抗-gcc抗體分子和其用於測試對gcc標靶治療的易感性的用途
2023-06-07 16:41:31 2
抗-gcc抗體分子和其用於測試對gcc標靶治療的易感性的用途
【專利摘要】本發明揭示結合GCC的抗體和抗體的抗原結合片段。本發明還提供用於鑑別應接受利用本發明提供的所述抗-GCC抗體的GCC標靶治療的患者的診斷方法。所述抗-GCC抗體分子可作為裸抗體分子和作為免疫偶聯物的組份來使用。因此，在另一方面中，本發明的特徵在於包含本發明描述的抗-GCC抗體分子和治療劑或標記的免疫偶聯物。本發明的特徵還在於使用本發明描述的抗-GCC抗體分子和免疫偶聯物用於(例如)檢測GCC以及表達GCC的細胞或組織的方法。所述方法尤其可用於GCC介導疾病的診斷、預後、成像或分期。因此，在一些方面中，本發明的特徵在於鑑別用GCC標靶治療、例如抗-GCC抗體治療、例如包含與治療劑偶聯的抗-GCC抗體的免疫偶聯物來治療的個體的方法。
【專利說明】抗-GCC抗體分子和其用於測試對GCC標祀治療的易感性的 用途
[0001] 巧關申請案
[0002] 本申請案主張對2012年4月27日申請的美國臨時申請案第61/639, 376號的權 益和優先權。美國臨時申請案第61/639, 376號的全部內容是W引用方式併入本文中。
【技術領域】
[0003] 本發明涉及結合GCC的抗體分子和使用其選擇用GCC標祀治療來治療的患者的方 法，所述GCC標祀治療是（例如）含有偶聯到諸如治療劑等藥劑的抗-GCC抗體分子或其片 段的免疫偶聯物。
【背景技術】
[0004] 鳥巧酸環化酶C( "GCC")是在維持腸液、電解質平衡和細胞增殖中發揮功能的 跨膜細胞表面受體，例如，參見卡裡瑟斯（Carrithers)等人，美國國家科學院院刊（Proc. 化tl.Acad.Sci.USA) 100:3018-3020(2003)。GCC在小腸、大腸和直腸襯裡的黏膜細胞處表 達（卡裡瑟斯等人，結腸與直腸疾病值isColonRectum) 39:171-181 (1996))。在腸上皮細 胞發生腫瘤轉化後，維持GCC表達，且在所有原發性和轉移性結腸直腸腫瘤中都有表達（卡 裡瑟斯等人，結腸與直腸疾病39:171-181 (1996);比克炬UC)等人，歐洲癌症雜誌巧urJ Cancer) 41:1618-1627 (200巧；卡裡瑟斯等人，胃腸病學（Gastroenterology) 107:1653-16 61(1994))。
【發明內容】
[0005] 本發明至少部分地基於新穎的抗-GCC抗體的發現。因此，在一個方面中，本發明 的特徵在於如本文所掲示的抗-GCC抗體分子。抗-GCC抗體分子可作為裸抗體分子和免疫 偶聯物的組份來使用。因此，在另一方面中，本發明的特徵在於包含本文所述抗-GCC抗體 分子和治療劑或標記的免疫偶聯物。本發明的特徵還在於使用本文所述抗-GCC抗體分子 和免疫偶聯物（例如）檢測GCC和表達GCC的細胞或組織的方法。所述方法尤其可用於GCC 介導疾病的診斷、預後、成像或分期。因此，在一些方面中，本發明的特徵在於鑑別用GCC標 祀治療來治療的個體的方法，所述GCC標祀治療是（例如）抗-GCC抗體治療，例如，包含與 治療劑偶聯的抗-GCC抗體的免疫偶聯物。本發明的特徵還在於確定患有癌症的個體是GCC 標祀治療（例如，本文所述GCC標祀治療）的潛在候選者的活體外或活體內方法。
