新型噬菌體和包含所述噬菌體的抗菌組合物的製作方法

2023-06-15 01:09:36

專利名稱：新型噬菌體和包含所述噬菌體的抗菌組合物的製作方法
技術領域：
本發明涉及新型噬菌體，更具體地，本發明涉及對引起禽傷寒(FowlTyphoid)的 雞沙門氏菌(Salmonella Gallinarum, SG)和引起雞白痢(Pullorumdisease)的雞白痢沙 門氏菌(Salmonella Pullorum,SP)具有特異殺菌活性的噬菌體。另外，本發明還涉及包含 作為活性成分的所述噬菌體的組合物，其用於預防或治療由雞沙門氏菌或雞白痢沙門氏菌 引起的傳染病(infectiousdiseases)。另外，本發明還涉及包含作為活性成分的所述噬菌 體的用於家畜的飼料和飲用水、消毒劑和清潔劑。
背景技術：
沙門氏菌是腸桿菌科(Enterobacteriaceae)的一個屬，其特徵為革蘭氏陰性、 兼性厭氧、無芽孢形成、杆狀細菌且大多數菌株均通過鞭毛活動。沙門氏菌基因組的平 均GC含量為50-52 %，這與大腸桿菌(Escherichia coll)和志賀氏菌(Shigella)相 似。沙門氏菌屬是在家畜和人中引起傳染的病原微生物。作為沙門氏細菌的一種，腸道 沙門氏菌(Salmonella enterica)具有多個血清型，包括沙門氏菌雞血清型(Salmonella Gallinarum)、沙門氏菌雞白痢血清型(Salmonella Pullorum)、沙門氏菌鼠傷寒血清型 (Salmonella Typhimurium)、沙門氏菌腸炎血清型(Salmonella Enteritidis)、沙門氏菌 傷寒血清型(SalmonellaTyphi)、沙門氏菌豬霍亂血清型(Salmonella Choleraesuis)和 沙門氏菌德爾卑血清型(Salmonella derby) (Bopp CA, Brenner Fff,Wells JG, Strokebine ΝΑ. Escherichia, Shigella, Salmonella. In Murry PR, Baron EJ, et al eds Manual ofclinical Microbiology. 7th ed. Washington DC American Society forMicrobiology 1999 ；467-74 ；Ryan KJ. Ray CG(editors) (2004)。其中，鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella Typhimurium)和腸炎沙門氏菌(Salmonella Enteritis)是人和動物二者的病原體，傷 寒沙門氏菌(Salmonella Typhi)是特異於人的病原體，豬霍亂沙門氏菌(Salmonella Choleraesuis)和德爾卑沙門氏菌(Salmonelladerby)是特異於豬的病原體，雞沙門氏菌 和雞白痢沙門氏菌是特異於禽的病原體。所述各種血清型都會在相應的物種中引起疾病， 對農民和/或消費者產生嚴重的不良影響。由沙門氏菌引起的家禽疾病為禽傷寒(FT)，其由雞沙門氏菌(下文稱為SG)病 原體引起。禽傷寒(FT)是家禽(如雞和鴨)的敗血症，其病程可能為急性或慢性的，並伴 有高死亡率。最近報導禽傷寒常常發生在歐洲、南美洲、非洲和東南亞，並且其破壞性逐漸 增加。韓國自1992年開始有FT爆發的報導，FT在褐色蛋雞中引起的經濟損失非常嚴重 (Kwon Yong-Kook. 2001 annualreport on avian diseases, information publication by Naional Veterinary Research& Quarantine Service. March,2001 ；Kim Ae-Ran et al.， The prevalence ofpullorum disease-fowl typhoid in grandparent stock and parent stock in Korea，2003，Korean J Vet Res (2006) 46 (4) :347 353)。雞白痢也是由一種沙 門氏細菌，即雞白痢沙門氏菌(下文稱為SP)引起的。雞白痢發生在任何年齡或季節，但雛 雞特別容易感染此病。上世紀期間，雞白痢是通過雞蛋在世界和韓國的1-2周齡或更年幼雛雞中傳播的嚴重疾病。在上世紀八十年代，其發病率急劇降低。然而，在九十年代其發病率又開始增加。在韓國，禽傷寒和雞白痢的爆發從上世紀九十年代開始增加，給農民造成了經濟 損失。為此，儘管其功效尚不確定，但已經從2004年開始在用於烤焙的雞(broiler)中 使用減毒活 SG 疫苗以預防禽傷寒(Kim Ae-Ran et al. , Theprevalence of puIlorum disease-fowl typhoid in grandparent stock and parentstock in Korea,2003,Korean J Vet Res (2006) 46 (4) :347 353)，然而由於存在由雞蛋傳播傳染病的風險，不允許活疫 苗用於蛋雞。遺憾的是，與禽傷寒不同，對於雞白痢仍沒有在商業上可行的預防策略。因此， 迫切需要預防禽傷寒和雞白痢的新方法。噬菌體是僅感染並破壞細菌，並且僅能在宿主細菌內進行自我複製的一種特殊 類型的病毒。噬菌體由被蛋白質外殼包圍的核酸遺傳物質(單鏈或雙鏈DNA或RNA)構 成。噬菌體有三種基本的結構類型有尾部的二十面頭部、無尾部的二十面頭部和絲狀 體。根據其形態結構和遺傳物質對噬菌體進行分類。根據其尾部結構，具有二十面體頭 部和作為遺傳物質的線狀雙鏈DNA的噬菌體被分成三個科肌尾噬菌體科(Myoviridae)、 長尾噬菌體科(Siphoviridae)和短尾噬菌體科(Podoviridae)，其特徵分別在於收縮性 尾部、無收縮性的長尾和無收縮性的短尾。