一種複合微生態製劑泡騰片的製備方法
2023-06-24 19:06:26
一種複合微生態製劑泡騰片的製備方法
【專利摘要】一種複合微生態製劑泡騰片的製備方法，屬於獸用生物製品【技術領域】。其包括以下工藝步驟：1）益生菌的製備；2）混合製劑的凍幹；3）泡騰片製備。本發明具有以下有益效果：本發明所製備的複合微生態製劑泡騰片，降低了產品的運輸要求，增加了用戶使用的便利性；本發明所製備的複合微生態製劑泡騰片可以在飲水免疫活疫苗的同時進行微生態製劑的飼喂，減少了人力物力，減少了對雞群的應激；本發明所製備的複合微生態製劑泡騰片可增強雞群免疫力，提高雞群飼料利用率，提高雞群產蛋率，降低雞舍氨氣排放量，改善雞群生活環境。
【專利說明】一種複合微生態製劑泡騰片的製備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬於獸用生物製品【技術領域】，具體涉及一種複合微生態製劑泡騰片的製備方法。
【背景技術】
[0002]益生菌對人畜都有益生作用。微生態製劑中的益生菌可以產生抗菌物質，並與有害細菌競爭生態位，抑制致病菌的生長繁殖，調整恢復腸道的菌群平衡。此外，微生態製劑可成為非特異性免疫因子，通過細菌本身或細胞壁成分刺激宿主細胞，激活免疫系統，提高機體抗體水平或巨噬細胞活性，從而增強機體抵抗力。微生態製劑中的有益菌群在消化道繁衍，能促進消化道內多種胺基酸、維生素等一系列營養成分的有效合成和吸收利用，從而促進畜禽生長發育和增重。同時在環保方面，可以清除糞尿惡臭，淨化生態環境。微生態製劑中的益生菌通過對有害物質進行發酵分解和合成，有效的降低了有毒有害物質的含量。
[0003]黃酮類化合物是自然界中存在的多元酚類物質，也是自然界藥用植物中的主要活性成分之一。它是指具有15個碳原子並以C6-C3-C6的方式構成的三環天然有機物，是植物在長期自然選擇中產生的二級代謝產物，現在已分離鑑定的有4000多種。它廣泛存在於果蔬、中草藥中，無毒副作用，它具有顯著的清除機體內自由基、抗老化、抗突變、調血脂降血壓等藥理保健功能，是一類極具開發前景的天然有機抗氧化劑，這些抗氧化活性物質可以減少和清除機體內自由基，具有預防疾病的作用。
[0004]多糖是中藥活性成分之一，大量研究表明，多糖及糖複合物在生物體內不僅是作為能量資源和構成材料，更重要的是它存在於一切細胞膜結構中，參與生命現象中細胞的各種活動。多糖類物質是所有生命有機體的重要組成部分，具有清除自由基、提高抗氧化酶活性和抑制脂質過氧化的能力。
[0005]目前，市售微生態製劑大都是凍乾粉，可以直接拌於飼料中，經口服方式被動物體吸收。這種飼餵方式雖然簡單方便，但由於微生態製劑大多為乳酸菌，其生命力較為脆弱，拌於飼料中會顯著降低活菌數。此外，由於同飼料共同飼喂，很難保證動物吸收的準確計量，從而影響療效。另外凍幹狀態的產品在使用的整個貯存和運輸過程中都要保持在較低的溫度狀態下的「冷鏈」環境，這給產品的貯存和運輸以及用戶的使用帶來諸多不便。
【發明內容】
[0006]針對現有技術存在的問題，本發明的目的在於設計提供一種複合微生態製劑泡騰片的製備方法的技術方案。
[0007]所述的一種複合微生態製劑泡騰片的製備方法，其特徵在於包括以下工藝步驟:
1)益生菌的製備
對乳酸菌和芽孢桿菌分別培養，得到乳酸菌菌液和芽孢桿菌菌液；
2)混合製劑的凍幹
將乳酸菌菌液和芽孢桿菌菌液在無菌條件下混合均勻，調整至所需菌數，得到益生菌混合菌液，將益生菌混合菌液與凍幹保護劑混合均勻，分裝後經冷凍真空乾燥製成混合製劑凍乾粉；
所述的凍幹保護劑為每1000ml磷酸緩衝液中含有中藥多糖30~80g、中藥黃酮20~50g、維生素組合6~10g、明膠4~6g和鹿糖40~70g,所述的中藥多糖和中藥黃酮由丹參、甘草、銀杏葉、黃苗、人參、黨參和枸杞中提取得到；
