具有增強的酶活性的酶學傷口清創組合物的製作方法

2023-06-10 15:14:31

專利名稱：具有增強的酶活性的酶學傷口清創組合物的製作方法
技術領域：
本發明總體涉及局部用酶學傷口清創組合物和用於治療需要清創的傷口的方法。
背景技術：
傷口癒合是一個複雜的過程，其經常因為傷口區域中無活力壞死組織的存在而進一步複雜化。清創是從傷口移除無活力組織的過程，以阻止或減少感染並利於癒合。含有如胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶、舒替蘭酶和膠原蛋白酶等蛋白水解酶的局部用組合物已經用於酶學傷口清創。通常，護理標準是每天一次地(每24小時一次)在需要清創的傷口上應用組合物，或者如果組合物被汙染，要更加頻繁。因為許多蛋白水解酶在水基組合物中容易降解，所以許多傷口清創組合物是使用無水、疏水基質製備的， 所述基質例如US 3，821，364和US 6，479，060公開的凡士林、礦物油和/或植物油，這兩個專利通過引用的方式併入。然而，基於疏水基質的酶學傷口清創組合物在傷口床的水性環境中通常是不混溶的，因此，蛋白水解酶與傷口床的接觸通常會受阻。一些其它組合物是使用無水、親水基質製造的，所述基質如US 6，548，556、US 2003/0198631、US 2003/0198632 中公開的丙二醇或泊洛沙姆，這三個專利通過引用的方式併入本文。

發明內容
本發明涉及具有增強的酶活性的局部用酶學傷口清創組合物。這些組合物包含含有至少一種蛋白水解酶和至少一種親水多元醇的分散相；以及含有疏水基質的連續相。本發明的傷口清創組合物比現有技術的傷口清創組合物具有增強的酶活性。本發明一方面揭示了一種傷口清創組合物，其包含含有液態親水多元醇和至少一種蛋白水解酶的分散相；以及含有疏水基質的連續相；其中液態親水多元醇的量在液態親水多元醇最佳量的±10% w/w內。例如，如果最佳量是約30% w/w，可以使用的液態親水多元醇的量在總配方約20% w/w到約40% w/w之間，以獲得配方的增強的酶活性。另一方面，液態親水多元醇的量在液態親水多元醇最佳量的±9%、8%、7%或6% w/w範圍內。再一方面，液態親水多元醇的量在液態親水多元醇最佳量的±5%、4%、3%、2%、1%、0.5% 或O. I % w/w範圍內。在包含(a)含有液態親水多元醇和至少一種蛋白水解酶的分散相；以及(b)含有疏水基質的連續相的組合物中，「液態親水多元醇的最佳量」可由本說明書具體實施方式
部分的A部分中描述的方法確定，其通過引用的方式併入該部分。在本說明書具體實施方式
部分的B部分中描述了用於確定組合物是否在液態親水多元醇的最佳量±10% w/w之內的方法，其通過引用的方式併入。
對於具有不同蛋白水解酶的組合物，液態親水多元醇的最佳量亦不同。另外，對於具有特定蛋白水解酶的組合物，其液態親水多元醇的最佳量可以根據組合物的成分而不同。比如，在含有PEG-400和凡士林的膠原蛋白酶組合物中的液態親水多元醇的最佳量可不同於在含有PEG-600和凡士林的膠原蛋白酶組合物中的液態親水多元醇的最佳量，或者不同於含有泊洛沙姆-124和凡士林的膠原蛋白酶組合物。術語「親水多元醇」意指含有至少兩個羥基基團的水溶性、極性脂肪醇，包括但不限於聚合物多元醇(例如聚乙二醇和泊洛沙姆)。在描述「親水多元醇」、「聚乙二醇」或「泊洛沙姆」的語境中，術語「液態」意指25°C 時材料處於液態。在描述「親水多元醇」、「聚乙二醇」或「泊洛沙姆」的語境中，術語「固態」意指25°C 時材料處於固態。根據本發明的另一方面，公開了一種治療需要清創的傷口的方法，包括在傷口上應用組合物，所述組合物包含含有液態親水多元醇和具有有效清創濃度的至少一種蛋白水解酶的分散相；以及含有疏水基質的連續相；其中液態親水多元醇的量在最佳量±10% w/ w內。另一方面，液態親水多元醇的量在所述最佳量的±9%、8%、7%或6% /^範圍內。再一方面，液態親水多元醇的量在所述最佳量的±5%、4%、3%、2%、1%、0. 5%或O. 1% w/w 範圍內。在某些實施例中，蛋白水解酶為金屬蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、絲氨酸蛋白酶或天門冬氨酸肽酶。通常，對於包括金屬蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶或絲氨酸蛋白酶的組合物，親水多元醇的最佳量從約 10% ,11% >12% ,13% ,14% ,15% ,16% ,17% ,18% ,19%,20%, 21 22%,23%,24%,25%,26%,27%,28%,29%,30%,31 32%,33%,34%,35%, 36%,37%,38%,39% w/w到約40% w/w，或從中可推導的任何範圍或數值量。對於包括天門冬氨酸肽酶的組合物，親水多元醇的最佳量從約48 %、49 %、50 %、51 %、52 %、53 %、 54%,55%,56%,57%,58%,59%,60%,61%,62%,63%,64%,65%,66%,67% w/w 到約 68% w/w或從中可推導的任何範圍或數值量。在一實施例中，金屬蛋白酶為膠原蛋白酶。 