可以根據其頭部形狀和成分以及外殼的存在 對具有無尾部的二十面體頭部和並以RNA或DNA為遺傳物質的噬菌體進行分組。根據其 大小、形狀、外殼和細絲(filament)成分對以DNA為其遺傳物質的絲狀噬菌體進行分組 (H. W. Ackermann. Frequency of morphologicalphage descriptions in the year 2000 ； Arch Virol(2001) 146 843~857 ；ElizabethKutter et al. Bacteriophages biology and application ；CRC press)。在感染過程中，噬菌體附著在細菌上，並將其遺傳物質注入到所 述細胞中。之後，噬菌體進入兩個生命周期之一裂解性或溶源性周期。裂解性噬菌體接 管所述細胞的運轉以製備噬菌體組分，然而使細胞破裂或裂解，以釋放新的噬菌體顆粒。溶 源性噬菌體將其核酸併入到宿主細胞的染色體中，將其作為一個單元進行複製，而不破壞 所述細胞。在某種情況下，溶源性噬菌體可以被誘導進入裂解周期(Elizabeth Kutter et al.Bacteriophages biology and application ;CRCpress)0在發現噬菌體後，人們最初對於其在傳染病治療中的應用給予了極大地信心。然 而，在廣譜抗生素得到廣泛使用後，噬菌體因具有特異靶標譜而被認為是不必要的。但 是，抗生素的誤用和濫用使得人們對抗生素耐性和食品中殘留抗生素的不良影響的擔憂 增力口(Cislo，M et al. Bacteriophage treatmentof suppurative skin infections. Arch Immunol. Ther. Exp. 1987. 2 :175—183 ；Kimsung-hun et al.，Bacteriophage ；New Alternative Antibiotics, biological researchinformation center，BRIC)。特另lj地，力口 入到動物飼料以促進生長的抗生素類生長促進劑(AGP)誘導抗生素耐性，因此最近提出禁 止使用抗生素類生長促進劑(AGP)的禁令。歐盟從2006年開始禁止使用所有抗生素類促 生長劑(AGP)。韓國已經禁止使用一些AGP，並且正在考慮限制使用所有的AGP。這些逐漸增加的對抗生素使用的擔憂已經使人們再度提起對作為抗生素替代物 的噬菌體興趣再次興起。在美國專利第6485902號中公開了控制大腸桿菌0157:H的7種 噬菌體(2002年申請-Use of bacteriophages for control ofEscherichia coli 0157)。 在美國專利第6，942，858號中公開了用於控制多種微生物的兩種噬菌體(2005年由Nymox串i青—Compositions containingbacteriophages and method of using bacteriophages to treat infections) 0許多公司已經積極嘗試利用噬菌體開發各種產品。BI food system(歐洲)開發了用於預防由單核細胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)引 起的食物中毒的食品添加劑，命名為Listex-PlOO，這是得到美國FDA批准的首個噬菌體產 品。研發的產品LMP-102也是基於噬菌體的抗單核細胞增生李斯特氏菌的食品添加劑，並 被批准GRAS (公認安全)級。在2007年，OmniLytics生產的基於噬菌體的洗劑被開發用 於預防屠宰過程中牛肉的大腸桿菌0157汙染，並得到美國農業部(USDA)的食品安全監督 服務局(FSIS)的批准。在歐洲,產胞梭菌(Clostridium sporogenes)噬菌體NCIMB 30008 和Clostridiumtyrobutiricum噬菌體NCIMB 30008分別在2003年和2005年被註冊為抗 梭菌的飼料防腐劑。這些研究表明，目前正在對作為將噬菌體作為抗人畜共患病病原體的 抗生素而用於家畜產品中進行深入的研究。

發明內容
技術問題為了解決由於廣譜抗生素的使用引起的問題，本發明人從自然源中分離了新型沙門氏菌噬菌體，並鑑定了其形態、生化特性和遺傳特性。本發明人發現，所述噬菌體對雞沙 門氏菌(SG)和雞白痢沙門氏菌(SP)具有特異殺菌活性而不影響有益細菌，並且具有良好 的耐酸性、耐熱性和耐乾燥性，並因此除了可應用於能夠用於預防或治療由雞沙門氏菌或 雞白痢沙門氏菌引起的傳染病(特別是禽傷寒或雞白痢)的組合物中外，還可以應用於各 種控制沙門氏菌的產品中，例如家畜飼料和飲用水、消毒劑和清潔劑，從而完成本發明。技術方案本發明的一個目的是提供對雞沙門氏菌或雞白痢沙門氏菌具有特異殺菌活性的 新型噬菌體。本發明的另一個目的是提供用於預防和治療由雞沙門氏菌和雞白痢沙門氏菌引 起的傳染病的組合物，該組合物包含作為活性成分的所述噬菌體。本發明的另一個目的是提供包含作為活性成分的所述噬菌體的家禽飼料和飲用 水。本發明的另一個目的是提供包含作為活性成分的所述噬菌體的消毒劑和清潔劑。本發明的另一個目的是提供利用包含作為活性成分的所述噬菌體的組合物來預 防和治療由雞沙門氏菌或雞白痢沙門氏菌引起的傳染病(禽傷寒或雞白痢)的方法。有益效果本發明的新型噬菌體對雞沙門氏菌和雞白痢沙門氏菌具有特異抗菌活性，該噬菌 體還具有優異的耐酸性、耐熱性和耐乾燥性，因此，其可用於預防和治療由雞沙門氏菌或雞 白痢沙門氏菌引起的傳染病(包括禽傷寒或雞白痢)，還可用於控制雞沙門氏菌和雞白痢 沙門氏菌。


