賴氨匹林藥的新用途的製作方法

2023-05-31 16:18:51 2

專利名稱：賴氨匹林藥的新用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及賴氨匹林的新用途，特別是在製藥領域中的新用途。
背景技術：
化合物賴氨匹林，其英文名DL-Lysine Acetylsalicylate，化學名DL—賴氨酸—單乙醯水楊酸，結構和分子式為 C15H22N2O6分子量326.35賴氨匹林是目前國內臨床上廣泛應用的解熱鎮痛藥物，其原料及注射劑已收入國家衛生部藥品標準二部四冊。
本品1970年由法國Egic公司開發上市，劑型有注射劑及口服劑。由於其具有起效快、血藥濃度高、療效明顯等優點，此後其它各國相繼試製與生產。本品自上市以來，銷售量上升很快，據報導，世界1999年統計500個暢銷藥品中，本品銷售量排名第360位。國內對本品的研製始於1979年，首先由湖南中南製藥廠與湖南衡陽製藥廠協作試製賴氨匹林原料與注射劑。1983年6月通過湖南省衛生廳與醫藥局組織的技術鑑定，1984年獲準生產並投放國內市場。本品因療效確切，對發熱、鎮痛等均有明顯效果，現是國內臨床上常用的解熱鎮痛藥，特別適用於小兒高熱的治療，可作為首選藥物。
由心血管疾病引發的血栓及血栓栓塞性疾病嚴重威脅著人類的生命，是造成死亡或病殘的主要原因之一。全世界每年心血管病患者多達1300萬例，多於腫瘤患者，位居各大疾病之首。而其中急性血栓類疾病，如腦血栓，急性心肌梗塞(AMI)的死亡率已達到40％以上，我國每年死於心腦血管疾病超過全部死亡人數的50％，在大城市發病率尤高，是我國死亡率最高的疾病之一。
目前，我國人口中每年死於腦部卒中的患者超過100萬，而且還有增加的趨勢。特別是缺血性卒中佔整個卒中發病率的70-75％，是卒中的主要類型。隨著人口老齡化和各種危險因素的增加，缺血性卒中所佔比例會越來越大。在西方國家，缺血性卒中患者的比例已達84％。腦卒中已經成為21世紀威脅人類健康及生活的主要病魔之一。由於缺血性卒中的致殘率、復發率比出血性卒中更高，因此，預防和治療缺血性卒中應該成為卒中防治的重點。美國和歐洲的臨床研究結果顯示，卒中發病5-6小時內靜脈給予組織纖溶酶原激活物(rtPA)溶栓藥治療，可以有效改善患者的預後，提高倖存者的生存質量，但不能降低死亡率，因此尋找更有效的藥物和治療方法則是我們臨床工作者面臨的迫切任務。
賴氨匹林是乙醯水楊酸(阿司匹林)和賴氨酸的復鹽，其目前已知的藥理作用與阿司匹林相同。近年來，國內外已研究證明發現阿司匹林有抗血小板聚集作用，能與環氧化酶作用，抑制血小板合成TXA2，也抑制血管壁合成PGI2。每日40-100毫克阿司匹林可有效地抑制血小板聚集，可用於預防不穩定型心絞痛發生心肌梗死，預防心肌梗死後心梗再發和降低急性心梗後死亡率；預防腦血管疾病患者一過性腦缺血(TIA)的發生，缺血性中風及腦血管性死亡的發生。由於阿司匹林在水中的溶解度小，不能製成注射劑，只能口服，但口服阿司匹林不良反應大，刺激胃黏膜引起出血性胃炎，潰瘍與出血。另外，由於口服生物利用度低，起效慢，不適用於對急性血栓類疾病，如腦卒中、急性心肌梗塞(AMI)的治療。從而限制了阿司匹林在臨床上的應用。

