一種治療急性胃腸炎症和抗流感病毒的複方製劑及其製備方法
2023-05-31 15:05:41 1
專利名稱：一種治療急性胃腸炎症和抗流感病毒的複方製劑及其製備方法
技術領域：
本發明涉及複方製劑藥物，特別是一種治療急性胃腸炎症和抗流感病毒的複方製劑及其製備方法。
背景技術：
目前常用的中成藥，由於藥物生產工藝技術落後，科技含量不足，劑型粗糙，消費者難以接受；工藝長時間的加熱，導致熱敏性有效成分的破壞。中醫藥對流感的治療，具有獨特的療效。″不換金正氣散″出自《太平惠民和劑局方》，是宋代治療瘴疫時氣引致的嘔吐洩瀉兼有表證的傳統名方，用於外感風寒、溼滯脾胃之胃腸型感冒(流行性感冒的一種)。將中醫傳統名方″不換金正氣散″用CO2超臨界流體萃取技術提取精製，用藥效學篩選指標進行有效成分的跟蹤；而研製的新製劑，會有意想不到的好效果。
發明內容
本發明的目的在於克服現有技術的不足而提供一種將古方與現代製劑技術相結合，既美觀又方便、服用劑量小的用於治療急性胃腸炎症和抗感冒病毒的複方製劑及其製備方法。
本發明的目的是這樣實現的一種治療急性胃腸炎症和抗流感病毒的複方製劑，其特徵在於複方製劑的組方是將蒼朮5-30份、厚樸5-30份、陳皮5-30份、廣藿香油0.1-6份、陳皮5-30份、甘草浸膏1-10份、半夏5-30份、黃芩5-30份，加入常規輔料或賦形劑，製成口服製劑、霧化劑或注射劑。
一種治療急性胃腸炎症和抗流感病毒的複方製劑的製備方法，其特徵在於取蒼朮、厚樸、陳皮原藥材，粉碎成粗粉，超臨界二氧化碳(SFE-CO2)萃取，萃取參數為萃取溫度45±3℃，萃取壓力25±5MPa，解析壓力6～7MPa，解析溫度55±5℃，二氧化碳流量為25±3L/h，萃取時間為3±1小時，所得萃取物置潔淨容器中，備用；萃取後的藥渣與半夏、黃芩用7-9倍水煎煮提取2-4次，每次1±0.5小時，濾過，合併濾液，濾液真空濃縮至相對密度1.20±0.05，放置至室溫，噴霧乾燥，幹浸膏粉置潔淨容器中，備用；取SFE-CO2提取物、水提幹浸膏粉、甘草浸膏粉、廣藿香油與適量澱粉混勻，加入4-6％羧甲基澱粉鈉，混勻，幹壓製成顆粒，填充至膠囊，分裝，即得。
本發明複方製劑中抗胃腸型感冒病毒的主要成分為厚樸酚、和厚樸酚、黃芩苷、蒼朮揮髮油、廣藿香油。本發明的膠囊劑定名為黃芩正氣膠囊，(下同)。
本發明黃芩正氣膠囊具有以下藥理作用黃芩正氣膠囊對大鼠幽門結紮性、應激性急性胃潰瘍和鹽酸-乙醇所致大鼠急性胃黏膜損傷有明顯的抑制作用；能減少胃液和胃酸分泌，抑制胃蛋白酶活性；促進小鼠胃排空，並有抑制腸功能亢進小鼠的小腸推進作用，對正常及亢進離體兔腸有明顯抑制作用；對醋酸腹腔注射、甲醛足蹠注射所致小鼠疼痛均有明顯的抑制作用。對醋酸所致小鼠腹腔毛細血管通透性增高以及大鼠蛋清性足腫脹、二甲苯所致小鼠耳腫脹均有明顯抑制作用；體外具有抑制金黃色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌、丙型鏈球菌、傷寒沙門氏菌、腸炎沙門氏菌、福氏志賀氏菌、大腸埃希氏菌、綠膿假單胞菌及白色念珠菌等九種常見腸道致病菌的作用，其中對金黃色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌、傷寒沙門氏菌和福氏志賀氏菌的抑菌作用較強。體外實驗證明黃芩正氣膠囊內容物對甲型流感病毒H3N2亞型、高致病性禽流感病毒H5N1亞型和乙型流感病毒株，在20mg/ml濃度時均有殺滅作用。
