冬凌草甲素乳劑的製作方法

2023-06-07 20:12:36 3

專利名稱：冬凌草甲素乳劑的製作方法
技術領域：
本發明涉及生物醫藥領域，特別涉及冬凌草甲素乳劑及其製備方法。
背景技術：
冬凌草甲素(Rubescensin A)是從冬凌草(Rabdosia rubescens)中提取
的一種烯類二萜。冬凌草又名冰凌草，具有清熱解毒、消炎止痛之功效，產於我國河南、河北、山西、四川等地，也是民間治療食管癌和胃癌的一種草藥。1991年我國衛生部批准將冬凌草乾燥葉及地上部分作為中藥材，收入部頒中藥材標準。我國從二十世紀70年代起對冬凌草的化學成分、藥理作用及臨床應用開始研究，從中提取到多種貝殼杉烯類二萜，包括冬凌草甲素、乙素、丙素、丁素、戊素等，其中以冬凌草甲素為主(劉晨江，趙志鴻.冬凌草的研究進展.中國藥學雜誌，1998， 33 (10): 577)。用乙醚或乙醇提取即可得到冬凌草甲素。
體內外抗癌實驗表明，冬凌草甲素對很多癌細胞系都有明顯的抑制殺滅作用，包括對多種移植性小鼠腫瘤株和體外培養的人癌細胞如人體食道癌109細胞株、人體肝癌BEL 7402、人體食管鱗癌細胞株CAES-17、肝癌及組織細胞肉瘤實體型、L1210、 P388、艾氏腹水癌ECA、 S180腹水型，平均抑瘤率為41%，其中對食管癌CaEs-17和胃腺癌MGC80-3最敏感。50mg/L的冬凌草甲素對食管癌CaEs-17和胃腺癌MGC80-3可產生超過3個對數殺滅的細胞毒效應。冬凌草甲素能抑制DNA、 RNA的合成，對於DNA合成期(S)、有絲分裂期(M)及DNA合成後期或分裂前期(G2)的細胞有殺傷作用。它可以延長細胞周期時間，其中對G2期的延緩更加明顯，可引起細胞在G2期及M期的堆積。這種抑制在一定範圍內，會隨藥物作用時間和濃度的增加而增強，說明冬凌草甲素抗癌活性的作用位點可能是在核苷酸底物聚合形成DNA的過程中(林碧蓮，等.冬凌草素的抗癌分子藥理與臨床應用策略.廣東藥學，2000， 10 (4): 8)。另外冬凌草甲素對K562/A02細胞有誘導凋亡、逆轉耐藥性的作用，是一種很有希望的抗白血病藥(郭娟娟，等.安徽中醫學院學報，2000， 19 (3): 34)。冬凌草甲素對活性氧自由基也有清除作用。
臨床研究證明冬凌草粗提物和冬凌草甲素對食管癌、原發性肝癌、膀胱癌、胰腺癌、大腸癌和乳腺癌都有明顯療效(河南醫學院第一附屬醫院腫瘤科.冬凌草單用及與化療藥物並用治療惡性腫瘤50例臨床療效觀察.河南醫學院學報，1975,10(2):17;王瑞林.冬凌草與化療合用治療食管癌增效作用的探討.中華腫瘤雜誌，1986，8(4):291;陳紹棠，等.魯山冬凌草治療食管賁門癌80例療效觀察.中西醫結合雜誌，1988,8(1):43;王瑞林.食管癌437例臨床療效觀察.中西醫結合雜誌，1989,9(12):74;河南省冬凌草研究協作組.冬凌草治療食管癌、賁門癌95例臨床療效結果.腫瘤防治研究，1994,11 (2):86)。
冬凌草甲素為白色結晶性粉末，不溶於水，溶於乙醇和乙酸乙酯。在已報導的研究中，通常採用冬凌草甲素的口服製劑或採用冬凌草甲素乙醇溶液靜脈注射。由於冬凌草甲素不溶於水，靜脈注射採用乙醇，對人體產生一定刺激，影響了患者適應性，有時會很難給藥。
