一種牛大力生根組織培養基及其製備方法與流程
2023-06-08 10:04:11 1
本發明屬於培養基製備技術領域，具體涉及一種牛大力生根組織培養基。
背景技術：
牛大力，別名豬腳笠、金鐘根、山蓮藕、倒吊金鐘、大力薯，為豆科豆科崖豆藤屬植物，其主要成分為蛋白質、澱粉質及生物鹼等。牛大力以根入藥，全年可採挖，為傳統的藥食同源植物。牛大力性平、味甘，有補腎潤肺、強筋活絡的功效，常用於治療腰肌勞損、風溼性關節炎、肺結核、慢性支氣管炎、慢性肝炎等病症。牛大力除了入藥煎劑外，亦常為廣東民間入湯做食療、藥膳之用。牛大力有效成分有高麗槐素、芒柄花素、查爾酮類化合物、異黃酮類、糠醛、牛大力多糖等，這些成分具有抗炎殺菌、免疫調節作用，並由一定抗氧化和清除自由基作用。牛大力經採挖後，經清洗、晾曬可直接入藥，也可用於食用，更可經深加工，製成牛大力保健酒、牛大力花茶等深加工產品。牛大力是製藥企業加工中成藥、保健品的常用原料，近年來，隨著我國中醫藥事業蓬勃發展，人們生活水平逐漸提高，保健意識不斷增強，牛大力的市場需求也在不斷擴大。
目前，牛大力的繁殖方法主要有種子繁育、扦插繁育、組織培養繁育等幾種模式。種子繁育及扦插培養對牛大力種苗本身要求較高，且培育周期較長，不利於牛大力種植推廣；因此，選擇優良的牛大力種苗，採用組織培養的模式進行繁育，是一種高效繁育培養牛大力的方法，能大大縮短牛大力的培育時間，且提高牛大力幼苗的成活率，繁育所得植株健康，有利於提高牛大力的結薯能力及產量。
在植物組織培養過程中，根據植物生長發育過程所需求的養分不同，可分為三種培養基，分別為誘導分化培養基、生根組織培養基、壯苗培養基。其中，生根組織培養基起到植物體生根的目的，直接決定了植物的根系發育程度，從而能夠提升組培苗對養分的吸收能力及移栽成活率。針對不同的植物，生根組織培養基的成分也應有所區別。
以上背景技術內容的公開僅用於輔助理解本發明的發明構思及技術方案，其並不必然屬於本專利申請的現有技術，在沒有明確的證據表明上述內容在本專利申請的申請日已經公開的情況下，上述背景技術不應當用於評價本申請的新穎性和創造性。
技術實現要素：
本發明要解決的技術問題是提供一種牛大力生根組織培養基，以實現對牛大力組培苗的高效誘導生根。
為了解決以上技術問題，本發明採用以下技術方案：
一種牛大力生根組織培養基，包括以下原料：瓊脂35～105g、蔗糖12～48g、激素0.3～1.2g、無機鹽溶液3～14g、煙酸0.1～1.2g、活性炭8～25g、半胱氨酸0.2～1.2g、鏈黴素0.1～1.5g、水解乳蛋白7～18g、有機物40～120g、三蒸水15～60g。
優選地，所述的牛大力生根組織培養基，包括以下原料：瓊脂40～90g、蔗糖18～42g、激素0.5～1g、無機鹽溶液5～12g、煙酸0.2～1g、活性炭10～22g、半胱氨酸0.3～1g、鏈黴素0.2～1.2g、水解乳蛋白8～15g、有機物50～110g、三蒸水20～50g。
優選地，所述的牛大力生根組織培養基，包括以下原料：瓊脂45～80g、蔗糖20～36g、激素0.6～0.8g、無機鹽溶液6～10g、煙酸0.3～0.9g、活性炭12～20g、半胱氨酸0.5～0.8g、鏈黴素0.3～0.9g、水解乳蛋白10～14g、有機物55～95g、三蒸水25～45g。
優選地，所述的牛大力生根組織培養基，所述有機物包括牛奶、蘋果泥、香蕉泥中的一種。
更優選地，所述的牛大力生根組織培養基，所述激素包括6-ba、kt、cppu、aba中的一種。
更優選地，所述的牛大力生根組織培養基，其無機鹽溶液中的無機鹽包括硼酸鈉、氯化鋅、氯化銨、磷酸二氫鉀、氯化鎂、氯化鈣中的一種或幾種。
進一步地，所述的牛大力生根組織培養基的製備方法，包括以下步驟：
s1：激素先用少量95％酒精溶解後，加入去離子水配置成溶液；
s2：蔗糖使用去離子水配置成10％的溶液；