圖1是本發明的工藝流程圖。
具體實施例方式
下面實驗例用於進一步說明本發明實驗例1 黃芩正氣膠囊治療急性胃腸炎症主要藥效學研究結果。
試驗時動物隨機分組，設正常或模型組為空白對照，選擇功效與主治基本相似的藿香正氣丸為陽性藥物對照，相關試驗設阿斯匹林、阿託品、易蒙停、乙醯膽鹼、嗎丁啉、雷尼替丁為陽性藥物對照，以保證試驗方法的可靠性。受試藥物按臨床劑量的5倍、10倍、20倍、30倍分別設3個劑量組(大鼠與家鴿為5倍、10倍、20倍，小鼠為10倍、20倍、30倍)。
試驗結果表明黃芩正氣膠囊對大鼠幽門結紮性、應激性急性胃潰瘍和鹽酸-乙醇所致大鼠急性胃黏膜損傷有明顯的抑制作用；能減少胃液和胃酸分泌，抑制胃蛋白酶活性；促進小鼠胃排空，並有抑制腸功能亢進小鼠的小腸推進作用，對正常及亢進離體兔腸有明顯抑制作用；對醋酸腹腔注射、甲醛足蹠注射所致小鼠疼痛均有明顯的抑制作用。對醋酸所致小鼠腹腔毛細血管通透性增高以及大鼠蛋清性足腫脹、二甲苯所致小鼠耳腫脹均有明顯抑制作用；體外具有抑制金黃色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌、丙型鏈球菌、傷寒沙門氏菌、腸炎沙門氏菌、福氏志賀氏菌、大腸埃希氏菌、綠膿假單胞菌及白色念珠菌等九種常見腸道致病菌的作用，其中對金黃色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌、傷寒沙門氏菌和福氏志賀氏菌的抑菌作用較強。
本研究結果表明，黃芩正氣膠囊具有抗潰瘍，調節胃腸運動，抑制胃液和胃酸分泌，抑制胃蛋白酶活性，以及鎮痛、抗炎和抑菌的作用。本研究為黃芩正氣膠囊燥溼運脾，行氣和胃。主治四時傷寒，嘔吐洩瀉，腹脹等症提供了藥理學依據，從而肯定了黃芩正氣膠囊的有效性。
實驗例2 黃芩正氣膠囊體外抗流感病毒試驗研究1材料1.1藥物供試品黃芩正氣膠囊SFE-CO2提取物，用DMSO溶解成20mg/ml的溶液備用；供試品黃芩正氣膠囊水提取物，用雙蒸水溶解成200mg/ml的溶液備用；利巴韋林注射液(100mg/ml)，批號031119，上海通用藥業股份有限公司。
1.2試驗毒株及敏感細胞流行性感冒病毒A/深圳/1/99(H3N2)(A型)；B/京防/184/93(B型)；禽流感病毒A/Goose/GD/2/96(H5N1)均由深圳市疾病控制中心提供。MDCK細胞(狗腎細胞)由中國疾病控制中心提供，經復甦、傳代製成單層細胞。
1.3試劑RPMI1640細胞生長液(含10％新生牛血清、青黴素100IU/ml、鏈黴素100ug/ml)；RPMI1640細胞維持液(含青黴素100IU/ml、鏈黴素100ug/ml)。
1.4雞血球懸液於公雞翅下肱靜脈採血，取2ml雞血，置離心管中，加0.85％生理鹽水洗滌3次，最後一次以每分鐘2000轉的速度沉澱10分鐘，洗滌後的血球用0.85％生理鹽水稀釋成濃度為0.5％。