在另一實施例中，金屬蛋白酶為膠原蛋白酶且親水多元醇的最佳量從約10 %、11 %、12 %、 13%,14%,15%,16%,17%,18%,19%,20%,21 %,22%,23%,24%,25%,26%,27%, 28%,29%,30%,31%,32%,33%,34%,35%,36%,37%,38%,39% w/w 到約 40% w/w 或從中可推導的任何範圍或數值量。在一實施例中，金屬蛋白酶為嗜熱菌蛋白酶。在另一實施例中，金屬蛋白酶為嗜熱菌蛋白酶且親水多元醇的最佳量從約19^^20^^21^^22 %、 23%,24%,25%,26%,27%,28%,29%,30%,31 %,32%,33%,34%,35%,36%,37%, 38 % w/w到約39 % w/w或從中可推導的任何範圍或數值量。在一實施例中，半胱氨酸蛋白酶為木瓜蛋白酶。在另一實施例中，半胱氨酸蛋白酶為木瓜蛋白酶且親水多元醇的最佳量從約 19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、 34 %、35 %、36 %、37 %、38 % w/w到約39 % w/w或從中可推導的任何範圍或數值量。在一實施例中，絲氨酸蛋白酶為胰蛋白酶。在另一實施例中，絲氨酸蛋白酶為胰蛋白酶且親水多元醇的最佳量從約 4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16% 17%,18%,19%,20%,21%,22%,23% w/w到約24% w/w或從中可推導的任何範圍或數值量。在一實施例中，天門冬氨酸肽酶為胃蛋白酶。在另一實施例中，天門冬氨酸肽酶為胃蛋白酶且親水多元醇的最佳量從 48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、 58%,59%,60%,61%,62%,63%,64%,65%,66%,67% w/w 到約 68% w/w 或從中可推導
的任何範圍或數值量。在某些實施例中，蛋白水解酶懸浮於分散相中。在其它實施例中，蛋白水解酶溶解於分散相中。在某些實施例中，液態親水多元醇為液態聚乙二醇或液態泊洛沙姆，或其混合物。本發明的某些實施例中，分散相可進一步包括固態親水多元醇以協助物理性地穩定該組合物或者降低或防止相分離。在某些實施例中，固態親水多元醇為固態泊洛沙姆或固態聚乙二醇或其混合物。在本發明的各種實施例中，疏水基質包含凡士林、礦物油或植物油、或其混合物。 在一實施例中，所述基質包含凡士林。在另一實施例中，疏水基質包含植物油。在另一實施例中，疏水基質包含礦物油。在另一實施例中，疏水基質包含凡士林和礦物油、凡士林和植物油、礦物油和植物油、或凡士林、礦物油和植物油。還在另一實施例中，疏水基質包含植物油，其中植物油是蓖麻油。 在一實施例中，組合物為半固態。在另一實施例中，組合物為液態。在其它實施例中，組合物注入到墊子、紗布、或海綿中。在一實施例中，組合物是無菌的或無水的或者既無菌又無水。組合物可被包裝成適合分配傷口清創劑的任何包裝。組合物可以包裝成多用途、 單劑量、或計量劑量的包裝。非限制性例子包括管子、瓶子、罐子、泵式容器、壓力式容器、氣囊式容器、氣溶膠容器、氣溶膠噴霧容器、非氣溶膠噴霧容器、注射器、小囊、或小袋。本發明的另一實施例中，公開了一種確定加到目標組合物中液態親水多元醇的最佳量的方法，所述目標組合物包含含有蛋白水解酶的分散相以及含有疏水基質的連續相， 所述方法包括(I)獲得包含分散相和連續相組成的一系列組合物，其中所述分散相進一步包含液態親水多元醇，其中該系列組合物中的每一種組合物包含相同量的蛋白水解酶和不同量的液態親水多元醇；(2)確定所述一系列組合物中的每一組合物的酶活性；(3)確定圖上的最高點，所述圖繪出相對於包含在所述一系列組合物的每一種組合物中的液態親水多元醇的量的酶活性，其中圖上的最高點與加到目標組合物中的液態親水多元醇的最佳量相關。一方面，所述一系列組合物的酶活性可通過利用如本說明書中描述的體外人工焦痂測試模型測定。本發明的另一方面公開了一種增強目標組合物中酶活性的方法，所述目標組合物包含含有蛋白水解酶的分散相和含有疏水基質的連續相，所述方法包括(I)獲得包含分散相和連續相的一系列組合物，其中所述分散相進一步地含有液態親水多元醇，其中該系列組合物的每一種組合物都含有相同量的蛋白水解酶和不同量的液態親水多元醇；(2)確定這一系列組合物中每一種組合物的酶活性；(3)確定圖上的最高點，所述圖繪出酶活性對對於包含在所述系列組合物的每一種組合物中的液態親水多元醇的量，其中圖上的最高點與加到目標組合物中的液態親水多元醇的最佳量相關；(4)將液態親水多元醇最佳量的 +10 % w/w加到目標組合物中，由此增加目標組合物中的酶活性。一方面，該系列組合物的酶活性可通過利用如本說明書中描述的體外人工焦痂測試模型測定。所述系列組合物中的多元醇的量可隨機地或按選擇的量在每種組合物間變化。在一實施例中，所述系列組合物的每一種組合物中的多元醇的量可以是組合物重量或體積計的 0%、0· 1%,O. 2%,O. 3%,O. 4%,0. 5%,0. 6%,0. 7%,0. 8%,0. 