28烷醇作為抗帕森氏病物質在藥物和保健品中的用途的製作方法

2023-06-08 02:35:11 1

專利名稱：：28烷醇作為抗帕森氏病物質在藥物和保健品中的用途的製作方法
技術領域：
：本發明涉及28烷醇及其衍生物或其藥物組合物，作為抗帕森氏病物質在藥物和保健品中的用途，尤其是用於製備治療和預防帕森氏病在藥物和保健品及其併發症等相關性疾病的藥物和保健品等方面的用途。
背景技術：
：帕金森氏病(Parkinson'sdisease,PD)是一種多見於中年以上的中樞神經系統變性疾病，又稱"震顫麻痺"，由JamesParkinson於1817年首次提出。該病突出表現為選擇性中腦黑質多巴胺(DA)能神經元喪失及紋狀體DA含量顯著減少，同時在神經元細胞質中產生泛素化蛋白沉澱即路易小體(Lewybody)。在散發PD患者中，黑質和紋狀體中神經膠質增生是另一顯著的祌經病理學特徵。PD本身並不是一種致命的疾病，但是，如果患者沒有得到及時合理的治療，很容易導致身體機能下降，甚至生活不能自理，最後出現各種併發症，如腫炎、泌尿系統感染等。病情發展到晚期將會全身僵直，臥床不起，器官功能衰竭而危及生命，給患者的工作、生活和家庭帶來極大的痛苦。隨著我國人口呈現出老齡化趨勢，PD患者的比例也在增加，由於環境汙染和某些尚未確定的原因，此病也有向中年人甚至青年人發展的趨勢。PD的確切病因目前仍不清楚，可能與年齡老化、遺傳、環境等諸多因素有關。多巴胺(DA)是一種神經信號傳輸物質，中樞神經系統中DA的缺乏是引起PD各種症狀的主要原因。因此，提高中樞神經系統中DA的含量或糾正DA能神經元與膽鹼能神經元兩大系統功能的不平衡，是目前臨床治療所遵循的基本原則。PD藥物治療原則提倡儘早治療、逐漸增量、個體化給藥及聯合用藥。目前對於PD的治療方法主要有補充腦內DA含量；增強或模擬DA作用的藥物；抗膽鹼藥物；穀氨酸受體拮抗劑；神經生長因子；手術治療或基因治療。雖然關於PD的藥物研究獲得了很多新的進展，但是這些藥物的不良反應限制了它們的應用。同時，這些藥物只能改善PD的症狀，而不能對疾病的進程產生影響。PD傳統的治療方案是以左旋多巴(L-3，4-dihydroxyphenylethylamine,L-DOPA)為主，但存在不能阻止疾病發展、後期無效等問題。向腦內植入能產生DA的細胞也有一定的療效，但因存活、效果、細胞來源等問題目前很難在臨床推廣。因此，能延緩或阻斷疾病進程的新型藥物一神經保護劑的研發將成為未來相當一段時間內PD治療藥物研究領域的熱點。目前，美國和歐洲5國(法國、德國、義大利、西班牙和英國)帕金森氏病治療市場總規模超過了20億美元。歐洲市場佔54%，芙國市場佔46%。上述國家帕金森氏病治療藥物市場的總體增長率為6.4%，其中歐洲增長6.8%，美國為5.9%。2000到2004年間，帕金森氏病市場的複合年增長率為10%。就市場規模而言，多巴胺激動劑依然是市場規模最大的藥物類別；L-DOPA衍生物和多巴胺脫羧酶抑制劑是第二大類藥物；COMT抑制劑市場規模相對較小，但增長最為迅速；單胺氧化酶抑制劑目前的市場規模也比較小，其代表藥Rasagiline每日只需口服一次，具有很好的耐受性。中到重度病人接受L-DOPA治療的基礎上加用rasagiline可改善症狀以及運動波動(motorfluctuations)。Rasagiline最重要的優勢是可以在早期階段限制神經變性。為期一年的由早期帕金森氏病人參加的臨床試驗顯示rasagiline可能具有神經保護效果，有可能改善帕金森氏病的進程。