2方法2.1流感病毒毒力測定病毒血凝效價滴定流感病毒凍幹菌株以，在雞胚中培養傳代後，在96孔板內用生理鹽水做倍比稀釋，得到病毒稀釋度順序為1∶2～1∶1024，同時以生理鹽水為空白對照，採用雞紅血細胞做血細胞凝集試驗測定血凝滴度，血凝滴度高的毒種在MDCK細胞培養內傳代。細胞病變(CPE)測定將96孔細胞培養板中生長成單層的MDCK細胞上清吸棄，用細胞維持液洗一遍，分別加入已做10倍系列稀釋的病毒懸液(10-1～10-8)，每稀釋度平行2孔，每孔50μl，置37℃、5％CO2培養箱中培養，以細胞病變測定組織培養病毒的半數感染劑量即TCID50。
2.2供試品對MDCK細胞毒性測定將96孔細胞培養板中生長成單層的MDCK細胞上清吸棄，分別加入用細胞維持液稀釋成不同濃度的供試品溶液(按1∶2～1∶128倍比稀釋)，每稀釋度平行2孔，每孔100μl，同時設溶媒對照和正常細胞對照，在37℃、5％CO2培養箱中培養，觀察細胞病變，細胞出現融合、圓縮和脫落現象者，為藥物有毒性。
2.3供試品對流感病毒血凝抑制試驗血凝抑制試驗在血凝板內進行，設空白溶媒對照(不加病毒和藥物)、流感病毒對照(不加藥物)、陽性藥物對照(利巴韋林)和供試品藥物2組。將藥物以對細胞最大無毒濃度為起始濃度，分別按2倍系列稀釋(由1∶2～1∶128共7個濃度，相當於含藥量50％～0.78％)，加入用細胞培養液稀釋的4倍血凝滴度流感病毒懸液，每孔中加入病毒懸液25μl，藥物25μl後，在37℃、5％CO2培養箱中培養1～2小時，再加入0.5％雞血球懸液50μl，搖勻，使紅細胞與病毒充分混勻，置室溫30分鐘後觀察血凝現象並記錄結果。以出現「++」的流感病毒最高稀釋度為血凝終點，該稀釋度的倒數即為流感病毒的血凝滴度。
3.結果3.1病毒毒力測定結果3.1.13種流感病毒株血凝滴度見表1。
凝集抑制試驗時採用4個血凝單位的病毒稀釋液，因此從表1可見A型病毒1∶256時出現「++」結果，則1∶64稀釋度為4個血凝單位；B型流感病毒和H5N1型流感病毒4個血凝單位分別為1∶128和1∶64。
表1 病毒血凝滴度測定結果
注「-」表示無細胞病變；「++++」表示一層紅細胞均勻鋪於管底；「+++」表示基本同上，但邊緣不整齊，有下垂趨向；「++」表示血球於管底形成一個環狀，四周有小凝塊。
3.1.2 3種流感病毒株對MDCK細胞導致的病變結果見表2。
表2 病毒毒力測定結果
注「-」表示無細胞病變；「+～++++」分別表示～25％、～50％、～75％和100％產生細胞病變。
由表2可知，生長良好的MDCK細胞接種A型流感病毒後，病毒稀釋度為10-5可見半數細胞病變，稀釋度為10-3可見完全細胞病變，此型流感病毒的TCID50為10-5；接種B型流感病毒後，病毒稀釋度為10-6可見半數細胞病變，稀釋度為10-4可見完全細胞病變，此型流感病毒的TCID50為10-6；接種H5N1型流感病毒後，病毒稀釋度為10-5可見半數細胞病變，稀釋度為10-3可見完全細胞病變，此型流感病毒的TCID50為10-5。
3.2.2供試品對MDCK細胞毒性測定結果見表3表3.供試品對MDCK細胞毒性測定結果
