中藥雙黃連的環糊精超分子化組合物的製作方法
2023-06-25 09:29:41 1
專利名稱：中藥雙黃連的環糊精超分子化組合物的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種複方中藥提取物，具體涉及一種中藥雙黃連的環糊精超分子化組合物，以及這種組合物的製備方法。
背景技術：
雙黃連為金銀花、黃芩、連翹配伍的複方中藥，目前我國藥典(2000年版)製劑主要有口服液、顆粒劑、栓劑、注射液等劑型。雙黃連具有清熱解毒，清宣風熱的功能功效，臨床用於外感風熱，邪在肺衛，熱毒內盛，證見發熱，微惡風寒或不惡寒，咳嗽氣促，咯痰色黃，咽紅腫痛；急性上呼吸道感染、急性支氣管炎、急性扁桃腺炎、輕型肺炎見上述證候者。大量藥理研究證明，雙黃連有抗炎、抗菌、抗病毒、抗內毒素等諸多藥理活性。目前雙黃連製劑採用傳統的水提醇沉方法提取有效成分，由此製備的製劑產品組成複雜、含量偏低，致使製劑服用量大、質量難以控制，產品質量及藥效穩定性不高。
關於雙黃連複方的環糊精作用研究、包合物製備及各製劑對抗內毒素小鼠致死的試驗研究尚未見報導。
發明內容
本發明屬於中藥現代化的一種新型提取技術方法。系採用β-環糊精與雙黃連有效成分經過分子識別過程形成超分子體(包合物)，從而得到穩定的多成分包合組合物，以簡單的技術過程達到純化中藥活性成分、提高藥用成分含量的目的。以創製療效好、質量可控、製備簡便、服用方便的新型中成藥。
環糊精(特別是β-環糊精)及其衍生物是近年快速發展的新型藥用材料，在改進藥物製劑性能、提高藥物生物利用度等方面有極大的研究及應用價值。利用β-環糊精與藥物的分子識別的獨特性能，我們已成功的進行了單味中藥虎杖的活性成分提取(CN)，但是，應用於成分複雜的中藥複方活性成分的提取分離研究目前尚未見文獻報導。
本發明採用環糊精(例如β-CD)與雙黃連複方藥材在特殊條件下進行相互混合作用，環糊精與多種成分通過分子識別方式超分子化，分子識別的結果使環糊精僅與其中的部分成分形成穩定的超分子體(包合物)，從而將雙黃連有效成分從眾多複雜的成分中提取分離出來，所得的產品是含有多種活性成分的藥物組合物，該組合物保留了雙黃連的活性，成分種類得到簡化，為淺黃色固體粉末，質量約為1/4量的普通方法提取物。
將雙黃連中藥材分別與一定比例的環糊精混合，或在特定條件下，將藥材的水、醇提取液或水提醇沉浸膏與環糊精混合處理，經分離、純化處理得到包合物。該包合物含約10多種不同化合物成分的組合物，含量及組成穩定，具有強的抗內毒素、抗菌、抗炎及其他活性。採用本方法得到的包合物可直接用於製備中藥製劑，也可解包合(去除環糊精)後用於其他製劑。
本發明的具體方案如下。
中藥雙黃連的環糊精超分子化組合物，其組成包括中藥雙黃連和環糊精，所述的中藥雙黃連為藥材幹粉或其粗提物，中藥雙黃連藥材幹粉和環糊精的質量比例為1∶6～1∶3；中藥雙黃連粗提物和環糊精的質量比例為1∶10～1∶3。
以上方案中的中藥雙黃連的組成和其中各藥材的比例，可以採用國家藥典(2000年版)上的處方。其中的比例，是將中藥雙黃連組合物作為一個整體，與環糊精作比較。
所述的環糊精為β-環糊精或或其衍生物羥丙基-β-環糊精或磺丁醚-β-環糊精。本發明推薦採用β-環糊精。
該組合物是將環糊精的水溶液或懸浮體，加入質量比1/6～1/3量的藥材粉、或1/10～1/3量的粗提物，經過混合、攪拌，分離、乾燥得到；其中所述的粗提物是將中藥雙黃連的藥材粉用通常的有機溶劑提取方法或水提乙醇沉澱得到的深色固體物。