帕金森氏病的治療在我國開展較晚，市場規模較小，常用的治療品種有多巴絲肼、複方二氫麥角隱亭、卡比多巴/左旋多巴、培高利特甲磺酸鹽、苯海索、左旋多巴和司來吉蘭等品種。抗PD藥的新劑型產品及左旋多巴前藥IH在開發中，一個更加新穎的方法是通過神經保護來治療PD，目前最具代表性的是立馬醋胺(remacemide)和利魯唑(riluzole)，這兩種藥還處於其他適應症的III期臨床試驗開發中6阿斯利康的Remacemide是一種有潛力的N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)拮抗劑，可抗痙攣、抗缺血。安萬特的riluzole是一種穀氨酸釋放抑制劑。其它處於開發中的神經保護藥還有抗氧化劑及自由基清除劑等。28烷醇是一種從天然產物中提取的烷醇類化合物(Octacosanol，縮寫OCS),、分子量為410.76，結構式為CH3(CH2》6CH20H。目前申請者實驗室已能人工合成，其合成工藝已申請國家發明專利(申請號20061008594.2;200610088034.6)，可溶於熱的乙醇、乙醚、苯、甲苯、二氯甲烷、氯仿及石油醚等有機溶劑，不溶於水。OCS安全性極高，經小鼠口服試驗確認LD5o在18000mg/kg以上。.目前對於OCS的研究主要集中在其增強體力和耐力；降低膽固醇，抑制脂質過氧化等方面。關於其在帕金森氏病中的作用在國內外還未見系統的文獻報導，本實驗結果初步證明OCS對兩種經典的帕金森氏病動物模型具有良好的治療作用。
發明內容本發明涉及28烷醇類化合物，作為抗帕森氏病物質在藥物和保健品中的用途，尤其是用於製備治療和預防帕金森氏病在藥物和保健品及其併發症等相關性疾病的藥物和保健品等方面的用途。28烷醇的結構如(1)所示，這類化合物可以從甘庶皮、菠菜、谷糠等中分離，也可通過化學合成得到。本發明的目的之一在於提供28烷醇類化合物或其組合物，包括28烷醇類化合物禾'Q製藥領域中常用的載體。本發明的又一目的在於提供28烷醇類化合物或其組合物在製備與治療和預防帕金森氏病及其併發症藥物中的應用。本發明的又一目的在於提供28垸醇類化合物或其組合物在製備與治療和預防帕金森氏病及其併發症相關的功能性保健品中的應用。為了完成本發明目的，本發明採取如下的技術方案-本發明還涉及含有作為活性成份的本發明28烷醇類化合物和常規藥物賦形劑或輔劑的藥物組合物。通常本發明藥物組合物含有0.05-95%或95。/。以上重量的本發明28烷醇類化合物。本發明還提供一種藥物組合物，它包括藥物有效劑量的，作為活性成分的28烷醇類化合物及藥學上可接受的載體。本發明28烷醇類化合物的藥物組合物可根據本領域公知的方法製備。用於此目的時，如果需要，可將本發明28烷醇類化合物與一種或多種固體或液體藥物賦形劑和/或輔劑結合，製成可作為人藥或獸藥使用的適當的施用形式或劑量形式。本發明28烷醇類化合物或含有它的藥物組合物可以單位劑量形式給藥，給藥途徑可為腸道或非腸道，如口服、鼻腔、口腔黏膜、皮膚、腹膜或直腸給藥等，優選口服給藥。本發明28烷醇類化合物或含有它的藥物組合物的給藥途徑，同樣包括注射給藥。注射包括靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、皮內注射等。給藥劑型可以是液體劑型、固體劑型。本發明28烷醇類化合物可以製成普通製劑、也可以是緩釋製劑、控釋製劑、耙向製劑及各種微粒給藥系統。為了將單位給藥劑型製成片劑，可以廣泛使用本領域公知的各種載體。關於載體的例子是，例如各種稀釋劑與吸收劑。