9%U%>2%,3%,4%, 5%,6%,7%,8%,9%U0%U1 %>12%,13%,14%,15%,16%,17%,18%,19%,20%, 21 %,22%,23%,24%,25%,26%,27%,28%,29%,30%,31 %,32%,33%,34%,35%, 36%,37%,38%,39%,40%,41 %,42%,43%,44%,45%,46%,47%,48%,49%,50%, 51 %,52%,53%,54%,55%,56%,57%,58%,59%,60%,61 %,62%,63%,64%,65%, 66%,67%,68%,69%,70%,71 %,72%,73%,74%,75%,76%,77%,78%,79%,80%, 81 %,82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%, 96%,97%,98%,99%,99. I % ,99. 2 % ,99. 3 % ,99. 4 % ,99. 5 % ,99. 6 % ,99. 7 % ,99. 8 %, 99. 9%、或 100%。術語「無水的」意指組合物含有相對於總組合物少於 約5% w/w、或少於約3% w/ W、或少於約1% w/w、或少於約O. 5% w/w、或少於約O. 1% w/w的，或0%的游離水或添加的水，不考慮水合水、結合水、或在任何的組合物原始成分中存在的一般溼度水平。除非另有說明，這裡表達的百分值是重量比重量，並且是相對於總組合物而言的。當與權利要求書和/或說明書中的術語「包括」或「含有」聯合使用時，單詞 「一」 (「a」或「an」)的使用意指「一個」，但是其也與「一個或多個」、「至少一個」、「一個和多於一個」的意思相一致。在整個本申請中，術語「約」用於表明數值包括對於獲得該數值的裝置、用來測定該數值的方法來說，誤差的固有變化，或者在評估對象中存在的變化。如在本說明書和權利要求書中所使用，單詞「包含」(和「包含「的任意形式)、「具有」(和「具有」的任意形式)、「包括」(和「包括」的任意形式)或「含有」(和「含有」的任意形式)是包含性的或開放式的，不排除另外的未說明的成分或方法步驟。當用於權利要求書和/或說明書時，術語「治療」、「抑制」 「防止」或「減少」、或這些術語的任何變化包括任何可測量的降低或完全抑制，以取得期望的結果。當在說明書和/或權利要求書中使用時，術語「有效的」意指足夠獲得期望的、預期的、或預設的結果。組合物和方法針對其應用可以「包含」整個說明書中公開的任何成分或步驟」或者 「基本上由其組成」或「由其組成」。關於過渡詞語(transitional phase) 「基本上由...組成」，在一非限制性方面，在本說明書中公開的組合物和方法的基本且新穎的特徵包括組合物的增強的酶活性。本發明的其它目的、特徵和優點會從以下詳細說明中變得明顯。然而應當理解的是，當表明本發明的具體實施方案時，具體實施方式
和具體的實例僅通過示例性的方式提供，因為在本發明精神和範圍內所作的各種改變和變動對於本領域的技術人員是顯而易見的。


圖I. 一系列組合物的體外膠原溶解活性(mg/mL) (y-軸)相對於包含在所述系列組合物中的PEG-400百分比(X-軸)的圖，所述組合物包含含有膠原蛋白酶和PEG-400的分散相，所述分散相分散到含有白凡士林的疏水相中。圖2. —系列組合物的體外膠原溶解活性(mg/mL) (y-軸)相對於包含在所述系列組合物中的PEG-600百分比(X-軸)的圖，所述組合物包含含有膠原蛋白酶和PEG-600的分散相，所述分散相分散到含有白凡士林的疏水相中。圖3. —系列組合物的體外膠原溶解活性(mg/mL) (y-軸)相對於包含在所述系列組合物中的泊洛沙姆-124百分比(X-軸)的圖，所述組合物包含含有膠原蛋白酶和泊洛沙姆-124的分散相，所述分散相分散到含有白凡士林的疏水相中。圖4. 一系列組合物的體外膠原溶解活性(mg/mL) (y-軸)相對於包含在所述系列組合物中的PEG-400百分比(X-軸)的圖，所述組合物包含含有胰蛋白酶和PEG-400的分散相，所述分散相分散到含有白凡士林的疏水相中。圖5. —系列組合物的體外膠原溶解活性(mg/mL) (y-軸)相對於包含在所述系列組合物中的PEG-400百分比(X-軸)的圖，所述組合物包含含有木瓜蛋白酶和PEG-400的分散相，所述分散相分散到含有白凡士林的疏水相中。圖6. —系列組合物的體外膠原溶解活性(mg/mL) (y-軸)相對於包含在所述系列組合物中的PEG-400百分比(X-軸)的圖，所述組合物包含含有嗜熱菌蛋白酶和PEG-400 的分散相，所述分散相分散到含有白凡士林的疏水相中。圖7. —系列組合物的體外膠原溶解活性(mg/mL) (y-軸)相對於包含在所述系列組合物中的PEG-400百分比(X-軸)的圖，所述組合物包含含有胃蛋白酶和PEG-400的分散相，所述分散相分散到含有白凡士林的疏水相中。 圖8.來自一系列組合物的膠原蛋白酶的物理釋放(mg) (y-軸)相對於包含在該系列組合物中的PEG-400百分比(X-軸)的圖，所述組合物包含含有膠原蛋白酶和PEG-400 的分散相，所述分散相分散到含有白凡士林的疏水相中。圖9.與水包油乳霜相比，白凡士林包PEG分散體中的酶穩定性。圖10.在豬燒傷傷口中，移除焦痂的清創功效。