以上組合物為包合態組合物，可以作為原料製成片劑、膠囊等口服劑型，也可以解包合後(非包合態組合物)製備其他製劑，製成各種劑型時，按藥物製劑現有技術加入各種輔料。
需要說明的是所述的「包合物經過脫包合後得到的不含有環糊精的多種有效成分的混合物」，與沒有進行環糊精包合以前的組合物是不同的環糊精以分子識別方式與雙黃連複方藥材中特定的結構成分結合形成超分子體(包合物)，包合成分易與非包合成分分離，從而達到提取活性成分的目的，這與傳統的色譜技術和溶液分配提取原理方法顯著不同。本發明對藥物先進行包合再解包合，是技術的關鍵操作而並非多餘的步驟。
所述的中藥雙黃連的環糊精超分子化組合物的製備方法，步驟如下雙黃連藥材的超分子化將處方比例雙黃連藥材粉碎得藥材粉，備用；或者，粉碎得到的藥材粗粉加入乙醇或乙酸乙酯、丁醇或這些溶劑混合的溶劑回流，過濾，蒸除溶劑得到粗提物，備用；或者，粉碎得到的藥材粗粉加入純水回流，過濾，蒸除水至粥狀，加入乙醇，靜置過夜，濾得溶液，蒸除溶劑得到粗提物，備用。
將環糊精與1～30倍的水混合，使成懸浮體或溶液，加入質量比1/6～1/3量的藥材粉、或1/10～1/3量的粗提物，混合、攪拌，過濾，沉澱、水洗或萃取、蒸除溶劑、乾燥即得淺黃色固體包合物(包合態組合物)。
採用非包合態組合物時，增加以下步驟將上述包合態組合物用乙醇，加熱脫包合而得到黃色固體組合物(非包合態組合物)。
以上製備方法更優化和更具體的步驟是雙黃連藥材的超分子化按照通常方法將藥材粉碎、過篩得藥材粉，備用；或者，藥粉用乙醇或乙酸乙酯、丁醇或混合溶劑按照通常的有機溶劑提取方法重複3次第一次10倍量溶劑；第二次8倍量溶劑；第二次5倍量溶劑，合併濾液，蒸除有機溶劑得到粗提物；或者，粉碎得到的藥材粗粉按照通常的水提醇沉方法提取得到粗提物，備用。
將β-環糊精與3～20倍量純水混合，使成懸浮體或溶液，加入質量比1/6～1/3量的藥材粉、或1/10～1/3量的粗提物，充分混合、攪拌5～24小時，過濾，沉澱、水洗或萃取、蒸除溶劑、乾燥即得淺黃色固體包合物(包合態組合物)。進一步將包合物與少量水溼潤並調和成糊狀，加熱條件下逐步加入15倍量乙醇，加熱攪拌回流2小時，冷卻、過濾，殘留固體物再加入10倍量乙醇提取一次，合併濾液蒸除溶劑得固體物。得到的固體物再以10倍量乙醇加熱攪拌，冷卻、過濾，蒸除溶劑即得黃色固體組合物(非包合態組合物)。每100克雙黃連藥材可處理得到約3.23～3.6克黃色非包合態組合物，質量約為溶劑法提取的粗提物的25％量。
本發明的優點藥物組分簡化及含量穩定β-環糊精與中藥材中的特定化學成分形成超分子體(包合物)，包合得到的化學成分數量恆定，各成分相對含量基本穩定。使得所得的組合物的成分明確、質量可控。多波長HPLC指紋圖譜對照分析顯示，經過包合處理得到的黃色固體組合物含有的化學成分與粗提物比較組分明顯減少，減少的主要是水溶性組分，而脂溶性成分得到保留和富集(附圖1；附圖2)。多批製備的樣品質量穩定、化學成分重現性好。
易於製劑加工本發明所得的組合物產品形式有2種，一為包合態組合物(包合物)，為淺黃色固體，可以直接製備口服製劑；另一為非包合態組合物(非包合態組合物)，為黃色固體物，可用於製備口服或非口服製劑。