[0006] 抗-GCC抗體（例如，本文所述抗-GCC抗體）還可用於（例如）調節GCC蛋白質 的活性或功能；和用於治療GCC介導疾病，如本文所述。在一些方面中，治療包括獲得了解 和/或評估樣品或個體W測定GCC表達水平，並且如果個體表達GCC，那麼投與GCC標祀治 療，例如，本文所述GCC標祀治療。在其它方面中，所述方法的特徵在於通過W下方式產生 個人化治療報告，例如，GCC標祀治療報告：從個體獲得樣品並通過（例如）本文所述檢測 方法（例如，使用本文所述抗-GCC抗體）測定GCC表達水平，並且基於所述測定，選擇所述 個體的標祀治療報告。
[0007] 在另一方面中，本發明的特徵還在於編碼抗-GCC抗體分子胺基酸序列的經分離 和/或重組核酸，W及包含所述核酸的載體和宿主細胞，和產生抗-GCC抗體分子的方法。本 文的特徵還在於包含本文所述抗-GCC抗體（例如，免疫偶聯物）的反應混合物和試劑盒， W及（例如）包含本文所述抗-GCC抗體W檢測GCC表達的活體外分析。
[0008] 本文所提到的所有出版物、專利申請案、專利和其它參考文獻都是全文W引用方 式併入本文中。
[0009] 根據說明書和圖式W及權利要求書將明了本文所掲示本發明的其它特徵、目的和 優點。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0010] 圖1是用於產生本發明的人類GCC化GCC)細胞外結構域巧CD)小鼠化(mFc)融合 蛋白化GCC-ECD-mFc)的蛋白質表達載體的環狀圖。
[0011] 圖2A-2D繪示匯總來自經篩選招募到C26001研究（GCC標祀免疫偶聯物的I期臨 床試驗）中的癌症患者的多種腫瘤類型的GCC表達的經組合/合計（頂端和細胞質）H評 分分布的條形圖。圖2A繪示所篩選結腸直腸癌患者的經組合合計H評分分布；圖2B繪示 所篩選胃癌患者的經組合合計H評分分布；圖2C繪示所篩選膜髒癌患者的經組合合計H評 分分布；圖2D繪示所篩選食道癌患者的經組合合計H評分分布。
[001引圖3A-3C繪示匯總所篩選各個腫瘤特異性微陣列的GCC表達的經組合/合計（頂 端和細胞質）H評分分布的條形圖。圖3A繪示針對GCC表達進行篩選的各個結腸直腸腫瘤 微陣列上的樣品的經組合/合計H評分分布；圖3B繪示針對GCC表達進行篩選的胃腫瘤微 陣列上的樣品的經組合/合計H評分分布；圖3C繪示針對GCC表達進行篩選的各個膜髒腫 瘤微陣列上的樣品的經組合/合計H評分分布。
【具體實施方式】
[0013] 鳥巧酸環化酶"GCC)(還稱為STAR、ST受體、GUC2C和GUCY2C)是在維持腸液、 電解質平衡和細胞增殖中發揮功能的跨膜細胞表面受體（卡裡瑟斯等人，美國國家科學 院院刊100:3018-3020(2003);曼恩（Mann)等人，生物化學與生物物理學通訊炬iochem Bio地ysResCommun) 239:463-466 (1997);培培利（Pitar;L)等人，美國國家科學院院刊 100:2695-2699(2003));基因庫佑enBank)登錄號NM_004963,其各自是全文W引用方式並 入本文中）。該個功能是經由鳥巧蛋白的結合來介導（威甘德（Wiegand)等人，歐洲生物化 學學會聯合會快報（陽BSLett. )311:150-154 (1992))。GCC還是熱穩定性腸毒素（ST，例 如具有胺基酸序列NTFYCCELCCNPACAGCY，SEQIDN0:1)的受體，所述腸毒素是由大腸桿菌 巧.coli)W及其它傳染性生物體產生的膚（拉奧，M.C. (Rao,M.C.)汽己基金座談會（Ciba Found.Symp.) 112:74-93 (1985);努普F.C.(KnoopF.C.)和歐文斯，M. (Owens,M.)藥理和 毒理方法雜誌（J.Wiarmacol.Toxicol.Methods) 28:67-72 (1992))。ST對GCC的結合活化 引起腸病（例如，腹瀉）的信號級聯。