具體實施例方式本發明一方面提供了具有增強的酶活性的局部用酶學傷口清創組合物。這些組合物包含含有至少一種蛋白水解酶和親水多元醇的分散相；以及含有疏水基質的連續相。本發明的一方面，所述親水多元醇是液態親水多元醇。發現，本發明組合物即，疏水基質中的親水多元醇和蛋白水解酶的分散體的酶活性(例如體外膠原溶解)，不僅高於僅基於蛋白水解酶和疏水基質組合(例如，沒有如親水多元醇的親水相)的酶組合物的酶活性，而且令人驚訝地高於那些僅基於蛋白水解酶和親水基質組合(例如，沒有如凡士林的疏水相)的酶組合物的酶活性。由於酶在水存在時被激活，因此預期在只基於蛋白水解酶和親水基質組合的組合物中出現最高的酶活性，在此， 所述基質在水中將完全混溶，並且此條件最有利於酶的釋放和活化。然而，本發明的親水和疏水相的分散體組合物具有與親水多元醇的最佳量相關的最高酶活性，所述最佳量高於組合物中親水多元醇的0%並低於100%。期望地發現，在單一基於親水載體的組合物中的物理性酶釋放高於在單一基於疏水載體的組合物中的酶釋放，也高於本發明的組合物。從在圖8中所示，酶釋放曲線通常隨增高的親水多元醇(PEG-400)百分比而增高，在100%時具有最高的釋放，在0%時具有最低的釋放。然而，令人驚訝地是，本發明的分散體組合物的酶活性更高(參看圖1-7)。因此，這些分散體組合物的酶活性曲線並不像預期的那樣與物理性酶釋放曲線相關。本發明的組合物適於通過將組合物應用到傷口從而治療需要清創的傷口，所述組合物包含含有親水多元醇和有效清創濃度的至少一種蛋白水解酶的分散相；以及含有疏水基質的連續相；其中，親水多元醇的量在最佳量的±10% w/w範圍內，或最佳量的±9%、 8%、7%或6%w/w範圍內，或親水多元醇最佳量的±5%、4%、3%、2%、1%、0. 5%或O. 1% w/w範圍內。在以下部分進一步詳細討論本發明的這些及其它非限制性方面。A.確定液態親水多元醇最佳量的方法以下方案可用於製備一系列的組合物(稱為「系列組合物」)，隨後確定可用於本發明的分散體中的液態親水多元醇的最佳量。i^一 (11)種組合物可用於生成系列組合物。注意蛋白水解酶的量w/w)在系列組合物中保持恆定。以下步驟可用來製備這十一(11)種組合物(i)確定用於系列組合物的成分(例如，液態親水多元醇、蛋白水解酶、疏水基質) 並選擇要使用的蛋白水解酶的量。舉例來說，液態親水多元醇(如PEG 400)、蛋白水解酶 (如1% w/w的膠原蛋白水解酶)和疏水基質(如白凡士林)。 (ii)對於系列組合物中的組合物一，使用0%的液態親水多元醇，使用選擇量的蛋白水解酶，用疏水基質補足混合物至100%。例如，參考上面的步驟(i)，系列組合物的組合物一將具有PEG 4000% w/w、白凡士林99% w/w和膠原蛋白酶I % w/w。(iii)對於系列組合物的組合物二，使用10% w/w的液態親水多元醇和相同量的蛋白水解酶，用疏水基質補足混合物至100%。(注意，允許在液態親水多元醇的組成中，作為必要使用一些固態親水多元醇，使得對於系列組合物中的組合物產生物理性穩定的分散體)。(iv)對於系列組合物的組合物三，使用20% w/w的液態親水多元醇和相同量的蛋白水解酶，用疏水基質補足混合物至100%。(V)對於系列組合物中的組合物四，使用30% w/w的液態親水多元醇和相同量的蛋白水解酶，用疏水基質補足混合物至100%。(vi)對於系列組合物的組合物五，使用40% w/w的液態親水多元醇和相同量的蛋白水解酶，用疏水基質補足混合物至100%。(vii)對於系列組合物的組合物六，使用50% w/w的液態親水多元醇和相同量的蛋白水解酶，用疏水基質補足混合物至100%。(viii)對於組合物系列中的組合物七，使用60% w/w的液態親水多元醇和相同量的蛋白水解酶，用疏水基質補足混合物至100%。(ix)對於組合物系列中的組合物八，使用70 % w/w的液態親水多元醇和相同份額的蛋白水解酶，用疏水基質補足混合物至100%。(X)對於組合物系列中的組合物九，使用80% w/w的液態親水多元醇和相同量的蛋白水解酶，用疏水基質補足混合物至100%。(xi)對於系列組合物的組合物十，使用90% w/w的液態親水多元醇和相同量的蛋白水解酶，用疏水基質補足混合物至100%。(xii)對於系列組合物的組合物i^一，使用0%的疏水基質和相同量的蛋白水解酶，用親水多元醇補足混合物。(xiii)如本說明書具體實施方式
的部分H所述，使用體外人工焦痂測試模型，針對以下樣品米集時間6、12、18和24小時,測定系列組合物中的^ 種組合物的每一種組合物的酶活性。(ivx)累積各數據採集時間，繪製針對每種組合物的酶活性相對於系列組合物的每一種組合物中存在的液態親水多元醇的相關量曲線。對於累積24小時數據收集時間，曲線上的最高點與可用於分散體的液態親水多元醇的最佳量相關。進一步地，如果在系列組合物中可以包含多種成分(例如，一或多種多元醇、一或多種蛋白水解酶、疏水基質、分散相內的附加成分和/或連續疏水相內的附加成分)，系列組合物可以通過如下步驟生成(I)對於系列組合物的每一種組合物，如以上討論改變親水多元醇的量，(2)使用確定量的蛋白水解酶，(3)用包括疏水基在內的附加成分的量補足混合物至100%;組合物i^一例外，其用包括親水多元醇在內的附加成分的量補足至100%。
B.確定組合物是否含有液態親水多元醇最佳量的+/-10% w/w的方法通過使用下述方案，可以確定包含(a)含有液態親水多元醇及至少一種蛋白水解酶的分散相；(b)含有疏水基質的連續相的組合物(稱為「興趣組合物」)是否在液態親水多元醇最佳量的±10%範圍內步驟一獲得包含(i)含有液態親水多元醇和蛋白水解酶的分散相以及(ii)含有疏水基質的連續相的興趣組合物。步驟二 基於興趣組合物製備一系列的組合物(稱為「系列組合物」)。注意系列組合物中蛋白水解酶的量(％ w/w)保持不變，和存在於興趣組合物中的量(*% w/w)相冋。 可使用以下步驟製備系列組合物(i)確定興趣組合物中所有成分的量(％ w/w)。(ii)確定興趣組合物中連續相的總量w/w)。舉例來說，如果興趣組合物包括液態親水多元醇(如聚乙二醇400) 15% w/w、蛋白水解酶(如膠原蛋白酶)I % w/w、疏水基質(如白凡士林)84% w/w,那麼興趣組合物會是連續相84% w/w和分散相16% w/w。步驟三依照在本說明書部分A中上述的方式，製備系列組合物(例如，這將包括依照在本說明書部分A所述方式製備11種組合物)。步驟四如本說明書具體實施方式