3)泡騰片製備
將混合製劑凍乾粉與泡騰材料混合均勻，用壓片機壓製成片劑，定量分裝，即得到複合微生態製劑泡騰片。
[0008]所述的一種複合微生態製劑泡騰片的製備方法，其特徵在於所述的步驟I)中乳酸菌的培養具體包括:將MRS液體培養基預熱至37°C，同時按2%接種量接種乳酸菌種子液，37°C靜置培養18~24小時，收穫菌液至4°C保存備用；芽孢桿菌的培養具體包括:將芽孢桿菌培養基預熱至37°C，同時按I %接種量接種芽孢桿菌種子液，37°C靜置培養18~24小時，收穫菌液至4°C保存備用。
[0009]所述的一種複合微生態製劑泡騰片的製備方法，其特徵在於所述的步驟I)中乳酸菌為兩歧雙歧桿菌 Cfeci77w5.7icA布氏乳桿菌(Zac tobaci Ilus buchneri )、長雙歧桿菌dobac teri um longum )中的一種或幾種；芽孢桿菌為地衣芽孢桿菌{Bacillus凝結芽孢桿菌{BacilluscoagWafls)、枯草芽抱桿菌subtil is)中的一種或幾種。
[0010]所述的一種複合微生態製劑泡騰片的製備方法，其特徵在於所述的步驟2)中益生菌混合菌液與凍幹保護劑的體積比為1:1~3。
[0011]所述的一種複合微生態製劑泡騰片的製備方法，其特徵在於所述的步驟2)中每1000ml磷酸緩衝液中含有中藥多糖40~70g、中藥黃酮30~40g、維生素組合7~9g、明膠5~6g和鹿糖50~60g。
[0012]所述的一種複合微生態製劑泡騰片的製備方法，其特徵在於所述的維生素組合中含有維生素C 20~40%、維生素E 10~30%、維生素D3 5~15%、維生素BI 15~35%、維生素K 10~20%、維生素B2 5~20%。[0013]所述的一種複合微生態製劑泡騰片的製備方法，其特徵在於所述的中藥多糖和中藥黃酮按以下步驟製得:
a、按丹參10~30份、甘草10~20份、銀杏葉10~30份、黃芪10~30份、人參10~20份、黨參10~30份、枸杞10~30份稱取各中藥原料，切碎、洗淨後用冷水浸泡過夜，再加入原料重量15倍的純化水，水浴至90°C，並保持在90°C，熬製2小時，熬製過程中每10分鐘攪拌一次；
b、棄去步驟a中藥洛,收集藥液,室溫冷卻後經1000Orpm離心10分鐘,棄去沉澱,收集上清；
C、將步驟b中上清進行醇沉，沉澱即為粗製中藥多糖，上清即為粗製中藥黃酮；
d、用滅菌純化水洗滌步驟c中粗製中藥多糖，洗滌後用20倍量的42°C滅菌純化水進行溶解，溶解後，按0.5%比例加入活性炭4°C吸附過夜，吸附後經1000Orpm離心10分鐘，棄去沉澱，收集上清；
e、將步驟d中上清液經0.22um濾膜過濾除菌後，進行10倍濃縮，製得中藥多糖濃縮液；
f、將步驟e中中藥多糖濃縮液進行真空冷凍乾燥即得到中藥多糖；
g、將步驟c中粗製中藥黃酮進行減壓真空濃縮，濃縮物用次滅菌注射用水稀釋清洗，再次進行減壓真空濃縮，如此三次後，再經0.22um濾膜過濾除菌，然後經冷凍真空乾燥即得到中藥黃酮。
[0014]本發明具有以下有益效果:
1、本發明所製備的複合微生態製劑泡騰片，降低了產品的運輸要求，增加了用戶使用的便利性。
[0015]2、本發明所製備的複合微生態製劑泡騰片可以在飲水免疫活疫苗的同時進行微生態製劑的飼喂，減少了人力物力，減少了對雞群的應激。
[0016]3、本發明所製備的複合微生態製劑泡騰片可增強雞群免疫力，提高雞群飼料利用率，提高雞群產蛋率，降低雞舍氨氣排放量，改善雞群生活環境。
【具體實施方式】
[0017]為了使本發明更加容易理解，下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用於說明本發明而不用於限制本發明的範圍，下列實施例中未提及的具體實驗方法，通常按常規實驗方法進行。