[0014] 人類GCC的核巧酸序列（基因庫登錄號NM_004963;SEQIDN0:2);
[0015] Igaccagagagaagcgtggggaagagtgggctgagggactccactagaggctgtccatctg
【權利要求】
1. 一種抗-GCC抗體分子，其包含三個重鏈互補決定區（⑶Rl XDR2和⑶R3)，其分別包 含胺基酸序列SEQ ID NO :21、22和23或分別包含SEQ ID NO :33、34和35 ;和三個輕鏈互 補決定區（CDRl、CDR2和CDR3)，其分別包含胺基酸序列SEQ ID NO : 27、28和29或分別包 含 SEQ ID NO :39、40 和 41。
2. -種抗-GCC抗體分子，其與包含以下的抗-GCC抗體競爭結合到相同表位或結合到 所述表位：三個重鏈互補決定區（⑶Rl、⑶R2和⑶R3)，其分別包含胺基酸序列SEQ ID NO : 21、22和23 ;和三個輕鏈互補決定區（⑶R1、⑶R2和⑶R3)，其分別包含胺基酸序列SEQ ID NO :27、28 和 29。
3. -種抗-GCC抗體分子，其與包含以下的抗-GCC抗體競爭結合到相同表位或結合到 所述表位：三個重鏈互補決定區（⑶Rl、⑶R2和⑶R3)，其分別包含胺基酸序列SEQ ID NO : 33、34和35 ;和三個輕鏈互補決定區（⑶Rl、⑶R2和⑶R3)，其分別包含胺基酸序列SEQ ID NO :39、40 和 41。
4. 根據前述權利要求中任一權利要求所述的抗-GCC抗體分子，其中所述抗-GCC抗體 分子是單克隆抗體。
5. 根據前述權利要求中任一權利要求所述的抗-GCC抗體分子，其中所述抗-GCC抗體 分子是兔或兔源抗體。
6. 根據權利要求5所述的抗-GCC抗體分子，其中所述抗體是兔單克隆抗體。
7. 根據權利要求1所述的抗-GCC抗體分子，其進一步包含包含根據SEQ ID NO: 11或 SEQ ID NO : 15的胺基酸序列的重鏈可變區和包含根據SEQ ID NO : 13或SEQ ID NO : 17的 胺基酸序列的輕鏈可變區。
8. 根據權利要求1所述的抗-GCC抗體分子，其中所述重鏈⑶R1XDR2和⑶R3分別包 含根據SEQ ID NO :21、22和23的胺基酸序列，並且所述輕鏈CDR分別包含根據SEQ ID NO: 27、28和29的胺基酸序列。
9. 根據權利要求7所述的抗-GCC抗體分子，其中所述重鏈可變區包含根據SEQ ID NO: 11的胺基酸序列且所述輕鏈可變區包含根據SEQ ID NO : 13的胺基酸序列。
10. 根據前述權利要求中任一權利要求所述的抗-GCC抗體分子，其中所述抗-GCC抗體 分子偶聯到可檢測標記。
11. 根據權利要求10所述的抗-GCC抗體分子，其中所述可檢測標記選自由以下組成的 群組：辣根過氧化物酶HRP ;鹼性磷酸酶；半乳糖苷酶；葡萄糖澱粉酶；溶菌酶；糖氧化酶， 例如，葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶和葡萄糖6-磷酸脫氫酶；雜環氧化酶，例如尿酸酶和黃 嘌呤氧化酶，其與諸如HRP、乳過氧化物酶或微過氧化物酶等採用過氧化氫來氧化染料前體 的酶偶合；生物素/抗生物素蛋白；自旋標記；噬菌體標記；和穩定自由基。