圖1為CDCJl的電子顯微鏡照片，其中OCJl符合長尾噬菌體科的形態型，特徵為 等軸衣殼(isometric capsid)和非收縮性長尾；
圖2為所分離的噬菌體OCJl的SDS-PAGE結果，其中顯示了所述噬菌體的蛋白圖 譜，包括約38kDa和49kDa的主要蛋白和約8kDa、17kDa、80kDa和IOOkDa的其它蛋白(參 見作為標記的藍色plus 2預染標準物(Invitrogen))；圖3為所分離的噬菌體OCJl的PFGE結果，其顯示全基因組大小約為61kbp (使用5kbp DNA大小標準物(Bio-rad)作為大小標記)；圖4為利用OCJl基因組DNA的各對引物對進行PCR的結果，其中，A、B、C和D 泳道(A 利用引物對SEQ ID Nos. 6和7進行PCR擴增，B 利用引物對SEQ ID Nos. 10和 11進行PCR擴增，C 利用引物對SEQ ID Nos. 8和9進行PCR擴增，D 利用引物對SEQ ID Nos. 12和13進行PCR擴增)分別具有約660bp、1. 3kbp、670bp和1. 8kbp的PCR產物；圖5為噬菌體OCJl的一步式培養試驗的結果，其中(A 雞沙門氏菌，B 雞白痢沙 門氏菌)所述噬菌體在雞沙門氏菌和雞白痢沙門氏菌中具有102或更大的裂解量(burst size)ο圖6為噬菌體OCJl的功效試驗(清除試驗，clearing assay)的結果，其中(A 雞沙門氏菌，B:雞白痢沙門氏菌，MOI(感染倍數)每個宿主細胞的噬菌體接種數)由於噬 菌體OCJl具有較高效率的感染性，其能夠有效裂解宿主細胞。圖7為噬菌體OCJl的耐酸性試驗結果，顯示噬菌體在pH 2. 1、2. 5、3. O、3. 5、4. O、 5. 5,6. 4,6. 9,7. 4,8. O和9. O時存活噬菌體的數量，其中，與對照相比，噬菌體。CJ1在pH 2. 5時仍保留其活性，但在pH 2. 1時完全喪失其活性。圖8為噬菌體OCJl的耐熱性試驗結果，表明在37°C、45°C、53°C、60°C、70°C和 80°C和0、10、30、60、120分鐘的時間點時存活噬菌體的數量，其中，即便在70°C溫育2小時 後噬菌體OCJl依然保持其活性，但在80°C暴露10分鐘後其活性下降，但仍然具有活性； 禾口圖9為利用加速真空乾燥器(SVD)在60°C持續120分鐘進行的噬菌體OCJl耐幹 燥性試驗的結果，其中，比較乾燥前後病毒滴度的變化從而檢測其相對穩定性，顯示其活性 降低至IO2。最佳實施方式一方面，本發明涉及對雞沙門氏菌或雞白痢沙門氏菌具有特異殺菌活性的新型噬 菌體。本發明的噬菌體符合長尾噬菌體科的形態型，其特徵在於等軸衣殼和非收縮性長 尾，並且全基因組大小為61kbp，主要結構蛋白的大小為38kDa和49kDa。本發明的噬菌體具有可選擇感染雞沙門氏菌和雞白痢沙門氏菌的能力，即具有這 些細菌的種特異性。此外，本發明噬菌體在遺傳上具有大小約為61kbp的全基因組，並且所述全基因 組可包含由SEQ ID Nos. 1-5所示的核酸分子。本文所使用的術語「核酸分子，，包括DNA (gDNA和cDNA)和RNA分子，作為核酸的 基本結構單元，術語「核苷酸」包括天然核苷酸及其糖或鹼基被修飾的類似物。此外，本發明的噬菌體具有耐酸性和耐熱性的生化特性，其中，所述噬菌體可以在 PH 2. 5-pH 9. O的寬範圍pH環境中和37°C _70°C的高溫環境中穩定存活。此外，本發明的 噬菌體還具有耐乾燥性，從而即使在高溫乾燥後(60°C持續120分鐘)仍能穩定保持其存活性。這種耐酸性、耐熱性和耐乾燥性的特性也允許本發明的噬菌體在各種溫度和PH環境下 生產用於由SG和SP引起的家禽疾病的預防性或治療性組合物，以及包含作為活性成分的 所述噬菌體的其它產品。
本發明的發明人收集了雞屠宰場的汙水樣品，並從其中分離出對SG和SP具有特 異殺菌活性和上述性質的本發明噬菌體，將其命名為噬菌體ocjl，並於2008年10月24日 保藏在韓國微生物培養中心，保藏號為KCCM10969P。根據本發明的具體實施例，本發明人收集了雞屠宰場的汙水樣品以分離裂解宿主 細胞SP的噬菌體，並且證實所述噬菌體確實能夠特異性地裂解SG和SP。本發明人還進一 步在電子顯微鏡下觀察了所述噬菌體(OCJl)，發現其屬於長尾噬菌體科的形態型(圖1)。本發明人還分析了所述噬菌體OCJl的蛋白圖譜，發現了大小約為38kDa和49kDa 的主要結構蛋白。還分析了所述噬菌體OCJl的全基因組大小，發現其全基因組大小約為61kbp。對 其遺傳特性的分析結果表明，所述噬菌體在全基因組內包含SEQ IDNOs. 1-5所示的核酸分 子。在這些結果的基礎上，比較與其它種的遺傳相似性。結果發現所述噬菌體與已知噬菌 體的遺傳相似性非常低，這表明所述噬菌體是新型噬菌體。更具體地，使用OCJl特異性引 物對，例如SEQ ID Nos. 6禾口 7、10禾口 11、8和9、12和13、14和15、16和17以及18禾口 19進 行 PCR。發現每種 PCR 產物的大小為 660bp、l. 3kbp、670bp、1. 8kbp、Ikbp、Ikbp 和 lkbp。此外，當用cDCJl感染SG和SP時，顯示噬菌斑(一個噬菌體對宿主細胞裂解而在 軟瓊脂上產生的清澈區域)具有相同的大小和濁度。觀察所述噬菌體OCJl對SG和SP的 裂解，發現其對SG和SP的生長具有抑制作用。此外，測定了 OCJl在各種溫度和pH條件下的穩定性，結果發現OCJl在pH 2. 5-pH 9. O的寬範圍pH環境下和37°C -70°C的高溫環境下都能穩定存活，即便在高溫乾燥 (60°C持續120分鐘)後仍能存活。這些結果表明，可以容易地將本發明的噬菌體OCJl應 用於各種用於控制SG和SP的產品中。另一方面，本發明涉及用於預防或治療由雞沙門氏菌或雞白痢沙門氏菌引起的禽 傷寒或雞白痢的組合物，所述組合物包含作為活性成分的所述噬菌體。