超分子化組合物活性強體外抗菌試驗、小鼠體內抗炎試驗及對抗小鼠內毒素致死試驗結果顯示，本發明所得的組合物與市售雙黃連口服液具有相同的藥理活性，以生藥劑量的活性相近；但單位質量提取物的活性，超分子化組合物約為雙黃連口服液劑量的1/4，明顯優於市售雙黃連口服液。另外，對比試驗證明，曲組方的各單味藥分別製備的超分子化組合物沒有活性或活性顯著降低。體外抗菌試驗結果見表1，超分子化組合物抗菌活性好。
表1體外抗菌最低濃度(單位mg生藥/ml)
給藥量20g/kg(生藥/體重)的小鼠體內抗炎試驗證明，組合物樣品與雙黃連口服液具有相近的抗炎作用，見表2，小鼠體內抗炎試驗結果(n＝10，P＜0.05)
以組合物試驗樣品和雙黃連口服液40g/kg(生藥/體重)劑量與12mg/kg劑量地塞米松陽性，對抗小鼠內毒素致死試驗結果見表3，組合物活性好於活性雙黃連口服液。
表3對抗小鼠內毒素致死試驗結果
工作原理及工作過程其中包合物、包合物製備是本發明技術的關鍵。
包合原理β-環糊精為外親水內有疏水空腔的七元環狀葡聚糖結構，空間體積較小的疏水性分子或疏水性基團易於進入β-環糊精疏水空腔，除空間因素外，包合的形成還取決於小分子與β-環糊精的分子間範德華力、疏水作用、氫鍵及電荷作用等相互作用，分子間「空間合適及相互作用」的存在是包合作用的基本要素，多種作用下形成穩定包合物的過程又稱為分子識別。分子識別使分子間組裝成為結構能量穩定的超分子體(包合物)。中藥雙黃連的特定分子能夠與β-環糊精形成穩定超分子體(包合物)，包合物與其他未包合分子具有不同的物理特性，因而，採用分子識別的超分子體技術方法可以將雙黃連的組分劃分為包合和非包合兩大類組分，從而達到純化雙黃連有效成分的目的。
通過對包合和非包合兩大類組分的藥理試驗，能夠進行組分的活性篩選。本發明試驗結果，雙黃連與β-環糊精形成的包合物部分是雙黃連的活性部分，而非包合部分基本沒有活性。
電子能譜實驗表明，與β-環糊精結合的雙黃連活性成分包合物的表觀穩定常數＞3000M-1，而非包合部分的表觀穩定常數＜300M-1。較大的穩定常數顯示包合部分能夠與β-環糊精形成包合物，通常條件下不能夠被溶劑解離，固體下加熱也不發生離解。從而可以與其他未包合分子分離。
目前已有眾多文獻報導關於雙黃連活性成分的研究，採用CAChe 6.1.1計算機軟體系統，模擬計算了雙黃連活性成分的代表性化合物與β-環糊精形成包合物的能量變化，見表4，雙黃連活性成分與β-環糊精的包合有較大的穩定化能，表明這些活性成分都能夠與β-環糊精形成穩定的包合物。
表4雙黃連活性成分/β-環糊精包合能量
發明創造的發明點β-環糊精與雙黃連複方藥材作用，β-環糊精以分子識別方式與特定的結構成分結合形成超分子體(包合物)，包合成分易與非包合成分分離，從而達到提取活性成分的目的，這與傳統的色譜技術和溶液分配提取原理方法顯著不同。
雙黃連複方藥材超分子化所得的組合物為中藥多組分混合物，其成分是複方中各單味藥的綜合作用結果。
超分子化組合物組成含量穩定、雜質少，外觀好，製備方法簡單、保持了原方活性。
圖1為HPLC指紋圖譜對照圖1.粗提物 2.包合組合物 3.雙黃連口服液 4.未包合組分(色譜條件色譜柱(Lichrospher C18，4.6mm×250mm，5μm)；流動相甲醇-水梯度(0～6min，1～11％CH3OH；6～8min，11～23％CH3OH；8～26min，23～50％CH3OH；26～50min，50～100％CH3OH；60min後，100％CH3OH)；流速1.0ml/min；柱溫25℃；檢測波長280nm；量程0.05AUFS；進樣量20μL)；
