分別是應用本發明獲得的喜馬拉雅杜鵑提取物配製"膏霜"和"潤膚乳液"化妝品的具體配料組成。配製時，將表中組分A加熱至85t:，溶化攪拌均勻，作為油相，將組分B放入容器加熱至85t:，攪拌溶解成水相原料，油相原料加入水相原料中攪拌，乳化均質後，冷卻至65t:時添加組分c，繼續攪拌冷卻至35t:時，加入喜馬拉雅杜鵑提取物和香精、防腐劑，攪拌均勻，陳化24小時後即可灌裝、包轉、檢驗，製得本發明之實例產品。tableseeoriginaldocumentpage9表5:"潤膚乳液"配料tableseeoriginaldocumentpage10採用"雙盲法"測試評價本發明的美白效果按照上述實例製備含有喜馬拉雅杜鵑提取物的美白抗衰老產品和不含喜馬拉雅杜鵑提取物的基質各一份，前者作為樣品，後者作為對照品，選擇2560歲的女士作為實驗小組成員。每天早晚洗臉後在每位小組成員的臉部和前臂各四個部位塗適量的製劑，共4周，使用皮膚測試儀測試皮膚黑色素的含量，以及皮膚色差儀來評估製劑的美白效果，同時利用皮膚彈性測試儀來測試皮膚彈性，以及皮膚顯微鏡及活性皮膚表面分析系統來測試皮膚的皺紋的深淺，從而評價製劑的抗衰老效果。結果表明(最好提供對比數據)含有喜馬拉雅杜鵑提取物的化妝品，具有明顯的美白和抗衰老活性。權利要求喜馬拉雅杜鵑活性提取物的製法，其特徵在於包括以下步驟I、將乾燥的喜馬拉雅杜鵑製成粉末；II、將喜馬拉雅杜鵑粉末放入濾紙袋並置於索氏提取器的提取管內，向提取瓶中加入瓶體體積的甲醇及2～3粒沸石，以80℃～95℃恆溫水浴浸提，至提取管中甲醇呈無色，得到粗提液；III、將喜馬拉雅杜鵑甲醇粗提液減壓濃縮去除並回收甲醇，並用去離子水懸浮脫甲醇的提取物，得到懸浮液；IV、用石油醚萃取懸浮液，脫除葉綠素和鞣質，得到精提液；V、採用乙酸乙酯超聲萃取的方法從精提液中萃取活性提取物，濃縮回收乙酸乙酯後將活性提取物真空乾燥成膏體。2.根據權利要求1所述的喜馬拉雅杜鵑活性提取物的製備方法，其特徵在於步驟I中，將喜馬拉雅杜鵑在自然環境下乾燥，然後再粉碎製成平均粒度在ioo目的粉末。3.根據權利要求1所述的喜馬拉雅杜鵑活性提取物的製備方法，其特徵在於步驟iv中，石油醚與懸浮液按體積比3:i、2:i或i:i進行萃取。4.根據權利要求1所述的喜馬拉雅杜鵑活性提取物的製備方法，其特徵在於步驟V中，乙酸乙酯與精提液按體積比3:i、2:i或i:i進行萃取。5.—種美白抗衰老活性化妝品，其特徵在於該化妝品包含按照權利要求i所述方法製備獲得的喜馬拉雅杜鵑活性提取物，具有抑制酪氨酸酶活性和抗氧化活性的功效。6.根據權利要求5所述的美白抗衰老活性化妝品，其特徵在於所述化妝品是水劑、霜劑、油劑、洗液或乳狀液。全文摘要本發明涉及一種喜馬拉雅杜鵑活性提取物的製法及美白抗衰老活性化妝品。喜馬拉雅杜鵑經乾燥、粉碎、提取、脫色、分離純化、濃縮等步驟進行處理，獲得中等極性的活性提取物，然後將該提取物添加到化妝品中配製成具有美白抗衰老功能的化妝品。該活性成分是通過對喜馬拉雅杜鵑提取物進行抑制酪氨酸酶、抗氧化、清除自由基等活性篩選所得到的中等極性的非杜鵑花酸活性成分，具有美白、鎖水和抗衰老的特殊功效，並具有一定的抑菌效果。本發明所用原料為天然生物，且為可再生資源；製備工藝綠色安全、步驟簡單獨到，所得提取物穩定性好、功效持久，可在任一階段直接添加到化妝品中，無需顧忌溶劑殘留和微生物汙染等問題。文檔編號A61K8/96GK101690704SQ200910034309公開日2010年4月7日申請日期2009年8月21日優先權日2009年8月21日發明者姚志蕊,張婷婷,肖韋,許至安,趙毅,陳婷婷,馬立偉申請人:珈儂生化科技(中國)有限公司