乳劑(emulsions)係指互不相溶的兩相液體混合，其中一相液體以液滴狀態分散於另一相中形成的非均勻相液體分散體系。乳劑液滴大小一般在0.1 10微米之間。乳劑中的液滴分散度很大，藥物吸收和藥效的發揮很快，有利於提高生物利用度；脂溶性藥物製成乳劑能保證劑量準確，而且使用方便；靜脈注射乳劑注射後分布較快、藥效高、有靶向性；靜脈營養乳劑可以提供高能量。口服乳劑容易被淋巴系統攝取，靜脈注射乳劑在體內可以被網狀內皮系統吞噬(如肝、脾、腎)，具有靶向性。因此乳劑是抗癌藥物常採用的劑型，如鴉膽子油乳、氟尿嘧啶乳劑、康萊特注射液等。乳劑中的油脂還可以提供一定營養能量。

發明內容
本發明人出乎意料地發現在配置合適處方的條件下，可以將冬凌草甲素 製備成乳劑。本發明因此設計並製備了冬凌草甲素乳劑。
本發明中的冬凌草甲素乳劑，其特徵是該乳劑中含有0.01% 20%(重量) 的冬凌草甲素，5% 60% (重量)的油脂，0.5% 30% (重量)的乳化劑， 0.01% 30% (體積)的助溶劑；優選的是含有0.1% 10% (重量)的冬凌草 甲素，5% 50% (重量)的油脂，1% 20% (重量)的乳化劑，0.1% 20% (體積)的助溶劑；更優選的是含有1% 5% (重量)的冬凌草甲素，10% 40% (重量)的油脂，2% 10% (重量)的乳化劑，1% 10% (體積)的助 溶劑。
本發明中的冬凌草甲素乳劑含有的油脂可選自大豆油、玉米油、山茶油、 芝麻油、花生油、橄欖油、棉籽油、菜籽油、蓖麻油、油酸乙酯、礦物油， 優選的是大豆油、玉米油、山茶油、油酸乙酯，更優選的是大豆油和玉米油。
本發明中的冬凌草甲素乳劑含有的乳化劑可選自磷脂、氧乙烯氧丙烯嵌 段共聚物、司盤、聚山梨酯(吐溫)、聚氧乙烯脂肪醇醚、聚氧乙烯氫化蓖麻 油、蔗糖脂肪酸酯，優選的是磷脂、氧乙烯氧丙烯嵌段共聚物、聚山梨酯， 更優選的是大豆磷脂、泊洛沙姆、吐溫80。
本發明人發現，由於冬凌草甲素的難溶性，需要將冬凌草溶於適當助溶 劑中後，才能方便地製得乳劑。因此本發明中的冬凌草甲素乳劑需添加助溶 劑。助溶劑包括水不溶性有機溶劑和水溶性有機溶劑，優選的是水溶性有機 溶劑。水不溶性有機溶劑選自乙酸乙酯、丙二醇二乙酯、三醋酸甘油酯。水 互溶性有機溶劑選自甲醇、乙醇、丙酮、二甲基亞碸、N'，N-二甲基甲醯胺、 四氫呋喃、乙二醇、丙二醇、異丙醇、甘油、聚乙二醇，優選自乙醇、乙二 醇、丙二醇、甘油、聚乙二醇，更優選自乙醇、丙二醇。
6本發明中的冬凌草甲素乳劑，其製備方法包括以下步驟
(1) 先用助溶劑將冬凌草甲素溶解；
(2) 將冬凌草甲素溶液與油相成分和乳化劑混勻；
(3) 加入水相成分，在高速剪切力條件下成乳。
得到的冬凌草甲素乳劑中的助溶劑可以通過某種方式除去部分助溶劑，方法包括減壓、加熱、透析。有些有機溶劑沒有毒性或毒性很小，可以不除去，例如乙醇、丙二醇、甘油、聚乙二醇。
本發明又設計了一種冬凌草甲素乳劑，該乳劑含有0.01% 20% (重量)的冬凌草甲素，5% 60% (重量)的油脂，0.5% 30% (重量)的乳化劑；優選的是含有0.1% 10% (重量)的冬凌草甲素，5% 50% (重量)的油脂，1% 20% (重量)的乳化劑；更優選的是含有1% 5% (重量)的冬凌草甲素，10% 40% (重量)的油脂，2% 10% (重量)的乳化劑。油脂和乳化劑選擇的範圍與前面相同。採用一般的乳劑製備方法就可以得到這種冬凌草甲素乳劑。製備方法中主要包括冬凌草甲素和油相成分、乳化劑的混合，然後和水相成分在高速剪切力條件下成乳。這種冬凌草甲素乳劑中不含助溶劑或分析儀器測不到助溶劑，但可採用製備過程中涉及助溶劑的方法。該乳劑的製備方法可採用以下步驟
