一種生牛乳體細胞檢測比色杯及其製作方法
2023-07-03 21:12:51
專利名稱：一種生牛乳體細胞檢測比色杯及其製作方法
技術領域：
本發明涉及食品檢測技術領域，具體地，本發明涉及一種生牛乳體細胞檢測比色杯及其製作方法。
背景技術：
生牛乳中的體細胞數是指每毫升生牛乳中的細胞總數，體細胞數是衡量生牛乳品質與供應生牛乳動物乳腺健康的重要指標，需要簡便、成本低、準確度高的檢測方法。目前國內外乳品行業應用的生牛乳體細胞數或乳房炎的檢測方法很多，通用的方法包括仲裁法-顯微鏡直接觀察法、電子計數儀檢測法、加利福尼亞細胞數測定法(CMT)、酯酶法。其中，仲裁法-顯微鏡直接觀察法需要染色、製片、觀察、計數，十分繁瑣，易造成操作人員視覺疲勞出現人為誤差，且其所用的試劑(四氯乙烷)具有強毒性。電子計數儀檢測法設備價格昂貴、運行成本高；加利福尼亞細胞數測定法只是對生牛乳的凝固狀態進行粗略的判斷，主觀性強，結果不夠準確。酯酶法是基於粒細胞胞質內含有特異性酯酶可作用於底物芳香酯，釋放出酚，酚又與重氮鹽發生反應形成紫色絡合物，顏色深淺與體細胞數呈一定的比例關係。但酯酶法未能廣泛應用於生牛乳驗收，以及奶牛乳房炎判定，主要原因為芳香酯檢測生牛乳時用量微小，需精密稱量；重氮鹽配製方法繁瑣，分布廣泛的生牛乳檢測現場無法具備精密稱取藥品、配製反應溶液的條件。
發明內容
本發明的目的在於，提供一種生牛乳體細胞檢測比色杯，該比色杯能夠快速、敏感、便捷的對生牛乳中的體細胞進行檢測。為達到上述目的，本發明採用了如下的技術方案一種生牛乳體細胞檢測比色杯，所述比色杯底部設置檢測塊，所述檢測塊包括芯材和壁材；所述芯材的組成成分包括I 12份芳香酯、I 18份重氮鹽、O.1 1. 6份增溶增敏劑，200份水溶解上述成分，濃度為O. lmol/L緩衝溶液調溶液的pH為8. O ;所述壁材的組成成分包括酪蛋白5 10份、大豆蛋白或乳清蛋白15 30份、乳糖或蔗糖20 50份。所述芳香酯為吡咯酯，也可以是其他芳香酯，比如吲哚酯等。所述重氮鹽為1-氨基-2-萘酚-4-磺酸重氮鹽，也可以是其他的重氮鹽，如氟硼
酸重氮鹽。所述緩衝溶液為Tris-鹽酸緩衝溶液。所述增溶增敏劑為EDTA。本發明採用微膠囊技術，以芳香酯及重氮鹽為芯材,並根據芯材性質以及檢測樣品(生牛乳)性質配製壁材，使壁材即可有效承載並保護芯材，又可以在與生牛乳接觸時迅速崩解，快速反應。本發明通過真空乾燥技術使用壁材包埋吡咯酯及重氮鹽，在比色杯底部形成質地細緻均勻的藥品固體方塊，且比色杯底部採用避光處理，-10°c 10°C條件保存。本發明的壁材中，乳糖或蔗糖為惰性載體，可有效保護芯材自身不發生反應變色。其中，乳糖與大 蛋白顆粒小、易溶解，與待測樣品溶液混合後可迅速朋解釋放芯材。乳糖和大豆蛋白聯合使用不會造成吡咯酯及重氮鹽在運輸或使用過程中的損失，且可賦予成品細膩豐滿的質感。酪蛋白在壁材配製中具有乳化作用，同時具有PH調節作用，使溶液以及成品的pH更接近中性。—般生牛乳的pH為6. 3 6. 8,因此,本發明試劑反應的最佳pH條件為弱鹼環境，故在配製過程中需要添加緩衝溶液，調節pH。