一種提高河豚體內河豚毒素含量的養殖飼料的製作方法
2023-06-14 23:13:36
本發明涉及水產養殖飼料技術領域，具體涉及一種提高河豚體內河豚毒素含量的養殖飼料。
背景技術：
河豚魚營養豐富，味道鮮美，有長江第一鮮之稱，河豚魚的食用在中國、日本等亞洲國家有著悠久的歷史，並逐漸形成特有的河豚飲食文化，河豚除了肉質鮮美為人所愛之外，其體內含有的河豚毒素也為眾人所知，河魨毒素是氨基全氫喹唑啉型化合物，是自然界中所發現的毒性最大的神經毒素之一，主要集中在卵巢、肝臟、血液中，其次是眼睛、鰓和皮膚中，河豚的卵巢和肝臟為河豚內臟中第二大劇毒臟器，河豚毒素具有鎮痛、降壓、抗心律失常、局部麻醉、戒毒及抑制腫瘤的功效，而且能特異性阻滯鈉離子通道，在生理學研究中，已經成為機制研究的工具藥，具有極高的經濟價值和醫療價值。
目前人工養殖河豚大多供於食用，河豚飼料一般是從提高河豚可食用部分品質、河豚養殖成活率、降低河豚體內毒素積累方面入手。
技術實現要素：
本發明提供一種提高河豚體內河豚毒素含量的養殖飼料，以提高河豚體內河豚毒素積累為目的，得到的河豚中河豚毒素含量較高，及其適用醫學、提取、試驗、製藥領域使用。
本發明一種提高河豚體內河豚毒素含量的養殖飼料，該河豚養殖飼料在製作時，
向質量濃度為3-5%鹽水中加入鹽水重量0.031-0.033倍的硫胺、0.005-0.008倍的過磷酸鈣、0.023-0.025倍的啤酒酵母、1-2倍的麥芽糖混合均勻，調節PH至7.2，接種溶藻弧菌，接種量為1.8-2%，接種新鮮活化後的小球藻藻種，接種量為30-40%，在溫度為20-23℃、光強度為8000-9000LX的環境下，培養30-35天，獲取小球藻；
將小球藻冷凍乾燥至含水量低於8%，與魚粉、紅血蟲、豆粕按1:3:1:1的重量比混合得到河豚養殖飼料。
該河豚飼料用於提高河豚體內河豚毒素的積累量。
魨毒素是寄生的產毒菌（海洋中的弧菌），在生長過程中所分泌並積累的一種毒素，其寄生在小球藻和小海螺上，由於河魨在生長過程中攝食大量帶巨毒的小球藻和小海螺，這些毒素經食物鏈作用傳遞到河魨體內。
本發明河豚飼料在製作時，依舊在小球藻培育過程中接種溶藻弧菌使溶藻弧菌寄生在小球藻上實現分泌和積累毒素，在常規小球藻培養液中，加入啤酒酵母和麥芽糖，能夠顯著提高溶藻弧菌的活性，從而提高溶藻弧菌總分泌和毒素積累量，得到的小球藻添加於魚粉、紅血蟲、豆粕中作為河豚養殖飼料，能夠顯著提高河豚體內河豚毒素的含量，提高河豚醫用價值。
具體實施方式
以下結合具體實施例對本發明進行說明，
實施例1、
向質量濃度為3%鹽水中加入鹽水重量0.031倍的硫胺、0.005倍的過磷酸鈣、0.023倍的啤酒酵母、1倍的麥芽糖混合均勻，調節PH至7.2，接種溶藻弧菌，接種量為1.8%，接種新鮮活化後的小球藻藻種，接種量為30%，在溫度為20℃、光強度為8000LX的環境下，培養30天，獲取小球藻；
將小球藻冷凍乾燥至含水量低於8%，與魚粉、紅血蟲、豆粕按1:3:1:1的重量比混合得到河豚養殖飼料。
將得到的河豚養殖飼料作為河豚日常飼料飼餵河豚，連續飼餵1個月，
取隨機撈取養殖塘內河豚，每畝撈取80隻，每隻取河豚魚肝組織，剪碎並研磨成糊狀，精確稱取5g於離心管內，加15mL1%的乙酸，於沸水浴中加熱並不斷攪拌10分鐘，冷卻至室溫後，以8000r/min的速率離心15分鐘，保留上清液1，殘渣繼續用8mL的0.1%乙酸反覆攪拌後於沸水浴中加熱5分鐘，以8000r/min的速率離心15分鐘，保留上清液2，將上清液1、2合併，加入等體積乙醚反覆洗脫2次，後經減壓法濃縮去除其中殘存乙醚，置於25mL的容量瓶中，用1mol/LNaOH調節pH至6.5-7.0，再用PBS定容至25mL，立即用於檢測，此時提取液1mL相當於0.2g樣品。
用ELISA法檢測河豚魚肝組織樣品中河豚毒素的含量：
當樣品重量為5g、樣品提取液為25mL時，河豚毒素的含量（μg/g）=CX/200；其中C為酶標板上測得的河豚毒素濃度（ng/mL），根據標準曲線求得，X為樣品提取液稀釋倍數。