例如為了將給藥單元製成丸劑，可以廣泛使用本領域公知的各種載體。關於載體的例子是，例如各種稀釋劑與吸收劑。例如將28烷醇類化合物製成微囊劑，混懸於水性介質中形成混懸劑；亦可裝入硬囊中或製成注射劑應用。例如，將本發明28烷醇類化合物製成注射用製劑，如溶液劑、混懸劑溶液劑、乳劑、，凍乾粉針劑等。為達到用藥目的，增強治療效果，本發明的藥物或藥物組合物可用任何公知的給藥方法給藥。本發明28垸醇類化合物藥物組合物的給藥劑量取決於許多因素，例如所要預防或治療疾病的性質和嚴重程度，患者或動物的性別、年齡、體重、性格及個體反應，給藥途徑、給藥次數、治療目的，因此本發明的治療劑量可以有大範圍的變化。一般來講，本發明中28烷醇類化合物的使用劑量是本領域技術人員公知的。可以根據本發明28垸醇類化合物組合物中最後的製劑中所含有的實際藥物數量，加以適當的調整，以達到其治療有效量的要求，完成本發明的預防或治療目的。本發明28烷醇類化合物的每天的合適劑量範圍本發明的28烷醇類化合物的用量為0.000001-10g/kg體重，優選為0.00001-2g/kg體重，最優選為0.001-1g/kg體重。上述劑量可以單一劑量形式或分成幾個，例如二、三或四個劑量方式給藥受限於給藥醫生的臨床經驗以及包括運用其它治療手段的給藥方案。每一種治療所需總劑量可分成多次或按一次劑量給藥。本發明的28烷醇類化合物或組合物可單獨服用，或與其他治療藥物或對症藥物合併使用並調整劑量。6圖l:不同濃度的28烷醇對於細胞增殖率的影響(作用24h)"屍O.Ol，與正常對照組比較圖2:不同濃度的28烷醇對於DA誘導的SH-SY5Y細胞損傷模型增殖率的影響##屍<0.01，與模型組比較圖3:'不同濃度的28烷醇對於細胞增殖率的影響(作用72h)"PO.Ol，與IH常對照組比較圖4:不同濃度的28烷醇對於MPP+誘導的SH-SY5Y細胞損傷模型增殖率的影響糊河Ol,與正常對照組比較；"屍O.Ol，與模型組比較具體實施例方式下面結合具體實施實例對本發明作進一歩的闡述，但是不限制本發明。實施例1:28醇對MPTP致帕金森病小鼠模型行為學的研究一、材料及方法1.材料l.l受試品28醇，為白色粉末或鱗片狀晶體，由徐州師範大學提供，溶於熱的乙醇、乙醚、苯、甲苯、氯仿、二氯甲烷等有機溶劑，不溶於水。對酸、鹼、還原劑穩定，主要存在於米糠蠟、甘蔗蠟、葵花油蠟中，以0.5%CMC(縮甲基纖維素鈉)水助溶製成懸浮液。1.2試劑l-甲基-4-苯基-l,2,3,6-四氫吡啶(MPTP)，Sigma公司產品，貨號M0896，批號095K1166。1.3陽性對照藥左旋多巴片，北京曙光藥業有限責任公司生產，批號060517。1.4動物:C57BL/6小鼠，雄性，體重24.5土0.8g，由北京維通利化動物公司提供。2.方法2.1小鼠PD模型的建立C57BL/6小鼠分成對照組、模型組、低劑量治療組(25mg/kg)、中劑量治療組(50mg/kg)、高劑量治療組(100mg/kg)、陽性藥組(左旋多巴，200mg/kg)。每組15隻。熟悉環境3天後，根據自發運動和轉杆行為情況進行分組。做動物個體化標誌。模型組、治療各組及陽性藥組小鼠以MPTP15mg/kg的劑量腹腔注射4次，丌始時間為早8:30，每間隔兩小時l次。l周測定體重兩次。2.2給藥於造模後第l天，28醇治療各組、陽性藥組小鼠以0.1ml/10g每天分別灌胃1次，對照組和模型組給等量0.5。/。CMC水，連續一周。2.3行為學實驗造模和給藥1周後，各組分別進行自發運動實驗和轉杆實驗。2.3.1自發運動實驗將小鼠置於自發運動監測儀(圓形，直徑50cm)中央部，保持環境安靜。