由表3可知，利巴韋林TD0為1∶64(1.56mg/ml)，TD50為1∶32(3.12mg/ml)；水提膏粉TD0為1∶4(50mg/ml)，TD50為1∶2(100mg/ml)；SFE-CO2提取物TD0為1∶16(1.25mg/ml)，TD50為1∶8(2.5mg/ml)。
3.2.3供試品對流感病毒的血凝抑制試驗結果見表4表4 供試品對流感病毒的血凝抑制試驗結果
注「+」為出現血凝現象，「-」為不出現血凝現象由表4可知，SFE-CO2提取物對A型、B型和H5N1型流感病毒所致血凝的抑制濃度分別為1.25mg/ml、2.50mg/ml和1.25mg/ml；水提膏粉對A型、B型和H5N1型流感病毒所致血凝的抑制濃度分別為100mg/ml、50mg/ml和100mg/ml。
實驗例3 黃芩正氣膠囊治療感冒的藥效學研究本資料觀察了黃芩正氣膠囊的抗病毒、抗細菌、抗炎、解熱及對免疫功能的影響。小鼠體內抗病毒實驗表明，黃芩正氣膠囊(中、高劑量)能顯著抑制病毒感染小鼠的肺指數增高。體外抗病毒實驗證明對呼吸道合胞病毒、腺病毒3型和柯薩奇B組病毒I型3種病毒增殖的抑制指數分別為8、4和1。陽性對照藥抗感解毒衝劑對3種病毒增殖的抑制指數分別為4、4和2。二者相比，體外抑制病毒的效果無顯著差異。
體外抑菌實驗表明，黃芩正氣膠囊對6種28株細菌均有不同程度的抑制作用。其中對金葡菌的抑制作用最明顯；抗感解毒衝劑對金葡菌的抑制程度與本品相當，但對其他種細菌的抑制作用明顯弱於本品。小鼠體內抗金葡菌實驗證明黃芩正氣膠囊和抗感解毒衝劑在體內對金葡菌感染均無明顯的抑制作用。
抗炎作用實驗結果表明，黃芩正氣膠囊(18g/kg，36g/kg，72g/kg)對二甲苯所致的小鼠耳腫脹均有非常顯著的抑制作用(p＜0.01)，抗感解毒衝劑(36g/kg)也表現非常顯著的抑制作用，但作用弱於同劑量的黃芩正氣膠囊。黃芩正氣膠囊(36g/kg)對角叉菜膠所致腫脹有一定的抑制作用，但沒有統計學意義18g/kg，72g/kg黃芩正氣膠囊對角叉菜膠所致腫脹形成沒有明顯影響；同劑量的抗感解毒衝劑在角叉菜膠致炎後1小時有顯著的抑制腫脹作用，致炎後2-5小時內沒有影響。黃芩正氣膠囊對乙酸引起小鼠腹腔毛細血管通透性增加沒有影響，36g/kg，72g/kg兩個劑量組則能非常顯著的抑制腹腔毛細血管通透性增加抗感解毒衝劑也有顯著的抑制作用；同劑量兩種藥物比較，前者作用略強。
解毒作用實驗結果表明，黃芩正氣膠囊各劑量(18g/kg，36g/kg，72g/kg)與抗感解毒衝劑組(36g/kg)對乾酵母引起的大鼠發熱均無顯著影響。
對免疫功能影響的實驗結果表明，黃芩正氣膠囊(36g/kg，72g/kg)對二硝基氯苯所致小鼠遲髮型超敏反應有顯著的抑制作用，具有一定的劑量依賴關係；抗感解毒衝劑組(36g/kg)也表現有抑制作用。
綜上所述，黃芩正氣膠囊具有抗病毒、抗菌作用；抗炎作用略強於同劑量的抗感解毒衝劑黃芩正氣膠囊能抑制二硝基氯苯所致的小鼠遲髮型超敏反應對乾酵母引起的大鼠發熱無顯著影響。
圖1為本發明的黃芩正氣膠囊的生產工藝流程圖。
具體實施方式
實施例1製成口服膠囊劑、片蒼朮21.3份、厚樸21.3份、陳皮21.3份、廣藿香油0.5份、甘草浸膏2.4份、半夏21.3份、黃芩11.8份。
製成膠囊或片1000粒，口服，一次2粒，一日3次，連續服3天。
