大花型蘭花的培育與快速繁殖方法

2023-06-02 13:26:16 1

專利名稱：大花型蘭花的培育與快速繁殖方法
技術領域：
本發明涉及植物培植技術領域，具體地說是大花型蘭花新品種的育種與快速繁殖方法。
背景技術：
大花型蘭花是指蘭屬(仏況沿仰 )中大花亞屬植物，主要特點是花型較大。蘭花花期差異，必須控制花期或保存花粉才能按時授粉。蘭花雜交種子很小，內含一些發育不完全的胚，無胚乳，自然狀態下很難萌發。雖有人作過蘭屬植物的育種和種子的萌發研究，但大花型蘭花雜交育種和快速繁殖未見報導。

發明內容
本發明的目的是提供一種為蘭花育種和產業化生產奠定重要技術基礎的大花型蘭花的育種與快速繁殖方法。本發明對四種大花型蘭花種子進行了無菌萌發研究，成功地培育出大量試管苗。碧玉蘭XCtnbidiutnIowianum)、獨佔春(C eburneum')、文山紅柱蘭(Cwenshanense)及大花蕙蘭(Cl hyridus)是蘭科蘭屬中大花亞屬不同種植物，以這四種蘭花為親本培育雜交種蘭花，具體的育種與繁殖方法為
I、材料來源蘭株採自雲南文山、保山、普洱等不同地區，大花蕙蘭購置於昆明鬥南花卉市場。將採集的野生蘭株在溫室內栽培馴化，選取花期相近的類型進行雜交育種和果實培育(現有技術)，待培育至蘭花果實到九成熟，果皮略顯黃色時摘取。2、培養方法
(I)雜交育種
①選取自然花期接近一致的大花型蘭花，待父母本花序1/2花蕾開放時陸續進行授粉育種操作；
②外植體處理90%成熟度果實經75%酒精消毒40秒後，轉入0.1%氯化汞表面消毒8 12分鐘，用無菌水衝洗3 4次，在無菌室取出種子，用紗布包好種子後，以少量無菌水潤洗5次，然後用0. lmol/L KOH溶液浸泡8 12分鐘，再用無菌水衝洗3次，在飽和漂白粉上清液中消毒10 20分鐘，再用無菌水衝洗5次後接種到固體培養基中。(2)種子無菌萌發培養篩選出改良MS (即1/2MS)為較適宜的基本培養基，加生長調節劑的配方為改良MS+6-BA0. 5 3. Omg. L^+NAAl. 0 I. 5mg. L—1，用暗箱培養，溫度24±2°C，光照1800 2500勒克斯(Ix),每天光照12小時，培養基pH5. 8 ；瓊脂7g/L，3個月後發芽；種子萌發後先長出芽，隨後長出幼根，轉接到改良MS+6-BA0. 3mg. L^+NAAO. 5mg.L—1培養基中培養，4 6個月後逐漸成為具有根系並可煉苗和移栽的試管苗；
(3)增殖、分化誘導與生根培養①原球莖增殖培養種子萌發後，多形成原球莖，可進行增殖培養，培養基及配方是改良 MS + 6-BA1. 0-3. 0 mg. L-1 + NAA 0. 3-0. 8 mg. L' 培養 30 45 天;
②原球莖分化培養原球莖進行分化培養後能形成試管苗，其培養基及配方為改良MS + 6-BA2. 0-3. 5 mg. L-1 + NAA0. 3-0. 8 mg. L-1 + 香蕉泥 80g/L,培養 35 55 天;
③試管苗生根培養生根培養配方為改良MS+ 6-BA0. 3- 0. 8mg. L—1 + NAA0. 5-2. 5mg. L'通過26 36天誘導出的根長達Icm左右時可出瓶在溫室煉苗，1 _2個月後在大棚利用設施栽培；
增殖、分化誘導與生根培養條件增殖、分化誘導與生根培養過程中，均採用光照培養，溫度24±2°C，光照1800 2500勒克斯(lx)，每天光照12小時，培養基pH5. 8 ；
一些種子萌發後經一定時間會直接形成苗，並長出幼根，轉接到改良MS+6-BA0. 2
0.5mg. L_1+NAA0. 3 0. 8mg. I71+香蕉泥SOgL4培養基中培養，4 6個月後逐漸成為具有根系並可煉苗和移栽的試管苗。本發明的方法具有以下特點
