藥物組合物及其在製備治療肺炎或/和增強上呼吸道感染中自然殺傷細胞活性藥物中的應用的製作方法
2023-06-10 11:07:31
本發明涉及生物醫藥技術領域，是一種藥物組合物及其在製備治療肺炎或/和增強上呼吸道感染中自然殺傷細胞活性藥物中的應用。
背景技術：
急性上呼吸道感染多由病毒引起，傳染性強，發病率高，容易引起暴發流行或大流行。其主要通過含有病毒的飛沫進行傳播。病毒易發生基因重組重排，產生突變體，使得臨床藥物的應用滯後於病毒變異的速度，出現藥物治療療效低或無效的現象。
免疫系統在對抗病原微生物過程中發揮著重要作用。研究表明提高機體免疫功能能夠增強機體的抗病毒能力。自然殺傷（nk）細胞是抗病毒感染免疫防禦的第一道防線。因為nk細胞無需預先致敏，可直接殺傷病毒及被病毒感染的靶細胞。因此，在發生病毒感染時，nk細胞總是先於t、b等免疫細胞，最早發揮抗病毒免疫應答效應。通過藥物治療增強nk細胞活性，提高免疫細胞的監視作用，進而增強機體的抗病毒能力，這對於病毒變異引起的治療無效有重要的意義。
銀翹散出自清代吳瑭所著《溫病條辨》，為辛涼解表的代表方劑，其主要功用為辛涼透表，清熱解毒，是臨床上治療流行性感冒的常用中醫方劑。但現有銀翹散方劑中藥味較多，服用量大，生產成本高。
技術實現要素：
本發明提供了一種藥物組合物及其在製備治療肺炎或/和增強上呼吸道感染中自然殺傷細胞活性藥物中的應用，克服了上述現有技術之不足，其能有效解決現有銀翹散方劑中藥味較多，服用量大，化學成分不明確，生產成本高的問題。
本發明的技術方案之一是通過以下措施來實現的：一種藥物組合物，原料按重量份數由牛蒡苷4份至6份、大豆素8份至12份、甘草酸4份至6份、甘草苷1.6份至2.4份組成。
下面是對上述發明技術方案之一的進一步優化或/和改進：
上述藥物組合物原料按重量份數由牛蒡苷5份、大豆素10份、甘草酸5份、甘草苷2份組成。
上述藥物組合物為顆粒劑或膠囊劑或丸劑或片劑或散劑或口服劑。
本發明的技術方案之二是通過以下措施來實現的：一種藥物組合物在製備治療肺炎或/和增強上呼吸道感染中自然殺傷細胞活性藥物中的應用。
本發明藥物組合物可用於製備治療肺炎和增強上呼吸道感染中自然殺傷細胞活性藥物；本發明藥物組合物不僅對流感病毒引起的小鼠肺炎模型具有治療作用，與常規抗病毒藥物利巴韋林相當，而且本發明藥物組合物能夠增強流感病毒引起的小鼠肺臟降低的nk細胞活性，作用與現有藥物銀翹散相當；且本發明藥物組合物對模型小鼠體重的維持作用大大好於利巴韋林和銀翹散，說明本發明藥物組合物具有顯著提高小鼠免疫系統功能的作用；同時本發明藥物組合物較現有藥物銀翹散大大降低了服用量，降低了生產成本，且藥效成分明確，具有很好的應用前景。
附圖說明
附圖1為本發明藥物組合物和現有藥物對流感病毒感染小鼠肺臟nk細胞活性的影響對比圖。
具體實施方式
本發明不受下述實施例的限制，可根據本發明的技術方案與實際情況來確定具體的實施方式。
實施例1，該藥物組合物原料按重量份數由牛蒡苷4份至6份、大豆素8份至12份、甘草酸4份至6份、甘草苷1.6份至2.4份組成。
實施例2，該藥物組合物原料按重量份數由牛蒡苷4份或6份、大豆素8份或12份、甘草酸4份或6份、甘草苷1.6份或2.4份組成。
實施例3，作為上述實施例的優化，該藥物組合物原料按重量份數由牛蒡苷5份、大豆素10份、甘草酸5份、甘草苷2份組成。
實施例4，作為上述實施例的優化，該藥物組合物為顆粒劑或膠囊劑或丸劑或片劑或散劑或口服劑。本發明藥物組合物可按常規方法製成各種劑型。
