結合hmga的核酸的製作方法

2023-06-10 22:26:11

結合hmga的核酸的製作方法
【專利摘要】在一個方面，本發明涉及鏡像異構體(spiegelmer)的新用途。在另一個方面，本發明涉及結合HMG-蛋白的鏡像異構體。具體而言，本發明提供了能夠特異性地與細胞內靶分子相互作用的物質類型。本發明涉及L-核酸作為細胞內活性劑的用途。
【專利說明】結合HMGA的核酸
[0001] 本申請是申請日為2006年5月4日、申請號為200680024585. 4、發明名稱為"鏡 像異構體的新用途"的發明專利申請的分案申請。

【技術領域】
[0002] 在一個方面，本發明涉及鏡像異構體（spiegelmer)的新用途。在另一個方面，本 發明涉及結合HMG-蛋白的鏡像異構體。

【背景技術】
[0003] 隨著分子醫學的進步，使得可能鑑定牽涉疾病或疾病狀態的靶分子和特異性地對 這些分子產生影響從而治療或預防所述疾病或疾病狀態或者至少減輕與之相關的症狀。原 則上可將靶分子分成兩類。第一類包括這樣的靶分子，其存在於細胞外，並原則上可通過將 活性物質施用入包含所述靶分子的體液或體腔中來使其與活性物質接觸。第一類靶分子在 此也稱為細胞外靶分子。第二類靶分子包括存在於細胞內的靶分子，其中這些細胞與待治 療的疾病有關或與對於所述疾病的易感有關。因此並不要求，所述靶分子對於所述疾病狀 態直接負責或與對於所述疾病的易感直接相關。更確切地說，各個靶分子參與其過程受到 活性物質影響的作用級聯反應，從而所述活性物質適合用於治療或預防該疾病，這就足夠 了。第二類靶分子在此也稱為細胞內靶分子。
[0004] 靶分子即細胞外或細胞內靶分子的性質原則上決定了結合類型，通過所述結合類 型可嘗試提供對於治療或預防作用來說必需的在活性物質（通常為藥物學活性物質）和靶 分子之間的相互作用。幾乎普遍使用所謂的小分子，即分子量通常為1000道爾頓或更小的 化合物。這些分子可以以希望的方式直接與細胞外靶分子相互作用，還與細胞內靶分子相 互作用。
[0005] 在該背景下，通過生物技術工業已開發了新的活性物質類型，例如抗體，特別是單 克隆抗體、反義分子、siRNA分子、適體（Aptamer)和鏡像異構體。儘管這些分子類型中的一 些仍然處於臨床研究的初期，但至少在抗體和反義分子的情況下存在已在臨床中使用的產 品。然而，當需要尋找細胞內靶分子時，使用這些新物質類型也存在重大問題。因此，例如， 抗體的細胞內使用目前仍然還是不可能的，至少在允許在患者中常規使用針對細胞內靶分 子的抗體以用於治療和/或預防的範圍內或方法和方式上是不可能的。此外，其他新的活 性物質類型，特別是反義分子和SiRNA分子，由於其作用機制，必須被導入各個包含靶分子 或編碼靶分子的基因的細胞內。活性物質的靶向給予（也稱為遞送）對於這些物質類型來 說也是目前臨床應用的限制因素。
[0006] 對於適體和鏡像異構體，即具有允許與各自靶分子特異性地相互作用的確定的三 維結構的功能性核酸，也是如此。為了找到細胞內存在靶分子而使用適體，在此利用基因技 術學的方法，更明確地說基因療法。通過基因技術學方法將針對細胞內靶分子的適體（也 稱為intramer)引入各自的靶細胞中。然而種類型的方法同樣也受到相當多的限制，尤其 是由於缺乏基於基因療法的治療方法的接受性。特別地，因為不存在能夠合成鏡像異構體 即由L-核苷酸組成的適體的生物系統，所以在intramer的情況下所採用的在細胞內編碼 各適體的核酸的細胞內表達的途徑對於鏡像異構體基本上是關閉的。
[0007] 因此，本發明的目的是提供能夠特異性地與細胞內靶分子即存在於細胞中的靶分 子相互作用的物質類型。


【發明內容】

[0008] 根據本發明，通過所附的獨立權利要求的主題而實現了該目的。在從屬權利要求 中公開了優選實施方案。
[0009] 根據本發明，根據獨立權利要求的主題實現了該基本目的。優選的實施方案公開 於從屬權利要求中。
[0010] 根據本發明的第一個方面，通過使用L-核酸作為細胞內活性劑實現了該目的。