[0018]實施例1:益生菌的製備
(I)生產用種子製備 乳酸菌的培養
將MRS液體培養基預熱至37 °C，同時按2%接種量接種乳酸菌種子液，37°C靜置培養18~24小時，收穫菌液至-4°C保存備用。
[0019]芽孢桿菌的培養
將芽孢桿菌培養基預熱至37°C，同時按I %接種量接種芽孢桿菌種子液，37°C靜置培養18~24小時，收穫菌液至4°C保存備用。
[0020]所述的乳酸菌菌為:兩歧雙歧桿菌dobac teri um bi fi dum )、乳酸乳桿菌(Lactobacillus I act is)、布氏乳桿菌{Lactobacillus buchneri )、長雙歧桿菌(.Bi fi dobac teri um 1ngum )中的一種或幾種。
[0021]所述的芽孢桿菌為:地衣芽孢桿菌QBaci Ilus Ii cheni formi s )、凝結芽孢桿菌{Bacillus枯草芽抱桿菌subtil is)中的一種或幾種。
[0022]所述的MRS液體培養基為:
蛋白腖10.0 g、牛肉膏10.0 g、酵母膏5.0 g、檸檬酸氫二銨2.0 g、葡萄糖20.0 g、吐溫80 1.0ml、乙酸鈉5.0 g、磷酸氫二鉀2.0 g、硫酸鎂0.58 g、硫酸錳0.25 g、瓊脂18.0 g、蒸餾水 1000 ml, ρΗ6.2-6.6。
[0023]所述的芽孢桿菌培養基為:葡萄糖20g、蛋白腖15g、牛肉膏0.5g、氯化鈉5g、硫酸猛lg、磷酸氫二鉀3g、磷酸二氫鉀1.5g、硫酸鎂0.5g、氯化鐵0.1g
碳酸鈣0.lg、蒸餾 水1000ml，116°C高壓滅菌25分鐘。
[0024]實施例2:複合中藥多糖與中藥黃酮的製備
a、按丹參20份、甘草15份、銀杏葉20份、黃芪20份、人參15份、黨參20份、枸杞20份稱取各中藥原料，切碎、洗淨後用冷水浸泡過夜，再加入原料重量15倍的純化水，水浴至900C，並保持在90°C，熬製2小時，熬製過程中每10分鐘攪拌一次；
b、棄去a中藥渣，收集藥液，室溫冷卻後經1000Orpm離心10分鐘，棄去沉澱，收集上
清；
C、將b中上清進行醇沉，沉澱即為粗製中藥多糖，上清即為粗製中藥黃酮；
d、用滅菌純化水洗滌c中粗製中藥多糖，洗滌後用20倍量的42°C滅菌純化水進行溶解，溶解後，按0.5%比例加入活性炭4°C吸附過夜，吸附後經1000Orpm離心10分鐘，棄去沉澱，收集上清；
e、將d中上清液經0.22um濾膜過濾除菌後，進行10倍濃縮，製得中藥多糖濃縮液；
f、將e中中藥多糖濃縮液進行真空冷凍乾燥即得到中藥多糖；
g、將c中粗製中藥黃酮進行減壓真空濃縮，濃縮物用次滅菌注射用水稀釋清洗，再次進行減壓真空濃縮，如此三次後，再經0.22um濾膜過濾除菌，然後經冷凍真空乾燥即得到中藥黃酮。
[0025]該實施例中步驟a中也可以按丹參10份、甘草10份、銀杏葉10份、黃芪10份、人參10份、黨參10份、枸杞10份稱取各中藥原料，也可以按丹參30份、甘草20份、銀杏葉30份、黃芪30份、人參20份、黨參30份、枸杞30份稱取各中藥原料。
[0026]實施例3:凍幹保護劑製備
每1000ml磷酸緩衝液包含以下組分:中藥多糖40g、中藥黃酮30g、維生素組合8g (維生素C 1.6g、維生素E 0.8g、維生素D3 0.6g、維生素BI 2.2g、維生素K 1.6g、維生素B2
1.2g)、明膠5g、蔗糖50g ;或每1000ml磷酸緩衝液包含以下組分:中藥多糖70g、中藥黃酮40g、維生素組合7g (維生素C 1.4g、維生素E 1.75g、維生素D3 0.7g、維生素BI 1.4g、維生素K 0.7g、維生素B2 1.058)、明膠68、蔗糖6(^。所述的中藥多糖和中藥黃酮由實施例2製得。