本發明的噬菌體對雞沙門氏菌和雞白痢沙門氏菌具有特異殺菌活性，並因此可以 用於預防或治療由這些細菌引起的疾病。特別地，在優選的實施方案中，可以包含抗生素。本文所使用的術語「預防」是指包括通過施用所述組合物來抑制或延遲所述疾病 的所有行為。本文所使用的術語「治療」是指包括通過施用所述組合物而使所述疾病好轉 或有所改善的所有行為。可以應用本發明組合物的傳染病的優選實例包括雞沙門氏菌引起禽傷寒和由雞 白痢沙門氏菌引起的雞白痢，但不限於此。本發明的組合物包含5xl02_5xl012pfu/ml 的 ΦCJl，優選為 lxl06-lxl01Qpfu/ml。本發明的組合物還可以進一步包含藥學上可接受的載體，並可以與所述載體一起 配製，從而提供食品、藥物和飼料添加劑。本文所使用的術語「藥學上可接受的載體」指不對生物體造成顯著刺激且不消除 所施用化合物的生物活性和特性的載體或稀釋劑。為了將所述組合物配製成液體製劑，可以使用無菌且具有生物相容性的藥學上可接受的載體，例如鹽水、無菌水、Ringer's溶液、緩衝生理鹽水、白蛋白輸注液、葡萄糖溶液、 麥芽糖糊精溶液、甘油和乙醇。這些物質可以單獨使用或以其任意組合使用。如果需要，可 以加入其它常規添加劑，例如抗氧化劑、緩衝劑和抑菌劑等。此外，還可以向所述組合物中 添加稀釋劑、分散劑、表面活性劑、粘合劑和潤滑劑，從而製備可注射製劑(例如水溶液、懸 浮液和乳液)，或者口服製劑(例如丸劑、膠囊、粒劑或片劑)。適合本發明組合物的口服劑型的實例包括片劑、錠劑(troches)、糖錠 (lozenges)、水懸液或乳懸液、散劑或粒劑、乳劑、硬膠囊或軟膠囊、糖漿或酏劑。對於諸如 片劑和膠囊的製劑，可使用粘合劑，例如乳糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、澱粉、支鏈澱粉、纖維 素或明膠；賦形劑，例如磷酸二鈣；崩解劑，例如玉米澱粉或甘薯澱粉；潤滑劑，例如硬脂酸 鎂、硬脂酸鈣、硬脂醯延胡索酸鈉或聚乙二醇蠟。對於膠囊，除了上述化合物外，還可以進一 步使用諸如脂質的液體載體。
對於非口服施用，可以將本發明的組合物配製成用於經皮下、靜脈內或肌內途徑 施用的注射劑，配製成栓劑，或經呼吸道施用的噴霧吸入劑，例如氣霧劑。可以通過將本發 明的組合物與穩定劑或緩衝劑一起溶解或懸浮在水中，並將所述溶液或懸浮液分裝在安瓿 或單位小瓶中而獲得注射製劑。對於噴劑，例如氣霧劑，可以將用於噴射水分散濃縮物或溼 粉末的推進劑與添加劑組合使用。根據另一方面，本發明涉及抗生素，包括用於預防或治療由雞沙門氏菌引起禽傷 寒和由雞白痢沙門氏菌引起的雞白痢的組合物。本文所使用的術語「抗生素」是指可應用於動物以殺滅病原體的任何藥物，用在本 文中作為防腐劑、殺菌劑和抗菌劑的通用術語。與傳統抗生素不同，本發明的噬菌體對於雞 沙門氏菌和雞白痢沙門氏菌具有高特異性，從而可以殺滅特定病原體而不影響有益細菌， 並且不誘導耐性，由此其生命周期相當長。根據另一方面，本發明涉及包含作為活性成分的所述噬菌體的家禽飼料或家禽飲 用水。可以將本發明的噬菌體單獨製備成飼料添加劑，隨後添加到動物飼料中，或直接 添加到動物飼料中。本發明的噬菌體可以以液體或乾燥形式包含在動物飼料中。所述乾燥 過程可以通過風乾、自然乾燥、噴霧乾燥或凍幹而進行，但並不限於此。基於動物飼料的重 量，可以以粉末的形式添加0. 05-10重量％，優選0. 1-2重量％的本發明噬菌體。本發明的包含OCJl的飼料可以包括基於植物的飼料，例如穀物、堅果、食品副產 物、海草、纖維、藥物副產物、油、澱粉、粗粉和穀物副產物；基於動物的飼料，例如蛋白質、礦 物質、脂肪、單細胞蛋白質、浮遊動物和食品廢料，但並不限於此。本發明的包含OCJl的飼料添加劑可以包含粘合劑、乳化劑、防腐劑(用於防止質 量退化)、胺基酸、維生素、酶、益生菌、調味劑、非蛋白氮、矽酸鹽(酯)、緩衝劑、著色劑、提 取物和用於提高效率的寡糖以及其它飼料預混料，但並不限於此。此外，提供混合有本發明噬菌體的飲用水可以降低家畜腸內雞沙門氏菌或雞白痢 沙門氏菌的數量，由此獲得不含雞沙門氏菌或雞白痢沙門氏菌的家畜。根據另一方面，本發明涉及包含作為活性成分的所述噬菌體的消毒劑或清潔劑。為了除去雞沙門氏菌和雞白痢沙門氏菌，可將包含作為活性成分的所述噬菌體的 消毒劑用於，但不限於，家畜舍、屠宰場、汙染區域和其它生產設施上。
此外，包含作為活性成分的所述噬菌體的清潔劑可以塗覆在活家禽的受汙染皮膚、羽毛和其它受汙染的身體部分，從而除去雞沙門氏菌和雞白痢沙門氏菌。另一方面，本發明涉及利用用於預防或治療由雞沙門氏菌引起的禽傷寒或由雞白 痢沙門氏菌引起的雞白痢的組合物來預防或治療傳染病(由雞沙門氏菌或雞白痢沙門氏 菌引起的禽傷寒或雞白痢)的方法。可以將本發明的組合物含在藥物製劑中或將其作為動物飼料的成分或在飲用水 中施用於動物，優選通過將其作為飼料添加劑混入動物飼料來施用。可以以通常方式通過各種途徑施用本發明的組合物，例如口服或腸胃外途徑，特 別是口服、經直腸、外用、靜脈內、腹膜內、肌內、動脈內、透皮、鼻內和吸入途徑。本發明的治療疾病的方法包括施用藥學有效量的本發明組合物。對於本領域技術 人員顯而易見的是，醫師通過適當的醫學判斷應當可以確定單日總劑量。對於患者來說，治 療有效量可能根據醫學領域熟知的各種因素而變化，包括要獲得的應答的種類和程度；患 者的狀況，例如年齡、體重、健康狀況、性別和飲食；施用時間和途徑、組合物的分泌率、治療 時間周期、根據是否使用其它試劑的具體組合物等。下文將參考以下實施例對本發明進行更詳細的闡述。然而，這些實施例僅出於說 明的目的，本發明並不限於這些實施例。