發明內容
本發明的目的在於提供賴氨匹林的新用途，特別是用於製備防治血栓形成及血栓栓塞性疾病藥中的應用，為臨床防治血栓性疾病增加一個新藥和本品臨床使用增加一個新的適應症。
由於賴氨匹林具有良好的水溶性，可用於肌注和靜注。避免了乙醯水楊酸對胃腸道的刺激，降低了毒副作用。根據文獻藥理毒理試驗表明賴氨匹林無論是口服或注射給藥，對胃腸的刺激作用均比相當劑量的阿斯匹林輕得多。大鼠口服阿斯匹林350mg和相當劑量的賴氨匹林，阿斯匹林組大便紅細胞增加7.5倍，而賴氨匹林組僅增加了2倍。小鼠腹腔注射賴氨匹林400mg/kg，大便紅細胞數僅僅是阿斯匹林組(200mg/kg)的十分之一。賴氨匹林口服的致潰活性比阿斯匹林明顯減輕(P＜0.01)。且注射給藥具有起效快、血藥濃度高以及生物利用度高等特點。特別是靜脈注射給藥，可以迅速準確地進入體循環，達到穩態血藥濃度(Css)。
另外，賴氨酸是人體必需的胺基酸，它具有增進神經細胞代謝，提高中樞神經活力，改善組織缺氧，使受損組織功能恢復的作用，其與乙醯水楊酸結合後對本品的藥效有協同和加強作用。因此本品在臨床上用於解熱鎮痛的治療，療效確切，使用廣泛，但國內外沒有本品用於防治血栓及血栓栓塞性疾病的報導。通過大量的動物試驗及臨床觀察，本發明創造性的發現，賴氨匹林具有新的用途，即用於急性血栓性疾病的搶救治療，這是阿司匹林在臨床使用中所不具有的治療功能。本發明的意義在於為臨床防治血栓性疾病增加一個新藥及為賴氨匹林臨床使用增加一個新的適應症。
賴氨匹林進入人體後水解成水楊酸和賴氨酸。水楊酸能使PG合成酶(環加氧酶)活性中心的絲氨酸乙醯化而失活，降低ADP、膠原和人凝血酶誘導的血小板聚集率，減少血小板中TAX2(血栓素)的生成而抗血小板聚集及抗血栓形成。賴氨酸作為營養物質被肌體利用，研究文獻表明賴氨酸除了作為營養物質外，還具有很強的和血小板糖蛋白IIb/IIIa受體的親和力，與血小板糖蛋白IIb/IIIa受體結合，佔據了其上的結合位點，使血小板糖蛋白上IIb/IIIa受體不能與纖維蛋白原結合，從而抑制血小板聚集。我們做的動物實驗表明，賴氨匹林對大鼠的的血小板聚集、血小板粘附率、實驗性血栓形成的影響以及對小鼠的尾動脈出血時間的影響均優於阿司匹林，特別是對血小板粘附性的影響，阿司匹林沒有作用，而賴氨匹林的作用非常明顯。這也是賴氨匹林防治血栓的機理之一。賴氨匹林臨床可用於防治血栓形成及血栓栓塞性疾病，包括缺血性腦卒中，腦水腫，缺血性心臟病，穩定型、不穩定型心絞痛等。
為了更好的說明本發明，下面用動物實驗及臨床試驗說明賴氨匹林在防治血栓形成及血栓栓塞性疾病藥物中的應用效果。
一、賴氨匹林對大鼠血小板粘附率的影響[動物]SD大鼠，雌雄兼用，體重300-400g，由南京醫學院實驗動物中心提供.[藥物與試劑]賴氨匹林由安徽省蚌埠塗山製藥廠提供，每克含乙醯水楊酸0.55g，用生理鹽水溶解。
阿司匹林由安徽省蚌埠塗山製藥廠提供。混懸於1％羧甲基纖維素納溶液中。[方法與結果]SD大鼠24隻，隨機分為1、正常對照組；2、阿斯匹林組；3、賴氨匹林組。
各組按0.2ml/100g體重的容積給大鼠灌胃，每日2次，共3天。對照3組給予等容積的1％羧甲基纖維素鈉。最後一次給藥後2h按方法(11)進行實驗。
大鼠用巴比妥鈉(30mg/kg)ip麻醉，左頸總動脈插管放血接於裝有3.23％枸櫞酸0.2ml的聚乙稀試管內(2ml/管)。取1.5ml抗凝血加入容量為12ml的球形玻璃瓶中。將玻璃瓶固定在XSNN-RRII型體外血栓形成，血小板粘附兩用儀(無錫縣電子儀器廠)上，以3轉15min，轉動15min。分別取旋轉前、後的血液做血小板計數並計算血小板粘附率。
