一種木聚糖酶及生產方法
2023-06-08 07:18:51
一種木聚糖酶及生產方法
【專利摘要】本發明公開了一種不產纖維素酶，可應用於造紙工藝的木聚糖酶生產方法，其特徵是它包括菌種培養、搖瓶發酵、酶液製備步驟，所述菌種即沙福芽孢桿菌（Bacillussafensis），實驗室編號為KERR89，保藏號：CGMCCNO：5466，所述木聚糖酶為內切型酶，不產纖維素酶，對結晶纖維素、羧甲基纖維素均沒有活性；酶活力在濃度5mMol/L以下，不受Fe2+、Fe3+、Zn2+、Cu2+金屬離子抑制；其酶作用pH範圍為pH4.5～10.5，溫度範圍為40℃～75℃；本發明的酶活力高，發酵木聚糖酶液≥30000u/ml，單位生產成本低，發酵周期短，工業化程度高，工藝過程簡單易控；產品對結晶纖維素、羧甲基纖維素均沒有活性，適合在造紙行業應用，可降低造紙生產成本和環境汙染，同時有助提高紙的產品品質。
【專利說明】一種木聚糖酶及生產方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種生物酶製劑的工業化生產，具體地說是一種木聚糖酶及生產方法。
【背景技術】
[0002]木聚糖酶包括內切1.3~P~木聚糖酶(EC3.2.1.32)，內切1.4~P~木聚糖酶(EC3.2.1.8)，木聚糖1.3~P~木糖苷酶(EC3.2.1.72)，木聚糖1.4~P~木糖苷酶 (EC3.2.1.37)和乙醯木聚糖酯酶(EC3.1.1.6)五種。內切型木聚糖酶水解木聚糖生成木寡糖和木糖，外切型木聚糖酶水解木寡糖，由非還原末端切除木糖殘基。
[0003]木聚糖酶可用於造紙工業中的製漿和紙漿漂白等工序，它是基於酶作用植物細胞與細胞之間相粘連的中膠層中的木聚糖，木聚糖一經分解，細胞與細胞便疏離或分開，從而使鹼等化學品易於起作用，因此降低了所用化學品的用量，使造紙廢水中的化學品汙染物大大降低。但是，許多微生物在產木聚糖酶的同時，還產纖維素酶。這樣，在應用中木聚糖酶不僅作用木聚糖，同時纖維素酶還作用纖維素，對纖維素有降解作用和對紙漿有毀壞作用。
【發明內容】
[0004]本發明的目的是提供一種不產纖維素酶，可應用於造紙工藝的木聚糖酶及生產方法。
[0005]本發明酶活力測定方法為，用pH值為9.0,0.lmol/L的甘氨酸一氫氧化鈉緩衝液為溶劑配製2 %木聚糖(sigma來自於樺木產品)溶液。吸取0.9ml底物於15ml刻度試管中，在要求溫度水浴平衡3min,加入0.1ml適當稀釋酶溶液,反應10min,加入3ml 3, 5~ 二硝基水楊酸試劑，沸水浴中顯色15min,冷涼後用蒸懼水定容至15ml,分光光度計550nm 波長測光吸收值。酶活力定義為，在測定條件下每小時水解底物產生Img還原糖(以木糖計，)所需酶量定義為一個酶活力單位U)。
·[0006]本發明是採用如下技術方案實現其發明目的的，一種木聚糖酶的生產方法，它包括菌種培養、搖瓶發酵、酶液製備步驟，所述菌種即沙福芽孢桿菌(Bacillus safensis)，實驗室編號為KERR89，保藏號=CGMCC NO:5466，其生物學特性為:革蘭氏染色陽性菌，產芽孢，菌體呈短杆狀，單細胞直徑小於lum，以二分裂方式增殖；在本發明所述培養基上菌落呈圓形，白色、表面光滑，均一，邊緣整齊，略有光澤，黏稠。
[0007]本發明的菌種是在中國寧夏採集，在菌種選育篩選過程中，採用了試管液體培養基反應DNS顯色初步定性篩選和搖瓶產酶定量篩選的方法,篩選出一株實驗室編號為 KERR89的高產菌株，根據主要生理生化特徵及16S rRNA基因序列、gyrB基因序列等實驗數據綜合分析鑑定為沙福芽孢桿菌(Bacillus safensis),該菌種已於2011年11月17日提交中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏(北京市朝陽區北辰西路I號院3 號)，保藏號:CGMCC NO:5466,並於同日提交了保藏存活證明。
