一種檢測禾穀縊管蚜抗藥性的方法
2023-05-31 15:24:31 1
一種檢測禾穀縊管蚜抗藥性的方法
【專利摘要】本發明提供了一種檢測禾穀縊管蚜抗藥性的方法，在藥劑的診斷劑量下製作診斷玻璃管，快速檢測禾穀縊管蚜田間種群對藥劑的抗性水平，所述藥劑為吡蟲啉、抗蚜威、氧化樂果或高效氯氰菊酯；藥劑的診斷劑量：吡蟲啉為898ng/cm2，抗蚜威為18ng/cm2，氧化樂果為170ng/cm2,高效氯氰菊酯為3077ng/cm2。本發明方法使用簡便，結果直觀明了，適用于田間快速檢測禾穀縊管蚜抗性水平，克服了傳統生測方法用樣本數量大、操作繁瑣、費時等缺點，可用於快速檢測禾穀縊管蚜田間種群抗性水平。
【專利說明】一種檢測禾穀縊管蚜抗藥性的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種對農業害蟲抗藥性進行監測的測定技術方法，具體地說，涉及一種檢測禾穀縊管蚜抗藥性的方法。
【背景技術】
[0002]禾穀縊管蚜是世界性的為害小麥的重要農業害蟲之一，遍及世界各個產麥國，在我國南北麥區均有發生。禾穀縊管蚜不僅能夠直接刺吸植物營養，造成植物嚴重失水和營養不良，還可以傳播病毒，對植物造成更大的間接傷害，對農業生產造成巨大的經濟損失。長期以來，對禾穀縊管蚜的防治主要以化學防治為主，由於化學殺蟲劑的大量、持續及不合理使用，致使許多國家和地區的禾穀縊管蚜對常用殺蟲劑產生了不同程度的抗藥性。
[0003]禾穀縊管蚜抗藥性的形成和發展給化學防治造成了很大困難，如何快速、準確的檢測禾穀縊管蚜抗藥性水平是非常重要的。現在用於抗藥性監測的方法主要包括傳統的生物測定、生化檢測法、免疫學方法以及分子生物學方法。通常情況下，生物測定是最直接、最接近田間檢測的方法。
[0004]由於各種藥劑作用機理的不同，短時間內昆蟲的中毒反應也各不相同，因此利用這個特點發展的玻璃管藥膜診斷劑量，能夠快速檢測田間種群的抗性水平，這一應用也是田間快速檢測抗性的重要手段。
[0005]毒力測定是室內了解害蟲抗藥性常用的方法，但傳統的浸液法和點滴法進行毒力測定，操作繁瑣，要設定若干濃度和重複，以保證結果的可信度。玻璃管藥膜法是新出現的一種快速檢測害蟲抗藥性的方法，由於其作用效果明顯，縮短了檢查結果的時間，但對於濃度和重複問題上仍然與傳統方法一樣，沒有改進。利用本發明的診斷劑量，輔以玻璃管藥膜法，不僅利用了玻璃管藥膜法的快速檢測特點，而且在診斷劑量下可快速了解害蟲抗性，解決的傳統毒力測定實驗繁瑣的程序，提高了效率，並可用于田間害蟲抗藥性的快速檢測。
【發明內容】
[0006]本發明的目的是提供一種使用簡便，結果直觀明了，適用于田間快速檢測禾穀縊管蚜抗性水平的方法。
[0007]為了實現本發明目的，本發明首先提供一種檢測禾穀縊管蚜抗藥性的方法，在藥劑的診斷劑量下製作診斷玻璃管，檢測禾穀縊管蚜田間種群對藥劑的抗性水平，所述藥劑為吡蟲啉、抗蚜威、氧化樂果或高效氯氰菊酯；藥劑的診斷劑量:吡蟲啉為898ng/cm2，抗蚜威為18ng/cm2,氧化樂果為170ng/cm2，高效氯氰菊酯為3077ng/cm2。
[0008]其中，藥劑的診斷劑量是通過不同濃度的藥劑採用玻璃管藥膜法對室內飼養混合種群進行藥劑毒力測定，計算lc99作為藥劑的診斷劑量。
[0009]上述室內飼養混合種群為採集各地禾穀縊管蚜田間種群，混合後，室內飼養多代得到。混合種群是各地採集禾穀縊管蚜種群，混合後飼養多代，因此該種群中含有各抗性水平的禾穀縊管蚜個體，在生測、酶活及分子水平上都表現有不同抗性，以該種群作為本發明實驗種群，更接近田間種群，實驗結果更可靠、更準確。
[0010]進一步地，藥劑的診斷劑量是通過如下步驟確定的:
[0011](1)禾穀縊管蚜田間種群的室內飼養:採集各地禾穀縊管蚜田間種群，混合飼養多代，獲得室內飼養混合種群；
[0012](2)丙酮稀釋四種殺蟲藥劑為不同的濃度梯度作為毒力測定濃度；
[0013](3)玻璃管藥膜的製作:用步驟(2)中丙酮稀釋的各梯度藥劑製作毒力測定所用的玻璃管藥膜，每管加入220 μ L各濃度藥液，滾動玻璃管至藥液均勻吸附在玻璃管內壁，直至丙酮完全揮發；
[0014](4)毒力測定:用步驟(3)中製備的玻璃管進行禾穀縊管蚜的毒力測定，至少進行三次生物學重複；
[0015](5)結果及診斷劑量:對步驟(4)的結果做毒力回歸曲線，並計算LC99得出各個藥劑的診斷劑量。
[0016]其中，步驟(2)中所用的殺蟲藥劑均為95%以上的原藥，並且用丙酮溶解，稀釋至5?7個濃度梯度。
[0017]其中，步驟(4)中每次毒力測定實驗做三次簡單獨立重複。
[0018]其中，步驟(5)用P0L0軟體計算結果及診斷劑量。
[0019]本發明的有益效果在於:
[0020]本發明方法使用簡便，結果直觀明了，適用于田間快速檢測禾穀縊管蚜抗性水平，克服了傳統生測方法用樣本數量大、操作繁瑣、費時等缺點，可用於快速檢測禾穀縊管蚜田間種群抗性水平，且用于田間的快速檢測方便可靠，解決了傳統毒力測定方法用蟲量大的問題，也解決了田間操作問題，簡單易操作，田間實時檢測抗性，了解禾穀縊管蚜抗性水平，指導田間用藥。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0021]圖1為本發明所用診斷玻璃管；
[0022]圖2為本發明實驗選用的無翅成蚜。
【具體實施方式】
[0023]以下實施例用於說明本發明，但不用來限制本發明的範圍。
[0024]實施例1診斷劑量的獲得
[0025]1.研究對象
[0026]本發明的研究對象為實驗室飼養多代的各地禾穀縊管蚜混合種群。
[0027]2.方法
[0028]供試藥劑吡蟲啉、抗蚜威、氧化樂果和高效氯氰菊酯，用玻璃管藥膜法，進行毒力測定。
[0029]2.1原藥母液的配置及稀釋
[0030]將原藥溶解於丙酮中，定容後裝於藥劑瓶中，封口膜封口，保存於4°C冰箱中。
[0031]毒力測定前，用丙酮將原藥母液稀釋到各濃度，備用。
[0032]2.2玻璃管藥膜的製作[0033]實驗所用玻璃管(如圖1所示)必須經過嚴格的洗滌，確保沒有任何藥物殘留。從稀釋好的藥液中吸取220 μ L加入到直徑1.7cm,高7.5cm的玻璃管(內表面積40cm2)中，滾動玻璃管至藥液均勻吸附在玻璃管內壁，直至丙酮完全揮發，對照單獨用丙酮處理，製作好的玻璃管藥膜室溫下過夜使用。
[0034]2.3毒力測定供試蚜蟲的選擇
[0035]選用室內飼養的禾穀縊管蚜種群，挑取健康一致的無翅成蚜(如圖2所示)進行實驗，每個製備好的藥膜管放置20頭蚜蟲，在室內正常飼養條件下(溫度20~25°C，相對溼度50% ~75%，光照 16L:8D)0
[0036]2.4檢查結果及死亡標準的判斷
[0037]3h後檢查結果，其中只有一條腿動或者完全不動的記為死，以對照死亡率小於10%為有效測定，並用對照死亡率進行校正。每個藥劑6~7個濃度，每個濃度3次重複，數據處理採用P0L0分析軟體，4種殺蟲藥劑對禾穀縊管蚜的毒力測定結果如表1所示，計算LC99，即診斷劑量，該診斷劑量可用於快速檢測禾穀縊管蚜田間種群對吡蟲啉、抗蚜威、氧化樂果和高效氯氰菊酯的抗性水平。
[0038]表1四種殺蟲藥劑對禾穀縊管蚜的毒力測定結果
[0039]
【權利要求】
1.一種檢測禾穀縊管蚜抗藥性的方法，在藥劑的診斷劑量下製作診斷玻璃管，檢測禾穀縊管蚜田間種群個體對藥劑的抗性水平，其特徵在於，所述藥劑為吡蟲啉、抗蚜威、氧化樂果或高效氯氰菊酯；藥劑的診斷劑量:卩比蟲啉為898ng/cm2,抗姆威為18ng/cm2,氧化樂果為170ng/cm2，高效氯氰菊酯為3077ng/cm2。
2.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，藥劑的診斷劑量是通過不同濃度的藥劑採用玻璃管藥膜法對室內飼養混合種群進行藥劑毒力測定，計算LC99作為藥劑的診斷劑量。
3.根據權利要求2所述的方法，其特徵在於，所述室內飼養混合種群為採集各地禾穀縊管蚜田間種群，混合後，室內飼養多代得到。
4.根據權利要求1-3任一項所述的方法，其特徵在於，藥劑的診斷劑量是通過如下步驟確定的:(1)禾穀縊管蚜田間種群的室內飼養:採集各地禾穀縊管蚜田間種群，混合飼養多代，獲得室內飼養混合種群；(2)丙酮稀釋四種殺蟲藥劑至不同濃度梯度作為毒力測定濃度；(3)玻璃管藥膜的製作:用步驟(2)中丙酮稀釋的各梯度藥劑製作毒力測定所用的玻璃管藥膜，每管加入220 μ L各濃度藥液，滾動玻璃管直至丙酮完全揮發，使藥液均勻分布在玻璃管內壁上；(4)毒力測定:用步驟(3)中製備的玻璃管進行禾穀縊管蚜的毒力測定；(5)結果及診斷劑量:對步驟(4)的結果做毒力回歸曲線，並計算LC99得出各個藥劑的診斷劑量。
5.根據權利要求4所述的方法，其特徵在於，步驟(2)中所用的殺蟲藥劑均為95%以上的原藥，並且用丙酮溶解，稀釋至6?7個濃度梯度。
6.根據權利要求4所述的方法，其特徵在於，步驟(4)中每次毒力測定實驗做三次簡單獨立重複。
7.根據權利要求4所述的方法，其特徵在於，步驟(5)用POLO軟體計算結果及診斷劑量。
【文檔編號】G01N33/50GK103675254SQ201310683154
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2013年12月12日 優先權日:2013年12月12日
【發明者】高希武, 辛娟娟, 魯豔輝, 劉曉嵐, 張帥, 肖達, 楊婷, 王思一, 宋敦倫 申請人:中國農業大學