血小板粘附率(％)＝旋轉前、後的血小板差數值/旋轉前血小板數×100％結果見表3表3賴氨匹林對大鼠血小板粘附率的影響(X±SD)分組n 血小板粘附率(％)正常組 8 43.73±9.80阿司匹林組 8 49.31±12.26(50.0mg/kg)賴氨匹林組 8 30.00±6.78**##(90.4mg/kg)**P＜0.01與正常組比較；##P＜0.01與阿司匹林相比較。[結論]賴氨匹林(90.4mg/kg)能顯著降低大鼠血小板粘附率；面相應劑量的阿斯匹林(50mg/kg)不能降低大鼠血小板粘附率。
二、賴氨匹林對腦梗塞大鼠的治療作用(一)、賴氨匹林對腦梗塞大鼠腦缺血的治療作用藥物及試劑注射用賴氨匹林安徽省蚌埠塗山製藥廠提供，批號010410 900mg/支三氯化鐵GR北京朝阻區通惠化工廠HCLGR北京化工廠，批號961122紅四氮唑(TTC)北京化工廠，批號810911水合三氯乙醛GR瀋陽試劑廠 批號920401劑量選擇參考浙江省醫學科學院藥物所試驗劑量，(小鼠i.v LD50＝1513mg/kg)假手術生理鹽水i.v模型組生理鹽水i.v賴氨匹林 100mg.kg-1i.v(相當小鼠LD50的1/15 i.v)50mg.kg-1i.v25mg.kg-1i.v儀器SXP-1B手術顯微鏡上海醫用光學儀器廠HZS-H水浴振蕩器哈爾濱東聯電子技術開發有限公司分析天平AEC-200日本島津公司動物Wistar大鼠，購自首都醫科大學動物科學部，雄、雌各半，體重220-270克，許可證SCXK11-00.0012方法大鼠中腦動脈三氯化鐵腦梗塞法大鼠腹腔注射三氯乙醛350mg.kg-1麻醉，左側位固定在鼠板上，在手術顯微境下沿外耳道與眼眥連線中點切開皮膚，暴露出顴弓，沿顱骨剪斷筋膜，暴露出聶前窩，用小牽張器將磷狀骨和下頜骨間距撐開，於顱骨底以手鑽打洞，開顱窗分離軟腦膜，暴露出大腦中動脈，用50％氯化鐵(1N HCL配製)10μl浸潤2×2mm定量濾紙片覆蓋大腦中動脈30分鐘，以形成血凝，阻斷血流，造成局部腦缺血梗塞。30分鐘後以小鑷子取出濾紙片，並以生理鹽水衝洗周圍組織三次，縫合傷口，用碘酒消毒，進行舌下靜脈給藥後回籠飼養。
室溫嚴格控制在24-25℃，24小時後進行行為評分、斷頭取腦。
行為評分判斷標準a.提起鼠尾，觀察兩前肢情況，正常動物兩前肢向前伸直並且對稱。手術後，腦缺血半球的對側前肢肩內旋和內收，觀察其程度不同評為0-4分。
b.牽拉兩肢，正常大鼠肌國對稱，手術後腦缺血半球的對側前肢肌無力，觀察其程度不同評為0-3分。
c.推兩肩，正常大鼠雙側肩阻力對稱，手術後腦缺血半球的對側肩阻力下降；觀察其程度不同評為0-3分。
根據以上標準滿分為10分，分數越高，說明腦功能障礙越嚴重。以此做為腦功能障礙的指標。
將剝離完整的大腦去嗅球、小腦及低位腦幹，沿冠狀面切為五片，立即放入含有5ml4％紅四氮唑(TTC)及0.1ml 1mol.L磷酸氫二鉀的5ml染色池中，避光在37℃水浴搖床中溫孵30分鐘。取出腦片觀察腦缺血情況。
正常組織為玫瑰紅色；梗塞區組織呈白色。挖出缺血組織，分別稱重，用重量求積法測量梗塞腦組織，計算梗塞腦組織佔大腦重量的百分比。
部分動物腦片拍照，以觀察中腦動脈梗塞後缺血情況。結果1.賴氨匹林對三氯化鐵引起大鼠大腦中腦動脈梗塞所致腦缺血的影響賴氨匹林100mg.kg-1、50mg.kg-1可明顯降低三氯化鐵引起大鼠大腦中腦動脈梗塞所致腦缺血的缺血面積，與模型組比較有顯著性差異。賴氨匹林25mg.kg-1對降低缺血面積無明顯作用。
表1賴氨匹林對大腦中腦動脈血栓大鼠腦缺血的影響組別 動物數 劑量(mg.kg-1)腦缺血(％)±SD模型 1011.36±3.49假手術 100***賴氨匹林 9100 3.17±2.9***賴氨匹林 10 50 6.77±3.61**賴氨匹林 925 9.09±3.19