本發明的使用方法量取I 2mL生牛乳注入比色杯，震蕩、混勻，靜置I IOmin觀察生牛乳顏色變化。本發明的另一個目的在於，提供一種生牛乳體細胞檢測比色杯的製備方法，所述方法包括以下步驟I)比色杯處理比色杯經超聲波處理10 30分鐘，水衝洗，熱風乾燥箱乾燥；2)芯材溶液1 12份芳香酯、I 18份重氮鹽、O.1 1. 6份增溶增敏劑，200份水溶解上述原料，濃度為O. lmol/L緩衝溶液調溶液的pH為8. O ;3)壁材溶液酪蛋白5 10份、大豆蛋白或乳清蛋白15 30份、乳糖蔗糖20 50份，IOOml水溶解上述原 料得到壁材溶液；4)混合溶液注入比色杯芯材溶液壁材溶液按照1:1混合，取混合溶液O. 15
O.25mL注入比色杯，膜封口，膜上扎孔；5)真空冷凍乾燥-80 -20°C預凍2 8h，I 20pa真空乾燥5 IOh ;6)避光處理真空冷凍乾燥後，比色杯底部形成檢測塊，採用不透光材質包裹比色杯底部或採用不透光塗料塗布比色杯底部，得到生牛乳體細胞檢測比色杯。所述混合溶液O. 15 O. 25mL注入比色杯中，優選混合溶液O. 2mL注入比色杯中。所述芳香酯為吡咯酯，也可以是其他芳香酯，比如吲哚酯等。所述重氮鹽為1-氨基-2-萘酚-4-磺酸重氮鹽，也可以是其他的重氮鹽，如氟硼酸重氮鹽。所述緩衝溶液為Tris-鹽酸緩衝溶液。所述增溶增敏劑為EDTA。本發明相對於現有技術具有以下優點I)可解決現有生牛乳體細胞的檢測方法無法實現實時在線檢測的問題，適用於生產現場生牛乳體細胞數據的收集；2)可解決酯酶法無法現場準確用量的問題；3)檢測速度快，最快2 8分鐘即可定量測定原料乳的體細胞；4)檢測方便，注入生牛乳混勻觀察即可；5)便捷、經濟、準確、成本低、應用廣泛，既適合個體奶農，又適合大型牧場的大量檢測。
具體實施例方式下面以具體實施方式
對本發明作進一步詳細的說明。實施例1一種生牛乳體細胞檢測比色杯，所述比色杯底部設置檢測塊，所述檢測塊包括芯材和壁材；所述芯材的組成成分包括I份吡咯酯、I份1-氨基-2-萘酚-4-磺酸重氮鹽、O.1份增溶增敏劑，200份水溶解上述成分，濃度為O. lmol/L Tris-鹽酸緩衝溶液調溶液的pH為 8.0 ;所述壁材的組成成分包括酪蛋白5份、大豆蛋白15份、乳糖20份。一種生牛乳體細胞檢測比色杯的製備方法，所述方法包括以下步驟I)比色杯處理751型有機玻璃比色杯經超聲波處理10分鐘，水衝洗，熱風乾燥箱乾燥；2)芯材溶液1份吡咯酯、I份1-氨基-2-萘酚-4-磺酸重氮鹽、O.1份增溶增敏齊U，200份水溶解，濃度為O. lmol/L Tris-鹽酸緩衝溶液調溶液的pH為8. O ;3)壁材溶液酪蛋白5份、大豆蛋白15份、乳糖20份，IOOml水溶解得到壁材溶液；4)混合溶液注入比色杯芯材溶液壁材溶液按照1:1混合，取混合溶液O. 2mL注入比色杯，膜封口，膜上扎孔；5)真空冷凍乾燥-28 -20°C預凍2h，1. 3pa真空乾燥IOh ；6)避光處理真空冷凍乾燥後，比色杯底部形成檢測塊，採用不透光材質包裹比色杯底部，得到生牛乳體細胞檢測比色杯。