(1) 先用0.01% 30% (體積)助溶劑將冬凌草甲素溶解；
(2) 將冬凌草甲素溶液與油相成分和乳化劑混勻；
(3) 加入水相成分，在高速剪切力條件下成乳；
(4) 從乳劑中除去全部助溶劑。
從本發明設計的冬凌草甲素乳劑中除去助溶劑的方法包括減壓、加熱、透析。
本發明中的冬凌草甲素乳劑，還可以含有製劑製備所需的藥用輔料，選自等滲調節劑、pH調節劑、抗氧化劑、防腐劑。等滲調節劑選自氯化鈉、葡萄糖、甘油、丙二醇、甘露醇、木糖醇、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉，優選自
7氯化鈉、葡萄糖。pH調節劑可以選自乳酸、檸檬酸、鹽酸、酒石酸、硼酸、醋酸、磷酸、磷酸二氫鈉、磷酸二氫鉀、碳酸鈉、碳酸氫鈉、檸檬酸鈉、醋酸鈉、乳酸鈉、磷酸氫二鈉、磷酸氫二鉀、酒石酸鹽、氫氧化鈉、硼砂、三羥甲基氨基甲垸。抗氧化劑可選自亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、硫
代硫酸鈉、硫脲、維生素C、半胱氨酸、硫代甘油、維生素E叔丁基對羥基茴香醚、二丁甲苯酚、培酸丙酯，優選的是亞硫酸氫鈉、維生素C。防腐劑可選自對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯、苯甲酸及其鹽、山梨酸及其鹽。
本發明中的冬凌草甲素乳劑在IOO'C下滅菌條件下保持粒徑沒有明顯變化，室溫貯存l年內，乳劑粒徑沒有明顯變化。
本發明中的冬凌草甲素乳劑可以用於靜脈注射、肌肉注射或口服。本發明中的冬凌草甲素乳劑也可以與臨床上可用的靜脈輸液混合後進行靜脈輸注。臨床上可用的靜脈輸液可選自氯化鈉輸液、葡萄糖輸液、胺基酸輸液。如果用這種臨用前與輸液混合的方式給藥，冬凌草甲素乳劑中可以不含等滲調節劑或含較少的等滲調節劑。通過靜脈注射、肌肉注射或口服進行給藥的冬凌草甲素乳劑也可以含等滲調節劑或不含，只要人體可耐受就可以。
上述所列舉的成分範圍和製備方法並不是本發明的限制，只要符合冬凌草甲素乳劑組成比例並能製備得到乳劑的方法都可以應用。
具體實施例方式
實施例l、冬凌草甲素乳劑l號
冬凌草甲素 &
乙醇 5ml
大豆油 120g
大豆磷脂 50g
氯化鈉 9.0g注射用水 至1000ml
取大豆油、大豆磷脂加熱至8(TC。另取處方量冬凌草甲素溶於乙醇中，並加入上述熱的油相中，攪拌均勻。加入8(TC溶解氯化鈉的注射用水700ml，一起加入組織搗碎機，並高速攪拌，8000轉/分鐘，每次持續3分鐘，重複3次，得到白色乳劑。乳劑冷卻後，加入注射用水至1000ml，在高壓乳勻機中循環乳化3次。顯微鏡下觀察，大部分乳滴粒徑在l微米以下，只有5%左右的粒子直徑在1 2微米。收集乳劑產品，加壓過濾，濾膜孔徑3微米。乳劑分裝於10ml安瓿中，充入氮氣，封口，在100'C條件下加熱30分鐘後，冷卻，取出。取少量樣品檢測，冬凌草甲素含量沒有變化，粒徑沒有明顯變化。該乳劑室溫避光保存1年後，取少量樣品檢測，冬凌草甲素含量沒有變化，粒徑沒有明顯變化。該乳劑用於靜脈注射，沒有明顯刺激，癌症患者易接受，與空白對照組比較，治療效果明顯，患者願意使用。
實施例2、冬凌草甲素乳劑2號
冬凌草甲素 5g
丙二醇 20ml
玉米油 160g
吐溫80 60g
泊洛沙姆P188 10g注射用水 至1000ml