圖2為HPLC指紋圖譜對照圖1.粗提物 2.包合組合物 3.口服液雙黃連 4.未包合組分(色譜條件色譜柱(Lichrospher C18，4.6mm×250mm，5μm)；流動相甲醇-水梯度(0～6min，1～11％CH3OH；6～8min，11～23％CH3OH；8～26min，23～50％CH3OH；26～50min，50～100％CH3OH；60min後，100％CH3OH)；流速1.0ml/min；柱溫25℃；檢測波長254nm；量程0.05AUFS；進樣量20μL)；具體實施方式
實施例1，包合按通常方法將中藥雙黃連藥材洗淨晾乾粉碎得藥粉。將β-環糊精與20倍量純水混合，使成懸浮體或溶液，加入相對於β-環糊精質量比1/3量的藥材粉，充分混合後浸泡過夜，加熱60℃條件下攪拌24小時，熱過濾，濾液冷卻，藥渣再以β-環糊精加水加熱60℃提取一次，過濾，合併濾液，冷卻，過濾，所得固體物水洗2次、60℃下乾燥即得淺色固體物(包合組合物)。
脫包合將包合物與少量水調和成糊，加熱70℃下逐步加入15倍量乙醇，然後回流2小時，冷卻、過濾，殘留固體物再加入10倍量乙醇提取一次，合併濾液，蒸除溶劑得固體物。
脫包合物的精製得到的脫包合物固體粗品以10倍量乙醇60℃保溫攪拌，冷卻、過濾，濾液蒸除溶劑即得非包合態的黃色固體組合物。
實施例2，中藥雙黃連藥材粉用通常的乙醇提取方法製得深色提取物(粗提物)。將粗提物1份與10份β-環糊精和30份純水混合，60℃條件下攪拌8小時，冷卻，過濾，固體物用水洗2次、60℃下乾燥即得淺色固體物(包合組合物)。
淺色包合組合物經過脫包合、精製製得非包合態的黃色固體組合物。
實施例3，中藥雙黃連藥材粉用通常的水提醇沉法提取得粗提物。將粗提物1份與10份β-環糊精和30份純水混合，60℃條件下攪拌8小時，冷卻，過濾，固體物用水洗2次、60℃下乾燥即得淺色固體物(組合物)。
淺色包合組合物經過脫包合、精製製得非包合態的黃色固體組合物。
實施例4，與實施例1基本相同，但是有如下改變藥材粉的加入量是相對於β-環糊精為質量比1/6的量；環糊精是和3份純水混合；加入物料後加熱60℃條件下攪拌8小時。
實施例5，與實施例2基本相同，但是有如下改變將粗提物1份與3份β-環糊精和10份純水混合製得包合物。
實施例6，與實施例2基本相同，但是用丁醇與藥粉混合回流提取2次，後處理獲得粗提物。
實施例7，與實施例2基本相同，但是用乙酸乙酯與藥粉混合回流提取2次，後處理獲得粗提物。
實施例8，與實施例2基本相同，但是回流藥粉採用乙醇和丁醇的混合溶劑。
實施例9，與實施例2基本相同，但是回流藥粉採用乙醇與乙酸乙酯的混合溶劑。
實施例10，與實施例3基本相同，但是將粗提物1份與5份β-環糊精和15份純水混合製得包合物。
實施例11，與實施例2基本相同，但是在60℃條件下攪拌24小時製得包合物。
實施例12，與實施例3基本相同，但是在60℃條件下攪拌24小時製得包合物。
實施例13、14，與實施例1或2基本相同，但是有如下改變所採用的環糊精為羥丙基-β-環糊精；環糊精是和1份純水混合實施例15、16，與實施例1或2基本相同，但是有如下改變所採用的環糊精為磺丁醚-β-環糊精。