[0008]本發明所述的菌種培養為CGMCC NO:5466菌種在如下配製的斜面上生長良好，以重量計，斜面培養基配方為:蛋白腖0.5 %~I %、牛肉膏0.3 %~0.5 %、酵母膏0.3 %~ 0.5 %、葡萄糖0.3 %~0.5 %、氯化鈉0.3 %~0.5 %、瓊脂1.8 %~2.2 %、水94.8 %~ 96.5 %，其中所述各組分之和為100 %，調pH值6.9~7.1,0.1MPa滅菌20分鐘~30分鐘， 製成試管斜面，接種該菌種，32°C~35°C，培養24小時~26小時後，放入5°C冰箱中備用， 或向菌斜面上注入已滅菌液體石蠟後保藏或以脫脂牛奶為載體冷凍乾燥真空封口保藏。
[0009]本發明所述的搖瓶發酵為CGMCC NO:5466菌種在規定的培養條件下可產生高活性木聚糖酶，這種培養條件是:以重量計，培養基配方為麥麩5 %~8 %、纖維質粉1.5 %~ 2 %、葡萄糖0.3 %~0.5 %、硫酸銨0.3 %~0.5 %、玉米漿I %~2 %、磷酸氫二鉀0.1 %~0.2 %、氯化鈉0.3 %~0.5 %、水86.3 %~91.5 %，其中所述各組分之和為100 %， 滅菌前，調pH值為8.0~8.5，0.1MPa滅菌20分鐘~35分鐘，培養條件:33°C~35°C，搖床轉速260 r/min~280r/min，培養48小時~52小時。
[0010]本發明所述的酶液製備為由茄瓶斜面到種子罐到發酵罐，二級發酵，製備標準化酶液。
[0011]本發明所述種子培養基配方為:以重量計，麥麩5 %~8 %、玉米粉1.5 %~2 %、 硫酸銨0.3 %~0.5 %、玉米漿I %~2 %、磷酸氫二鉀0.1 %~0.2 %、氯化鈉0.3 %~ 0.5 %、水86.8 %~91.8 %，其中所述各組分之和為100 %，滅菌前，調pH值為6.5~7.0，
0.1MPa滅菌30分鐘~35分鐘，種子罐裝料總體積不超過70% ;培養條件:溫度33°C~ 38°C，攪拌轉速180 r/min~220 r/min，通氣量以v/v計:0小時~5小時，1:0.40~0.46， 5小時以後，1:0.50~0.56，罐壓0.06 MPa~0.07MPa,培養周期為7小時~9小時。
[0012]本發明所述產酶發酵罐的培養基配方為:以重量計,麥麩5 %~8 %、纖維質粉
1.5 %~2 %、葡萄糖0.3~0.5 %、硫酸銨0.3 %~0.5 %、玉米漿I %~2 %、磷酸氫二鉀0.1 %~0.2 %、氯化鈉0.3 %~0.5 %、水86.3 %~91.5 %，其中所述各組分之和為 100 %，滅菌前，調pH值為8.0~8.5,0.1MPa滅菌30分鐘~35分鐘，裝料總體積不超過70 % ;培養條件:溫度33°C~38°C，攪拌轉速180 r/min~220 r/min，通氣量以v/v計:0小時~2小時，1:0.40~0.42，2小時~4小時，1:0.50~0.52，4小時~6小時，1:0.55~ 0.68，6小時以後1:0.60~0.62，罐壓0.06 MPa~0.07MPa，發酵周期為48小時~52小時。
[0013]本發明為促進產酶，提高木聚糖酶`的活力，在產酶發酵罐的培養基配方中加入0.3 %~0.4 %的二水合氯化鈣，相應減少水的用量，其中所述各組分之和為100 %，可顯著提高木聚糖酶活力，木聚糖酶活力由對照的34000u/ml增加到38000u/ml，提高11.76 %。
[0014]本發明在製備標準化酶液中，將產酶發酵罐的發酵醪液經過板框過濾、硅藻土除菌，經防腐處理得到在15°C密封存放三個月條件下，酶活力保持率為95 %以上的標準木聚糖酶液。
[0015]本發明為去雜除菌，提高產品質量，發酵醪液經板框過濾後，在發酵濾液中加入十二水合磷酸氫二鈉和二水合氯化鈣取雜除菌，其用量分別為發酵濾液質量的2.8 %~