12. 根據權利要求10所述的抗-GCC抗體分子，其中所述可檢測標記是選自以下的螢光 團：螢光黃或其衍生物、玫瑰紅或其衍生物、丹磺醯基、傘形酮、螢光素酶、螢光素和2, 3-二 氫酞嗪二酮。
13. 根據權利要求10所述的抗-GCC抗體分子，其中所述可檢測標記是選自由以下組成 的群組的放射性試劑：32P、 3H、14C、188Rh、43K、52Fe、 57Co、67Cu、67Ga、68Ga、77Br、 81 RV81MKr、87MSr、 99Tc、mIn、 113M In、123I、125I、127Cs、129Cs、 131I、132I、197Hg、2〇3Pb 和 2tl6Bi 和 213Bi。
14. 一種經分離核酸序列，其編碼根據權利要求1、7、8和9中任一權利要求所述的抗體 分子。
15. -種細胞，其包含根據權利要求14所述的經分離核酸序列。
16. -種產生根據權利要求1、7、8或9所述的抗體分子的方法，其包含在容許產生抗體 分子的條件下培養根據權利要求15所述的細胞，由此產生根據權利要求1、7、8或9所述的 抗體分子。
17. -種載體，其包含根據權利要求1、7、8或9所述的抗體分子的輕鏈和重鏈中的一者 或二者。
18. -種檢測生物樣品中的GCC分子的方法，其包含使所述生物樣品與根據權利要求1 到13中任一權利要求所述的抗體分子接觸和測定所述抗體分子是否結合到所述GCC分子。
19. 根據權利要求18所述的方法，其中所述方法檢測方法包含免疫組織化學分析。
20. 根據權利要求18或19所述的方法，其中所述生物樣品是源自懷疑患有表達GCC的 癌症的患者的腫瘤生檢。
21. 根據權利要求18到20中任一權利要求所述的方法，其進一步包含對所述生物樣品 中的GCC表達進行定量的步驟。
22. 根據權利要求21所述的方法，其中對GCC表達的所述定量包含所述生物樣品中的 頂端GCC表達、所述生物樣品中的細胞質GCC表達或二者。
23. 根據權利要求21或22所述的方法，其中所述定量步驟包含H-評分方法。
24. 根據權利要求20所述的方法，其中所述表達GCC的癌症選自由以下組成的群組： 結腸直腸癌、胃癌、小腸癌、食道癌、胰臟癌、肺癌、軟組織肉瘤、神經外胚層腫瘤和神經內分 泌腫瘤。
25. 根據權利要求24所述的方法，其中所述肺癌是鱗狀細胞癌或腺癌。
25. 根據權利要求24所述的方法，其中所述軟組織肉瘤是平滑肌肉瘤或橫紋肌肉瘤。
26. 根據權利要求24所述的方法，其中所述神經內分泌腫瘤是胃腸或支氣管肺神經內 分泌腫瘤。
27. -種試劑盒，其包含根據權利要求1到13中任一權利要求所述的抗-GCC抗體分子 和使用說明書。
28. 根據權利要求27所述的試劑盒，其進一步包含GCC標靶治療劑。
29. 根據權利要求28所述的試劑盒，其中所述GCC標靶治療劑包含抗-GCC抗體分子。
30. 根據權利要求29所述的試劑盒，其中所述治療性抗-GCC抗體分子是單克隆抗體。
31. 根據權利要求29或30所述的試劑盒，其中所述治療性抗-GCC抗體分子是人類 IgGl抗體。
32. 根據權利要求29、30或31所述的試劑盒，其中所述治療性抗-GCC抗體分子包含三 個重鏈互補決定區（CDR1、CDR2和CDR3)，其分別包含根據SEQ ID NO :67、68和69的氨基 酸序列；和三個輕鏈互補決定區（⑶RU⑶R2和⑶R3)，其分別包含根據SEQ ID NO :70、71 和72的胺基酸序列。
33. 根據權利要求32所述的試劑盒，其中所述治療性抗-GCC抗體分子包含包含SEQ ID NO :79的胺基酸序列的重鏈可變區和包含SEQ ID NO :80的胺基酸序列的輕鏈可變區。