具體實施例方式實施例1 沙門氏菌噬菌體的分離1-1.噬菌體的篩選和單噬菌體的分離將來自雞屠宰場和排水溝汙水的50ml樣品轉移到離心管中，並以4000rpm離心 10分鐘。隨後，利用0. 45 μ m濾器過濾上清。將18ml所述樣品濾液與150 μ 1 SP振蕩培 養基(0D_ = 2)和2ml的IOXLuria-Bertani培養基(下文稱為LB培養基，蛋白腖10g、 酵母提取物5g、NaCl 10g，終體積為1L)混合。將混合物在37°C培養18小時，並將培養液 以4000rpm離心10分鐘。利用0. 2 μ m濾器過濾上清。將3ml 0. 7%瓊脂(w/v)和150 μ 1 SP振蕩培養基(0D_ = 2)混合，並鋪在LB平板上，並使其轉變成固體培養基。在其上塗布 10 μ 1培養濾液，並在37°C培養18小時(將0. 7%的瓊脂用作「上層瓊脂」，並在所述上層 瓊脂上進行噬菌體裂解物的滴定，稱為軟瓊脂覆層法)。將包含噬菌體裂解物的樣品培養液稀釋，並與150 μ 1 SP振蕩培養基(0D_ = 2) 混合，隨後進行軟瓊脂覆層法，從而獲得單個噬菌斑。由於單個噬菌斑代表一個噬菌體，為 了分離單噬菌體，將一個噬菌斑加入到400 μ 1 SM溶液(NaCl，5. 8g ；MgSO4 · 7H20，2g ；IM Tris-Cl (pH7. 5), 50ml ;H20，終體積為1L)中，在室溫下靜置4小時，以分離單噬菌體。為了 大量純化噬菌體，從所述單噬菌體溶液中取出100 μ 1上清，並與12ml 0. 7%瓊脂和500 μ 1 SP振蕩培養基混合，隨後在LB平板(直徑為150mm)上進行軟瓊脂覆層法。當裂解完成後， 向平板中加入15ml SM溶液。將平板在室溫下溫和振蕩4小時，以從上層瓊脂中洗脫噬菌 體。回收包含洗脫噬菌體的SM溶液，並加入終體積為的氯仿，均勻混合10分鐘。將溶 液在4000rpm下離心10分鐘。利用0. 2 μ m濾器過濾所獲得的上清，並貯存在冰箱中。1-2.噬菌體的大規模培養利用SP大量培養所選擇的噬菌體。振蕩培養SPJf 1.5X IOltlCfu(集落形成單位)的等分試樣在4000rpm離心10分鐘，隨後將沉澱重懸在4ml SM溶液中。在其中接種 7. 5X IO7Pfu (噬菌斑形成單位)的噬菌體(MOI 感染倍數=0. 005)，在37°C靜置20分鐘。 將所述溶液接種到150ml LB培養基中，並在37°C培養5小時。加入終體積為的氯仿， 並將培養溶液振蕩20分鐘。分別加入終濃度為1 μ g/ml的Dnase I和Rnase A。將溶液 在37°C靜置30分鐘。分別加入終濃度為IM和10% (w/v)的NaCl和PEG(聚乙二醇)，並 再在37°C靜置3小時。將所述溶液在4°C以12000rpm離心20分鐘，以捨棄上清。將沉澱 重懸在5ml SM溶液中，並在室溫下靜置20分鐘。向其中加入4ml氯仿，並混合均勻，隨後 在4°C以4000rpm離心20分鐘。利用0. 2 μ m濾器過濾上清，並通過甘油密度梯度超離心 (密度40%，5%甘油在41以35，000印111離心1小時)純化OCJl。將純化的OCJl重懸 在300 μ 1 SM溶液中，隨後進行滴定。
實施例2 檢測Φ CJl對沙門氏菌的感染為了檢測所選噬菌體對其它沙門氏菌種以及SP的裂解活性，利用其它沙門氏 菌種進行了交叉感染的試驗。結果OCJl沒有感染ST(腸道沙門氏菌鼠傷寒血清型， Salmonella enterica Serotype Typhimurium)、SE(腸道沙門氏菌腸炎血清型，Salmonella enterica Serotype Enteritis)、SC(腸道沙門氏菌豬霍舌Lili青型，Salmonella enterica Serotype Choleraesuis)、SD(腸道沙門氏菌德爾卑血清型，Salmonella enterica Serotype Derby)、SA(腸道沙門氏菌亞禾Ij 桑那亞種，Salmonella enterica subsp. Arizonae)、SB(腸道沙門氏菌邦戈亞種，Salmonella entericl subsp Bongori))，但特異 感染了 SG和SP(參見實施例13)。所述結果示於下表1中。利用SG作為宿主細胞產生的 噬菌體C^CJl具有與利用SP作為宿主細胞所產生的噬菌體相同的噬菌斑大小和噬菌斑濁 度，以及相同的蛋白譜和基因組大小。表1 Φ CJl對沙門氏菌的感染
—Itr凊型 菌株名稱 噬菌斑的形成 血清型 菌株名稱 噬菌斑的形成
SG SGSC 2293__O__SE SGSC 2282__X
SGSC 2294OSC ATCC 13312X
SP-----
SGSC 2295OSCSG 2467X
---SD--
ATCC 14028__X____SGSC 2468__X
STLT2__X__SA ATCC 13314__X
__UKlX I SB 丨 ATCC 43975X*ATCC 全球生物資源中心(The Global Bioresource Center)*SGSC 沙門氏菌遺傳庫中心(salmonella genetic stock center)實施例3 噬菌體OCJl的形態鑑定利用0.01%明膠溶液稀釋經純化的OCJl，隨後固定在2. 5%的戊二醛溶液中。將 樣品滴在碳包被的雲母板(ca. 2.5X2. 5mm)上並使其適應10分鐘後，用無菌的蒸餾水洗 滌。將碳膜封裝在銅柵(copper grid)上，並用4%的乙酸鈾醯染色30-60秒，乾燥，並在 JEM-IOll透射式電子顯微鏡(80kV，放大倍率為X 120，OOO-X200，000)下觀察。結果如圖 1所示，發現純化的OCJl具有包括等軸衣殼和非收縮性長尾在內的形態特徵，這表明其屬於長尾噬菌體科的形態型組。實施例4 噬菌體OCJl的蛋白譜分析 利用3 μ 1 5 X SDS樣品溶液處理15 μ 1純化的OCJl溶液(IollPfuAil滴定度)， 並加熱5分鐘。