[0011] 在第一個方面的第一個實施方案中，所述L-核酸是鏡像異構體。
[0012] 在第一個方面的第二個實施方案（其也是第一個實施方案的一個實施方案）中， 所述L-核酸與細胞內受體相互作用。
[0013] 在第一個方面的第三個實施方案（其也是第二個實施方案的一個實施方案）中， 所述細胞內受體選自分子受體、酶、伴侶分子、信號肽、細胞內結構和代謝中間體。
[0014] 在第一個方面的第四個實施方案（其也是第二個實施方案的一個實施方案）中， 所述細胞內受體選自多肽、糖類、核酸、脂質和其組合。
[0015] 在第一個方面的第五個實施方案（其也是第二、第三和第四個實施方案的一個實 施方案）中，所述L-核酸在細胞內與細胞內受體相互作用。
[0016] 在第一個方面的第六個實施方案（其也是第二、第三、第四和第五個實施方案的 一個實施方案）中，所述細胞內受體選自轉錄因子和結合AT-鉤的DNA結合蛋白。
[0017] 在第一個方面的第七個實施方案（其也是第六個實施方案的一個實施方案）中， 所述細胞內受體選自HMG-蛋白，優選選自HMGAl、HMGAla、HMGAlb和HMGA2。
[0018] 根據本發明的第二個方面，通過用於結合細胞內受體的方法實現了該目的，所述 方法包括：
[0019] -提供包含至少一種細胞內受體的細胞，
[0020] -提供L-核酸，和
[0021] -將細胞和L-核酸一起溫育。
[0022] 在第二個方面的第一個實施方案中，在使所述L-核酸在細胞內結合細胞內受體 的條件下進行溫育。
[0023] 在第二個方面的第二個實施方案（其也是第一個實施方案的一個實施方案）中， 所述L-核酸是鏡像異構體。
[0024] 在第二個方面的第三個實施方案（其也是第一和第二個實施方案的一個實施方 案）中，在溫育細胞和L-核酸後，測定所述L-核酸是否與所述細胞內受體結合，特別是細 胞內結合。
[0025] 在第二個方面的第四個實施方案（其也是第一、第二和第三個實施方案的一個實 施方案）中，所述細胞內受體選自分子受體、代謝中間體和酶。
[0026] 在第二個方面的第五個實施方案（其也是第一、第二、第三和第四個實施方案的 一個實施方案）中，所述細胞內受體選自多肽、糖類、核酸、脂質和其組合。
[0027] 在第二個方面的第六個實施方案（其也是第一、第二、第三、第四和第五個實施方 案的一個實施方案）中，所述細胞內受體選自轉錄因子和結合AT-鉤的DNA結合蛋白。
[0028] 在第二個方面的第七個實施方案（其也是第六個實施方案的一個實施方案）中， 所述細胞內受體選自HMG-蛋白，優選選自HMGAl、HMGAla、HMGAlb和HMGA2。
[0029] 根據本發明的第三個方面，通過使用L-核酸來製備用於治療和/或預防疾病的藥 物實現了該目的，其中所述藥物的靶分子是細胞內靶分子。
[0030] 在第三個方面的第一個實施方案中，所述細胞內受體選自分子受體、酶、伴侶分 子、信號肽、細胞內結構和代謝中間體。
[0031] 在第三個方面的第二個實施方案（其也是第一個實施方案的一個實施方案）中， 所述細胞內受體選自多肽、糖類、核酸、脂質和其組合。
[0032] 在第三個方面的第三個實施方案（其也是第一和第二個實施方案的一個實施方 案）中，所述靶分子選自轉錄因子和結合AT-鉤的DNA結合蛋白。
[0033] 在第三個方面的第四個實施方案（其也是第三個實施方案的一個實施方案）中， 所述靶分子選自HMG-蛋白，優選選自HMGAl、HMGAla、HMGAlb和HMGA2。
[0034] 在第三個方面的第五個實施方案（其也是第三和第四個實施方案的一個實施方 案）中，所述疾病選自腫瘤疾病、病毒感染和動脈硬化。
[0035] 在第三個方面的第六個實施方案（其也是第五個實施方案的一個實施方案）中， 所述腫瘤疾病選自間充質腫瘤、上皮腫瘤、良性腫瘤、惡性腫瘤和轉移性腫瘤。