的部分H所述，使用體外人工焦痂測試模型，針對以下每個樣品採集時刻6、12、18和24，確定系列組合物中^^一種組合物的每一種的酶活性。步驟五累積各數據採集時間，繪製針對每種組合物的酶活性相對於系列組合物的每一種組合物中存在的液態親水多元醇的相關量曲線。對於累積24小時數據收集時間， 曲線上的最高點與針對興趣組合物的液態親水多元醇的最佳量相關。步驟六比較存在於興趣組合物內的液態親水多元醇的量，以確定其是否在針對興趣組合物的液態親水多元醇最佳量的±10% w/w範圍內。C.蛋白水解酶對傷口清創有用的任何蛋白水解酶均適用本發明。蛋白水解酶(蛋白酶)通過水解蛋白質肽鏈中將胺基酸連接在一起的肽鍵來打斷蛋白質。基於催化機理，它們可分為四個主要的群絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、金屬蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶。已經確定某些蛋白酶在活性位點具有其它的催化性胺基酸，如蘇氨酸和穀氨酸；然而它們沒有形成主要的組。I.絲氨酸蛋白酶絲氨酸蛋白酶依賴絲氨酸殘基的羥基作為親核試劑攻擊肽鍵。在人身上發現的主要家族包括類胰凝乳蛋白酶、類枯草桿菌蛋白酶、α/β水解酶、信號肽家族。在進化史中， 絲氨酸蛋白酶最初是消化酶。在哺乳動物中，它們通過基因複製進化以在血液凝固、免疫系統、炎症中行使功能。這些蛋白酶具有廣泛的底物特異性，能在寬的PH範圍內起作用。絲氨酸蛋白酶的非限制性例子包括胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶(subtilisin)、 舒替蘭酶、纖溶酶和彈性蛋白酶。2.半胱氨酸蛋白酶結合易斷開肽鍵的親和試劑位於半胱氨酸殘基的巰基的肽酶被稱為半胱氨酸蛋白酶。半胱氨酸蛋白酶通常存在於包括木瓜、菠蘿和獼猴桃的水果中。半胱氨酸蛋白酶具有廣泛的特異性，並在生理條件下廣泛使用。在這個家族中，木瓜蛋白酶已長期廣泛用於傷口清創。其它半胱氨酸蛋白酶，如菠蘿蛋白酶(bromelain)和安奈林(analain),也已研究用於傷口清創。半胱氨酸蛋白酶的其它非限制性例子包括鈣蛋白酶(calpain)、半胱天冬酶 (caspases)、木瓜凝乳蛋白酶(chymopapain)和梭菌蛋白酶(clostripain)。3.金屬蛋白酶金屬蛋白酶屬於水分子介導的親核結合肽鍵的蛋白酶，同時二價金屬陽離子激活水分子，所述金屬離子通常為鋅，有時為鈷、錳、鎳或銅。金屬離子對於活性非常重要。具有與金屬離子相互作用一螯合或氧化-潛力的任何化合物都會影響酶的活性。本家族金屬蛋白酶的非限制例子包括嗜熱菌蛋白酶(thermolysin)、膠原蛋白酶、基質金屬蛋白酶 (MMPs)、枯草桿菌蛋白酶(bacillolysin)、分散酶(dispase)、弧菌溶血素(vibriolysin)、 假單胞菌素(pseudolysin)、基質溶素(stromelysin)和各種來自細菌的中性金屬蛋白酶。4.天冬氨酸肽酶天冬氨酸肽酶如此命名是因為天冬氨酸殘基是活化的水分子的配體。在本家族大多數酶中，一對天冬氨酸殘基共同作用以結合併激活催化性水分子。全部或大部分天冬氨酸肽酶是肽鍵內切酶。大多數天冬氨酸肽酶具有廣泛的特異性。然而，大多數天冬氨酸肽酶的最佳PH值在酸性範圍內。天冬氨酸肽酶非限制性例子包括胃蛋白酶、凝乳酶、β -分泌酶、痕原蟲天冬氨酸蛋白酶(plasmepsin)、植物酸性蛋白酶、逆轉錄病毒蛋白酶。5.膠原蛋白酶對傷口清創合適的蛋白水解酶是金屬蛋白酶膠原蛋白酶。膠原蛋白酶可實質上純淨，或者它可含有可檢測水平的其它蛋白酶。膠原蛋白酶的效價測定和在此所用的「膠原蛋白酶單位」的含義基於pH7.2、37°C、 24小時下，來源於(牛跟腱)的未變性膠原蛋白的消化。通過與茚三酮反應測定裂解的肽鍵數量。減去由胰蛋白酶消化對照釋放的氨基基團。一個淨膠原蛋白酶單位將溶解相當於每分鐘I納摩爾亮氨酸等價物的茚三酮反應性物質。
本發明組合物中膠原蛋白酶的量(效價或濃度)處於傷口清創的有效水平。通常，基於產品中使用的膠原蛋白酶的活性，組合物中膠原蛋白酶的效價可以從每克產品約 I至約10000膠原蛋白酶單位變化。在各種實施例中，以每克產品中膠原蛋白酶單位表示的效力為從約 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、 85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、160、170、180、190、200、210、 220、230、240、250、260、270、280、290、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、 850、900、950、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000、5500、6000、6500、7000、 7500、8000、8500、9000、9500至約10000，或從中可推導的任何範圍或數值。