s3：向燒杯中加入三蒸水，接著加入s1所得的激素溶液、無機鹽溶液、煙酸、活性炭、半胱氨酸、鏈黴素、水解乳蛋白、有機物，充分攪拌；
s4：向s3所製成的溶液中加入s2所得的蔗糖溶液，充分攪拌，使用10％naoh和10％hcl溶液調節至體系ph值為5～6.6；
s5：向步驟s4所製成的溶液中加入瓊脂，加熱攪拌，待溶液沸騰後分裝於培養瓶中；
s6：將步驟s5所製成的誘導組織培養瓶置於高壓蒸汽滅菌鍋中滅菌一段時間後，即製成生根組織培養基。
進一步地，所述的牛大力生根組織培養基的製備方法，所使用的試劑級別均為分析純。
進一步地，所述的牛大力生根組織培養基的製備方法，步驟s5中所述培養瓶為罐頭瓶。
進一步地，所述的牛大力生根組織培養基的製備方法，步驟s6中滅菌溫度為120～135℃，滅菌時間為5～15min。
本發明具有以下有益效果：
(1)本發明所述生根組織培養基，其成分來源廣泛，製備方法易於操作，且儲存期長；
(2)本發明所述的生根組織培養基，含有對促進植物生根明顯的硼、脫落酸等成分；
(3)本發明所述的生根組織培養基能夠有效促進牛大力組培苗幼體生根，提升生根率及移栽成活率。
具體實施方式
下面結合具體實施方式對本發明作進一步詳細說明。應該強調的是，下述說明僅僅是示例性的，而不是為了限制本發明的範圍及其應用。
實施例1：
一種牛大力生根組織培養基，包括以下原料：瓊脂35g、蔗糖12g、6-ba0.3g、含有硼酸鈉、氯化鋅、磷酸二氫鉀、氯化鎂、氯化鈣的無機鹽溶液3g、煙酸0.1g、活性炭8g、半胱氨酸0.2g、鏈黴素0.1g、水解乳蛋白7g、牛奶40g、三蒸水15g。
所述的牛大力生根組織培養基的製備方法，包括以下步驟：
s1：6-ba先用少量95％酒精溶解後，加入去離子水配置成溶液；
s2：蔗糖使用去離子水配置成10％的溶液；
s3：向燒杯中加入三蒸水，接著加入s1所得的6-ba溶液、無機鹽溶液、煙酸、活性炭、半胱氨酸、鏈黴素、水解乳蛋白、牛奶，各試劑均為分析純，然後充分攪拌；
s4：向s3所製成的溶液中加入s2所得的蔗糖溶液，充分攪拌，使用10％naoh和10％hcl溶液調節至體系ph值為5.5；
s5：向步驟s4所製成的溶液中加入瓊脂，加熱攪拌，待溶液沸騰後分裝於罐頭培養瓶中；
s6：將步驟s5所製成的誘導組織培養瓶置於高壓蒸汽滅菌鍋中在120℃下滅菌15min，即製成生根組織培養基。
實施例2
一種牛大力生根組織培養基，包括以下原料：瓊脂105g、蔗糖48g、kt1.2g、含有硼酸鈉、氯化鋅、氯化銨、磷酸二氫鉀、氯化鈣的無機鹽溶液14g、煙酸1.2g、活性炭25g、半胱氨酸1.2g、鏈黴素1.5g、水解乳蛋白18g、蘋果泥120g、三蒸水60g。
所述的牛大力生根組織培養基的製備方法，包括以下步驟：
s1：kt先用少量95％酒精溶解後，加入去離子水配置成溶液；
s2：蔗糖使用去離子水配置成10％的溶液；
s3：向燒杯中加入三蒸水，接著加入s1所得的kt溶液、無機鹽溶液、煙酸、活性炭、半胱氨酸、鏈黴素、水解乳蛋白、蘋果泥，各試劑均為分析純，然後充分攪拌；
s4：向s3所製成的溶液中加入s2所得的蔗糖溶液，充分攪拌，使用10％naoh和10％hcl溶液調節至體系ph值為5.8；
s5：向步驟s4所製成的溶液中加入瓊脂，加熱攪拌，待溶液沸騰後分裝於罐頭培養瓶中；
s6：將步驟s5所製成的誘導組織培養瓶置於高壓蒸汽滅菌鍋中在135℃下滅菌5min，即製成生根組織培養基。
實施例3
一種牛大力生根組織培養基，包括以下原料：瓊脂40g、蔗糖18g、cppu0.5g、含有硼酸鈉、氯化銨、磷酸二氫鉀、氯化鎂、氯化鈣的無機鹽溶液5g、煙酸0.2g、活性炭10g、半胱氨酸0.3g、鏈黴素0.2g、水解乳蛋白8g、香蕉泥50g、三蒸水20g。
所述的牛大力生根組織培養基的製備方法，包括以下步驟：