[0036] 在第三個方面的第七個實施方案（其也是第三、第四、第五和第六個實施方案的 一個實施方案）中，所述靶分子是HMGA，和所述疾病選自前列腺、胰腺、甲狀腺、子宮頸、胃、 乳腺、結腸/直腸、卵巢的癌症；成神經細胞瘤；淋巴瘤；子宮平滑肌瘤；脂肪瘤；子宮內膜 息肉；肺的軟骨樣錯構瘤；頭唾液腺（KopfspeicheldrUsen)的多形性腺瘤；血管外皮細胞 瘤；軟骨瘤；侵襲性血管粘液瘤；瀰漫性星形細胞瘤；破骨細胞瘤；皮膚癌；伯基特淋巴瘤； 路易斯肺癌（Lewis-Lungenkrebs);白血病；非小細胞肺癌；和各自地其轉移和/或轉移形 式。
[0037] 在第三個方面的第八個實施方案（其也是第五個實施方案的一個實施方案）中， 通過由HMGAl、HMGAla、HMGAlb和/或HMGA2介導的動脈硬化斑的形成而引起或導致所述動 脈硬化。
[0038] 在第三個方面的第九個實施方案（其也是第一、第二、第三、第四、第五、第六、第 七和第八個實施方案的一個實施方案）中，所述細胞內靶分子存在於細胞內。
[0039] 根據本發明的第四個方面，通過使用L-核酸來製備用於診斷的診斷劑實現了該 目的，其中所述診斷劑的靶分子是細胞內靶分子。
[0040] 在第四個方面的第一個實施方案中，所述細胞內受體選自分子受體、酶、伴侶分 子、信號肽、細胞內結構和代謝中間體。
[0041] 在第四個方面的第二個實施方案（其也是第一個實施方案的一個實施方案）中， 所述細胞內受體選自多肽、糖類、核酸、脂質和其組合。
[0042] 在第四個方面的第三個實施方案（其也是第一和第二個實施方案的一個實施方 案）中，所述靶分子選自轉錄因子和結合AT-鉤的DNA結合蛋白。
[0043] 在第四個方面的第四個實施方案（其也是第三個實施方案的一個實施方案）中， 所述靶分子選自HMG-蛋白，優選選自HMGA、HMGAla、HMGAlb和HMGA2。
[0044] 在第四個方面的第五個實施方案（其也是第三和第四個實施方案的一個實施方 案）中，所述疾病選自腫瘤疾病、病毒感染和動脈硬化。
[0045] 在第四個方面的第六個實施方案（其也是第五個實施方案的一個實施方案）中， 所述腫瘤疾病選自間充質腫瘤、上皮腫瘤、良性腫瘤、惡性腫瘤和轉移性腫瘤。
[0046] 在第四個方面的第七個實施方案（其也是第三、第四、第五和第六個實施方案的 一個實施方案）中，所述靶分子是HMGA，和所述疾病選自前列腺、胰腺、甲狀腺、子宮頸、胃、 乳腺、結腸/直腸、卵巢的癌症；成神經細胞瘤；淋巴瘤；子宮平滑肌瘤；脂肪瘤；子宮內膜 息肉；肺的軟骨樣錯構瘤；頭唾液腺的多形性腺瘤；血管外皮細胞瘤；軟骨瘤；侵襲性血管 粘液瘤；瀰漫性星形細胞瘤；破骨細胞瘤；皮膚癌；伯基特淋巴瘤；路易斯肺癌；白血病；非 小細胞肺癌；和各自地其轉移和/或轉移形式。
[0047] 在第四個方面的第八個實施方案（其也是第五個實施方案的一個實施方案）中， 通過由HMGA1、HMGAla、HMGAlb和/或HMGA2介導的動脈硬化斑的形成而引起所述動脈硬 化。
[0048] 在第四個方面的第九個實施方案（其也是第一、第二、第三、第四、第五、第六和第 七個實施方案的一個實施方案）中，所述細胞內靶分子存在於細胞內。
[0049] 根據本發明的第五個方面，通過包含結合細胞內靶分子的L-核酸和遞送媒介物 的組合物實現了該目的。
[0050] 在第五個方面的第一個實施方案中，所述遞送媒介物是適合於所述L-核酸的細 胞內遞送的遞送媒介物。
[0051] 在第五個方面的第二個實施方案（其也是第一個實施方案的一個實施方案）中， 所述遞送媒介物選自載體、綴合物和物理手段。
[0052] 在第五個方面的第三個實施方案（其也是第二個實施方案的一個實施方案）中， 所述遞送媒介物是載體，其中所述載體選自脂質體、納米顆粒、微粒、環糊精或樹枝狀聚合 物，或者是由多肽、聚氮丙啶和/或兩親性分子組成的囊泡。
[0053] 在第五個方面的第四個實施方案（其也是第二個實施方案的一個實施方案）中， 所述遞送媒介物是綴合物，其中所述綴合物是用於受體介導的胞吞作用的綴合物，具有融 合肽的綴合物，具有信號肽的綴合物，具有核酸的綴合物，優選具有鏡像異構體的綴合物， 或者是親脂綴合物。