實施例5，該藥物組合物在製備治療肺炎或/和增強上呼吸道感染中自然殺傷細胞活性藥物中的應用。
上述實施例得到的藥物組合物在製備治療肺炎或/和增強上呼吸道感染中自然殺傷細胞活性藥物中的應用如下：
1.實驗材料及藥品
流感病毒鼠肺適應株a/h1n1/puertorico/8/34，簡寫為pr8，購自中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所流感室，中國中醫科學院生物安全實驗室常規雞胚傳代，-80℃冰箱保存。
小鼠及c57bl/6小鼠（spf/vaf級），雌雄各半，體重為14±1g，由北京金牧陽試驗動物技術有限公司提供，動物許可證號scxk(京)2014-0004。
利巴韋林用於呼吸道病毒感染性疾病的預防和治療。本實驗中作為抗流感病毒的陽性對照藥物，小鼠給藥劑量為82.5mg/kg/d。
雷利度胺用於多發性骨髓瘤的治療；其作用機制是增強自然殺傷細胞活性。本實驗中作為提高nk細胞活性的陽性對照藥物，小鼠給藥劑量為100mg/kg/d。
其它藥物購自上海將來試劑有限公司，包括l-薄荷醇（左旋薄荷醇，薄荷腦）、咖啡酸、牛蒡苷、胡薄荷酮（(r)-(+)-長葉薄荷酮）、薄荷酮、大豆素、染料木素、甘草酸、甘草苷。
參考文獻中各藥物的小鼠給藥劑量，制定本試驗的小鼠劑量。
原料的篩選
原料藥物的篩選見表1所示；表1中按照9因素2水平正交設計各組藥物；將icr小鼠按體重隨機分為15組，分別為正常對照組、模型組、利巴韋林組、各原料藥物組（即表1中的12組藥物），每組10隻，各組的小鼠給藥量為0.2ml/10g。除正常對照組外，其餘各組將小鼠麻醉後，以15個ld50流感病毒鼠肺適應株pr8滴鼻感染，每隻30μl；於感染後2h開始給藥，每次按0.2ml/10g灌胃給藥，每天1次，連續5天，正常對照組和模型組給予等體積的蒸餾水；治療第5天稱重後解剖，稱取肺重，計算肺指數及肺指數抑制率，結果採用組間比較t檢驗進行統計學處理。
肺指數=肺溼重(g)/體重（g）
肺指數抑制率=（模型組肺重-受試藥物組肺重）/（模型組肺重-正常對照組肺重）×100%
原料篩選中各組對pr8感染小鼠肺炎模型的治療作用（n=10）見表2所示；表2中的1至12對應表1中的12組藥物，表2結果顯示，採用甲型h1n1流感病毒pr8感染正常小鼠後，小鼠肺指數明顯增高，與正常對照組比較有顯著性差異（p<0.01）；感染當天開始給予受試藥物治療5天，所試的不同藥物組合物組肺指數均顯著降低，其中第2組、第8組和第11組對流感病毒引起的肺指數增加的抑制率高於其餘各受試藥物組（p<0.05）；並且小鼠體重也顯著高於模型組，同時也高於其餘各受試藥物組和陽性對照藥利巴韋林組。其中第11組（即本發明藥物組合物）在所有受試藥物中，對小鼠肺炎模型的抑制率最強，其小鼠體重降低也最低，說明本發明藥物組合物較其它各組對肺炎的抑制率更強，效果更好，所以確定原料的篩選以第11組為準，即本發明藥物組合物（原料組成牛蒡苷、大豆素、甘草酸和甘草苷）繼續進行研究。
本發明藥物組合物原料組成牛蒡苷、大豆素、甘草酸和甘草苷中各藥物配合的進一步研究
將icr小鼠按體重隨機分為10組，分別為正常對照組、模型組、利巴韋林組、本發明藥物組合物原料拆分組（將其拆分為7組），每組10隻，本發明藥物組合物原料拆分組（將其拆分為7組）的配比見表3所示；除正常對照組外，將小鼠麻醉後，以15個ld50流感病毒鼠肺適應株pr8滴鼻感染，每隻30μl。於感染後2h開始給藥，每次按0.2ml/10g灌胃給藥，每天1次，連續5天，正常對照組和模型組給予等體積的蒸餾水。治療第5天稱重後解剖，稱取肺重，計算肺指數及肺指數抑制率。結果採用組間比較t檢驗進行統計學處理。