將OCJl的總蛋白在4-12% NuPAGE Bis-Tris凝膠(Invitrogen)中進行 電泳，隨後用考馬斯亮藍將凝膠在室溫下染色1小時。如圖2所示，所述蛋白譜顯示觀察到 作為主要蛋白的38kDa和49kDa的條帶，同時還觀察到8kDa、17kDa、80kDa和IOOkDa的條
市ο實施例5 噬菌體OCJl的全基因組DNA大小分析通過超速離心法從純化的OCJl分離基因組DNA。具體而言，向純化的OCJl的培 養液中分別加入終濃度為20mM、50 μ g/ml和0. 5% (w/v)的EDTA(乙二胺四乙酸，pH8. 0)、 蛋白酶K和SDS(十二烷基硫酸鈉)，並在50°C下靜置1小時。加入等量的苯酚(pH8.0)並 混合均勻，隨後在室溫下以12000rpm離心10分鐘。將上清與等量PC(苯酚氯仿=1 1) 混合均勻，隨後在室溫下以12000rpm離心10分鐘。將上清與等量氯仿混合均勻，隨後在室 溫下以12000rpm離心10分鐘。再次向上清中加入1/10體積的3M乙酸鈉和2體積95% 的冷乙醇，並在_20°C靜置1小時。在0°C以12000rpm離心10分鐘後，徹底除去上清，並將 DNA沉澱溶解在50 μ 1 TE (Tris-EDTA, ρΗ 8. 0)中。將所提取的DNA稀釋10倍，並測量其 在OD26tl的吸光度。將Iyg全基因組DNA上樣到1%PFGF(脈衝場凝膠電泳)瓊脂糖凝膠 中後，利用BIORAD PFGE系統程序7 (大小範圍為25_100kbp ；轉換時間梯度(switch time ramp)為0. 4-2. O秒，線形；正向電壓為180V ；反向電壓為120V)在室溫下進行電泳20小 時。如圖3所示，OCJl的基因組大小約為61kbp。實施例6 噬菌體OCJl的遺傳分析為了分析純化的OCJl的遺傳特徵，利用限制性酶EcoR V和Sca I對5 μ gOCJl 基因組DNA進行處理。利用EcoR V酶切載體pBluescript SK+(Promega)，並用CIP(小 牛腸鹼性磷酸酶)處理。經酶切的基因組DNA和載體以3 1的比例混合，並在16°C連 接5小時。將連接產物轉化到大腸桿菌DH5 α中。將轉化的細胞塗布在含氨苄青黴素和 X-gal (5-溴-4-氯-3-吲哚基-β -D-吡喃半乳糖苷)的LB平板上，以進行藍/白斑篩選， 由此選出兩個克隆。將所選克隆在含氨苄青黴素的培養基中振蕩培養16小時。隨後，利用 質粒提取試劑盒(Promega)提取質粒。利用Μ13正向和Μ13反向引物對通過PCR確定質粒克隆，並選擇Ikbp或更長的插 入片段，利用Μ13正向和Μ13反向引物對對其序列進行分析。結果如SEQ ID NOs. 1_5所 示.。利用NCBI blastx程序進行序列相似性分析，結果示於表2中。如表2所示，OCJl在SEQ ID NO. 1的前部分序列中顯示與噬菌體TLS的Dcm具有 36%的序列相似性，後部分序列中顯示與洋蔥伯克霍爾德菌(Burkholderia cepacia)噬菌 體Bc印Nazgul的DR0530-樣引發酶(DR0530_lik印rimase)具有31%的序列相似性。SEQ ID NO. 1的後部分序列顯示與沙門氏菌噬菌體Det7的尾突蛋白具有34%序列相似性。與 已知噬菌體的蛋白比較顯示出低相似性，並且通過NCBI blastn程序對SEQ ID NOs. 1_5的 鹼基序列進行分析，結果顯示沒有序列相似性。這些結果表明OCJl是新型噬菌體。表2 OCJl與其它噬菌體的序列相似性比較 實施例7 Φ CJl-特異性引物序列的構建為了鑑定OCJl，構建了 OCJl-特異性引物。在SEQ ID NO. 1的基礎上，構建PCR 引物對SEQ ID NOs. 6和7以及SEQ ID NOs. 10和11。另外，還在SEQ ID NO. 2的基礎上， 構建了 PCR 引物對 SEQ ID NOs. 8 和 9 以及 SEQID NOs. 12 和 13。另外，還在 SEQ ID N0. 3、 4和5的基礎上，構建了各引物對SEQ ID NOs. 14和15、SEQ ID NOs. 16禾口 17以及SEQ ID NOs. 18 和 19。利用各引物對 SEQ ID NOs. 6 和 7、SEQ ID NOs. 10 和 11、SEQ ID NOs. 8 和 9、 SEQ ID NOs. 12 禾口 13、SEQ ID NOs. 14 禾口 15、SEQ ID NOs. 16 禾口 17 以及 SEQ ID NOs. 18 禾口 19進行PCR。向預混物(Bioneer)中加入0. 1 μ g噬菌體基因組DNA、0. 5pmol引物，並將終 體積調整至20 μ 1。利用30個如下循環進行PCR :94°C變性30秒、60°C退火30秒、72°C聚 合1分鐘。當使用SEQ ID NOs. 3和4以及SEQ ID NOs. 7和8作為引物對時，可以分別獲 得約660bp和1. 3kbp的PCR產物。另外，當使用SEQ ID NOs. 5和6以及SEQ IDNOs. 9和 10作為引物對時，可以分別獲得約670bp和l.Skbp的PCR產物。結果示於圖4中。另外， 當使用 SEQ ID NOs. 14 和 15、SEQ ID NOs. 16 和 17 以及 SEQ ID NOs. 18 和 19 作為引物對 時，可以獲得約Ikbp的PCR產物(數據未顯示)。實施例8 噬菌體感染效率的試驗為了檢測噬菌體OCJl的感染效率，進行了一步式生長培養試驗。將50ml SG培養液(OD6tltl = 0. 5)在4000rpm離心10分鐘，並重懸在25ml新鮮的LB培養基中。向其中接種純化的噬菌體(M0I = 0.0005)，並靜置5分鐘。然後將反應溶液 在4000rpm離心10分鐘，並將細胞沉澱重懸在新鮮的LB培養基中。在37°C培養細胞時， 每10分鐘收集兩份細胞培養液樣品，並在12000rpm離心3分鐘。