各組均與模型組比較 ***P＜0.001 **P＜0.012、賴氨匹林對三氯化鐵引起大鼠大腦中腦動脈梗塞所致神經症狀的影響賴氨匹林100mg.kg-1、50mg.kg-1可明顯改善三氯化鐵引起大鼠大腦中腦動脈梗塞所致腦缺血產生的神經障礙症狀。賴氨匹林25mg.kg-1也有一定程度的改善。(P＜0.05)表2賴氨匹林對大腦中腦動脈血栓大鼠神經症狀的影響組別 動物數 劑量(mg.kg-1) 神經症狀評分±SD模型 10 6.7±0.8假手術 10 0***賴氨匹林 9100 2.7±1***賴氨匹林 10 50 4.5±1.4**賴氨匹林 925 5.3±0.9*各組均與模型組比較****P＜0.001**P＜0.01*P＜0.05(一)賴氨匹林對腦梗塞大鼠腦水腫的治療作用藥物及試劑同試驗(一)劑量選擇同試驗(一)動物同試驗(一)方法大鼠中腦動脈三氯化鐵腦梗塞法大鼠腹腔注射三氯乙醛350mg.kg-1麻醉，左側位固定在鼠板上，在手術顯微境下沿外耳道與眼眥連線中點切開皮膚，暴露出顴弓，沿顱骨剪斷筋膜，暴露出聶前窩，用小牽張器將磷狀骨和下頜骨間距撐開，於顱骨底以手鑽打洞，開顱窗分離軟腦膜，暴露出大腦中動脈，用50％氯化鐵(1N HCL配製)10μl浸潤2×2mm定量濾紙片覆蓋大腦中動脈30分鐘，以形成血凝，阻斷血流，造成局部腦缺血梗塞。30分鐘後以小鑷子取出濾紙片，並以生理鹽水衝洗周圍組織三次，縫合傷口，用碘酒消毒，進行舌下靜脈給藥後回籠飼養。
室溫嚴格控制在24-25℃，24小時後進行行為評分、斷頭取腦。
將剝離完整的大腦去嗅球、小腦及低位腦幹，稱取全腦溼重，放入烤箱中(200℃)烤至恆重。(全腦溼重-全腦幹重)/全腦溼重×100％為腦水含量。各組腦含水量均與假手術組比較。進行統計學處理。結果賴氨匹林對三氯化鐵引起大鼠大腦中腦動脈梗塞所致腦水腫的影響賴氨匹林100mg.kg-1、50mg.kg-1能減輕腦含水量。
表3賴氨匹林對大腦中腦動脈血栓大鼠腦含水量的影響組別動物數 劑量(mg.kg-1) 腦含水量(100％)±SD模型11 80.38±0.58假手術 10 77.03±0.43**賴氨匹林10 100 78.53±0.59**賴氨匹林10 50 79.82±0.32*賴氨匹林10 25 80.10±0.54各組均與模型組比較 **P＜0.01*P＜0.05結論1.用三氯化鐵局部粘貼損傷血管，從腦缺血、神經行為障礙、腦水腫為觀察指標判斷，形成了大鼠大腦中腦動脈血栓模型。
2.賴氨匹林100、50mg.kg-1於手術後30分鐘靜脈注射，能明顯縮小腦栓塞24小時的腦缺血範圍，改善神經行為障礙、並能減輕腦水腫。
三、賴氨匹林治療缺血性腦卒中的臨床報告根據賴氨匹林動物試驗對缺血性腦梗塞的作用，中國康復研究中心對注射用賴氨匹林用於治療缺血性腦卒中進行了60例臨床觀察，以確定能否在臨床上應用。
對象與方法對象為急性缺血性腦卒中患者，經CT證實，符合中華神經科學會制定的診斷標準。既往二周內末用過口服阿司匹林及其它抗血小板藥和抗凝劑。
方法採用隨機對照法分為治療組和對照組。
治療組患者應用賴氨匹林針劑0.9g+500ml林格氏液，每日一次靜滴。14日為一療程。
對照組患者應用目前臨床普遍使用、療效確切的複方丹參針劑16ml+500ml林格氏液，每日一次靜滴，但禁止同時用潘生丁、的克來得等藥物。
觀察指標分為臨床療效及實驗室血液流變學指標。
臨床療效指標神經功能缺損量表及日常生活能力量表(ADL)實驗室觀察指標各項血液流變學數值。
統計方法用SPSS軟體。
一般資料治療組男18，女12，年齡73-35歲。
對照組男19，女11，年齡75-41歲。
結果
兩組年齡無顯著差異P＞0.05如表1所示，兩組神經功能缺損評分，日常生活能力(ADL)評分治療前與治療後均無顯著差異P＞0.05，血小板聚集率在治療後兩組有差異0.01＜P＜0.05，如表16所示.。其餘血液流變學指標均為P＞0.05，無差異如表4-15所示。表1年齡

