一種桑葚發酵方法

2023-06-29 05:34:56

一種桑葚發酵方法
【專利摘要】本發明提供了一種桑葚發酵方法，其主要過程為：取桑葚，洗淨，榨汁，過濾，離心，取上清液過濾，以磷酸鹽緩衝液稀釋，得稀桑葚汁；將含有酵母粉的細菌培養基培養所得的乳酸桿菌菌液接種於上述稀桑葚汁中發酵，發酵溫度為20-30℃，發酵10-20天，過濾，即得。本發明提供的桑葚發酵方法工藝簡單，相對於現有技術，能夠顯著降低桑葚中有效成分的損失，而且不會影響其抗氧化性能。
【專利說明】一種桑葚發酵方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種發酵方法，特別涉及一種桑葚乳酸桿菌發酵方法，屬於生物領域。【背景技術】
[0002]酚類物質與色素含量豐富的桑葚提取物，能夠顯著降低抗氧化酶缺乏的被促衰老型小鼠(SAM)的β_澱粉樣蛋白含量，提高學習記憶能力，提高抗氧化酶活性，降低其大腦和肝臟中的脂質氧化水平，並且還能降低SAM小鼠衰老過程中產生的血清天冬氨酸轉氨酶、丙氨酸轉氨酶、甘油三酯和總膽固醇含量，因此桑葚提取物具有恢復抗氧化防衛系統、延緩衰老過程中的記憶力衰退現象的作用。已有研究發現桑葚果汁具有延緩衰老的作用，能顯著提高大鼠紅細胞和肝臟中丙二醛(MDA)的含量，說明桑葚汁能有效地清除體內自由基，並且可以防止脂質過氧化。
[0003]桑葚汁中含有豐富的活性成分，如黃酮、桑色素、花青素、礦物質等。花青素(Anthocyanidin)，又稱花色素，是自然界一類廣泛存在於植物中的水溶性天然色素，屬黃酮類化合物。花青素是羥基供體，同時也是一種自由基清除劑，它能和蛋白質結合防止過氧化。也和金屬Cu2+等螯合，防止Vc過氧化，再生Ne』從而再生VE，也能淬滅單線態氧，所以桑葚有較強的抗氧化能力。抗氧化物以當代的科學技術大規模提取有較大難度，且不經濟。因此，利用桑葚發酵製作果汁、酒類等飲品，具有成本低、可廣泛推廣的優勢，但是發酵菌種的選擇、發酵過程等都有可能會影響飲品最終的抗氧化效果，最終影響成品質量。

【發明內容】

[0004]發明目的:本發明的目的在於提供一種工藝簡單、不影響抗氧化性能的桑葚發酵方法。
[0005]技術方案:本發明提供了一種桑葚發酵方法，其包括以下步驟:
[0006](I)取桑葚，洗淨，榨汁，過濾，得桑葚汁；
[0007](2)取上述桑葚汁，離心，取上清液過濾，得濃桑葚汁；
[0008](3)取上述濃桑葚汁，以磷酸鹽緩衝液稀釋，得稀桑葚汁；
[0009](4)將乳酸桿菌加入到含有酵母粉的細菌培養基中培養，得培養菌液；
[0010](5)將上述培養菌液接種於步驟(3)所得稀桑葚汁中發酵，發酵溫度為20-30°C，發酵10-20天，過濾，即得。
[0011]優選地，所述步驟(2)中，離心速度為1000-3000轉/min，離心時間為5-15分鐘；過濾採用0.22 μ m的微孔濾膜過濾。
[0012]優選地，所述步驟(3)中，以濃桑葚汁和磷酸鹽緩衝液的體積比計，所述稀桑葚汁的濃度為0.625%-2.500% ;所述磷酸鹽緩衝液的pH=6.8。
[0013]優選地，所述步驟(4)中，乳酸桿菌和細菌培養基的體積比為1:(800-1200);培養溫度為20-30°C ;培養時間為200-500分鐘。
[0014]更優選地，所述步驟(4)中，乳酸桿菌和細菌培養基的體積比為1:1000 ;培養溫度為 26 °C ；
[0015]優選地，所述步驟(4)中，含有酵母粉的細菌培養基的製備方法如下:
[0016]以重量份計，取蛋白腖10份、牛肉粉5份、酵母粉4份、葡萄糖20份、吐溫2份、磷酸氫二鉀2份、乙酸鈉5份、檸檬酸三銨2份、硫酸鎂0.2份、硫酸錳0.05份、瓊脂粉15份，加入到1000份蒸餾水中，加熱溶解，調節pH為6.2，分裝後121°C高壓滅菌15min_20min，即得。
[0017]優選地,所述步驟(5)中，培養菌液和稀桑葚汁的體積比為1: (80-120)。
[0018]優選地，所述步驟(5)中，發酵溫度為26°C，發酵15天。