[0054] 在第五個方面的第五個實施方案（其也是第二個實施方案的一個實施方案）中， 所述遞送媒介物是物理手段，其中所述手段優選選自電穿孔、離子電滲、壓力、超聲波和衝 擊波。
[0055] 在第五個方面的第六個實施方案（其也是第三個實施方案的一個實施方案）中， 所述遞送媒介物包含聚氮丙啶。
[0056] 在第五個方面的第七個實施方案（其也是第六個實施方案的一個實施方案）中， 所述聚氮丙啶是分子量為大約25kDa的分枝的聚氮丙啶。
[0057] 在第五個方面的第八個實施方案（其也是第六和第七個實施方案的一個實施方 案）中，所述聚氮丙啶形成微團或微團樣結構。
[0058] 在第五個方面的第九個實施方案（其也是第一、第二、第三、第四、第五、第六、第 七和第八個實施方案的一個實施方案）中，所述L-核酸是鏡像異構體。
[0059] 在第五個方面的第十個實施方案（其也是第九個實施方案的一個實施方案）中， 所述鏡像異構體具有修飾，其中所述修飾選自PEG-殘基。
[0060] 在第五個方面的第十一個實施方案（其也是第十個實施方案的一個實施方案） 中，所述PEG-殘基具有大約1，000至10, OOODa的分子量，優選大約1，500至2, 500Da的分 子量，和最優選大約2, OOODa的分子量。
[0061] 在第五個方面的第十二個實施方案（其也是第十和第十一個實施方案的一個實 施方案）中，所述修飾結合至L-核酸的5'末端或3' -末端。
[0062] 在第五個方面的第十三個實施方案（其也是第九、第十、第十一和第十二個實施 方案的一個實施方案）中，在所述組合物中，聚氮丙啶的氮基團的總數目對在所述組合物 中包含的核酸的磷酸基團的總數目的比率為大約1至20,優選大約1.5至10,更優選大約 2至5,和最優選大約2至3。
[0063] 在第五個方面的第十四個實施方案（其也是第一、第二、第三、第四、第五、第六、 第七、第八、第九、第十、第十一、第十二和第十三個實施方案的一個實施方案）中，所述組 合物在細胞內提供L-核酸。
[0064] 根據本發明的第六個方面，通過包含第五個方面的組合物和藥學上可接受的載體 的藥物組合物實現了該目的。
[0065] 在第一個方面的用途的一個實施方案中，所述L-核酸是第五個方面的組合物。 [0066] 在第二個方面的方法的一個實施方案中，所述L-核酸是第五個方面的組合物。 [0067] 在第三個方面的用途的一個實施方案中，所述L-核酸是第五個方面的組合物。 [0068] 在第四個方面的用途的一個實施方案中，所述L-核酸是第五個方面的組合物。 [0069] 根據本發明的第七個方面，通過結合HMGA的核酸實現了該目的，其特徵在於，所 述核酸包含盒Al區段和盒A2區段，其中盒Al區段和盒A2區段通過中間區段相互連接，和 其中盒Al和盒A2單獨地且相互獨立地選自GGGCG、GGGUG和GGGAG。
[0070] 在第七個方面的第一個實施方案中，所述中間區段由包含6或7個核苷酸的中間 區段Z1，或由包含12至15個核苷酸的中間區段Z2組成。
[0071] 在第七個方面的第二個實施方案（其也是第一個實施方案的一個實施方案）中， 所述核酸在盒Al區段的5' -末端具有第一區段，和在盒A2區段的3' -末端具有第二區段， 其中優選地這兩個區段相互獨立地各包含4至8個核苷酸。
[0072] 在第七個方面的第三個實施方案（其也是第二個實施方案的一個實施方案）中， 所述兩個區段相互之間至少部分或完全雜交，其中所述雜交在4至8個核苷酸對上延伸。
[0073] 在第七個方面的第四個實施方案（其也是第二和第二個實施方案的一個實施方 案）中，所述核酸在盒Al區段的5' -末端具有螺旋Al區段，和在盒A2區段的3' -末端具 有螺旋A2區段，其中優選地所述螺旋Al區段包含4至8個核苷酸和優選地所述螺旋A2區 段包含4至8個核苷酸，和其中優選地所述螺旋Al區段是在盒Al區段的5'-末端的第一 區段或其部分，和其中優選地所述螺旋A2區段是在盒A2區段的3' -末端的第二區段或其 部分，其中螺旋Al區段的長度不依賴於螺旋A2區段的長度。