3.5 %和 1.0 % ~1.3 %。
[0016]一種如上述方法生產的木聚糖酶，所述木聚糖酶為內切型酶，不產纖維素酶，對結晶纖維素、羧甲基纖維素均沒有活性；酶活力在濃度5mMol/L以下，不受Fe2+、Fe3+、Zn2+、 Cu2+金屬離子抑制；其酶作用pH範圍為pH4.5~10.5，溫度範圍為40°C~75°C ;適宜pH範圍為pH7.0~9.0，適宜溫度範圍為45°C~65°C;最適pH範圍為pH8.5~9.0，最適溫度 50°C~55°C。
[0017]由於採用上述技術方案，本發明較好的實現了發明目的，其酶活力高，發酵木聚糖酶液>30000 u/ml，單位生產成本低，發酵周期短，工業化程度高，工藝過程簡單易控；產品對結晶纖維素、羧甲基纖維素均沒有活性，適合在造紙行業應用，可降低造紙生產成本和環境汙染，同時有助提聞紙的廣品品質。
【具體實施方式】
[0018] 下面結合及實施例對本發明作進一步說明。
[0019]一種木聚糖酶的生產方法，它包括菌種培養、搖瓶發酵、酶液製備步驟，所述菌種即沙福芽孢桿菌(Bacillus safensis)，實驗室編號為KERR89，保藏號:CGMCC N0:5466，其生物學特性為:革蘭氏染色陽性菌，產芽孢，菌體呈短杆狀，單細胞直徑小於lum，以二分裂方式增殖；；在本發明所述培養基上菌落呈圓形，白色、表面光滑，均一，邊緣整齊，略有光澤，黏稠。
[0020]本發明的菌種是在中國寧夏採集，在菌種選育篩選過程中，採用了試管液體培養基反應DNS顯色初步定性篩選和搖瓶產酶定量篩選的方法,篩選出一株實驗室編號為 KERR89的高產菌株，根據主要生理生化特徵及16S rRNA基因序列、gyrB基因序列等實驗數據綜合分析鑑定為沙福芽孢桿菌(Bacillus safensis),該菌種已於2011年11月17日提交中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏(北京市朝陽區北辰西路I號院3 號)，保藏號:CGMCC NO:5466,並於同日提交了保藏存活證明。
[0021]本發明所述的菌種培養為CGMCC NO:5466菌種在如下配製的斜面上生長良好，以重量計，斜面培養基配方為:蛋白腖0.5 %~I %、牛肉膏0.3 %~0.5 %、酵母膏0.3 %~
0.5 %、葡萄糖0.3 %~0.5 %、氯化鈉0.3 %~0.5 %、瓊脂1.8 %~2.2 %、水94.8 %~ 96.5 %，其中所述各組分之和為100 %，調pH值6.9~7.1，0.1MPa滅菌20分鐘~30分鐘， 製成試管斜面，接種該菌種，32°C~35°C，培養24小時~26小時後，放入5°C冰箱中備用， 或向菌斜面上注入已滅菌液體石蠟後保藏或以脫脂牛奶為載體冷凍乾燥真空封口保藏。
[0022]本實施例斜面培養基配方為:蛋白腖0.8 %、牛肉膏0.4 %、酵母膏0.4 %、葡萄糖
0.4 %、氯化鈉0.4 %、瓊脂2.0 %、水96 %，其中所述各組分之和為100 % ;用氫氧化鈉調 pH值7.0，0.1MPa滅菌30分鐘，製成試管斜面，接種該菌種，34°C，培養24小時後，放入5°C 冰箱中冷臧備用。
[0023]該斜面菌種通過搖瓶發酵檢驗菌種產酶能力合格後，可以作為種子擴培使用或發酵產酶使用。
[0024]本發明所述的搖瓶發酵為CGMCC NO:5466菌種在規定的培養條件下可產生高活性木聚糖酶，這種培養條件是:以重量計，培養基配方為麥麩5 %~8 %、纖維質粉1.5 %~ 2 %、葡萄糖0.3 %~0.5 %、硫酸銨0.3 %~0.5 %、玉米漿I %~2 %、磷酸氫二鉀0.1 %~0.2 %、氯化鈉0.3 %~0.5 %、水86.3 %~91.5 %，其中所述各組分之和為100 %， 滅菌前，調PH值為8.0~8.5，0.1MPa滅菌20分鐘~35分鐘，培養條件:33°C~35°C，搖床轉速260 r/min~280r/min，培養48小時~52小時。