在自發運動監測儀內有多束紅外線穿過，動物活動時就阻隔紅外線束，即可被檢測並記數。預適應2min後，記錄小鼠3min內自發運動次數。2.3.2轉杆實驗水平金屬杆(直徑3cm)長約為50cm，用金屬板分隔為5段，用擋板隔開動物彼此不受影響。實驗採用16r/min轉速。小鼠在轉杆上丌始爬行後自動記時，從轉杆跌落時可以被紅外裝置所監測，自動停止記時並顯示小鼠在轉杆上運動的時間。2.4統計學方法本實驗結果統計學處理，採用SPSS11.5中的ANOVA方法。~"^結果1、自發實驗結果28醇在100mg/kg劑量下連續給藥7天，使MPTP致帕金森小鼠模型自發活動次數明顯增加(P<0.05)，(見表l)。2、轉杆實驗結果28醇在25mg/kg，50mg/kg和100mg/kg劑量下連續給藥7天，使MPTP致帕金森小鼠模型轉杆運動時間明顯延長(PO.05),(見表l)。tableseeoriginaldocumentpage8中劑量50]583.8±16.3152.7±72.8*高劑量1001288.8±19.1*147.6±64.3*#>^oT6—5—，——#T7^^Tr^i^n^7—*7^:o7，—"7^o:oT:—一￥組比較。結論28醇在100mg/kg劑量下連續給藥7天對MPTP致帕金森小鼠模型自發運動次數減少和四肢運動協調能力下降有明顯改善作用；在25mg/kg，50mg/kg劑量下連續給藥7天對其四肢運動協調能力有明顯改善作用，效果與陽性藥左旋多巴接近。實施例2:28醇對6-OHDA致帕金森病(PD)大鼠模型行為學的研究一、材料及方法1.材料l.l受試品28醇，為白色粉水或鱗片狀晶體，由徐州師範大學提供。溶於乙醇、乙醚、，苯、甲苯、氯仿、二氯甲烷等有機溶劑，不溶於水。對酸、鹼、還原劑穩定，主要存在於米糠蠟、甘蔗蠟、葵花油蠟中。以0.5。/。CMC(縮甲基纖維素鈉)水助溶製成懸浮液。1.2試齊U:6羥基多巴胺(6-OHDA),Sigma公司產品，貨號H116，批號115K4613;阿撲嗎啡(Apomorphine，APO)，Sigma公司產品，貨號A4393'批號085K1223。1.3動物SD大鼠，雄性，體重203.0g土7.9g，由北京維通利化動物公司提供。2.方法2.1大鼠PD模型的建立成年雄性健康SD大鼠經一般行為檢測確認其無異常後，隨機分為正常對照組、假手術組及篩模組。篩模組腹腔注射1%戊巴比妥鈉(50mg/kg體重)將大鼠麻醉後，嚴格顱平位(前図與後囟水平高度相差0.1mm以下，顱骨矢狀縫兩側旁開4mm處水平高度相差O.lmm以下)固定於大鼠腦立體定向儀上(注意將微量注射器針柄與操作平面保持垂直)。剪開頭皮，剝離骨膜後，根據大鼠體重和頭顱大小在規定範圍內確定具體坐標並標記，用牙科鑽小心鑽透顱骨(注意勿損傷硬腦膜)。根據PaxinosWatson圖譜，確定右側紋狀體(CPU)坐標，行兩點注射。按確定坐標將微量注射器緩慢進針到規定深度。向CPU兩點各注射6-OHDA15路，3jil(溶於質量分數為0.2%抗壞血酸的生理鹽水)，注射速度為lpl/min，留針10min，緩慢退針3min(lmm/min)。假手術組用上述相同方法向兩點分別注射同體積的含0.2%抗壞血酸的生理鹽水。術後，手術各組大鼠肌肉注射青黴素，以防治感染。2.2篩選大鼠PD模型術後第4w丌始對大鼠6-OHDAPD模型進行旋轉實驗篩選，APO頸部皮下注射(0.5mg/kg體重)，觀察其30min行為變化，若大鼠恆定轉向健側，且旋轉圈數M50r/30min，每分鐘最大旋轉次數大於等於7r/min，表示毀損穩定，則視為成功PD大鼠模型，成功率為79%。