[0027]製備方法:精確稱取各組分，溶解於1000ml的磷酸緩衝溶液，無菌條件下經
0.22um濾膜過濾除菌，4°C保存備用。
[0028]磷酸緩衝液由氯化鈉6~10g，氯化鉀0.05~0.5g,磷酸氫二鈉I~L 2g,磷酸二氫鉀0.05~0.5g，氯化鈣0.05~0.2g，含6個結晶水的氯化鎂0.05~0.2g溶於1000ml雙蒸水中，經116°C，高壓滅菌30分鐘得到。
[0029]實施例4:泡騰材料的製備
a、酸性材料的製備
按質量份分別稱取檸檬酸15份、乳糖10份、EDTA 15份、亮藍指示劑0.5份，將上述成分充分混合，40~65°C烘乾後過8~12目篩，製得酸性顆粒備用；
b、鹼性材料的製備
按質量份分別稱取碳酸氫鈉15份、乳糖10份、亮藍指示劑1份，將上述成分充分混合，40~65°C烘乾後過8~12目篩，製得鹼性顆粒備用；
C、將上述鹼性材料與酸性材料按1:1混合均勻，並加入0.5~I質量份的左旋咪唑，經Co-60輻射滅菌製得泡騰材料。
[0030]實施例5:—種複合微生態製劑泡騰片的製備方法
a、將實施例1得到的乳酸菌菌液和芽孢桿菌菌液混合均勻，並調整至160億/ml (其中乳酸菌80億/ml、芽孢桿菌80億/ml)，得到益生菌混合菌液。
[0031]b、將a中益生菌混合菌液按1: 1、1:2或1:3 (V:V)比例加入含實施例3製得的凍幹保護劑，分裝後經冷凍真空乾燥製成微生態製劑複合凍乾粉。
[0032]e、泡騰片製備
將按上述製備的凍幹製劑與實施例4中的泡騰材料按2:1-3混合均勻後，用壓片機壓製成片劑，定量分裝。
[0033]試驗例I本發明複合微生態製劑泡騰片的應用 I材料
1.1複合微生態製劑泡騰片 按本發明實施例5製得。
[0034]1.2試驗用雞180日齡海蘭蛋雞1500隻；10日齡三黃肉雞1500隻。
[0035]2 方法
2.1將1500隻180日齡海蘭蛋雞分為兩組，第一組500隻，作為實驗一組，在飼餵全價飼料(參考雞飼養標準NY/33-2004)的同時飼餵本發明複合微生態製劑泡騰片5片；第二組500隻，作為實驗二組，在飼餵全價飼料(參考雞飼養標準NY/33-2004)的同時飼餵本發明複合微生態製劑泡騰片10片；第三組500隻，作為對照組，只飼餵全價飼料。試驗實施期記錄各組產蛋率、蛋重、死淘率、新城疫抗體水平等指標，觀察期為四周。
[0036]2.2將1500隻10日齡三黃肉雞分為兩組，第一組500隻，作為實驗一組，在飼餵全價飼料(參考雞飼養標準NY/33-2004)的同時飼餵本發明複合微生態製劑泡騰片5片；第二組500隻，作為實驗二組，在飼餵全價飼料(參考雞飼養標準NY/33-2004)的同時飼餵本發明複合微生態製劑泡騰片10片；第三組500隻，作為對照組，只飼餵全價飼料。試驗實施期記錄各組平均日增重、死淘率和新城疫抗體水平，觀察期為4周。
[0037]3 結果
3.1崩解時限結果
取I片泡騰片，置盛有200ml水的250ml燒杯中，水溫15_25°C，觀察並記錄完全溶解的時間，結果見表1。
[0038]表1崩解時限檢驗結果
【權利要求】
1.一種複合微生態製劑泡騰片的製備方法，其特徵在於包括以下工藝步驟: 1)益生菌的製備 對乳酸菌和芽孢桿菌分別培養，得到乳酸菌菌液和芽孢桿菌菌液； 2)混合製劑的凍幹 將乳酸菌菌液和芽孢桿菌菌液在無菌條件下混合均勻，調整至所需菌數，得到益生菌混合菌液，將益生菌混合菌液與凍幹保護劑混合均勻，分裝後經冷凍真空乾燥製成混合製劑凍乾粉； 所述的凍幹保護劑為每1000ml磷酸緩衝液中含有中藥多糖30~80g、中藥黃酮20~50g、維生素組合6~10g、明膠4~6g和鹿糖40~70g,所述的中藥多糖和中藥黃酮由丹參、甘草、銀杏葉、黃苗、人參、黨參和枸杞中提取得到； 3)泡騰片製備 將混合製劑凍乾粉與泡騰材料混合均勻，用壓片機壓製成片劑，定量分裝，即得到複合微生態製劑泡騰片。