[0025]本實施例培養基配方為麥麩6 %、纖維質粉1.5 %、葡萄糖0.4 %、硫酸銨0.4 %、玉米漿1.5 %、磷酸氫二鉀0.1 %、氯化鈉0.4 %、水89.7 %，其中所述各組分之和為100 %，滅菌前，用I %碳酸鈉溶液調PH值為8.0，0.1MPa滅菌25分鐘，培養條件:33°C，搖床轉速280 r/min,培養48小時。
[0026]本發明所述的酶液製備為由茄瓶斜面到種子罐到發酵罐，二級發酵，製備標準化酶液。
[0027]本發明所述種子培養基配方為:以重量計，麥麩5 %~8 %、玉米粉1.5 %~2 %、 硫酸銨0.3 %~0.5 %、玉米漿1 %~2 %、磷酸氫二鉀0.1 %~0.2 %、氯化鈉0.3 %~
0.5 %、水86.8 %~91.8 %，其中所述各組分之和為100 %，滅菌前，調pH值為6.5~7.0，
0.1MPa滅菌30分鐘~35分鐘，種子罐裝料總體積不超過70% ;培養條件:溫度33°C~ 38°C，攪拌轉速180 r/min~220 r/min，通氣量以v/v計:0小時~5小時，1:0.40~0.46， 5小時以後，1:0.50~0.56，罐壓0.06 MPa~0.07MPa,培養周期為7小時~9小時。
[0028]本實施例種子培養基配方為:以重量計，麥麩6 %、玉米粉2 %、硫酸銨0.4 %、玉米漿I %、磷酸氫二鉀0.2 %、氯化鈉0.4 %、水90.0 %，其中所述各組分之和為100 %，滅菌前，調PH值為7.0,0.1MPa滅菌30分鐘，種子罐裝料總體積不超過70%;培養條件:溫度 36°C，攪拌轉速220 r/min，通氣量以v/v計:0小時~5小時，1:0.40，5小時以後，1:0.50， 罐壓0.06 MPa~0.07MPa，培養周期為8小時。在培養4h後取樣鏡檢，觀察菌生長發育，繁殖情況。當培養到菌體細胞鏈70 %斷裂為單個細胞，酶活力600u/ml左右，表明種子已接近成熟，做好轉罐接種的各項準備工作。
[0029]本發明所述產酶發酵罐的培養基配方為:以重量計,麥麩5 %~8 %、纖維質粉
1.5 %~2 %、葡萄糖0.3~0.5 %、硫酸銨0.3 %~0.5 %、玉米漿I %~2 %、磷酸氫二鉀0.1 %~0.2 %、氯化鈉0.3 %~0.5 %、水86.3 %~91.5 %，其中所述各組分之和為 100 %，滅菌前，調pH值為8.0~8.5，0.1MPa滅菌30分鐘~35分鐘，裝料總體積不超過70 % ;培養條件:溫度33°C~38°C，攪拌轉速180 r/min~220 r/min，通氣量以v/v計:0小時~2小時，1:0.40~0.42，2小時~4小時，1:0.50~0.52，4小時~6小時，1:0.55~
0.68，6小時以後1:0.60~0.62，罐壓0.06 MPa~0.07MPa,發酵周期為48小時~52小時。
[0030]本實施例產酶發酵罐的培養基配方為:以重量計,麥麩6 %、纖維質粉1.5 %、葡萄糖0.4 %、硫酸銨0.4 %、玉米漿I %、磷酸氫二鉀0.2 %、氯化鈉0.4 %、水90.1 %，其中所述各組分之和為100 %，滅菌前，調pH值為8.0，0.1MPa滅菌30分鐘，裝料總體積不超過70 % ;培養條件:溫度35°C，攪拌轉速220 r/min，通氣量以v/v計:0小時~2小時，1:0.40， 2小時~4小時，1:0.50，4小時~6小時，1:0.55，6小時以後1:0.60，罐壓0.06 MPa,發酵周期為48小時。前16h每隔4h取一次樣，16h後每隔2h取一次樣。鏡檢觀察菌生長狀態， 測定pH、還原糖和酶活力。其木聚糖酶活力最高可達到36000u/ml，平均水平可達31000u/ ml以上。