I、引種馴化必須引種馴化野生蘭花和建立種質資源圃，用能調控環境的溫室培育父母本植株以便進行雜交育種。2、花期調控用設施按蘭花生理生態要求條件下的環境調控使父母本花期一致，或在低溫下保存花粉。3、根據花器官特點正確進行雜交技術操作。4、不同培養基對雜交種子萌發的影響將種子分別接種在多種改良MS培養基上，從播種到發芽形成圓球莖需3 6個月，改良MS+BA0. 5 3. Omg. L^+NAAO. 8 2. 5mg.L—1更有利於雜交種子萌發。5、不同激素對圓球莖生長的影響由於蘭花種子非常細小，播種時有些種子聚集在一起，致使長出的圓球莖較擁擠，因此，將圓球莖從原來母瓶中取出，轉接到11個不同激素濃度的培養基中作對比試驗，且培養基中加入了 SOgr1香蕉泥。經過25天培養觀察時，培養基中均觀察到圓球莖上已全長出新綠葉，一般為2 3片，有些球狀莖已長出根，植株3 5cm。研究表明，改良MS+KT0. 5-2. 5mg. I^+NAAO. 5-1. 5mg. L^1培養圓球莖生長的效果最佳。本發明從實驗中找到了適宜大花型雜交蘭花的育種和快速增殖方法，為這類蘭花的雜交育種培育了創新材料和奠定了技術基礎。經過多年努力，突破了種種技術難關，已培育出BHL-I (碧蕙蘭)、BCL_1 (碧春蘭)、WHL-I (文虎蘭)和WBL-I (文碧蘭)四個雜交種(或新種質)，可以進行試管繁殖。本發明與現有技術比較具有的優點
蘭花的雜交育種已有一些報導，但米用碧玉蘭Iowianum )、獨佔春iC. e/wraewfi )、文山紅柱蘭(C及大花蕙蘭(C AjritZw1S)四種蘭花作親本進
行雜交育種，突破一系列技術難關培育新品種還未見報導。此種方法不但培育出了新品種，還能進行快速繁殖，以滿足「花香色豔」的產業化需求。
具體實施例方式實施例I :BCL_1 (碧春蘭)的育種與繁殖I、材料來源兩種親本蘭株碧玉蘭及獨佔春(C eburneum、兔自雲南山區，碧玉蘭與獨佔春互為父母本。2、培養方法 (I)雜交育種
①建立蘭花資源圃，資源圃內的環境能人工調控，創造最適合蘭花生長發育的最佳環境。②這幾種蘭花的自然花期接近一致，待父母本花序1/2花蕾開放時進行育種操作。③育種操作清潔手和鑷子，用手輕輕摘除父母本藥帽(花葯頂端帽狀物)，用鑷子摘下父本花粉塊，送入母本合蕊柱的腔(柱頭)內即可；
④加強溫、光和肥水管理，注意防治病蟲危害，直到蘭花果實發育到九成熟，1/3果皮顯黃色時摘取。⑤外植體處理90%成熟度果實經75%酒精消毒40秒後，轉入0. 1%氯化汞表面消毒8 12分鐘，用無菌水衝洗3 4次，在無菌室取出種子，用紗布包好種子後，以少量無菌水潤洗5次,然後用0. lmol/L KOH (氫氧化鉀)溶液浸泡8 12分鐘,再用無菌水衝洗3次，在飽和漂白粉上清液中消毒10 20分鐘，再用無菌水衝洗5次後接種到固體培養基中。(2)種子無菌萌發
①種子萌發培養篩選出改良MS (即1/2MS)為較適宜的基本培養基，加生長調節劑的配方為改良MS+6-BA1. Omg. L^+NAAl. Omg. L—1，用暗箱培養，溫度24±2°C，光照1800 2500勒克斯(lx)，每天光照12小時，培養基pH5.8;瓊脂7g/L，3個月後發芽。②種子萌發後先長出芽，隨後長出幼根，轉接到改良MS+6-BA0. 3mg. L^+NAAO. 5mg.L—1培養基中培養，4 6個月後逐漸成為具有根系並可煉苗和移栽的試管苗。(3)增殖、分化誘導與生根培養
①原球莖增殖培養基:改良MS + 6-BA1. Omg. L-1 + NAA 0. 3mg. L—1，培養30天。②原球莖分化為試管苗培養基改良MS + 6-BA2. Omg. L^1 + NAAO. 3mg. L^1 +香蕉泥80g/L，培養36天。③生根培養基:改良MS + 6-BAO. 3mg. I71 + NAAO. 5mg. I71，培養 28 天。增殖、分化誘導與生根培養條件增殖、分化誘導與生根培養過程中，均採用光照培養，溫度24±2°C，光照1800 2500勒克斯(lx)，每天光照12小時，培養基pH5. 8 ；
實施例2 =BHL-I (碧蕙蘭)的育種與繁殖
母本碧玉蘭(C Iowianum)；父本大花蕙蘭(C hyridus )
(I)雜交育種與實施例I相同。(2)種子無菌萌發
①種子萌發培養基篩選出改良MS (S卩1/2MS)為較適宜的基本培養基，加生長調節劑的配方為改良MS+6-BA2. Omg. L^+NAAO. 5mg. L—1。培養條件與實施例I相同。②種子萌發後先長出芽，隨後長出幼根，轉接到改良MS+6-BA0. 3mg. L^+NAA0. 5mg.L—1培養基中培養，4 6個月後逐漸成為具有根系並可煉苗和移栽的試管苗。(3)增殖、分化誘導與生根培養①原球莖增殖培養基:改良MS + 6-BA2. Omg. L-1 + NAA 0. 5mg. L—1，培養38天。②原球莖分化為試管苗培養基改良MS + 6-BA 3. 5mg. T1 + NAAO. 5 mg. T1 +香蕉泥80g/L，培養48天。③生根培養基:改良MS + 6-BAO. 5mg. I71 + NAA1. 5mg. I71，培養 32 天。增殖、分化誘導與生根培養條件與實施例I相同。