[0019]有益效果:本發明提供的桑葚發酵方法工藝簡單，相對於現有技術，能夠顯著降低桑葚中有效成分的損失，而且不會影響其抗氧化性能。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0020]圖1為本發明乳酸桿菌生長曲線圖。
【具體實施方式】
[0021]下面結合附圖對本發明做出進一步說明。
[0022]實施例1:
[0023]桑葚發酵方法:
[0024](I)取桑葚IOOg,洗淨,榨汁,用紗布過濾兩次,得桑葚汁；
[0025](2)取上述桑葚汁，1000轉/min離心5分鐘，取上清液，0.22 μ m微孔濾膜過濾，得
濃桑葚汁；
[0026](3)取上述濃桑葚汁，以pH=6.2的磷酸鹽緩衝液稀釋，以濃桑葚汁和磷酸鹽緩衝液的體積比計，得濃度為0.625%的稀桑葚汁；
[0027](4)將乳酸桿菌加入到含有酵母粉的細菌培養基中培養，乳酸桿菌和細菌培養基的體積比為1:800，培養溫度20°C，培養200分鐘，得培養菌液；
[0028](5)將上述培養菌液接種於步驟(3)所得稀桑葚汁中發酵，培養菌液和稀桑葚汁的體積比為1:80，發酵溫度為20°C，發酵10天，過濾，即得。
[0029]步驟(4)中，含有酵母粉的細菌培養基的製備方法如下:
[0030]取蛋白腖10g、牛肉粉5g、酵母粉4g、葡萄糖20g、吐溫2g、磷酸氫二鉀2g、乙酸鈉5g、檸檬酸三銨2g、硫酸鎂0.2g、硫酸錳0.05g、瓊脂粉15g，加入到IOOOml蒸餾水中，加熱溶解，調節PH為6.2，分裝後121°C高壓滅菌15min，即得。
[0031]實施例2:
[0032]桑葚發酵方法:
[0033](I)取桑葚100g，洗淨，榨汁，用紗布過濾兩次，得桑葚汁；
[0034](2)取上述桑葚汁，3000轉/min離心15分鐘，取上清液，0.22 μ m微孔濾膜過濾，得濃桑葚汁；
[0035](3)取上述濃桑葚汁，以pH=6.2的磷酸鹽緩衝液稀釋，以濃桑葚汁和磷酸鹽緩衝液的體積比計，得濃度為2.500%的稀桑葚汁；
[0036](4)將乳酸桿菌加入到含有酵母粉的細菌培養基中培養，乳酸桿菌和細菌培養基的體積比為1: 1200，培養溫度30°C，培養500分鐘，得培養菌液；
[0037](5)將上述培養菌液接種於步驟(3)所得稀桑葚汁中發酵，培養菌液和稀桑葚汁的體積比為1:120，發酵溫度為30°C，發酵20天，過濾，即得。
[0038]步驟(4)中，含有酵母粉的細菌培養基的製備方法如下:
[0039]取蛋白腖10g、牛肉粉5g、酵母粉4g、葡萄糖20g、吐溫2g、磷酸氫二鉀2g、乙酸鈉5g、檸檬酸三銨2g、硫酸鎂0.2g、硫酸錳0.05g、瓊脂粉15g，加入到IOOOml蒸餾水中，加熱溶解，調節PH為6.2，分裝後121°C高壓滅菌20min，即得。
[0040]實施例3:
[0041]桑葚發酵方法:
[0042](I)取桑葚IOOg,洗淨,榨汁,用紗布過濾兩次,得桑葚汁；
[0043](2)取上述桑葚汁，2000轉/min離心10分鐘，取上清液，0.22 μ m微孔濾膜過濾，
得濃桑葚汁；
[0044](3)取上述濃桑葚汁，以pH=6.2的磷酸鹽緩衝液稀釋，以濃桑葚汁和磷酸鹽緩衝液的體積比計，得濃度為1%的稀桑葚汁；
[0045](4)將乳酸桿菌加入到含有酵母粉的細菌培養基中培養，乳酸桿菌和細菌培養基的體積比為1: 1000，培養溫度26°C，培養350分鐘，得培養菌液；
[0046](5)將上述培養菌液接種於步驟(3)所得稀桑葚汁中發酵，培養菌液和稀桑葚汁的體積比為1:100，發酵溫度為26°C，發酵15天，過濾，即得。
[0047]步驟(4)中，含有酵母粉的細菌培養基的製備方法如下:
[0048]取蛋白腖10g、牛肉粉5g、酵母粉4g、葡萄糖20g、吐溫2g、磷酸氫二鉀2g、乙酸鈉5g、檸檬酸三銨2g、硫酸鎂0.2g、硫酸錳0.05g、瓊脂粉15g，加入到IOOOml蒸餾水中，加熱溶解，調節PH為6.2，分裝後121°C高壓滅菌18min，即得。
[0049]實施例4:
[0050]桑葚發酵方法:
[0051](I)取桑葚100g，洗淨，榨汁，用紗布過濾兩次，得桑葚汁；