對獲得的上清進行連續 稀釋，並按照軟瓊脂覆層法將10 u 1的各稀釋樣品在37°C培養18小時，並進行噬菌體裂解 物的滴定。OCJ1是既能感染SG，又能感染SP的噬菌體。因此，對SP進行同樣的試驗。SG 和SP的一步式培養試驗的結果顯示102或更高的裂解量。結果示於圖5中。實施例9 噬菌體功效的檢測為了檢測液體培養基中OCJ1對SG的功效，進行了各種條件下的澄清試驗 (clearing assay)。向 250ml 燒瓶中加入 35ml LB 培養基，以 1 1、1 100 和 1 10000 的細胞比例向其中接種單個噬菌斑的噬菌體和SG細胞，然後在37°C以200rpm進行培養。 在每個時間間隔監測0D,的變化。結果，觀察到OCJ1對SG和SP的抑制作用。結果示於 圖6中。實施例10 噬菌體的pH穩定性試驗為了檢測OCJ1在低pH環境下(例如雞胃)中的穩定性，在寬pH水平範圍(pH 2. 1、2. 5、3. 0、3. 5、4. 0、5. 5、6. 4、6. 9、7. 4、8. 2、9. 0)內進行了穩定性試驗。製備了濃度為 2M的各種pH溶液(乙酸鈉緩衝液(pH 2. l、pH 4. 0、pH 5. 5、pH 6. 4))、檸檬酸鈉緩衝液(pH 2. 5、pH 3. 0、pH 3. 5)、磷酸鈉緩衝液(pH 6. 9、pH 7. 4)、Tris-HCl (pH 8. 2、pH 9. 0))。將 100 u 1 pH溶液與等量的噬菌體溶液(1. 0X10npfu/ml)混合，使各pH溶液的濃度為1M，並 在室溫下靜置1小時。對反應溶液進行連續稀釋，並按照軟瓊脂覆層法將10 yl的各稀釋 樣品在37°C培養18小時，並進行噬菌體裂解物的滴定。比較滴定度在不同pH下的變化， 以測定相對穩定性。結果顯示，所述噬菌體沒有喪失其活性，並且直至PH 2. 5都保持穩定。 然而，在pH 2.1時，其活性喪失。結果示於圖7中。實施例11 噬菌體的熱穩定性試驗為了測定噬菌體在用作飼料添加劑時對配製過程中產生的熱的穩定性，進行了以 下試驗。將 200 ill 的① CJ1 溶液(1. 0X10npfu/ml)分別在 37°C、45°C、53°C、60°C、70°C 和80°C靜置0分鐘、10分鐘、30分鐘、60分鐘和120分鐘。對所述溶液進行連續稀釋，並按 照軟瓊脂覆層法將10 yl的各稀釋樣品在37°C培養18小時，並進行噬菌體裂解物的滴定。 比較滴定度隨溫度和暴露時間的變化，以測定相對穩定性。結果表明，直到在70°C暴露2小 時，所述噬菌體都沒有喪失其活性。然而，在80°C或更高溫度下暴露10分鐘後，所述噬菌體 活性急劇下降，但仍穩定保持一定活性。結果示於圖8中。實施例12 噬菌體的乾燥穩定性試驗為了測定噬菌體在用作飼料添加劑時對配製過程中乾燥條件的穩定性，進行了以 下試驗。基於熱穩定性試驗的結果，本試驗在高溫乾燥條件(60°C持續120分鐘)下進行。 利用加速真空(加速-真空濃縮器5301，Eppendorf)對200iil的①CJ1溶液(1. 0X10npfu/ ml)進行乾燥。在4°C將所得的沉澱完全懸浮在等量的SM溶液中持續1天。對反應溶液進 行連續稀釋，並按照軟瓊脂覆層法將10 yl的各稀釋樣品在37°C培養18小時，並進行噬菌 體裂解物的滴定。比較滴定度在乾燥前後的變化，以測定相對穩定性。結果顯示其活性降 低至102。結果示於圖9中。實施例13 測定噬菌體對野生型SG/SP的感染
除了在本發明中使用的SG(SG RKS4994)和SP(SP RKS2242)外，還測定了噬菌 體①CJ1對首爾國立大學獸醫藥學院鳥類疾病實驗室(Laboratory ofAvian Disease, College of Veterinary Medicine, Seoul National University)分離的韓國野生型 SG(15株)和SP(5株)的裂解活性。將150 yl各菌株的振蕩培養液(0D6QQ = 2)與10 yl 的OCJ1溶液(lCTpfu/ml)混合，並按照軟瓊脂覆層法在37°C培養18小時，測定噬菌斑的 形成。發現噬菌體OCJ1對野生型SG和SP具有100%的裂解活性。結果示於表3中。表3對韓國野生型SG和SP的裂解活性 *SG/SP來源首爾國立大學獸醫藥學院鳥類疾病實驗室實施例14 噬菌體的毒性試驗通過評價其在蛋雞中的安全性、殘留量和蛋雞的雞蛋，對用於預防禽傷寒的噬菌 體OCJ1進行毒性試驗。將蛋雞分為3組以進行致病性試驗和雞蛋試驗，並檢測臨床體徵 的存在和盲腸糞中噬菌體的含量。對於致病性試驗，將13隻褐色蛋雞分為OCJ1-處理組(8隻)和對照組(5隻)。 使用飼料和①CJ1 (每克飼料108pfu或更高)的混合物飼養OCJ1-處理組，而對照組僅用 飼料飼養，並且在噬菌體處理後持續3周檢測產蛋率和臨床體徵。如表4所示，OCJ1-處理 組和對照組分別顯示約42%和50%的產蛋率。另外，還檢測了噬菌體處理後的臨床體徵， 結果表明在OCJ1處理24天後沒有觀察到呼吸道和消化道損傷，也沒有觀察到異常活性。 結果顯示OCJ1處理沒有產生副作用。對於雞蛋檢測，在①CJ1處理後第3天、第6天和第9天收集10枚雞蛋，用70 %的 乙醇洗滌雞蛋表面並打碎雞蛋。混合蛋黃和蛋白，用45ml PBS將5ml混合液稀釋到10人 1(T2和1(T3。在25ml各稀釋溶液中加入106cfuSNUSG0197，並在37°C溫育3小時，通過離心 分離細胞。將500 ill上清和100 ill SNUSG0197(109cfu/ml)相互混合，並按照上層瓊脂糖 覆層技術平鋪在胰蛋白酶大豆瓊脂平板上。在37°C溫育18小時後，清點噬菌斑的數量以計算每ml雞蛋中噬菌體的數量。如表5所示，在第3天、第6天和第9天收集的17枚雞蛋中 都沒有發現OCJ1。接著，檢測OCJ1處理後臨床體徵的存在和盲腸糞中OCJ1的含量。