肺指數=肺溼重(g)/體重（g）
肺指數抑制率=（模型組肺重-受試藥物組肺重）/（模型組肺重-正常對照組肺重）×100%
正常對照組、模型組、利巴韋林組、本發明藥物組合物原料拆分組（將其拆分為7組）對pr8感染小鼠肺炎模型的治療作用（n=10）見表4所示；從表3和表4可以看出，採用甲型h1n1流感病毒pr8感染正常小鼠後，小鼠肺指數明顯增高，與正常對照組比較有顯著性差異（p<0.01）。按照正交表設計的試驗組，目的是通過拆分，考察本發明藥物組合物原料拆分組（將其拆分為7組）中各藥物的活性。感染當天開始給予受試藥物治療5天，所試的不同藥物組合物組群，除第1組和第2組外，其餘各組肺指數均有降低；本發明藥物組合物原料拆分組（將其拆分為7組）的抑制率均小於本發明藥物組合物（原料組成牛蒡苷、大豆素、甘草酸和甘草苷）的抑制率。
本發明藥物組合物對流感病毒感染小鼠肺臟nk細胞活性的影響
將c57bl/6小鼠按體重隨機分為5組，分別為正常對照組、模型組、雷利度胺組、利巴韋林組和本發明藥物組合物組（即牛蒡苷+大豆素+甘草酸+甘草苷），每組3隻。除正常對照組外，將小鼠麻醉後，以15個ld50流感病毒鼠肺適應株pr8滴鼻感染，每隻30μl。於感染後2h開始給藥，每次按0.2ml/10g灌胃給藥，每天1次，連續5天，正常對照組和模型組給予等體積的蒸餾水。治療第5天稱重後解剖，摘取肺臟，製備肺臟單細胞懸液，去除紅細胞，將所得白細胞與小鼠ly49d單克隆抗體和ly49h單克隆抗體4℃避光孵育30min；同時製備同型對照組，陰性對照組及各單抗對照。pbs緩衝液洗2次，以4%多聚甲醛固定，採用流式細胞儀檢測。結果採用組間比較t檢驗進行統計學處理。
本發明藥物組合物和現有藥物對流感病毒感染小鼠肺臟nk細胞活性的影響對比圖見圖1所示，圖1中的化合物組合即為本發明藥物組合物（牛蒡苷+大豆素+甘草酸+甘草苷）；從圖1可以看出，小鼠感染流感病毒後，肺臟ly49d+單陽性nk細胞、ly49h+單陽性nk細胞和ly49d+ly49h+雙陽性nk細胞均顯著減低（p<0.01）；經各組藥物治療後，對nk細胞表面ly49d+和ly49h+抗原表達均有顯著的促進作用（p<0.01，p<0.05）；對流感病毒模型小鼠肺臟nk細胞活性，本發明藥物組合物具有顯著的促進活性，作用與銀翹散組相當；同時現有銀翹散的成人服用量為18g/人/d，本發明藥物組合物的成人服用量為1.664g/人/d，從而大大減少了服用量，降低了生產成本。
綜上所述，本發明藥物組合物可用於製備治療肺炎和增強上呼吸道感染中自然殺傷細胞活性藥物；本發明藥物組合物不僅對流感病毒引起的小鼠肺炎模型具有治療作用，與常規抗病毒藥物利巴韋林相當，而且本發明藥物組合物能夠增強流感病毒引起的小鼠肺臟降低的nk細胞活性，作用與現有藥物銀翹散相當；且本發明藥物組合物對模型小鼠體重的維持作用大大好於利巴韋林和銀翹散，說明本發明藥物組合物具有顯著提高小鼠免疫系統功能的作用；同時本發明藥物組合物較現有藥物銀翹散大大降低了服用量，降低了生產成本，且藥效成分明確，具有很好的應用前景。
以上技術特徵構成了本發明的實施例，其具有較強的適應性和實施效果，可根據實際需要增減非必要的技術特徵，來滿足不同情況的需求。