檢測得到河豚肝組織中河豚毒素平均含量為：48.66（μg/g）。
對照組在實施例1的基礎上取消添加啤酒酵母、麥芽糖，得到的河豚養殖飼料作為河豚日常飼料飼餵河豚，連續飼餵1個月，檢測河豚肝組織中河豚毒素平均含量為：4.53（μg/g）。
實施例2、
向質量濃度為4%鹽水中加入鹽水重量0.032倍的硫胺、0.0065倍的過磷酸鈣、0.024倍的啤酒酵母、1.5倍的麥芽糖混合均勻，調節PH至7.2，接種溶藻弧菌，接種量為1.9%，接種新鮮活化後的小球藻藻種，接種量為35%，在溫度為22℃、光強度為8500LX的環境下，培養32天，獲取小球藻；
將小球藻冷凍乾燥至含水量低於8%，與魚粉、紅血蟲、豆粕按1:3:1:1的重量比混合得到河豚養殖飼料。
將得到的河豚養殖飼料作為河豚日常飼料飼餵河豚，連續飼餵1個月，
處理結束後，取隨機撈取塘內河豚，每畝撈取80隻，每隻取河豚魚肝組織，剪碎並研磨成糊狀，精確稱取5g於離心管內，加15mL1%的乙酸，於沸水浴中加熱並不斷攪拌10分鐘，冷卻至室溫後，以8000r/min的速率離心15分鐘，保留上清液1，殘渣繼續用8mL的0.1%乙酸反覆攪拌後於沸水浴中加熱5分鐘，以8000r/min的速率離心15分鐘，保留上清液2，將上清液1、2合併，加入等體積乙醚反覆洗脫2次，後經減壓法濃縮去除其中殘存乙醚，置於25mL的容量瓶中，用1mol/LNaOH調節pH至6.5-7.0，再用PBS定容至25mL，立即用於檢測，此時提取液1mL相當於0.2g樣品。
用ELISA法檢測河豚魚肝組織樣品中河豚毒素的含量：
當樣品重量為5g、樣品提取液為25mL時，河豚毒素的含量（μg/g）=CX/200；其中C為酶標板上測得的河豚毒素濃度（ng/mL），根據標準曲線求得，X為樣品提取液稀釋倍數。
檢測得到河豚肝組織中河豚毒素平均含量為：54.35μg/g）。
對照組在實施例2的基礎上取消添加啤酒酵母、麥芽糖，得到的河豚養殖飼料作為河豚日常飼料飼餵河豚，連續飼餵1個月，檢測河豚肝組織中河豚毒素平均含量為：4.538（μg/g）。
實施例3、
向質量濃度為5%鹽水中加入鹽水重量0.033倍的硫胺、0.008倍的過磷酸鈣、0.025倍的啤酒酵母、2倍的麥芽糖混合均勻，調節PH至7.2，接種溶藻弧菌，接種量為2%，接種新鮮活化後的小球藻藻種，接種量為40%，在溫度為23℃、光強度為9000LX的環境下，培養35天，獲取小球藻；
將小球藻冷凍乾燥至含水量低於8%，與魚粉、紅血蟲、豆粕按1:3:1:1的重量比混合得到河豚養殖飼料。
將得到的河豚養殖飼料作為河豚日常飼料飼餵河豚，連續飼餵1個月，
處理結束後，取隨機撈取塘內河豚，每畝撈取80隻，每隻取河豚魚肝組織，剪碎並研磨成糊狀，精確稱取5g於離心管內，加15mL1%的乙酸，於沸水浴中加熱並不斷攪拌10分鐘，冷卻至室溫後，以8000r/min的速率離心15分鐘，保留上清液1，殘渣繼續用8mL的0.1%乙酸反覆攪拌後於沸水浴中加熱5分鐘，以8000r/min的速率離心15分鐘，保留上清液2，將上清液1、2合併，加入等體積乙醚反覆洗脫2次，後經減壓法濃縮去除其中殘存乙醚，置於25mL的容量瓶中，用1mol/LNaOH調節pH至6.5-7.0，再用PBS定容至25mL，立即用於檢測，此時提取液1mL相當於0.2g樣品。
用ELISA法檢測河豚魚肝組織樣品中河豚毒素的含量：
當樣品重量為5g、樣品提取液為25mL時，河豚毒素的含量（μg/g）=CX/200；其中C為酶標板上測得的河豚毒素濃度（ng/mL），根據標準曲線求得，X為樣品提取液稀釋倍數。
檢測得到河豚肝組織中河豚毒素平均含量為：58.02μg/g）。
對照組在實施例2的基礎上取消添加啤酒酵母、麥芽糖，得到的河豚養殖飼料作為河豚日常飼料飼餵河豚，連續飼餵1個月，檢測河豚肝組織中河豚毒素平均含量為：4.54（μg/g）。