在OCJ1處 理3周後對經測試的蛋雞進行安樂死，並進行屍檢以測定肝臟、脾臟、腎臟和卵巢中是否存 在明顯損傷。利用無菌棉籤在無菌條件下收集肝臟樣品，並平鋪在Mac Conkey瓊脂平板上， 以檢測雞沙門氏菌的存在。還收集盲腸糞以測定雞個體中的OCJ1含量。簡而言之，將lg 盲腸糞懸浮在9mlPBS中，並以15000g離心30分鐘。利用PBS將1ml上清稀釋至^^-川一4， 將500 yl稀釋液和100 yl SG0197(109cfu/ml)相互混合，並按照上層瓊脂覆層技術，將其 平鋪在10X胰蛋白酶大豆瓊脂平板上。在37°C溫育18小時後，清點噬菌斑的數量以計算 每g盲腸糞中噬菌體的數量，將連續稀釋的倍數計算在內。結果表明，在檢測期間沒有觀察 到任何異常臨床體徵，並且每克盲腸糞測量到約3. 7X104pfuOCJl，這表明所述噬菌體通 過胃後在腸中仍存活。檢測了噬菌體在器官中的分布。簡而言之，將10隻SPF雛雞(11天齡)分成兩組， 每組5隻。在3天中，處理組用補充有108pfuOCJl (每克)的飼料飼養，對照組僅用飼料 飼養。處死雛雞，收集肝臟、腎臟和盲腸糞，並檢測OCJ1存在與否。用等體積PBS乳化收 集的每份肝臟、腎臟和盲腸糞。將1ml肝臟和全部量的腎臟和盲腸糞轉移到1. 5ml試管中， 並以15，OOOrpm離心15分鐘。利用PBS將lml上清稀釋至妒-瓜4，將500 u 1稀釋液和 100iaSG0197(109cfU/ml)相互混合，並按照上層瓊脂覆層技術，將其平鋪在10X胰蛋白酶 大豆瓊脂平板上。在37°C溫育18小時後，清點噬菌斑的數量以計算每克盲腸糞中噬菌體的 數量，將連續稀釋的倍數計算在內。如表6所示，在肝臟和腎中髒沒有觀察到OCJ1，但在盲 腸糞中觀察到了 OCJ1。表4. OCJ1處理後的平均產蛋率 表5.①CJ1的存在率 表6. OCJ1-處理組的器官中噬菌體的存在 實施例15 噬菌體的功效試驗為了評價OCJ1對預防和治療SG的功效，使用雞進行了功效試驗。將20隻褐色蛋雞(1天齡)分成10個實驗組，每組10隻(OCJ1處理組和非處理 組)。在第1周，用補充有107pfuOCJl (每克)的飼料和補充有107pfuOCJl (每ml)的飲 用水飼養試驗雞。1周後，用500 ill TSB將106cfu SG0197(每隻雞)和107pfu (M0I = 10) 噬菌體混合，並在冰上靜置1小時或更短，然後通過口服施用。測定2周內的死亡率。對存 活的雞進行屍體解剖，檢測是否存在明顯的損傷，並分離細菌。如表7所示，發現OCJ1處理組顯示出顯著高於非處理組的保護率(P < 0. 05)。表7.使用雞進行的OCJ1功效試驗 工業應用性本發明的噬菌體對雞沙門氏菌和雞白痢沙門氏菌具有特異殺菌活性而不影響有 益細菌，並且具有優異的耐酸性、耐熱性和耐乾燥性，並由此可以應用於抑制或預防由雞沙 門氏菌和雞白痢沙門氏菌引起的禽傷寒和雞白痢，並可用於控制雞沙門氏菌和雞白痢沙門 氏菌。例如，所述噬菌體可以作為活性成分，應用至用於預防或治療由雞沙門氏菌和雞白痢 沙門氏菌引起的傳染病的組合物，家禽飼料和飲用水、清潔劑和消毒劑。
權利要求
對雞沙門氏菌或雞白痢沙門氏菌具有特異殺菌活性的噬菌體，其屬於長尾噬菌體科的B1形態組，特徵為等軸衣殼和非收縮性長尾，該噬菌體的全基因組大小為61kbp，主要結構蛋白的大小為38kDa和49kDa。
2.如權利要求1所述的噬菌體，其中所述噬菌體具有圖1所示的形態。
3.如權利要求1所述的噬菌體，其中所述噬菌體的全基因組包含選自由SEQID NOs. 1、2、3、4和5組成的組中的一種或多種核酸分子。
4.如權利要求1所述的噬菌體，其中利用選自由SEQID NOs. 6和7,SEQ ID NOs. 8和 9、SEQ ID NOs. 10 和 11、SEQ ID NOs. 12 和 13、SEQ ID NOs. 14 和 15、SEQ ID NOs. 16 和 17 以及SEQ ID NOs. 18和19組成的組中的一對或多對引物對進行PCR時，所述噬菌體產生的 PCR 產物為約 660bp、670bp、l. 3kbp、l. 8kbp、lkbp、lkbp 和 lkbp。
5.如權利要求1所述的噬菌體，其中所述噬菌體在pH2. 5-pH 9.0的pH範圍內具有耐 酸性，在37°C -70°C的溫度範圍內具有耐熱性，在60°C持續120分鐘時具有耐乾燥性。
6.如權利要求1所述的噬菌體，其保藏號為KCCM10969P。
7.用於預防或治療由雞沙門氏菌或雞白痢沙門氏菌引起的傳染病的組合物，其包含作 為活性成分的權利要求1所述的噬菌體。
8.如權利要求7所述的組合物，其中，由雞沙門氏菌引起的疾病為禽傷寒，由雞白痢沙 門氏菌引起的疾病為雞白痢。
9.如權利要求7所述的組合物，其中所述組合物被用作抗生素。
10.動物飼料或飲用水，其包含作為活性成分的權利要求1-6中任一項所述的噬菌體。
11.消毒劑或清潔劑，其包含作為活性成分的權利要求1-6中任一項所述的噬菌體。
12.權利要求1所述的噬菌體或權利要求7所述的組合物用於治療由雞沙門氏菌或雞 白痢沙門氏菌在除人以外的動物中引起的傳染病的方法。
全文摘要
本發明涉及新型噬菌體，更具體地，本發明涉及對引起禽傷寒的雞沙門氏菌(SG)和引起雞白痢的雞白痢沙門氏菌(SP)具有特異殺菌活性的噬菌體。另外，本發明還涉及包含作為活性成分的所述噬菌體的組合物，其用於預防或治療由雞沙門氏菌或雞白痢沙門氏菌引起的傳染病。另外，本發明還涉及包含作為活性成分的所述噬菌體的家畜飼料和飲用水、消毒劑和清潔劑。
文檔編號C12N7/01GK101861387SQ200980000314
公開日2010年10月13日 申請日期2009年8月17日 優先權日2008年12月2日
發明者姜寅惠, 崔香, 樸敏兌, 申秀安, 趙英鬱 申請人:Cj第一製糖株式會社