t檢驗值t＝0.025818，對應p＞0.05表2療效比(神經功能缺損評分)

表3ADL

表4全血高切值(cp)


表5全血中切值H(cp)

表6全血中切值L(cp)

表7全血低切值(cp)

表8血漿粘度(cp)


表9ESR血沉(mm/h)

表10紅細胞壓積(％)

表11全血高切還原粘度

表12全血低切還原粘度

表13紅細胞剛性指數

表14紅細胞聚集指數

表15血沉方程K值


表16血小板聚集率

討論賴氨匹林具有水溶性強、起效快等特點，短時即可達到血藥濃度高峰，持續時間長，與其他藥物相溶性強。它除具有抗血小板聚集的作用外，還具有組織修復，增進神經細胞代謝，提高中樞神經活力，改善組織缺氧，能使受損的腦組織恢復功能。因此，我們設想把其應用於缺血性腦卒中的急性期治療。我們用國產的賴氨匹林針劑對缺血性腦卒中急性期60例。隨機分為兩組進行臨床效果及血小板聚集性觀察，以便確定國產賴氨匹林針劑能否在臨床上應用於缺血性腦卒中。
我們研究結果如表1-16所示，兩組年齡及神經功能缺損量表、ADL以及各項血液流變學指標與治療前相比均為P＞0.05，無差異，兩組存在可比性，治療後，神經功能缺損量表及ADL，兩組比較均為P＞0.05，賴氨匹林與複方丹參治療對照組在療效上無明顯差別。但說明賴氨匹林與複方丹參具有同等療效。複方丹參治療缺血腦卒中已被國內公認，廣泛應用於臨床，取得較好的效果。由此可推論，賴氨匹林完全是與複方丹參類藥物相同，可作為缺血性腦卒中的急性期治療，應用於臨床，值得注意的是我們的研究提示賴氨匹林組與複方丹參組相比，血小板聚集率兩者有明顯差異，P＜0.05，說明它優於複方丹參，具有抑制血小板聚集的作用。這為在臨床上應用於缺血性腦卒中急發生急性期治療提供了藥理依據。另外，我們也發現賴氨匹林治療組除血小板下降外，全血低切值，血沉方程K值在治療後也有較大的下降，約下降了18％及17％。在應用賴氨匹林過程中，未見一例有出血及其它副作用。
綜上所述，我們認為賴氨匹林完全可應用於缺血性腦卒中的急性期早期治療，有良好前景。
從以上結果可以看出本發明的優點在於1.本發明對已知的賴氨匹林藥發掘了新的醫療用途，開拓了一個新的應用領域；2.與同類防治血栓及血栓栓塞性疾病藥物相比，具有起效快、作用強、副作用小及使用方便等特點，注射用賴氨匹林特別適宜於急性期腦卒中的治療。
3.本發明的物質來源廣泛，並可製成各種常規劑型供臨床使用，這些劑型包括胃腸道及非胃腸道給藥的劑型，如注射劑、口服製劑、皮膚給藥製劑、口腔吸入製劑、植入劑等。
權利要求
1.賴氨匹林在製備治療血栓形成及血栓栓塞性疾病藥物中的應用。
2.根據權利要求1的應用，所述的血栓形成及血栓栓塞性疾病包括腦血栓性疾病和心血栓性疾病。
3.根據權利要求2的應用，所述的腦血栓性疾病包括缺血性腦卒中、腦水腫。
4.根據權利要求2的應用，所述的心血栓性疾病包括缺血性心臟病，穩定型、不穩定型心絞痛。
全文摘要
本發明涉及賴氨匹林在製藥領域中的新用途，賴氨匹林進入人體後水解成賴氨酸和乙醯水楊酸，賴氨酸作為營養物質被機體利用，乙醯水楊酸進一步水解成水楊酸，乙醯水楊酸能使PG合成酶(環加氧酶)活性中心的絲氨酸乙醯化而失活，降低ADP、膠原和人凝血酶誘導的血小板聚集率，減少血小板中TAX
文檔編號A61K31/616GK1463704SQ02135219
公開日2003年12月31日 申請日期2002年6月18日 優先權日2002年6月18日
發明者汪洪湖, 丁漢錦 申請人:蚌埠豐原醫藥科技發展有限公司