實施例16、17，與實施例1或2基本相同，但是有如下改變所製成的包合態組合物，直接作為原料製成片劑、膠囊等口服劑型，去掉解包合步驟。
權利要求
1.一種中藥雙黃連的環糊精超分子化組合物，其組成包括中藥雙黃連和環糊精，所述的中藥雙黃連為藥材幹粉或其粗提物，中藥雙黃連藥材幹粉和β-環糊精的質量比例為1∶6～1∶3；中藥雙黃連粗提物和環糊精的質量比例為1∶10～1∶3。
2.按照權利要求1所述的中藥雙黃連的環糊精超分子化組合物，其特徵在於所述的環糊精為β-環糊精或其衍生物羥丙基-β-環糊精或磺丁醚-β-環糊精。
3.按照權利要求1或2所述的中藥雙黃連的環糊精超分子化組合物，其特徵在於所述的超分子化組合物是由包合物經過脫包合後得到的不合有環糊精的雙黃連有效成分的混合物。
4.一種權利要求1所述的中藥雙黃連的環糊精超分子化組合物的製備方法，步驟如下雙黃連藥材的超分子化將雙黃連藥材粉碎、過篩得藥粉，備用；或者，藥粉用無毒或低毒有機溶劑回流，過濾，蒸除有機溶劑得到粗提物；將環糊精與1～30倍的水混合，使成懸浮體或溶液，加入質量比1/6～1/3量的藥材粉、或1/10～1/3量的粗提物，混合、攪拌，過濾，水洗或萃取、蒸除溶劑、乾燥即得淺色固體包合組合物。
5.按照權利要求4所述的中藥雙黃連的環糊精超分子化組合物的製備方法，其特徵在於，所述各步驟的具體操作是雙黃連藥材的超分子化按照通常方法將藥材粉碎、過篩得藥粉，備用；或者，藥粉用乙醇、乙酸乙酯、丁醇等無毒或低毒有機溶劑回流，過濾，蒸除有機溶劑得到粗提物；或者，藥粉用純水回流，過濾，蒸除水至粥狀，加入乙醇，靜置過夜，濾得溶液，蒸除溶劑得到粗提物，備用。將β-環糊精與3-20倍量純水混合，使成懸浮體或溶液，加入質量比1/6～1/3量的藥材粉、或1/10～1/3量的粗提物，充分混合、攪拌8-24小時，過濾，水洗或萃取、蒸除溶劑、乾燥即得淺色固體組合物。
6.按照權利要求5所述的中藥雙黃連的環糊精超分子化組合物的製備方法，其特徵在於，還增加有以下步驟將所述的包合態組合物與少量水調和成糊狀，加熱條件下逐步加入乙醇，加熱回流2小時，冷卻、過濾，殘留固體物再加入10倍量乙醇提取一次，合併濾液蒸除溶劑得固體物，得到的固體物再以10倍量乙醇加熱攪拌，冷卻、過濾，蒸除溶劑即得黃色固體非包合組合物。
7.按照權利要求4或5或6所述的中藥雙黃連的環糊精超分子化組合物的製備方法，其特徵在於，所述的無毒或低毒有機溶劑為乙醇、乙酸乙酯、丁醇，或其中兩種或兩種以上的混合物。
全文摘要
中藥雙黃連的環糊精超分子化組合物，其組成包括中藥雙黃連和環糊精，中藥雙黃連為藥材幹粉或其粗提物，中藥雙黃連藥材幹粉和β－環糊精的質量比例為1∶6～1∶3；中藥雙黃連粗提物和環糊精的質量比例為1∶10～1∶3。所述的環糊精為β－環糊精或其衍生物羥丙基－β－環糊精或磺丁醚－β－環糊精。優化方案是由包合物經過脫包合後得到的不含有環糊精的多種有效成分的混合物。本申請還提供了該組合物的製備方法。本發明利用β－環糊精以分子識別方式與特定的結構與藥物成分結合形成超分子體包合物，包合成分易與非包合成分分離，從而達到提取活性成分的目的，這與傳統的色譜技術和溶液分配提取原理方法顯著不同。
文檔編號A61P31/12GK1720969SQ200510040908
公開日2006年1月18日 申請日期2005年7月6日 優先權日2005年7月6日
發明者任勇, 董祥玉, 殷志敏 申請人:南京師範大學