實施例2一種生牛乳體細胞檢測比色杯，所述比色杯底部設置檢測塊，所述檢測塊包括芯材和壁材；所述芯材的組成成分包括12份吡咯酯、18份1-氨基-2-萘酚_4_磺酸重氮鹽、1.6份增溶增敏劑，200份水溶解上述成分，濃度為O. lmol/L Tris-鹽酸緩衝溶液調溶液的PH 為 8. O ;所述壁材的組成成分包括酪蛋白10份、乳清蛋白30份、蔗糖50份。一種生牛乳體細胞檢測比色杯的製備方法，所述方法包括以下步驟I)比色杯處理751型有機玻璃比色杯經超聲波處理15分鐘，水衝洗，熱風乾燥箱乾燥；2)芯材溶液12份吡咯酯、18份1-氨基_2_萘酚_4_磺酸重氮鹽、1. 6份增溶增敏劑，200份水溶解，濃度為O. lmol/L Tris-鹽酸緩衝溶液調溶液的pH為8. O ;3)壁材溶液酪蛋白10份、乳清蛋白30份、蔗糖50份，IOOml水溶解得到壁材溶液；4)混合溶液注入比色杯芯材溶液壁材溶液按照1:1混合，取混合溶液O. 15mL注入比色杯，膜封口，膜上扎孔；5)真空冷凍乾燥-80 _40°C預凍2h,1. 3pa真空乾燥IOh ；6)避光處理真空冷凍乾燥後，比色杯底部形成檢測塊，採用不透光塗料塗布比色杯底部，得到生牛乳體細胞檢測比色杯。實施例3一種生牛乳體細胞檢測比色杯，所述比色杯底部設置檢測塊，所述檢測塊包括芯材和壁材；所述芯材的組成成分包括8份吲哚酯、12份氟硼酸重氮鹽、1. O份增溶增敏劑，200份水溶解上述成分，濃度為O. lmol/L Tris-鹽酸緩衝溶液調溶液的pH為8. O ;所述壁材的組成成分包括酪蛋白8份、乳清蛋白20份、蔗糖35份。一種生牛乳體細胞檢測比色杯的製備方法，所述方法包括以下步驟I)比色杯處理751型有機玻璃比色杯經超聲波處理30分鐘，水衝洗，熱風乾燥箱乾燥；2)芯材溶液8份吲哚酯、12份氟硼酸重氮鹽、1. O份增溶增敏劑，200份水溶解，濃度為O. lmol/L Tris-鹽酸緩衝溶液調溶液的pH為8. O ;3)壁材溶液酪蛋白8份、乳清蛋白20份、蔗糖35份，IOOml水溶解得到壁材溶液；4)混合溶液注入比色杯芯材溶液壁材溶液按照1:1混合，取混合溶液O. 25mL注入比色杯，膜封口，膜上扎孔；5)真空冷凍乾燥-80 _40°C預凍2h,1. 3pa真空乾燥IOh ；6)避光處理真空冷凍乾燥後，比色杯底部形成檢測塊，採用不透光塗料塗布比色杯底部，得到生牛乳體細胞檢測比色杯。實施例41、比色杯檢測方法建立選取分娩30天內的奶牛的體細胞數較高的生牛乳樣品，用UHT乳以1:1、1 :2、1 3、1 :4、1 :5、1 :6、1 :7、1 :8、1 :9、1 :10、1 19比例稀釋。將待測樣品混勻，各取2ml加入實施例I 3製得的比色杯中，震蕩、混勻，於lmin、5min和IOmin記錄顏色變化,並應用直接顯微鏡計數(NY/T800-2004)檢測樣品體細胞數，結果如表I 3 :表I實施例1製備的比色杯檢測生牛乳時的顏色變化
樣品稀釋顯微鏡檢測結_觀察時間_
權利要求