2.3篩選後分組篩選成功的模型當天隨機分組(每組旋轉次數與體重無明顯差異)。共分為模型組19隻，高劑量治療組13隻，中劑量治療組12隻，低劑量治療組12隻，陽性藥組12隻，假手術組15隻，正常對照組ll只。2.4給藥於分組後第1天，28醇高劑量組(70mg/kg)，中劑量組(35mg/kg),低劑量組(17.5mg/kg)，陽性藥組(140mg/kg)每天分別灌胃1次，正常對照組、模型組及假手術組給等量0.5%CMC水，連續1周。2.5行為學實驗連續給藥1周後開始行為學檢測。3種行為實驗全部採用雙盲方法，即籠子號統一用阿拉伯數字表示，實驗者不知每籠分組情況。2.5.1阿撲嗎啡誘導旋轉實驗用阿樸嗎啡(Apomorphine，APO)行大鼠(包括模型組、給藥組、假手術組)頸部皮下注射(0.5mg/kg體重)，觀察並記錄其在30min內轉向健側的圈數及每分鐘平均轉數(部分錄像)。2.5.2Morris水迷宮實驗(露臺)Morris水迷宮主要由一不鏽鋼製成的圓柱形黑色水池和一可移動位置的平臺組成。預先在水池裡注入清水，並使平臺高出水面2cm，水溫控制在20±0.5°C，水中加入黑色墨水，成黑水白鼠對比。平臺置於某一象限的中間，大鼠入池位置為站臺所在位置的對象限，於象限邊l/2弧度處頭朝池壁入水，水池上空通過一攝像機與監視電視和計算機相連接。當設定的訓練時間己到或動物己爬上平臺，計算機停止跟蹤並記錄下遊泳軌跡和自動計算出動物在水池中所遊過的路程，找到平臺所需的時間(即潛伏期)及遊泳的速度等指標。2.5.3平衡杆實驗平衡木桿長105cmX寬4cmX高3cm，木桿離地80cm，兩端由木架支撐。木桿的一端為起始區，長20cm，另一段為終點區，終點區後接一個大鼠籠，木桿下有lm2，厚12cm墊子防止大鼠摔傷。實驗時，將大鼠放在起始區面對鼠籠方向，同時開始計時，記錄大鼠走過起始區的時間(潛伏期)和大鼠走過整個平衡杆的時間,.潛伏期最大允許時間為lmin，走過橫杆最大允許時間為2min。大鼠先訓練3次，然後開始TF式實驗。2.6統計學方法本實驗結果統計學處理，採用SPSS11.5中的ANOVA方法。以P<0.05為有顯著性差異。^、結果1、阿撲嗎啡誘導旋轉實驗28醇在70mg/kg和35mg/kg劑量下連續給藥7天，使6-0HDA致PD大鼠模型向健側旋轉次數明顯減少(P<0.05)，(見表1)。2、"orris水迷宮實驗(露臺)28醇在70mg/kg和35mg/kg劑量下連續給藥7天，使6-OHDA致PD大鼠模型尋臺時間明顯縮短(P<0.05)，(見表2)。2、平衡杆實驗28醇在70mg/kg、35mg/kg和17.5mg/kg劑量下連續給藥7天，使6-OHDA致PD大鼠模型過杆潛伏期和過杆時間顯著減少(P<0.01，P<0.001)，(見表3和表4)。表l阿撲嗎啡誘導大鼠旋轉實驗結果組別劑量(mg/kg)n旋轉次數/30min±SD假手術組CMC水1534.0±20.0模荊組CMC水18319.9±179.8,.卩ll性藥紹14012163.5±57.8*17.512198.7±54.0中劑呈組3512171.8±49.1*高劑呈紹7012169.4±33.5*腳屍〈0肌與假手術組比較;*P<0.05,與模艱組比較。