s1：cppu先用少量95％酒精溶解後，加入去離子水配置成溶液；
s2：蔗糖使用去離子水配置成10％的溶液；
s3：向燒杯中加入三蒸水，接著加入s1所得的cppu溶液、無機鹽溶液、煙酸、活性炭、半胱氨酸、鏈黴素、水解乳蛋白、香蕉泥，各試劑均為分析純，然後充分攪拌；
s4：向s3所製成的溶液中加入s2所得的蔗糖溶液，充分攪拌，使用10％naoh和10％hcl溶液調節至體系ph值為6.5；
s5：向步驟s4所製成的溶液中加入瓊脂，加熱攪拌，待溶液沸騰後分裝於罐頭培養瓶中；
s6：將步驟s5所製成的誘導組織培養瓶置於高壓蒸汽滅菌鍋中在125℃下滅菌12min，即製成生根組織培養基。
實施例4
一種牛大力生根組織培養基，包括以下原料：瓊脂90g、蔗糖42g、aba1g、含有硼酸鈉、氯化鋅、氯化銨、磷酸二氫鉀、氯化鎂、氯化鈣的無機鹽溶液12g、煙酸1g、活性炭22g、半胱氨酸1g、鏈黴素1.2g、水解乳蛋白15g、牛奶110g、三蒸水50g。
所述的牛大力生根組織培養基的製備方法，包括以下步驟：
s1：aba先用少量95％酒精溶解後，加入去離子水配置成溶液；
s2：蔗糖使用去離子水配置成10％的溶液；
s3：向燒杯中加入三蒸水，接著加入s1所得的aba溶液、無機鹽溶液、煙酸、活性炭、半胱氨酸、鏈黴素、水解乳蛋白、牛奶，各試劑均為分析純，然後充分攪拌；
s4：向s3所製成的溶液中加入s2所得的蔗糖溶液，充分攪拌，使用10％naoh和10％hcl溶液調節至體系ph值為5.8；
s5：向步驟s4所製成的溶液中加入瓊脂，加熱攪拌，待溶液沸騰後分裝於罐頭培養瓶中；
s6：將步驟s5所製成的誘導組織培養瓶置於高壓蒸汽滅菌鍋中在135℃下滅菌6min，即製成生根組織培養基。
實施例5
一種牛大力生根組織培養基，包括以下原料：瓊脂55g、蔗糖28g、aba0.7g、無機鹽溶液8g、煙酸0.6g、活性炭16g、半胱氨酸0.7g、鏈黴素0.5g、水解乳蛋白12g、蘋果泥80g、三蒸水30g。
更優選地，所述的牛大力生根組織培養基，其無機鹽溶液中的無機鹽包括硼酸鈉、氯化鋅、氯化銨、磷酸二氫鉀、氯化鎂、氯化鈣中的一種或幾種。
進一步地，所述的牛大力生根組織培養基的製備方法，包括以下步驟：
s1：aba先用少量95％酒精溶解後，加入去離子水配置成溶液；
s2：蔗糖使用去離子水配置成10％的溶液；
s3：向燒杯中加入三蒸水，接著加入s1所得的aba溶液、無機鹽溶液、煙酸、活性炭、半胱氨酸、鏈黴素、水解乳蛋白、蘋果泥，各試劑均為分析純，然後充分攪拌；
s4：向s3所製成的溶液中加入s2所得的蔗糖溶液，充分攪拌，使用10％naoh和10％hcl溶液調節至體系ph值為6.2；
s5：向步驟s4所製成的溶液中加入瓊脂，加熱攪拌，待溶液沸騰後分裝於罐頭培養瓶中；
s6：將步驟s5所製成的誘導組織培養瓶置於高壓蒸汽滅菌鍋中在130℃下滅菌8min，即製成生根組織培養基。
為了更詳細說明本發明的有益效果，以下還提供了具體的試驗結果。
選取牛大力新鮮種子切片180份作為組織培養的外植體，隨機分為a、b、c、d、e、f六組，每組30份。每組經升汞消毒後分別接入相同組分的誘導培養基，培育10天後，a～e組種苗移入採用本發明實施例1～5所述配方及方法製備成的生根組織培養基中，f組接入市售普通生根組織培養基中，繼續培養7天後，比較各組的生根率。後移入種植地種植培育，記錄種苗成活率，實驗數據如下表所示。
由此可見，本發明所述的牛大力生根組織培養基與市售普通培養基相比，能夠提升牛大力組培苗的生根率，且移栽成活率較高。
以上內容不能認定本發明的具體實施只局限於這些說明，對於本發明所屬技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明構思的前提下，還可以做出若干簡單推演或替換，都應當視為屬於本發明由所提交的權利要求書確定的專利保護範圍。