[0052](2)取上述桑葚汁，1500轉/min離心8分鐘，取上清液，0.22 μ m微孔濾膜過濾，得
濃桑葚汁；
[0053](3)取上述濃桑葚汁，以pH=6.2的磷酸鹽緩衝液稀釋，以濃桑葚汁和磷酸鹽緩衝液的體積比計，得濃度為1.25%的稀桑葚汁；
[0054](4)將乳酸桿菌加入到含有酵母粉的細菌培養基中培養，乳酸桿菌和細菌培養基的體積比為1:900，培養溫度22°C，培養300分鐘，得培養菌液；
[0055](5)將上述培養菌液接種於步驟(3)所得稀桑葚汁中發酵，培養菌液和稀桑葚汁的體積比為1:90，發酵溫度為28°C，發酵18天，過濾，即得。
[0056]步驟(4)中，含有酵母粉的細菌培養基的製備方法如下:
[0057]取蛋白腖10g、牛肉粉5g、酵母粉4g、葡萄糖20g、吐溫2g、磷酸氫二鉀2g、乙酸鈉5g、檸檬酸三銨2g、硫酸鎂0.2g、硫酸錳0.05g、瓊脂粉15g，加入到1000ml蒸餾水中，加熱溶解，調節PH為6.2，分裝後121°C高壓滅菌16min，即得。
[0058]實施例5:
[0059]桑葚發酵方法:[0060](I)取桑葚100g，洗淨，榨汁，用紗布過濾兩次，得桑葚汁；
[0061](2)取上述桑葚汁，2500轉/min離心12分鐘，取上清液，0.22 μ m微孔濾膜過濾，得濃桑葚汁；
[0062](3)取上述濃桑葚汁，以pH=6.2的磷酸鹽緩衝液稀釋，以濃桑葚汁和磷酸鹽緩衝液的體積比計，得濃度為0.83%的稀桑葚汁；
[0063](4)將乳酸桿菌加入到含有酵母粉的細菌培養基中培養，乳酸桿菌和細菌培養基的體積比為1: 1100，培養溫度28°C，培養400分鐘，得培養菌液；
[0064](5)將上述培養菌液接種於步驟(3)所得稀桑葚汁中發酵，培養菌液和稀桑葚汁的體積比為1:110，發酵溫度為22°C，發酵12天，過濾，即得。
[0065]步驟(4)中，含有酵母粉的細菌培養基的製備方法如下:
[0066]取蛋白腖10g、牛肉粉5g、酵母粉4g、葡萄糖20g、吐溫2g、磷酸氫二鉀2g、乙酸鈉5g、檸檬酸三銨2g、硫酸鎂0.2g、硫酸錳0.05g、瓊脂粉15g，加入到1000ml蒸餾水中，加熱溶解，調節PH為6.2，分裝後121°C高壓滅菌18min，即得。
[0067]實驗例
[0068]雙歧桿菌發酵後桑葚汁，是指在本發明實施例1-5發酵工藝和條件的基礎上，僅以雙歧桿菌菌代替乳酸桿菌，所製得的發酵桑葚汁；
[0069]嗜熱鏈球菌發酵後桑葚汁，是指在本發明實施例1-5發酵工藝和條件的基礎上，僅以嗜熱鏈球菌菌代替乳酸桿菌，所製得的發酵桑葚汁；
`[0070]一、發酵前後，桑葚汁中花青素含量、DPPH清除率及Fe2+螯合率的變化
[0071]1、方法
[0072]1.1高相液相色譜法檢測桑葚汁中花青素含量
[0073]精確稱取花青素標準品若干，加入1%鹽酸甲醇溶液，配製成濃度為4mg/mL，
0.22 μ m 濾膜過濾，分別取 0.01mL, 0.05mL, 0.1mL, 0.2mL, 0.4mL 稀釋到 ImL,取 20 μ L 進樣，高效液相色譜測定。色譜條件:流動相4%磷酸:乙腈(v/v) =88:12 (pH=3.6)，波長520nm，流速0.7166mL/min,以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，得標準曲線。同樣方法和條件進樣發酵前稀桑椹汁、本發明乳酸桿菌發酵後、雙歧桿菌發酵後及嗜熱鏈球菌發酵後桑葚汁，得峰面積，代入標準曲線，計算其中花青素含量。
[0074]1.2檢測發酵前後對DPPH清除率的變化
[0075]稱取一定量的DPPH(1，1- 二苯基_2_三硝基苯肼)，用無水乙醇配製成0.04mg/mL的DPPH溶液。分別取2mL本發明實施例1_5所得發酵前稀桑葚汁和發酵後桑葚汁溶液，以及雙歧桿菌發酵後及嗜熱鏈球菌發酵後桑葚汁溶液，加入2mL DPPH溶液，混合均勻，室溫放置30min後，5000r/min離心lOmin。取上清液於517nm處測吸光值。樣品對DPPH自由基
的清除率用以下公式計算:
[0076]



(A1- A-y\
DPPH f窘ft率(％)=1 —100%


Α?