[0074] 在第七個方面的第五個實施方案（其也是第四個實施方案的一個實施方案）中， 螺旋Al和螺旋A2區段相互之間至少部分或完全雜交，其中所述雜交在4至8個核苷酸對 上延伸。
[0075] 在第七個方面的第六個實施方案（其也是第四和第五個實施方案的一個實施方 案）中，在螺旋Al區段的3' -末端和盒Al區段的5' -末端之間布置螺旋Bl區段，和在盒 A2區段的3' -末端和螺旋A2區段的5' -末端之間布置螺旋B2區段，其中優選地所述螺旋 Bl和螺旋B2區段的長度單獨地且獨立地各包含4至8個核苷酸的長度。
[0076] 在第七個方面的第七個實施方案（其也是第六個實施方案的一個實施方案）中， 螺旋Bl和螺旋B2區段相互之間至少部分或完全雜交，其中所述雜交在4至8個核苷酸對 上延伸。
[0077] 在第七個方面的第八個實施方案（其也是第六和第七個實施方案的一個實施方 案）中，在螺旋Al區段的3' -末端和螺旋Bl區段的5' -末端之間布置0至5個核苷酸。
[0078] 在第七個方面的第九個實施方案（其也是第八個實施方案的一個實施方案）中， 在螺旋Al區段的3' -末端和螺旋Bl區段的5' -末端之間布置2個核苷酸。
[0079] 在第七個方面的第十個實施方案（其也是第六、第七、第八和第九個實施方案的 一個實施方案）中，在螺旋B2區段的3' -末端和螺旋A2區段的5' -末端之間布置0至6 個核苷酸。
[0080] 在第七個方面的第十一個實施方案（其也是第十個實施方案的一個實施方案，優 選地在第十個實施方案為第九個實施方案的一個實施方案的情況下）中，在螺旋B2區段的 3' -末端和螺旋A2區段的5' -末端之間布置1個核苷酸。
[0081] 在第七個方面的第十二個實施方案（其也是第六、第七、第八、第九、第十和第 十一個實施方案的一個實施方案）中，螺旋Al區段和螺旋Bl區段的核苷酸總數為10至12 個核苷酸，以及螺旋A2區段和螺旋B2區段的核苷酸總數為10至12個核苷酸。
[0082] 在第七個方面的第十三個實施方案（其也是第十二個實施方案的一個實施方案） 中，來自螺旋Al區段與螺旋A2區段的雜交以及螺旋Bl區段與螺旋B2區段的雜交的雜交 核苷酸的總數為10至12個核苷酸對。
[0083] 在第七個方面的第十四個實施方案（其也是第六、第七、第八、第九、第十、第 十一、第十二和第十三個實施方案，優選地第六或第七個實施方案的一個實施方案）中，所 述核酸不包含螺旋Al和螺旋A2區段，由此螺旋Bl區段布置在所述核酸的5' -末端並且螺 旋B2布置在3' -末端，其中優選地螺旋Bl和螺旋B2區段的長度單獨地且獨立地各包含4 至8個核苷酸的長度。
[0084] 在第七個方面的第十五個實施方案（其也是第十四個實施方案的一個實施方案） 中，螺旋Bl和螺旋B2區段相互之間至少部分或完全雜交，其中所述雜交在4至8個核苷酸 對上延伸。
[0085] 在第七個方面的第十六個實施方案（其也是第四和第五個實施方案的一個實施 方案）中，在螺旋Al區段的3' -末端和盒Al區段的5' -末端之間布置1至5個核苷酸，和 在盒A2區段的3' -末端和螺旋A2區段的5' -末端之間布置1至3個核苷酸。
[0086] 在第七個方面的第十七個實施方案（其也是第六、第七、第八、第九、第十、第 十一、第十二、第十三、第十四和第十五個實施方案的一個實施方案）中，在螺旋Bl區段和 3' -末端和盒Al區段的5' -末端之間布置2個核苷酸，在盒A2區段的3' -末端和螺旋B2 區段的5' -末端之間布置1至7個核苷酸。
[0087] 在第七個方面的第十八個實施方案（其也是下列實施方案的一個實施方案：第 一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八和第十個實施方案，在第十個實施方案為第六、 第七和第八個實施方案的一個實施方案的情況下，第十二和第十三個實施方案，在它們為 第六、第七、第八和第十個實施方案的實施方案的情況下，第十四和第十五個實施方案，在 它們為第六、第七、第八、第十、第十一、第十二和第十三個實施方案的實施方案的情況下， 或第十七個實施方案，在它為第六、第八、第十、第十二、第十三和第十五個實施方案的一個 實施方案的情況下，各自在此處限定的範圍內）中，中間區段Zl包含6或7個核苷酸。 [0088] 在第七個方面的第十九個實施方案（其也是第十八個實施方案的一個實施方案） 中，中間區段Zl具有序列N1N 2GN8N3N4N5，其中