取玉米油、吐溫80、泊洛沙姆P188加熱至8(TC。另取處方量冬凌草甲素溶於丙二醇中，並加入上述熱的油相中，攪拌均勻。加入8(TC的注射用水700ml，然後同實施例l製備得到冬凌草甲素乳劑。顯微鏡下觀察，大部分乳滴粒徑在1微米以下。該乳劑室溫避光保存1年後，取少量樣品檢測，冬凌草甲素含量沒有變化，粒徑沒有明顯變化。該乳劑臨用時，以20%比例加入氯化鈉輸液中進行靜脈輸注。
該乳劑在水相中添加適量甜味劑後，也可用於口服，無明顯味道，無刺激，患者易接受。
實施例3、冬凌草甲素乳劑3號
冬凌草甲素 10g
乙醇 50ml
玉米油 160g
吐溫80 90g
泊洛沙姆P188 10g注射用水 至1000ml
該乳劑採用與實施例2類似的製備方法，得到冬凌草甲素乳劑後，在減壓條件下37。C加熱，除去全部乙醇(氣相色譜檢測)。顯微鏡下觀察，大部分乳滴粒徑在l微米以下。
權利要求
1.一種冬凌草甲素乳劑，其特徵是該乳劑中含有0.01％～20％(重量)的冬凌草甲素，5％～60％(重量)的油脂，0.5％～30％(重量)的乳化劑，0.01％～30％(體積)的助溶劑。
2. 如權利要求l所述的冬凌草甲素乳劑，含有0.1% 10% (重量)的冬凌草 甲素，5% 50% (重量)的油脂，1% 20% (重量)的乳化劑，0.1% 20%(體積)的助溶劑。
3. 如權利要求1所述的冬凌草甲素乳劑，含有製劑製備所需的藥用輔料，選 自等滲調節劑、pH調節劑、抗氧化劑、防腐劑。
4. 如權利要求1所述的冬凌草甲素乳劑，含有的油脂選自大豆油、玉米油、 山茶油、芝麻油、花生油、橄欖油、棉籽油、菜籽油、蓖麻油、油酸乙酯、 礦物油。
5. 如權利要求1所述的冬凌草甲素乳劑，含有的乳化劑選自磷脂、氧乙烯氧 丙烯嵌段共聚物、司盤、聚山梨酯、聚氧乙烯脂肪醇醚、聚氧乙烯氫化蓖 麻油、蔗糖脂肪酸酯。
6. 如權利要求1所述的冬凌草甲素乳劑，含有的助溶劑為水溶性有機溶劑， 選自甲醇、乙醇、丙酮、二甲基亞碸、N，,N-二甲基甲醯胺、四氫呋喃、乙二醇、丙二醇、異丙醇、甘油、聚乙二醇。
7. 如權利要求1所述的冬凌草甲素乳劑，其製備方法包括以下步驟(1) 先用助溶劑將冬凌草甲素溶解；(2) 將冬凌草甲素溶液與油相成分和乳化劑混勻；(3) 加入水相成分，在高速剪切力條件下成乳。
8. 如權利要求7所述的冬凌草甲素乳劑，在其製備成乳後，除去部分助溶劑。
9. 一種冬凌草甲素乳劑，其特徵是該乳劑中含有0.01% 20% (重量)的冬 凌草甲素，5% 60% (重量)的油脂，0.5% 30% (重量)的乳化劑。
10.如權利要求9所述的冬凌草甲素乳劑，其製備方法包括以下步驟:(1) 先用0.01% 30% (體積)助溶劑將冬凌草甲素溶解；(2) 將冬凌草甲素溶液與油相成分和乳化劑混勻；(3) 加入水相成分，在高速剪切力條件下成乳；(4) 從乳劑中除去全部助溶劑。
全文摘要
本發明公開了冬凌草甲素乳劑及其製備方法。該乳劑穩定性好，粒徑小，可用於靜脈注射、肌肉注射或口服。該冬凌草甲素乳劑含有0.01％～20％的冬凌草甲素，5％～60％的油脂，0.5％～30％的乳化劑，0.01％～30％的助溶劑，其中助溶劑可以全部或部分除去。
文檔編號A61K47/34GK101669907SQ20091018083
公開日2010年3月17日 申請日期2009年10月19日 優先權日2009年10月19日
發明者麗 佟, 常貴生 申請人:常貴生;佟 麗