實施例2製成霧化劑蒼朮21.3份、厚樸21.3份、陳皮21.3份、廣藿香油0.5份、甘草浸膏2.4份、半夏21.3份、黃芩11.8份。
製成霧化劑1000ml，每瓶50ml，每日5次，連續用3天。
實施例3製成凍乾粉劑蒼朮21.3份、厚樸21.3份、陳皮21.3份、廣藿香油0.5份、甘草浸膏2.4份、半夏21.3份、黃芩11.8份。
製成凍乾粉劑1000g，每支5g，每日2次，肌肉注射，連續用3天。
實施例4製成靜脈滴注劑蒼朮21.3份、厚樸21.3份、陳皮21.3份、廣藿香油0.5份、甘草浸膏2.4份、半夏21.3份、黃芩11.8份。
製成靜脈滴注劑，每支50ml，每日2次，靜脈滴注，連續用3天。
實施例5製成口服液體製劑蒼朮21.3份、厚樸21.3份、陳皮21.3份、廣藿香油0.5份、甘草浸膏2.4份、半夏21.3份、黃芩11.8份。
製成口服液體製劑1000ml，每支20ml，每日3次，連續用3天。
實施例6提取工藝蒼朮、厚樸、陳皮原藥材，粉碎成粗粉，超臨界二氧化碳(SFE-CO2)萃取，萃取參數為萃取溫度45℃，萃取壓力25MPa，解析壓力6～7MPa，解析溫度55℃，二氧化碳流量為25.0L/h，萃取時間為3小時，所得萃取物置潔淨容器中，備用。萃取後的藥渣與姜半夏、黃芩用8倍水煎煮提取3次，每次1小時，濾過，合併濾液，濾液真空濃縮至相對密度1.20，放置至室溫，噴霧乾燥，幹浸膏粉置潔淨容器中，備用。
權利要求
1.一種治療急性胃腸炎症和抗流感病毒的複方製劑，其特徵在於複方製劑的組方是將蒼朮5-30份、厚樸5-30份、陳皮5-30份、廣藿香油0.1-6份、陳皮5-30份、甘草浸膏1-10份、半夏5-30份、黃芩5-30份，加入常規輔料或賦形劑，製成口服製劑、霧化劑或注射劑。
2.一種治療急性胃腸炎症和抗流感病毒的複方製劑的製備方法，其特徵在於取蒼朮、厚樸、陳皮原藥材，粉碎成粗粉，超臨界二氧化碳(SFE-CO2)萃取，萃取參數為萃取溫度45±3℃，萃取壓力25±5MPa，解析壓力6～7MPa，解析溫度55±5℃，二氧化碳流量為25±3L/h，萃取時間為3±1小時，所得萃取物置潔淨容器中，備用；萃取後的藥渣與半夏、黃芩用7-9倍水煎煮提取2-4次，每次1±0.5小時，濾過，合併濾液，濾液真空濃縮至相對密度1.20±0.05，放置至室溫，噴霧乾燥，幹浸膏粉置潔淨容器中，備用；取SFE-CO2提取物、水提幹浸膏粉、甘草浸膏粉、廣藿香油與適量澱粉混勻，加入4-6％羧甲基澱粉鈉，混勻，幹壓製成顆粒，填充至膠囊，分裝，即得。
全文摘要
本發明涉及一種治療急性胃腸炎症和抗流感病毒的複方製劑及其製備方法，其特徵在於複方製劑的組方是將蒼朮5－30份、厚樸5－30份、陳皮5－30份、廣藿香油0.1－6份、陳皮5－30份、甘草浸膏1－10份、半夏5－30份、黃芩5－30份，用CO2超臨界流體萃取技術提取精製，製成口服製劑、霧化劑或注射劑，製成一種既美觀又方便、服用劑量小、醫療效果顯著的用於治療急性胃腸炎症和抗流感病毒的複方製劑。
文檔編號A61P1/00GK1718232SQ200510035200
公開日2006年1月11日 申請日期2005年6月16日 優先權日2005年6月16日
發明者蘇子仁, 賴小平, 陳建南 申請人:廣州中醫藥大學