[0031]放罐條件:罐溫不再上升，酶活力不再增加；pH8.5左右；細胞95%以上出現芽孢， 並有部分自溶。將發酵醪液PH調至7.0左右。濾液酶活力32000u/ml。
[0032]本發明為促進產酶，提高木聚糖酶的活力，在產酶發酵罐的培養基配方中加入0.3 %~0.4 %的二水合氯化鈣(本實施例為0.3 % )，相應減少水的用量，其中所述各組分之和為100 %，可顯著提高木聚糖酶活力，木聚糖酶活力由對照的34000u/ml增加到38000u/ml，提聞 11.76 9?。
[0033]本發明在製備標準化酶液中，將產酶發酵罐的發酵醪液經過板框過濾、硅藻土除菌，經防腐處理得到在15°C密封存放三個月條件下，酶活力保持率為95 %以上的標準木聚糖酶液。
[0034]本發明為去雜除菌，提高產品質量，發酵醪液經板框過濾後，在發酵濾液中加入十二水合磷酸氫二鈉和二水合氯化鈣取雜除菌，其用量分別為發酵濾液質量的2.8 %~
3.5 % (本實施例為3.2 % )和1.0 %~1.3 % (本實施例為1.2%)。
[0035]本發明也可使用其它無機鹽組合替代，例如硫酸鈉與二水合氯化鈣組合。
[0036]本發明所述的CGMCC NO:5466菌種可利用多種碳、氮源產酶。所述的碳源如麥麩、 玉米軸粉、玉米秸杆粉、稻草粉、玉米油渣、纖維質粉、花生外殼粉等，可單獨或混合用。所述的氮源如無機氮中的硫酸銨、磷酸氫二銨、氯化銨等生理酸性鹽，硝酸鈉生理鹼性鹽，硝酸銨生理中性鹽；尿素、玉米漿、玉米漿粉、玉米蛋白粉、大豆蛋白粉、大豆蛋白腖、魚蛋白腖、 酵母膏、酵母粉、牛肉膏等有機氮，可單獨或混合用。
[0037]—種如上述方法生產的木聚糖酶，所述木聚糖酶為內切型酶，不產纖維素酶，對結晶纖維素、羧甲基纖維素均沒有活性；酶活力在濃度5mMol/L以下，不受Fe2+、Fe3+、Zn2+、 Cu2+金屬離子抑制；其酶作用pH範圍為pH4.5~10.5，溫度範圍為40°C~75°C ;適宜pH 範圍為pH7.0~9.0，適宜溫度範圍為45°C~65°C;最適pH範圍為pH8.5~9.0，最適溫度 50°C~55°C。
[0038]現有文獻報導，銅對酶活性的抑制是強烈的。而本發明木聚糖酶的酶活性不受濃度高達5mmol/L的CU2+所抑制。
[0039]同時，本發明木聚糖酶不含纖維素酶活性，酶活力高，產酶時還可產生少量過氧化氫酶，其作用溫度和PH適合在造紙行業應用，可降低造紙生產成本和環境汙染，有助提高紙的廣品品質。
【權利要求】
1.一種木聚糖酶的生產方法，其特徵是它包括菌種培養、搖瓶發酵、酶液製備步驟，所述菌種即沙福芽孢桿菌(Bacillus safensis)，實驗室編號為KERR89，保藏號:CGMCC NO: 5466，其生物學特性為:革蘭氏染色陽性菌，產芽孢，菌體呈短杆狀，單細胞直徑小於lum， 以二分裂方式增殖；在本發明所述培養基上菌落呈圓形，白色、表面光滑，均一，邊緣整齊， 略有光澤，黏稠。
2.根據權利要求1所述的一種木聚糖酶的生產方法，其特徵是所述的菌種培養為 CGMCC NO:5466菌種在如下配製的斜面上生長良好，以重量計，斜面培養基配方為:蛋白腖 0.5 %~I %、牛肉膏0.3 %~0.5 %、酵母膏0.3 %~0.5 %、葡萄糖0.3 %~0.5 %、氯化鈉0.3 %~0.5 %、瓊脂1.8 %~2.2 %、水94.8 %~96.5 %，其中所述各組分之和為 100 %，調pH值6.9~7.1,0.1MPa滅菌20分鐘~30分鐘，製成試管斜面，接種該菌種， 32°C~35°C，培養24小時~26小時後，放入5°C冰箱中備用，或向菌斜面上注入已滅菌液體石蠟後保藏或以脫脂牛奶為載體冷凍乾燥真空封口保藏。