組合物中膠原蛋白酶的濃度一般可從約O. 001% w/w至約8% w/w變化。在各種實施例中，以重量百分比表示的膠原蛋白酶的濃度為從約O. 001,0. 002,0. 003,0. 004,0. 005、 O. 006,0. 007,0. 008,0. 009,0. 010,0. 015,0. 020,0. 025,0. 030,0. 035,0.040,0.050、 O. 055,0. 060,0. 065,0. 070,0. 075,0. 080,0.085,0.090,0.095,0. 100,0. 125,0. 150、 O. 175、0· 20、0· 25、0· 30、0· 35、0· 40、0· 45、0· 50、0· 55、0· 60、0· 65、0· 70、0· 75、0· 80、0· 85、 O. 90,0. 95、1、2、3、4、5、6、7至約8，或從中可推導的任何範圍或數值。在一個實施例中，膠原蛋白酶來源於溶組織梭菌(Clostridium histolyticum)； 然而，在其它實施例中，膠原蛋白酶可以從其它來源獲得。用於製備合適的膠原蛋白酶的方法在美國專利 3，705，083,3, 821，364,5, 422，261,5, 332，503,5, 422，103,5, 514，370、 5，851，522,5, 718，897和6，146，626中公開，所有這些專利通過引用並於此。6.胰蛋白酶對傷口清創合適的另一個蛋白水解酶是絲氨酸蛋白酶胰蛋白酶。通常，胰蛋白酶來自健康的牛或豬動物的胰腺或兩者的胰腺。胰蛋白酶也可從重組體來源獲得。藥用級 (USP/NF)胰蛋白酶被稱為結晶的胰蛋白酶(Crystallized Trypsin)。它含有以乾燥基礎計算的不低於每mg 2500 USP胰蛋白酶單位,不低於90. 0%且不高於110. 0%的標記效價。 胰蛋白酶的效價測定及USP胰蛋白酶單位的定義可在USP 31(2008年8月I日官方版)的結晶胰蛋白酶專論中找到，其通過引用結合於此。本發明組合物中胰蛋白酶的量(效價或濃度)處於傷口清創的有效水平。通常，組合物中胰蛋白酶的效價可從每克產品約90至約60，000USP胰蛋白酶單位變化。在各種實施例中，以每克產品USP胰蛋白酶單位表示的胰蛋白酶效價為從約90、100、150、200、250、 300、320、350、375、400、500、600、675、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000、10000、 20000,30000,40000,50000至約60000，或從中可推導的任何範圍或數值。組合物中胰蛋白酶的濃度一般可從約O. 0025% w/w至約1% w/w變化。在各種實施例中，以重量百分比表示的胰蛋白酶的濃度為從約O. 0025,0. 0050,0. 010,0. 015,0. 020、 O. 025,0. 030,0. 035,0. 040,0. 045,0. 050,0. 055,0. 060,0.065,0.070,0.075,0.080、 O.085、0·090、0·095、0·10、0· 15、0· 20、0· 25、0·30、0·35、0·40、0·45、0·50、0·55、0·60、 O. 65,0. 70,0. 75,0. 80,0. 85,0. 90,0. 95至約1，或從中可推導的任何範圍或數值。D.親水多元醇本發明的親水多元醇是具有至少有兩個羥基的水溶性極性脂肪醇，包括聚合物多元醇，如聚乙二醇和泊洛沙姆。本發明的一方面，分散相中的親水多元醇是液態親水多元醇。在一些實施例中，液態親水多元醇是液態聚乙二醇或液態泊洛沙姆，或它們的混 合物。 固態親水多元醇如固態聚乙二醇或固態泊洛沙姆也可以添加到本發明的分散相中，以助於物理穩定分散體。液態親水多元醇的其它例子包括但不僅限於丙二醇、丁二醇、戊二醇、己二醇、甘油、己二醇、甲氧基聚乙二醇、丙烯碳酸酯和乙氧基二甘醇，這些也可以加到分散相中。I.聚乙二醇聚乙二醇是乙二醇和水的均聚物，代表式為H(OCH2CH2)nOH其中η表示氧乙烯基的平均數目。取決於它們的分子量，聚乙二醇在25°C可以是液體或固體。使用USP命名法說明以下液態聚乙二醇的合適的非限制性例子:聚乙二醇200、聚乙二醇300、聚乙二醇400、聚乙二醇500和聚乙二醇600。使用USP命名法說明以下固態聚乙二醇的合適的非限制性聚乙二醇700、聚乙二醇800、聚乙二醇900、聚乙二醇1000、聚乙二醇1100、聚乙二醇1200、聚乙二醇1300、聚乙二醇1400、聚乙二醇1450、聚乙二醇1500、聚乙二醇1600、聚乙二醇1700、聚乙二醇1800、 聚乙二醇1900、聚乙二醇2000、聚乙二醇2100、聚乙二醇2200、聚乙二醇2300、聚乙二醇 2400、聚乙二醇2500、聚乙二醇2600、聚乙二醇2700、聚乙二醇2800、聚乙二醇2900、聚乙二醇3000、聚乙二醇3250、聚乙二醇3350、聚乙二醇3750、聚乙二醇4000、聚乙二醇4250、 聚乙二醇4500、聚乙二醇4750、聚乙二醇5000、聚乙二醇5500、聚乙二醇6000、聚乙二醇 6500、聚乙二醇7000、聚乙二醇7500和聚乙二醇8000。