2.如權利要求1所述的一種複合微生態製劑泡騰片的製備方法，其特徵在於所述的步驟I)中乳酸菌的培養具體包括JfMRS液體培養基預熱至37°C，同時按2%接種量接種乳酸菌種子液，37°C靜置培養18~24小時，收穫菌液至4°C保存備用；芽孢桿菌的培養具體包括:將芽孢桿菌培養基預熱至37°C，同時按I %接種量接種芽孢桿菌種子液，37°C靜置培養18~24小時，收穫菌液至4°C保存備用。
3.如權利要求1或2所述的一種複合微生態製劑泡騰片的製備方法，其特徵在於所述的步驟I)中乳酸菌為兩歧雙歧桿菌(Maci I Ius Ii cheni formi s ) >乳酸乳桿菌(Lactobacillus I act is)、布氏乳桿菌{Lactobacillus buchneri )、長雙歧桿菌(Bi fi dobac teri um 1ngum')中的一種或幾種；芽孢桿菌為地衣芽孢桿菌QBacillusIi cheni formi 5 ) > 凝結芽抱杆舊{Bacillus coagulans ) > 枯草芽抱杆 1MiMacillussubtil is、中的一種或幾種。
4.如權利要求1所述的一種複合微生態製劑泡騰片的製備方法，其特徵在於所述的步驟2)中益生菌混合菌液與凍幹保護劑的體積比為1:1~3。
5.如權利要求1所述的一種複合微生態製劑泡騰片的製備方法，其特徵在於所述的步驟2)中每1000ml磷酸緩衝液中含有中藥多糖40~70g、中藥黃酮30~40g、維生素組合7~9g、明膠5~6g和鹿糖50~60g。
6.如權利要求1或5所述的一種複合微生態製劑泡騰片的製備方法，其特徵在於所述的維生素組合中含有維生素C 20~40%、維生素E 10~30%、維生素D3 5~15%、維生素BI 15~35%、維生素K 10~20%、維生素B2 5~20%。
7.如權利要求1或5所述的一種複合微生態製劑泡騰片的製備方法，其特徵在於所述的中藥多糖和中藥黃酮按以下步驟製得: a、按丹參10~30份、甘草10~20份、銀杏葉10~30份、黃芪10~30份、人參10~20份、黨參10~30份、枸杞10~30份稱取各中藥原料，切碎、洗淨後用冷水浸泡過夜，再加入原料重量15倍的純化水，水浴至90°C，並保持在90°C，熬製2小時，熬製過程中每10分鐘攪拌一次； b、棄去步驟a中藥洛,收集藥液,室溫冷卻後經1000Orpm離心10分鐘,棄去沉澱,收集上清； C、將步驟b中上清進行醇沉，沉澱即為粗製中藥多糖，上清即為粗製中藥黃酮； d、用滅菌純化水洗滌步驟c中粗製中藥多糖，洗滌後用20倍量的42°C滅菌純化水進行溶解，溶解後，按0.5%比例加入活性炭4°C吸附過夜，吸附後經1000Orpm離心10分鐘，棄去沉澱，收集上清； e、將步驟d中上清液經0.22um濾膜過濾除菌後，進行10倍濃縮，製得中藥多糖濃縮液； f、將步驟e中中藥多糖濃縮液進行真空冷凍乾燥即得到中藥多糖； g、將步驟c中粗製中藥黃酮進行減壓真空濃縮，濃縮物用次滅菌注射用水稀釋清洗，再次進行減壓真空濃縮，如此三次後，再經0.22um濾膜過濾除菌，然後經冷凍真空乾燥即得到中藥黃酮。`
【文檔編號】A61P37/04GK103550401SQ201310579858
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年11月19日 優先權日:2013年11月19日
【發明者】張秀文, 李陽, 閆豔麗, 劉雪, 王二先, 盛璐絲 申請人:浙江美保龍生物技術有限公司