34. 根據權利要求29到33所述的試劑盒，其中所述治療性抗-GCC抗體分子偶聯到細 胞毒性劑。
35. 根據權利要求34所述的試劑盒，其中所述細胞毒性劑是奧裡斯他汀分子。
36. 根據權利要求35所述的試劑盒，其中所述奧裡斯他汀分子是單甲基奧裡斯他汀E MMAE或單甲基奧裡斯他汀F MMAF。
37. 根據權利要求34到36所述的試劑盒，其中所述細胞毒性劑經由含有馬來醯亞胺部 分的連接體偶聯到所述抗體。
38. 根據權利要求37所述的試劑盒，其中所述馬來醯亞胺連接體選自由以下組成的群 組：馬來醯亞胺基己醯基（me)、馬來醯亞胺基己醯基-L-苯丙氨酸-L-賴氨酸-對-氨基 苯甲基氨基甲酸酯和馬來醯亞胺基己醯基-L-纈氨酸-L-瓜氨酸-對-氨基苯甲基氨基甲 酸酯（vc)。
39. 根據權利要求28所述的試劑盒，其中所述GCC標靶治療劑是特徵在於式（1-4)、 (1-5)或（1-6)中任一者的免疫偶聯物：
其中Ab是抗-GCC抗體分子，所述抗-GCC抗體分子包含三個重鏈互補決定區（⑶Rl、 ⑶R2和⑶R3)，其分別包含根據SEQ ID NO :67、68和69的胺基酸序列；和三個輕鏈互補決 定區（CDRUCDR2和CDR3)，其分別包含根據SEQ ID NO :70、71和72的胺基酸序列，並且其 中m是1到8的整數。
40. 根據權利要求39所述的試劑盒，其中m是3到5。
41. 根據權利要求39所述的試劑盒，其中m是約4。
42. -種治療患有特徵在於一或多個表達GCC的細胞的疾病的患者的方法，其包含： a. 通過例如根據權利要求18到26中任一權利要求所述的方法檢測從所述患者獲得的 生物樣品中的GCC蛋白質表達；和 b. 如果所述生物樣品表達GCC，那麼將GCC標靶治療劑、例如本文所述的GCC標靶治療 劑投與所述患者。
43. 根據權利要求42所述的方法，其中所述檢測步驟包含以下步驟： i) 使所述生物樣品與本文所述的抗-GCC抗體分子、例如根據權利要求1到13中任一 權利要求所述的抗-GCC抗體分子、例如包含以下的抗-GCC抗體分子接觸：三個重鏈互補決 定區（CDR1、CDR2 和 CDR3)，其分別包含根據 SEQ ID N0:21、22 和 23 或 SEQ ID N0:33、34 和35的胺基酸序列；和三個輕鏈互補決定區（⑶RU OTR2和⑶R3)，其分別包含根據SEQ ID NO :27、28和29或SEQ ID NO :39、40和41的胺基酸序列；和 ii) 檢測所述抗-GCC抗體分子與GCC蛋白質之間的複合物的形成。
44. 根據權利要求43所述的方法，其中所述檢測步驟是經由免疫組織化學來執行。
45. 根據權利要求43所述的方法，其中所述GCC標靶治療劑包含抗-GCC抗體分子。
46. 根據權利要求45所述的方法，其中所述治療性抗-GCC抗體分子是單克隆抗體。
47. 根據權利要求45或46所述的方法，其中所述治療性抗-GCC抗體分子是人類IgGl 抗體。
48. 根據權利要求45所述的方法，其中所述抗-GCC抗體分子包含三個重鏈互補決定區 (CDRUCDR2和CDR3)，其分別包含根據SEQ ID NO :67、68和69的胺基酸序列；和三個輕鏈 互補決定區（CDRUCDR2和CDR3)，其分別包含根據SEQ ID NO :70、71和72的胺基酸序列。
49. 根據權利要求48所述的方法，其中所述抗-GCC抗體分子進一步包含包含根據SEQ ID NO :79的胺基酸序列的重鏈可變區和包含根據SEQ ID NO :80的胺基酸序列的輕鏈可變 區。