從DOW化學公司以商品名稱CARB0WAX 以及從BASF公司以商品名稱 LUTROL E和PLURACARE E可商業獲得液態和固態聚乙二醇。對於本發明，藥用級 (USP/NF)和化妝品級聚乙二醇都是合適的。2.泊洛沙姆泊洛沙姆是環氧乙烷和環氧丙烷的合成嵌段共聚物，代表式HO (C2H4O) a (C3H6O) b (C2H4O) aH其中a和b代表重複單元的數目。取決於特定的泊洛沙姆，通常a從2到150，b 從15到70。依據它們的分子量，泊洛沙姆在25°C可以是液態或固態。使用CTFA/INCI命名法說明以下液態泊洛沙姆的合適的非限制性例子泊洛沙姆101、泊洛沙姆105、泊洛沙姆122、泊洛沙姆123、泊洛沙姆124、泊洛沙姆181、泊洛沙姆182、泊洛沙姆183、泊洛沙姆184、泊洛沙姆212、泊洛沙姆231、泊洛沙姆282、泊洛沙姆 331、泊洛沙姆401和泊洛沙姆402。使用CTFA/INCI命名法說明以下固態泊洛沙姆的合適的非限制性例子泊洛沙姆108、泊洛沙姆188、泊洛沙姆217、泊洛沙姆237、泊洛沙姆238、泊洛沙姆288、泊洛沙姆338、泊洛沙姆407、泊洛沙姆185、泊洛沙姆215、泊洛沙姆234、泊洛沙姆235、泊洛沙姆 284、泊洛沙姆333、泊洛沙姆334、泊洛沙姆335和泊洛沙姆403。 從BASF公司以商品名稱PLIJRONIC 和LUTROL 以及從UNIQEMA公司以商品名稱SYNPERONIC 可以商業獲得液態和固態泊洛沙姆。藥用級(USP/NF)泊洛沙姆是泊洛沙姆124、泊洛沙姆188、泊洛沙姆237、泊洛沙姆338和泊洛沙姆407。對於本發明，藥用級和化妝品級泊洛沙姆都是合適的。E.疏水基質本發明的疏水基質可包括但不限於植物、動物、石蠟和合成來源的脂肪、黃油、油月旨、蠟、溶劑和油；礦物油、植物油、凡士林、水溶性有機酯和甘油三酯、聚矽氧烷或氟化化合物；或其混合物。在本發明的一實施例中，疏水相包含凡士林。植物源材料包括但不限於落花生(花生)油、秘魯香脂油、巴西棕櫚蠟、小燭樹蠟、 蓖麻油、氫化蓖麻油、可可脂、椰子油、玉米油、棉花籽油、霍霍巴油、馬卡達姆(macadamia) 籽油、橄欖油、橙油、橙臘、棕櫚仁油、菜籽油、紅花油、芝麻籽油、牛油樹脂(shea butter)、 大豆油、葵花籽油、茶樹油、植物油和氫化植物油。動物源材料的非限制性例子包括蜂蠟、魚肝油、鴯鶓油、豬油、貂油、鯊魚肝油、角鯊烷、角鯊烯、牛脂。石蠟材料的非限制性例子包括異鏈烷烴(isoparaffin)、微晶蠟、重礦物油、輕礦物油、地蠟、凡士林和石蠟。有機酯和甘油三酯的合適的非限制性例子包括C12-15烷基苯甲酸酯、豆蘧酸異丙酯、棕櫚酸異丙酯、中鏈甘油三酯、甘油三月桂酸酯、三羥硬脂精。聚矽氧烷的非限制性例子為聚二甲基矽氧烷和環聚甲基矽氧烷。氟化化合物的一個非限制性例子是聚四氟乙烯(PTFE)。I.凡士林凡士林是從石油中獲得的純化的半固態碳氫化合物混合物，其顏色從深琥珀色到淡黃色變化。白凡士林是完全 或幾乎脫色的凡士林，其顏色從奶油白到雪白變化。凡士林和白凡士林也可在熔點、粘度和密度變化。從PENREC0公司以下述商品名可商業獲得各種等級的產品
PENRECO UlriMA 、 PENRECO SUPER 、 PENRECO SNOW 、
PENRECOe-REGENT 、 PENRECO LILY 、 PENRECO CREAM 、 PENRECO ROYAL、 PENRECO BLOND 和 PENRECO AMBER。
從S0NNEB0RN公司以下述商品名也可商業獲得各種等級ALBA 、 SUPERWHITE PROTOPET , SUPER WHITE FONOLINE 、WHITE PR0T0PET IS 、WHITE protopet 2L 、white PROTOPET 3C 、wmn· FONOLINE氣 PERFECTA 、yellow protopet 2A 、yellow FONOLINE .PROTOLINE , sonojell #4 、sonojell #9 、
MINERAL JELLY #10 、 MINERAL JELLY #14 、 MINERAL JELLY #17^ 和 CARNATION TROUGH GREASE 。可獲得化妝品級和藥物(USP/NF)級凡士林和白凡士林，二個級別都適用於本發明。F.局部用組合物本發明的局部用組合物是在疏水連續相中包含親水分散相的分散體。分散相包含蛋白水解酶和親水多元醇。在本發明的一方面，親水多元醇是液態親水多元醇。在某些實施例中，液態親水多元醇是液態聚乙二醇或液態泊洛沙姆、或其混合物。連續相包括疏水基質。疏水基質可以是凡士林。這些組合物對於治療需傷口清創的傷口是有用的。如此處定義，組合物可以是無水的。組合物可以是半固態或液態。組合物可注入到墊子、紗布或海綿中。組合物還可以是無菌的。組合物可包括適合這種性質的局部用組合物的本領域已知的附加材料，如吸收劑、除臭劑、表面活性劑、溶劑、流變改性劑、成膜劑、穩定劑、潤膚劑(emoIlients) >保溼劑、 防腐劑、抗菌劑、抗氧化劑、螯合劑、香味劑和著色劑。組合物還可以包含適合這種性質的局部用組合物的本領域已知的附加藥用活性組分，比如抗菌劑、傷口癒合劑、麻醉劑、醫傷劑和止血劑。醫傷劑的一個非限制性例子是秘魯香脂(balsam Peru)。組合物可被包裝成適合分配傷口清創劑的任何包裝。組合物可被包裝成多用途、 單劑量或計量劑量的包裝。