[0077]A0:2mL無水乙醇+2mL DPPH溶液的吸光值；
[0078]A1:2mL樣品溶液+2mL DPPH溶液的吸光值；
[0079]A2:2mL樣品溶液+2mL無水乙醇的吸光值。[0080]1.3檢測發酵前後Fe2+螯合力的變化
[0081]分別取3mL本發明實施例1_5所得發酵前稀桑葚汁和發酵後桑葚汁溶液，以及雙歧桿菌發酵後及嗜熱鏈球菌菌發酵後桑葚汁溶液，加入2mmol/L的FeC12溶液0.05ml和5mmol/L的菲洛嗪溶液，劇烈振蕩後室溫放置lOmin，於562nm處測吸光值。樣品對Fe2+的
螯合率計算公式如下:
[0082]
【權利要求】
1.一種桑葚發酵方法，其特徵在於:其包括以下步驟: (1)取桑葚，洗淨，榨汁，過濾，得桑葚汁； (2)取上述桑葚汁，離心，取上清液過濾，得濃桑葚汁； (3)取上述濃桑葚汁，以磷酸鹽緩衝液稀釋，得稀桑葚汁； (4)將乳酸桿菌加入到含有酵母粉的細菌培養基中培養，得培養菌液； (5 )將上述培養菌液接種於步驟(3 )所得稀桑葚汁中發酵，發酵溫度為20-30 °C，發酵10-20天，過濾，即得。
2.根據權利要求1所述的一種桑葚發酵方法，其特徵在於:所述步驟(2)中，離心速度為1000-3000轉/min，離心時間為5_15分鐘；過濾採用0.22 μ m的微孔濾膜過濾。
3.根據權利要求1所述的一種桑葚發酵方法，其特徵在於:所述步驟(3)中，以濃桑葚汁和磷酸鹽緩衝液的體積比計，所述稀桑葚汁的濃度為0.625%-2.500% ;所述磷酸鹽緩衝液的 pH=6.8。
4.根據權利要求1所述的一種桑葚發酵方法，其特徵在於:所述步驟(4)中，乳酸桿菌和細菌培養基的體積比為1:(800-1200);培養溫度為20-30°C ;培養時間為200-500分鐘。
5.根據權利要求1所述的一種桑葚發酵方法，其特徵在於:所述步驟(4)中，含有酵母粉的細菌培養基的製備方法如下: 以重量份計，取蛋白腖10份、牛肉粉5份、酵母粉4份、葡萄糖20份、吐溫2份、磷酸氫二鉀2份、乙酸鈉5份、檸檬酸三銨2份、硫酸鎂0.2份、硫酸錳0.05份、瓊脂粉15份，加入到1000份蒸餾水中，加熱溶解，調節pH為6.2，分裝後121°C高壓滅菌15min_20min，即得。
6.根據權利要求1所述的一種桑葚發酵方法，其特徵在於:所述步驟(5)中，培養菌液和稀桑葚汁的體積比為1: (80-120)。
【文檔編號】A23L2/84GK103750448SQ201310716544
【公開日】2014年4月30日 申請日期:2013年12月23日 優先權日:2013年12月23日
【發明者】聞燕, 杜博瑋, 姚雪妍, 江明珠, 許曉風 申請人:江蘇科技大學