3.根據權利要求1所述的一種木聚糖酶的生產方法，其特徵是所述的搖瓶發酵為 CGMCC NO:5466菌種在規定的培養條件下可產生高活性木聚糖酶，這種培養條件是:以重量計，培養基配方為麥麩5 %~8 %、纖維質粉1.5 %~2 %、葡萄糖0.3 %~0.5 %、硫酸銨0.3 %~0.5 %、玉米漿I %~2 %、磷酸氫二鉀0.1 %~0.2 %、氯化鈉0.3 %~0.5 %、水86.3 %~91.5 %，其中所述各組分之和為100 %，滅菌前，調pH值為8.0~8.5， 0.1MPa滅菌20分鐘~35分鐘，培養條件:33°C~35°C，搖床轉速260 r/min~280r/min， 培養48小時~52小時。
4.根據權利要求1所述的一種木聚糖酶的生產方法，其特徵是所述的酶液製備為由茄瓶斜面到種子罐到發酵罐，二級發酵，製備標準化酶液。
5.根據權利要求4所述的一種木聚糖酶的生產方法，其特徵是種子培養基配方為:以重量計，麥麩5 %~8 %、玉米粉1.5 %~2 %、硫酸銨0.3 %~0.5 %、玉米漿I %~2 %、磷酸氫二鉀0.1 %~0.2 %、氯化鈉0.3 %~0.5 %、水86.8 %~91.8 % ,其中所述各組分之和為100 %，滅菌前，調pH值為6.5~7.0，0.1MPa滅菌30分鐘~35分鐘，種子罐裝料總體積不超過70% ;培養條件:溫度33°C~38°C，攪拌轉速180 r/min~220 r/min, 通氣量以v/v計:0小時~5小時，1:0.40~0.46，5小時以後，1:0.50~0.56，罐壓0.06 MPa~0.07MPa，培養周期為7小時~9小時。
6.根據權利要求4所述·的一種木聚糖酶的生產方法，其特徵是產酶發酵罐的培養基配方為:以重量計，麥麩5 %~8 %、纖維質粉1.5 %~2 %、葡萄糖0.3~0.5 %、硫酸銨 0.3 %~0.5 %、玉米漿I %~2 %、磷酸氫二鉀0.1 %~0.2 %、氯化鈉0.3 %~0.5 %、 水86.3 %~91.5 %，其中所述各組分之和為100 %，滅菌前，調pH值為8.0~8.5，0.1MPa 滅菌30分鐘~35分鐘，裝料總體積不超過70 % ;培養條件:溫度33°C~38°C，攪拌轉速 180 r/min~220 r/min，通氣量以v/v計:0小時~2小時，1:0.40~0.42，2小時~4小時，1:0.50~0.52，4小時~6小時，1:0.55~0.68，6小時以後1:0.60~0.62，罐壓0.06 MPa~0.07MPa，發酵周期為48小時~52小時。
7.根據權利要求6所述的一種木聚糖酶的生產方法，其特徵是在產酶發酵罐的培養基配方中加入0.3 %~0.4 %的二水合氯化鈣，相應減少水的用量，其中所述各組分之和為 100 %。
8.根據權利要求4所述的一種木聚糖酶的生產方法，其特徵是在製備標準化酶液中， 將產酶發酵罐的發酵醪液經過板框過濾、硅藻土除菌，經防腐處理得到在15°C密封存放三個月條件下，酶活力保持率為95 %以上的標準木聚糖酶液。
9.根據權利要求8所述的一種木聚糖酶的生產方法，其特徵是發酵醪液經板框過濾後，在發酵濾液中加入十二水合磷酸氫二鈉和二水合氯化鈣取雜除菌，其用量分別為發酵濾液質量的2.8 %~3.5 %和1.0 %~1.3 %。
10.一種根據權利要求1所述方法生產的木聚糖酶，其特徵是所述木聚糖酶為內切型酶，不產纖維素酶，對結晶纖維素、羧甲基纖維素均沒有活性；酶活力在濃度5mMol/L以下， 不受Fe2+ 'Fe3+、Zn2+、Cu2+金屬離子抑制；其酶作用pH範圍為pH4.5~10.5，溫度範圍為 40°C~75°C ;適宜pH範圍為pH7.0~9.0，適宜溫度範圍為45°C~65°C ;最適pH範圍為 pH8.5~9.0，最適溫度50°C~55°C。
【文檔編號】C12N9/42GK103571811SQ201310490355
【公開日】2014年2月12日 申請日期:2013年10月19日 優先權日:2013年10月19日
【發明者】李忠興, 楊忠義 申請人:沅江浣溪沙酶技術有限公司