50. 根據權利要求45所述的方法，其中所述抗-GCC抗體分子偶聯到細胞毒性劑。
51. 根據權利要求50所述的方法，其中所述細胞毒性劑是奧裡斯他汀分子。
52. 根據權利要求51所述的方法，其中所述奧裡斯他汀分子是單甲基奧裡斯他汀E MMAE或單甲基奧裡斯他汀F MMAF。
53. 根據權利要求50到53所述的方法，其中所述細胞毒性劑是經由含有馬來醯亞胺部 分的連接體偶聯。
54. 根據權利要求53所述的方法，其中所述馬來醯亞胺連接體選自由以下組成的群 組：馬來醯亞胺基己醯基（me)、馬來醯亞胺基己醯基-L-苯丙氨酸-L-賴氨酸-對-氨基 苯甲基氨基甲酸酯和馬來醯亞胺基己醯基-L-纈氨酸-L-瓜氨酸-對-氨基苯甲基氨基甲 酸酯（vc)。
55. 根據權利要求42所述的方法，其中所述GCC標靶治療是特徵在於式（1-4)、（1-5) 或（1-6)中任一者的免疫偶聯物：
其中Ab是抗-GCC抗體分子，所述抗-GCC抗體分子包含三個重鏈互補決定區（⑶RU ⑶R2和⑶R3)，其分別包含根據SEQ ID NO :67、68和69的胺基酸序列；和三個輕鏈互補決 定區（CDRUCDR2和CDR3)，其分別包含根據SEQ ID NO :70、71和72的胺基酸序列，並且其 中m是1到8的整數。
56. 根據權利要求55所述的方法，其中m是約3到約5。
57. 根據權利要求56所述的方法，其中m是約4。
58. 根據權利要求42到57中任一權利要求所述的方法，其中所述特徵在於一或多個表 達GCC的細胞的疾病選自由以下組成的群組：癌症、炎症性腸綜合症、克隆氏病或帕金森氏 病。
59. 根據權利要求58所述的方法，其中所述癌症選自由以下組成的群組：結腸直腸癌、 胃癌、小腸癌、食道癌、胰臟癌、肺癌、軟組織肉瘤、神經外胚層腫瘤和神經內分泌腫瘤。
60. 根據權利要求59所述的方法，其中所述肺癌是鱗狀細胞癌或腺癌。
61. 根據權利要求59所述的方法，其中所述軟組織肉瘤是平滑肌肉瘤或橫紋肌肉瘤。
62. 根據權利要求59所述的方法，其中所述神經內分泌腫瘤是胃腸或支氣管肺神經內 分泌腫瘤。
63. 根據權利要求42到62所述的方法，其中所述生物樣品是細胞或組織生檢。
64. 根據權利要求63所述的方法，其中所述細胞或組織生檢是腫瘤生檢。
65. -種測定癌細胞對GCC標靶治療劑的敏感性和/或評估個體是否是GCC標靶治療 的潛在候選者的方法，所述方法包含以下步驟： i) 提供來自患有癌症的患者的癌細胞樣品； ii) 使所述樣品與本文所述的抗-GCC抗體分子、例如根據權利要求1到13中任一權利 要求所述的抗-GCC抗體、例如包含以下的抗-GCC抗體接觸：三個重鏈互補決定區（⑶R1、 CDR2和CDR3)，其分別包含根據SEQ ID NO :21、22和23或SEQ ID NO :33、34和35的氨基 酸序列；和三個輕鏈互補決定區（CDRUCDR2和CDR3)，其分別包含根據SEQ ID N0:27、28 和29或SEQ ID NO :39、40和41的胺基酸序列；和 iiii)檢測所述抗-GCC抗體分子與GCC蛋白質之間的複合物的形成，由此測定所述癌 症對所述GCC標靶治療劑、例如本文所述的GC標靶治療劑的敏感性，和/或測定個體是否 是用GCC標靶治療、例如本文所述的GCC標靶治療來治療的候選者。
66. 根據權利要求65所述的方法，其中所述檢測步驟是經由免疫組織化學來執行。
67. 根據權利要求65或66所述的方法，其中所述癌症選自由以下組成的群組：結腸 直腸癌、胃癌、小腸癌、食道癌、胰臟癌、肺癌、軟組織肉瘤、神經外胚層腫瘤和神經內分泌腫 瘤。