表2各組大鼠Morris水迷宮實驗(露臺)結果組別劑量(mg/kg)n尋臺時間(S)±SD止常對照幼CMC水1021.20±13.05假手術紹CMC水1528.33±17.09模艱組CMC水1858.50±32.31#m性藥節1401231.25±22.29低劑量節17.51233.50±20.20中劑呈絎351229.42±14.44*高劑呈紹701226.92±17.86*V0.05，與假手術紹比較；*戶<0.05,與模巧徹.比較。表3各組大鼠平衡杆潛伏期實驗結果組別劑量(mg/kg)n潛伏期(s)±SD止常對照紀CMC水110.57±0.58假手術幼CMC水141.66±1.24模荊紀CMC水184.96±3.44#Rl性藥幼140121.03±0.95**17.5120.81±0.51**中劑量鄉R35120.77±0.63**高劑呈幼70120.98±0.48**#屍<0.05,與假手術糹fl比較；*:*戶<0.01,與投型絎比較。表4各組大鼠平衡杆過杆實驗結果分析組別劑量(mg/kg)n過杆時間(s)±SD正常對照組CMC水116.43±5.19假手術紹CMC水159.66±6.41CMC水1851.99±36.93##陽性藥鉬140128.14±6.79**低劑呈紡17.51211.88±9.05**中劑量紹35128.84±6.94**高劑量新70126.07±3.88***PO.Ol，Lj假手術幼比較；**屍<0.01,***P<0.001與模艱紹比較。三、結論本實驗採用單側紋狀體內注射6-OHDA致PD模型。採用雙盲法開展了3種動物行為學檢測。1.在阿樸嗎啡實驗中，患側黑質紋狀體通路損傷導致動物模型向健側旋轉運動明顯增加(PO.OOl)，經28醇灌胃7天後旋轉次數明顯減少，其中高劑量70mg/kg組和中劑量35mg/kg組具有明顯統計學差異(P<0.05)，與陽性藥左旋多巴的效果相同(P<0.05)，而28醇的用藥量僅為左旋多巴的1/4~1/2。2.在Morris水迷宮實驗中，模型組動物感覺與四肢協調運動能力下降，尋臺時間明顯延長(P<0.05)，經28烷醇灌胃7天後，3個劑量組均縮短了尋臺時間，其中，高劑量組和中劑量組具有明顯統計學差異(P<0.05)，陽性藥有改善的趨勢但無統計學差異。3.在平衡杆實驗中，模型鼠的運動始動性及運動平衡能力均明顯比假手術組差(PO.05,PO.Ol)，經28烷醇3個劑量灌胃7天後，上述表現均有明顯改善(PO.Ol)，其中高劑量組對運動平衡能力的作用效果最佳(PO.OOl)。陽性藥也有明顯改善作用(P<0.01)。總之，我們在對28醇給藥1周後的藥效學研究證明，該藥能提高PD模型鼠的體力和對應激的反應力，提高運動靈敏性，改善四肢協調性，有效對抗多巴胺神經損傷造成的行為障礙，有些作用效果甚至優於左旋多巴。實施例3:28烷醇對SH-SY5Y細胞存活率的影響及對DA和MPP+誘導的SH-SY5Y細胞損傷模型的保護作用實驗目的通過分別建立刺激劑多巴胺(Dopamine,DA)和l-甲基-4-苯基吡啶(MPP+)誘導的兩種多巴胺能神經細胞株損傷體外細胞模型，觀察28烷醇的細胞保護作用。材料及方法1.材料1.1受試品28垸醇，為白色粉術或鱗片狀晶體，由徐州師範大學提供。溶於熱的乙醇、乙醚、苯、甲苯、氯仿、二氯甲烷等有機溶劑，不溶於水。對酸、鹼、還原劑穩定，主要存在於米糠蠟、甘蔗蠟、葵花油蠟中。以乙醇二甲基亞碸(1:1)配製為混懸液，以PBS稀釋為溶液待用。1.2試劑多巴胺(Dopamine,DA),1-甲基-4-苯基吡啶(MPP+)，4-甲基偶氮唑藍(MTT)，均為Sigma公司產品。2.方法2.1DA及MPP+細胞損傷模型的建立多巴胺能神經細胞株(SH-SY5Y)使用含10。/。