[0089] N1 = ^GA或G ;
[0090] N2 = G 或 U ;
[0091] N3 = U 或 C ;
[0092] N4 = U 或 A ;
[0093] N5 = G 或 A ;和
[0094] N8 = U或不存在。
[0095] 在第七個方面的第二十個實施方案（其也是第十九個實施方案的一個實施方案） 中，所述核酸包含盒Al區段和盒A2區段，其中盒Al區段的3' -末端直接與中間區段Zl的 5' -末端相連接，和中間區段Zl的3' -末端直接與盒A2區段的5' -末端相連接。
[0096] 在第七個方面的第二十一個實施方案（其也是第十八、第十九和第二十個實施方 案，特別是第二十個實施方案的一個實施方案）中，所述核酸包含螺旋Bl區段和螺旋B2區 段。
[0097] 在第七個方面的第二十二個實施方案（其也是第二十一個實施方案的一個實施 方案）中，螺旋Bl和螺旋B2區段單獨地且相互獨立地各包含4至8個核苷酸，其優選地相 互之間完全或部分雜交。
[0098] 在第七個方面的第二十三個實施方案（其也是第二十一和第二十二個實施方案 的一個實施方案）中，在螺旋Bl區段的3'-末端和盒Al區段的5'-末端之間以5'-3'方 向布置兩個核苷酸N6、N 7，其中N6是G、A或U，和N7是G或U。
[0099] 在第七個方面的第二十四個實施方案（其也是第二十一、第二十二和第二十三個 實施方案的一個實施方案）中，在盒A2區段的3' -末端和螺旋B2區段的5' -末端之間沒 有布置核苷酸，或以5' -3'方向布置核苷酸序列GNy,其中Ny包含0至6個核苷酸，優選0或 6個核苷酸。
[0100] 在第七個方面的第二十五個實施方案（其也是第十八、第十九、第二十、第 二i^一、第二十二、第二十三和第二十四個實施方案的一個實施方案）中，所述核酸包含螺 旋Al區段和螺旋A2區段。
[0101] 在第七個方面的第二十六個實施方案（其也是第二十五個實施方案的一個實施 方案）中，螺旋Al和螺旋A2區段各自且相互獨立地包含4至8個核苷酸，其中優選地螺旋 Al和螺旋A2區段相互之間完全或部分雜交。
[0102] 在第七個方面的第二十七個實施方案（其也是第二十五和第二十六個實施方案 的一個實施方案）中，在螺旋Al區段的3' -末端和螺旋BI區段的5' -末端之間布置核苷 酸序列Nx，其中Nx包含O至5個核苷酸。
[0103] 在第七個方面的第二十八個實施方案（其也是第二十五、第二十六和第二十七個 實施方案的一個實施方案）中，在螺旋B2區段的3' -末端和螺旋A2區段的5' -末端之間 布置核苷酸序列Nz，其中Nz包含0至6個核苷酸。
[0104] 在第七個方面的第二十九個實施方案（其也是第二十一、第二十二、第二十三、第 二十四、第二十五、第二十六、第二十七和第二十八個實施方案的一個實施方案）中，來自 螺旋Al區段與螺旋A2區段的雜交以及螺旋Bl區段與螺旋B2區段的雜交的雜交核苷酸的 總數為10至12個核苷酸對。
[0105] 在第七個方面的第三十個實施方案（其也是第二十四、第二十五、第二十六、第 二十七、第二十八和第二十九個實施方案的一個實施方案）中，在盒A2區段的3'-末端和 螺旋B2區段的5' -末端之間以5' -3'方向布置核苷酸序列GNy，其中Ny包含0至6個核苷 酸，優選〇或6個核苷酸。
[0106] 在第七個方面的第三十一個實施方案（其也是第三十個實施方案的一個實施方 案）中，所述結合HMGA的核酸包含下列結構

【權利要求】