1.一種生牛乳體細胞檢測比色杯，所述比色杯底部設置檢測塊，所述檢測塊包括芯材和壁材； 所述芯材的組成成分包括I 12份芳香酯、I 18份重氮鹽、O.1 1. 6份增溶增敏齊IJ，200份水溶解上述成分，濃度為O. lmol/L緩衝溶液調溶液的pH為8. O ; 所述壁材的組成成分包括酪蛋白5 10份、大豆蛋白或乳清蛋白15 30份、乳糖或鹿糖20 50份。
2.根據權利要求1所述的生牛乳體細胞檢測比色杯，其特徵在於，所述芳香酯為吡咯酯或吲哚酯。
3.根據權利要求1所述的生牛乳體細胞檢測比色杯，其特徵在於，所述重氮鹽為1-氨基-2-萘酚-4-磺酸重氮鹽或氟硼酸重氮鹽。
4.根據權利要求1所述的生牛乳體細胞檢測比色杯，其特徵在於，所述緩衝溶液為Tris-鹽酸緩衝溶液。
5.根據權利要求1所述的生牛乳體細胞檢測比色杯，其特徵在於，所述增溶增敏劑為EDTA。
6.一種生牛乳體細胞檢測比色杯的製備方法，所述方法包括以下步驟 1)比色杯處理比色杯經超聲波處理10 30分鐘，水衝洗，熱風乾燥箱乾燥； 2)芯材溶液1 12份芳香酯、I 18份重氮鹽、O.1 1. 6份增溶增敏劑，200份水溶解，濃度為O. lmol/L緩衝溶液調溶液的pH為8. O ; 3)壁材溶液酪蛋白5 10份、大豆蛋白或乳清蛋白15 30份、乳糖或蔗糖20 50份，IOOml水溶解上述原料得到壁材溶液；4)混合溶液注入比色杯芯材溶液與壁材溶液按照1:1混合，取混合溶液O. 15 O.25mL注入比色杯，膜封口，膜上扎孔； 5)真空冷凍乾燥_80 -20°C預凍2 8h，I 20pa真空乾燥5 IOh; 6)避光處理真空冷凍乾燥後，比色杯底部形成檢測塊，採用不透光材質包裹比色杯底部或採用不透光塗料塗布比色杯底部，得到生牛乳體細胞檢測比色杯。
7.根據權利要求6所述的生牛乳體細胞檢測比色杯，其特徵在於，所述芳香酯為吡咯酯或吲哚酯。
8.根據權利要求6所述的生牛乳體細胞檢測比色杯，其特徵在於，所述重氮鹽為1-氨基-2-萘酚-4-磺酸重氮鹽或氟硼酸重氮鹽。
9.根據權利要求6所述的生牛乳體細胞檢測比色杯，其特徵在於，所述緩衝溶液為Tris-鹽酸緩衝溶液。
10.根據權利要求6所述的生牛乳體細胞檢測比色杯，其特徵在於，所述增溶增敏劑為EDTA。
全文摘要
本發明涉及一種生牛乳體細胞檢測比色杯及其製備方法，所述比色杯底部設置檢測塊，所述檢測塊包括芯材和壁材；所述芯材的組成成分包括1～12份芳香酯、1～18份重氮鹽、0.1～1.6份增溶增敏劑，水溶解上述成分，並用濃度為0.1mol/L緩衝溶液調溶液pH為8.0，得到芯材溶液；所述壁材的組成成分包括酪蛋白5～10份、大豆蛋白或乳清蛋白15～30份、乳糖或蔗糖20～50份，水溶解上述成分得到壁材溶液，將芯材溶液與壁材溶液按照11混合，取混合溶液0.15～0.25mL注入比色杯，膜封口，膜上扎孔，經冷凍乾燥和避光處理，得到生牛乳體細胞檢測比色杯。本發明能夠快速、敏感、便捷的對生牛乳中的體細胞進行檢測。
文檔編號G01N21/78GK103048317SQ20121055828
公開日2013年4月17日 申請日期2012年12月20日 優先權日2012年12月20日
發明者富鑫 申請人:內蒙古伊利實業集團股份有限公司