胎牛血清的高糖DMEM培養基，其中含有100U/ml青黴素，100U/ml鏈^素，於5%C02，37'C培養箱中培養。3~4天換液，生長融合至80y。傳代。於細胞培養液中加入終濃度為50pimol/LDA和20(^Mmol/LMPP+，製成細胞損傷模型。2.2細胞存活率檢測調整細胞濃度，以2xlS個/孔加入96孔培養板中，100)iL/孔，設六個復孔。檢測28垸醇對細胞存活率影響時，每孔加入不同濃度的28垸醇(10"4-10—511101/10;檢測28烷醇抗DA和MPP+誘導的細胞毒性作用時，除加入不同濃度的28烷醇外，每孔還分別加入終濃度為50pmol/L的DA和200|amol/L的MPP+，使終體積為200pL。將細胞置於5%C02，37。C培養箱分別培養24h和72h後，每孔再加入20(xL5mg/mLMTT，在同樣的條件下培養4h，2000r/min，4°C，離心5min，吸棄上清，向沉澱中加入150nLDMSO，于振蕩器振蕩15min,酶標儀570nm處測定OD值。增殖率計算公式為[(OD實驗組-OD空白組)-(OD對照組-OD空白組)]/(OD對照組-OD空白組)xioo%。實驗結果1.不同濃度的28烷醇對於細胞增殖率的影響(作用24h)如圖1所示，10—14-—10—7mol/L28烷醇對於SH-SY5Y細胞的增殖率無明顯影響。142.不.同濃度的28垸醇對於DA誘導的SH-SY5Y細胞損傷模型增殖率的影響如圖2所示，10—13—l(T6mol/L28垸醇對於DA誘導的細胞存活率下降有明顯的抑制作用；10—14mOl/L28烷醇組與模型組相比未見顯著變化。3.不同濃度的28垸醇對於細胞增殖率的影響(作用72h)如圖3所示，10—14—10—7mol/L28烷醇對於SH-SY5Y細胞的增殖率無明顯影響。4.不同濃度的28烷醇對於MPP+誘導的SH-SY5Y細胞損傷模型增殖率的影響如圖4所示，10—12—10—7mol/L28烷醇對於MPP+誘導的細胞存活率下降有明顯的抑制作用；10—14、10—13和10—Smol/L28烷醇組與模型組相比未見顯著變化。結論10—|4—lCT7mol/L28烷醇作用24小時和72小時後，對於SH-SY5Y細胞的增殖率無明顯影響；l(T13"~10—6mol/L28垸醇對於DA誘導的細胞存活率下降有明顯的抑制作用；10"2—10—7mol/L28垸醇對於MPP+誘導的細胞存活率下降有明顯的抑制作用。以上結果提示，28烷醇具有細胞保護作用。1權利要求1、28烷醇及其衍生物在製備抗帕森氏病的藥物和保健品中的應用。2、28烷醇及其衍生物在製備抗帕森氏病其併發症的藥物和保健品中的應用。3、一種抗帕森氏病的藥物組合物，其包括28烷醇及其衍生物和藥學土可接受的載體。4、根據權利要求3的藥物組合物，所述的藥物組合物包括片劑、膠囊、丸劑、注射劑、緩釋製劑、控釋製劑及各種微粒給藥系統。全文摘要本發明公開了28烷醇作為抗帕森氏病物質在藥物和保健品中的用途，尤其是用於製備治療和預防帕森氏病及其併發症等相關性疾病的藥物和保健品等方面的用途。本發明還公開了一種抗帕森氏病的藥物組合物，其包括28烷醇及其衍生物和藥學上可接受的載體。所述的藥物組合物包括片劑、膠囊、丸劑、注射劑、緩釋製劑、控釋製劑及各種微粒給藥系統。文檔編號A61P25/16GK101543485SQ20081010253公開日2009年9月30日申請日期2008年3月24日優先權日2008年3月24日發明者何放亭,馮友建,嶺張,朱海波,凱渠,蔣繼宏,趙大龍申請人:中國醫學科學院藥物研究所;徐州師範大學