1. 結合HMGA的核酸，其特徵在於，所述核酸包含盒A1區段和盒A2區段，其中盒A1區段 和盒A2區段通過中間區段相互連接，和其中盒A1和盒A2單獨地且相互獨立地選自GGGCG、 GGGUG和GGGAG，其特徵在於，所述中間區段由包含6或7個核苷酸的中間區段Z1，或由包 含12至15個核苷酸的中間區段Z2組成，並且所述核酸在盒A1區段的5' -末端具有第一 區段，和在盒A2區段的3'-末端具有第二區段，其中優選地這兩個區段相互獨立地各包含 4至8個核苷酸。
2. 權利要求1的結合HMGA的核酸，其特徵在於，HMGA選自選自HMGAl、HMGAla、HMGAlb 和 HMGA2。
3. 權利要求1的結合HMGA的核酸，其特徵在於，中間區段Z1具有序列NiN2GN8N3N 4N5，其 中 & = U、C、A 或G ; N2 = G 或 U ; N3 = U 或 C ; N4 = U 或 A ; N5 = G或A ;和 N8 = U或不存在。
4. 權利要求3的結合HMGA的核酸，其包含下列結構 螺旋 A1-N,-螺旋 B1-N6N
i1N2GN8N 3N4N：
}-N「螺旋 B2-Nz-螺旋 A2 其中 & = U、C、A 或G ; N2 = G 或 U ; N3 = U 或 C ; N4 = U 或 A ; N5 = G 或 A ; N6 = G、A 或 U ; N7 = G 或 U ; N8 = U或無核苷酸； Nx = 0至5個核苷酸； Ny = 0或6個核苷酸；和 Nz = 0至6個核苷酸； 盒A1區段和盒A2區段單獨地且相互獨立地各自選自包括GGGCG、GGGUG和GGGAG的核 苷酸序列； 螺旋A1區段和螺旋A2區段單獨地且相互獨立地各包含4至8個核苷酸，其中優選地 螺旋A1和螺旋A2區段相互之間完全或部分雜交；和 螺旋B1和螺旋B2區段單獨地且相互獨立地各包含4至8個核苷酸，其中優選地螺旋 B1和螺旋B2區段相互之間完全或部分雜交並且雜交區域包含4至8個核苷酸，和其中來自 螺旋A1區段與螺旋A2區段的雜交以及螺旋B1區段與螺旋B2區段的雜交的雜交核苷酸的 總數為10至12個核苷酸對。
5. 權利要求4的結合HMGA的核酸，其中結合HMGA的核酸的序列選自SEQ. ID. No. 1、 SEQ. ID. No. 2、SEQ. ID. No. 3、SEQ. ID. No. 5、SEQ. ID. No. 6、SEQ. ID. No. 7 和 SEQ. ID. No. 13。
6. 權利要求3的結合HMGA的核酸，其由下列結構組成 螺旋Al-Ν廠螺旋B1-N6N7
NAGNANA
曝旋B2-Nz-螺旋A2 其中 & = U、C、A 或G ; N2 = G 或 U ; N3 = U 或 C ; N4 = U 或 A ; N5 = G 或 A ; N6 = G、A 或 U ; N7 = G 或 U ; N8 = U或無核苷酸； Nx = 0至5個核苷酸；和 Nz = 0至6個核苷酸； 盒A1區段和盒A2區段單獨地且相互獨立地各自選自包括GGGCG、GGGUG和GGGAG的核 苷酸序列； 螺旋A1區段和螺旋A2區段單獨地且相互獨立地各包含4至8個核苷酸，其中優選地 螺旋A1和螺旋A2區段相互之間完全或部分雜交；和 螺旋B1和螺旋B2區段單獨地且相互獨立地各包含4至8個核苷酸，其中優選地螺旋 B1和螺旋B2區段相互之間完全或部分雜交並且雜交區域包含4至8個核苷酸，和其中來自 螺旋A1區段與螺旋A2區段的雜交以及螺旋B1區段與螺旋B2區段的雜交的雜交核苷酸的 總數為10至12個核苷酸對。
7. 權利要求6的結合HMGA的核酸，其中結合HMGA的核酸的序列是SEQ. ID. No. 3。
8. 權利要求3的結合HMGA的核酸，其由下列結構組成 螺旋 B1-N6N
SfAGNsNAN:
S-NY-螺旋 B2 其中 & = U、C、A 或G ; N2 = G 或 U ; N3 = U 或 C ; N4 = U 或 A ; N5 = G 或 A ; N6 = G、A 或 U ; N7 = G 或 U ; N8 = U或無核苷酸；和 Ny = 0至6個核苷酸； 盒A1區段和盒A2區段單獨地且相互獨立地各自選自包括GGGCG、GGGUG和GGGAG的核 苷酸序列；和 螺旋B1和螺旋B2區段單獨地且相互獨立地各包含4至8個核苷酸，其中優選地螺旋 B1和螺旋B2區段相互之間完全或部分雜交並且雜交區域包含4至8個核苷酸，和其中來自 螺旋A1區段與螺旋A2區段的雜交以及螺旋B1區段與螺旋B2區段的雜交的雜交核苷酸的 總數為10至12個核苷酸對。
9. 權利要求3的結合HMGA的核酸，其由下列結構組成 螺旋 bi-n6n7
NAGNANA
螺旋 B2 其中 & = U、C、A 或G ; N2 = G 或 U ; N3 = U 或 C ; N4 = U 或 A ; N5 = G 或 A ; N6 = G、A 或 U ; N7 = G或U ;和 N8 = U或無核苷酸； 盒A1區段和盒A2區段單獨地且相互獨立地各自選自包括GGGCG、GGGUG和GGGAG的核 苷酸序列；和 螺旋B1和螺旋B2區段單獨地且相互獨立地各包含4至8個核苷酸，其中優選地螺旋 B1和螺旋B2區段相互之間完全或部分雜交並且雜交區域包含4至8個核苷酸，和其中來自 螺旋A1區段與螺旋A2區段的雜交以及螺旋B1區段與螺旋B2區段的雜交的雜交核苷酸的 總數為10至12個核苷酸對。
10. 權利要求8的結合HMGA的核酸，其中結合HMGA的核酸的序列選自SEQ. ID. No. 15 和 SEQ. ID. No. 16。
11. 權利要求1的結合HMGA的核酸，其特徵在於，中間區段Z2包含螺旋Cl區段和螺旋 C2區段。
12. 權利要求11的結合HMGA的核酸，其由下列結構組成： 螺旋 Al-Na-
-N-^^CL-N-^^tCl-N,-
-G-Ns-螺旋 A2 (III) 其中 Na = 1至5個核苷酸； Nb = 3個核苷酸； N。= 3至5個核苷酸； Nd = 2至5個核苷酸；和 Nc = 1至2個核苷酸，優選A或UU ; 盒A1區段和盒A2區段單獨地且相互獨立地各自選自GGGCG、GGGUG和GGGAG ; 螺旋A1和螺旋A2區段單獨地且相互獨立地各包含5或6個核苷酸；和 螺旋C1和螺旋C2區段各包含5或6個核苷酸，其優選地相互之間完全或部分雜交。
13. 權利要求12的結合HMGA的核酸，其中結合HMGA的核酸的序列選自SEQ. ID. No. 8、 SEQ. ID. No. 9、SEQ. ID. No. 10、SEQ. ID. No. 11、SEQ. ID. No. 14、SEQ. ID. No. 22 和 SEQ. ID. No. 24。
14. 權利要求11的結合HMGA的核酸，其由下列結構組成： 螺旋 Al-Nr螺旋 Bl-Nr
Cl -NC2_-G-
-G-螺旋 B2-A- 螺旋A2 其中 隊包含2個核苷酸，優選是CA ; %包含2個核苷酸，優選是AG ; N。包含4個核苷酸，優選是GAUG ; 盒A1和盒A2區段單獨地且相互獨立地各自選自序列GGGCG、GGGUG和GGGAG ; 螺旋A1和螺旋A2區段單獨地且獨立地各包含6個核苷酸，其優選地相互雜交； 螺旋B1和螺旋B2區段單獨地且獨立地各包含5個核苷酸，其中優選地螺旋B1區段和 螺旋B2區段相互雜交；和 螺旋C1和螺旋C2區段單獨地且獨立地各包含3個核苷酸，其中優選地螺旋C1和螺旋 C2區段相互雜交。
15. 權利要求14的結合HMGA的核酸，其中結合HMGA的核酸的序列是SEQ. ID. No. 12。
16. 用於檢測HMGA的試劑盒，其包括權利要求1至15中任一項的結合HMGA的核酸。
17. 包含HMGA蛋白和權利要求1至15中任一項的結合HMGA的核酸的複合物。
【文檔編號】C12N15/115GK104293780SQ201410395203
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2006年5月4日 優先權日:2005年5月4日
【發明者】F·雅羅施, C·馬奇, S·克魯斯曼, A·沃特, D·尤爾伯格, W·普爾斯克, K·布赫納 申請人:諾松製藥股份公司