實施例3: WHL-I (文虎蘭)的育種與繁殖
母本文山紅柱蘭(C wenshanense);父本虎雪蘭(C tracyanum var huanghuaXC.aastersii)，雜交育種和種子無菌萌發與實施例I或實施例2相同。、
增殖、分化誘導與生根培養
①原球莖增殖培養基:改良MS + 6-BA3. Omg. L-1 + NAA 0. 8mg. L—1，培養42天。②原球莖分化為試管苗培養基改良MS + 6-BA2. 5mg. L—1 + NAA 0. 8mg. L—1 +香蕉泥80g/L，培養53天。③生根培養基:改良MS + 6-BAO. 8mg. I71 + NAA 2. 5mg. I71，培養 36 天。增殖、分化誘導與生根培養條件與實施例I相同。
實施例4 =WBL-I (文碧蘭)的育種與繁殖
母本文山紅柱蘭(C父本碧玉蘭(C Iowianum )，雜交育種、種子
無菌萌、增殖、分化誘導與生根培養與實施例I或實施例2或實施例3相同。
權利要求
1.大花型蘭花的培育與快速繁殖方法，其特徵在於按以下步驟進行 (1)材料將採得的碧玉蘭、獨佔春、文山紅柱蘭及大花蕙蘭等蘭株在資源圃內進行雜交育種和果實培育，待培育至蘭花果實到九成熟，果皮略顯黃色時摘取； (2)培養方法 ①選取自然花期接近一致的大花型蘭花，待父母本花序1/2花蕾開放時陸續進行授粉育種操作； ②外植體處理90%成熟度果實經75%酒精消毒40秒後，轉入O.1%氯化汞表面消毒8 12分鐘，用無菌水衝洗3 4次，在無菌室取出種子，用紗布包好種子後，以少量無菌水潤洗5次，然後用O. lmol/L KOH溶液浸泡8 12分鐘，再用無菌水衝洗3次，在飽和漂白粉上清液中消毒10 20分鐘，再用無菌水衝洗5次後接種到固體培養基中； ③種子無菌萌發培養篩選出改良MS(即1/2MS)為較適宜的基本培養基，加生長調節劑的配方為改良MS+6-BA0. 5 3. Omg.じ1+NAA1. O I. 5mg.じ1，用暗箱培養，溫度24±2°C，光照1800 2500勒克斯(Ix),每天光照12小時，培養基ρΗ5· 8 ；瓊脂7g/L，3個月後發芽；種子萌發後先長出芽，隨後長出幼根，轉接到改良MS+6-BA0. 3mg.じ1+NAAO. 5mg.じ1培養基中培養，4 6個月後逐漸成為具有根系並可煉苗和移栽的試管苗； (3)増殖、分化誘導與生根培養 ①原球莖増殖培養種子萌發後，多形成原球莖，可進行增殖培養，培養基及配方是改良 MS + 6-BA1. 0-3. O mg.じ1 + NAA O. 3-0. 8 mg.じ1，培養 30 45 天; ②原球莖分化培養原球莖進行分化培養後能形成試管苗，其培養基及配方為改良MS + 6-BA2. 0-3. 5 mg.じ1 + ΝΑΑ0. 3-0. 8 mg.じ1 + 香蕉泥 80g/L,培養 35 55 天; ③試管苗生根培養生根培養配方為:改良MS+ 6-BA0. 3- O. 8mg.じ1 + ΝΑΑ0. 5-2. 5mg.じ1，通過26 36天誘導出的根長達Icm左右時可出瓶在溫室煉苗，1_2個月後在大棚利用設施栽培； 増殖、分化誘導與生根培養條件増殖、分化誘導與生根培養過程中，均採用光照培養，溫度24±2°C，光照1800 2500勒克斯(lx)，每天光照12小時，培養基pH5. 8。
全文摘要
本發明是大花型蘭花的培育與快速繁殖方法。將碧玉蘭、獨佔春、文山紅柱蘭及大花蕙蘭等蘭株在資源圃內進行雜交育種和果實培育，待培育至蘭花果實到九成熟，果皮略顯黃色時摘取進行雜交育種，經外植體處理、種子無菌萌發培養，種子萌髮長出幼根，轉接到改良培養基中培養，4～6個月後逐漸成為具有根系並可煉苗和移栽的試管苗；經增殖、分化誘導與生根培養，根長達1cm左右時可出瓶在溫室煉苗，1-2個月後在大棚利用設施栽培。本發明的方法不但培育出了新品種，還能進行快速繁殖，以滿足「花香色豔」的產業化需求。
文檔編號A01H4/00GK102726288SQ20121025307
公開日2012年10月17日 申請日期2012年7月22日 優先權日2012年7月22日
發明者唐敏, 張小平, 張愛玲, 李葉芳, 李枝林, 楊根華, 王有國 申請人:雲南農業大學