68. 根據權利要求67所述的方法，其中所述肺癌是鱗狀細胞癌或腺癌。
69. 根據權利要求67所述的方法，其中所述軟組織肉瘤是平滑肌肉瘤或橫紋肌肉瘤。
70. 根據權利要求67所述的方法，其中所述神經內分泌腫瘤是胃腸或支氣管肺神經內 分泌腫瘤。
71. 根據權利要求65到70中任一權利要求所述的方法，其進一步包含向所述患者投與 所述GCC標靶治療劑、例如本文所述的GCC標靶治療劑的步驟。
72. 根據權利要求71所述的方法，其中所述GCC標靶治療劑包含抗-GCC抗體分子。
73. 根據權利要求72所述的方法，其中所述治療性抗-GCC抗體分子是單克隆抗體。
74. 根據權利要求72或73所述的方法，其中所述治療性抗-GCC抗體分子是人類IgGl 抗體。
75. 根據權利要求72、73或74中任一權利要求所述的方法，其中所述治療性抗-GCC抗 體分子包含三個重鏈互補決定區（⑶R1、⑶R2和⑶R3)，其分別包含根據SEQ ID NO:67、68 和69的胺基酸序列；和三個輕鏈互補決定區（⑶RU OTR2和⑶R3)，其分別包含根據SEQ ID NO :70、71和72的氣基酸序列。
76. 根據權利要求75所述的方法，其中所述治療性抗-GCC抗體分子進一步包含包含根 據SEQ ID NO :79的胺基酸序列的重鏈可變區和包含根據SEQ ID NO :80的胺基酸序列的輕 鏈可變區。
77. 根據權利要求72到76中任一權利要求所述的方法，其中所述抗-GCC抗體分子偶 聯到細胞毒性劑。
78. 根據權利要求77所述的方法，其中所述細胞毒性劑是奧裡斯他汀分子。
79. 根據權利要求78所述的方法，其中所述奧裡斯他汀分子是單甲基奧裡斯他汀 EMMAE或單甲基奧裡斯他汀F MMAF。
80. 根據權利要求77、78或79中任一權利要求所述的方法，其中所述細胞毒性劑是經 由含有馬來醯亞胺部分的連接體偶聯。
81. 根據權利要求80所述的方法，其中所述馬來醯亞胺連接體選自由以下組成的群 組：馬來醯亞胺基己醯基（me)、馬來醯亞胺基己醯基-L-苯丙氨酸-L-賴氨酸-對-氨基 苯甲基氨基甲酸酯和馬來醯亞胺基己醯基-L-纈氨酸-L-瓜氨酸-對-氨基苯甲基氨基甲 酸酯（vc)。
82. 根據權利要求65到71所述的方法，其中所述GCC標靶治療劑是特徵在於式（1-4)、 (1-5)或（1-6)中任一者的免疫偶聯物：
其中Ab是抗-GCC抗體分子，所述抗-GCC抗體分子包含三個重鏈互補決定區（⑶RU ⑶R2和⑶R3)，其分別包含根據SEQ ID NO :67、68和69的胺基酸序列；和三個輕鏈互補決 定區（CDRUCDR2和CDR3)，其分別包含根據SEQ ID NO :70、71和72的胺基酸序列，並且其 中m是1到8的整數。
83. 根據權利要求82所述的方法，其中m是約3到約5。
84. 根據權利要求83所述的方法，其中m是約4。
85. -種反應混合物，其包含生物樣品和本文所述的抗-GCC抗體分子、例如根據權利 要求1到13中任一權利要求所述的抗-GCC抗體、例如包含以下的抗-GCC抗體分子：三個 重鏈互補決定區（CDR1、CDR2和CDR3)，其分別包含根據SEQ ID NO :21、22和23或SEQ ID NO : 33、34和35的胺基酸序列；和三個輕鏈互補決定區（CDRl、CDR2和CDR3)，其分別包含 根據SEQ ID NO : 27、28和29或SEQ ID NO : 39、40和41的胺基酸序列。
86. 根據權利要求85所述的反應混合物，其中所述生物樣品包含一或多個細胞。
87. 根據權利要求85所述的反應混合物，其中所述生物樣品包含組織樣品。
88. 根據權利要求87所述的反應混合物，其中所述組織樣品是經石蠟包埋的組織樣 品。
89. 根據權利要求85所述的反應混合物，其中所述生物樣品是原發性或轉移性腫瘤生 檢樣品。
90. 根據權利要求85所述的反應混合物，其中所述生物樣品安裝在載玻片上。
91. 根據權利要求89所述的反應混合物，其中所述腫瘤是結腸直腸腫瘤、胃腫瘤、小腸 腫瘤、食道腫瘤、胰臟腫瘤、肺腫瘤、軟組織肉瘤、神經外胚層腫瘤或神經內分泌腫瘤。
92. 根據權利要求91所述的反應混合物，其中所述肺腫瘤是鱗狀細胞癌或腺癌。
93. 根據權利要求91所述的反應混合物，其中所述軟組織肉瘤是平滑肌肉瘤或橫紋肌 肉瘤。
94. 根據權利要求91所述的反應混合物，其中所述神經內分泌腫瘤是胃腸或支氣管肺 神經內分泌腫瘤。
95. 根據權利要求85所述的反應混合物，其中懷疑所述生物樣品含有GCC蛋白質。
96. 根據權利要求85到95中任一權利要求所述的反應混合物，其進一步包含適於檢測 所述抗-GCC抗體與GCC蛋白質之間的複合物的形成的試劑。
97. -種產生個人化癌症治療報告的方法，所述方法包含以下步驟： 使從懷疑患有表達GCC的癌症的癌症患者獲得的包含一或多個癌細胞的生物樣品與 本文所述的抗-GCC抗體分子、例如根據權利要求1到13中任一權利要求所述的抗-GCC 抗體分子、例如包含以下的抗-GCC抗體分子接觸：三個重鏈互補決定區（⑶R1、⑶R2和 CDR3)，其分別包含根據SEQ ID NO :21、22和23或SEQ ID NO :33、34和35的胺基酸序列； 和三個輕鏈互補決定區（CDRl、CDR2和CDR3)，其分別包含根據SEQ ID NO : 27、28和29或 SEQ ID NO :39、40和41的氣基酸序列； 通過例如根據權利要求18到26中任一權利要求所述的方法檢測所述生物樣品中所述 抗-GCC分子與GCC蛋白質之間的複合物的形成； 對所述生物樣品中的GCC表達進行定量； 將所述GCC表達水平與包含GCC標靶治療、例如本文所述的GCC標靶治療的資料庫比 較；和 基於所述GCC表達水平選擇GCC標靶治療和任選地給藥方案。
98. 根據權利要求97所述的方法，其中所述表達GCC的癌症是結腸直腸癌、胃癌、小腸 癌、食道癌、胰臟癌、肺癌、軟組織肉瘤、神經外胚層腫瘤或神經內分泌腫瘤。
99. 根據權利要求98所述的方法，其中所述肺腫瘤是鱗狀細胞癌或腺癌。
100. 根據權利要求98所述的方法，其中所述軟組織肉瘤是平滑肌肉瘤或橫紋肌肉瘤。
101. 根據權利要求98所述的反應混合物，其中所述神經內分泌腫瘤是胃腸或支氣管 肺神經內分泌腫瘤。
102. 根據權利要求97到101中任一權利要求所述的方法，其中所述檢測步驟是經由免 疫組織化學來執行。
103. 根據權利要求97到102中任一權利要求所述的方法，其中對GCC表達的所述定量 包含所述生物樣品中的頂端GCC表達、所述生物樣品中的細胞質GCC表達或_者。
104. 根據權利要求97到103所述的方法，其中所述定量步驟包含H-評分方法。
【文檔編號】C12N15/10GK104395470SQ201380033309
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2013年4月27日 優先權日:2012年4月27日
【發明者】海倫·艾利森·弗蘭克, 艾麗斯·A·麥克唐納, 特雷莎·L·奧基夫 申請人:米倫紐姆醫藥公司