非限制性例子包括管子、瓶子、罐子、泵式容器、壓力式容器、氣囊式容器、氣溶膠容器、氣溶膠噴霧容器、非氣溶膠噴霧容器、注射器、小囊或小袋。G.製備工藝本發明的組合物可利用本領域普通技術人員已知的技術和方法，通過將蛋白水 解酶溶解或懸浮在部分或全部的可用親水多元醇中製備。形成的溶液或懸浮液可與疏水基質混合形成分散體，其中疏水基質成為連續相而親水多元醇/酶相變為分散相。這些組合物可利用由本領域普通技術人員已知的加工設備如混合器、攪拌器、研磨機、均質器、分散器、 溶解器等製備。H.體外人工焦痂測試模型通過使用如以下和在通過引用並於此的出版物「Study on the debridement efficacy of formulated enzymatic wound debriding agents by in vitro assessment using artificial wound eschar and by an in vivo pig model」，Shi 等，Wound Repair Regen, 2009,17 (6) :853中說明的體外人工焦痂模型來測試組合物，確立了組合物酶活性的增強。使用牛膠原蛋白(I型)、牛血纖蛋白和彈性蛋白製備人工傷口焦痂(AWE)基質 (substrate)。FITC標記膠原蛋白，彈性蛋白-羅丹明和血纖蛋白-香豆素是用於產生AWE 基質的原料。為了製備Ig AWE基質，稱取膠原蛋白-FITC 650mg、彈性蛋白-羅丹明和纖維蛋白原-香豆素各IOOmg至50mL的試管中，在IOmL Tris緩衝鹽溶液中混均。在一單獨試管中，用Tris緩衝鹽溶液製備15mg/mL的纖維蛋白原溶液10mL。將這兩組溶液結合徹底混合。加入凝血酶溶液(50U/mL，0. 25mL)，快速混合，將溶液傾倒入含有一 90mm非反應性膜過濾器的派崔氏培養皿(Petri dish)中。由於凝血酶誘導的纖維蛋白原聚合，通過使染色蛋白質凝結成固態基質，材料開始在膜過濾器的頂部形成軟的薄片。使凝結的AWE基質固化 30分鐘，然後用水漂洗15分鐘以出去凝血酶。AWE基質進一步脫水至75%的水分含量，備用。在AWE基質依舊附著在膜上時，利用打孔器衝壓出直徑為35mm的片。將AWE基質衝壓片放到Franz擴散池系統(Hanson Research, Chatsworth, CA)的頂部平面,在頂部放一TEFLO#樣品架。將清創藥膏樣品載到樣品架的中心，刮去任何多餘的樣品。對於含有膠原蛋白酶、木瓜蛋白酶、嗜熱菌蛋白酶或胰蛋白酶的樣品，受體池中的溶液是pH 7. 4 的Tris緩衝液；對於含有胃蛋白酶的樣品，受體池中的溶液是pH 2的醋酸鈉緩衝液。受體池中的溶液以ImL的增量按照如下樣品收集時間取樣0、1、2、3、6、12、18和24小時。一旦完成，使用FITC染料的螢光測試以485nm (激發波長)和520nm (發射波長)分析樣品從而確定以mg/mL報告的膠原蛋白的消化(膠原溶解)。I.體外物理性酶釋放測試通過Franz池擴散研究，利用PVDF (0. 45微米)過濾器確定酶從組合物中的釋放。該研究在35°C下進行並持續6小時。接收池中的溶液樣品進行總蛋白分析。蛋白質濃度由BCA分析(Peirce)確定並使用相同的膠原蛋白酶做參考標準。細節描述如下BCA蛋白分析將熟知的鹼性介質中蛋白質對Cu2+到Gu1+的還原與利用二喹啉甲酸對亞銅陽離子(Cu1+)的高靈敏性和選擇性的比色檢測結合起來。第一步是鹼性環境下用蛋白質螯合銅形成藍色絡合物。被稱為雙縮脲反應的該反應中，在含有酒石酸鈉鉀的鹼性環境中，含有兩個或三個胺基酸殘基的肽與亞銅離子形成有色的螯合物。該反應稱為雙縮脲反應是因為利用有機化合物雙縮脲(NH2-CO-NH-CO-NH2)與亞銅離子形成了相似的絡合物。 雙縮脲，過量尿素和熱形成的產物，與銅反應形成淺藍色四配位基絡合物。在顯色反應的第二步中，BCA，一種高靈敏性和選擇性的比色檢測試劑，與第一步生成的亞銅陽離子(Gu1+) 反應。兩分子的BCA與一個亞銅離子螯合形成紫色反應產物。BCA/銅絡合物是水溶性的， 並在562nm處隨著蛋白質濃度的增加表現出強的線性吸收。紫色可在550nm到570nm之間的任一波長下以最小的信號損失(少於10% )進行測量。參照通過引用結合於此的以下參考Smith, P. K. , Krohn, R. I. , Hermanson, G. T. , Mallia, A. K. , Gartner, F. H. , Provenzano, M. D. , Fujimoto, Ε. K. , Goeke, N. Μ. , Olson, B. J. and Klenk, D. C. (1985). Measurement of protein using bicinchoninic acid. Anal. Biochem. 150,76-85.
實施例 以下實例用來證明本發明的某些非限制性方面。本領域的技術人員應該理解，以下實例中公開的技術代表由申請人發現的技術，在本發明實踐中適當地起作用。然而，根據本發明，本領域的技術人員應當理解，在所公開的具體實施方式
中可作許多變動，在不脫離本發明的精神和範圍的條件下仍能獲得同樣或類似的結果。實例I :凡士林中膠原蛋白酶/PEG 400的分散體表I中的分散體由分散在凡士林中不同濃度的聚乙二醇400(PEG_400)製備。表I
分散體 PEG 400 PEG-1450 白凡士林泊洛沙姆407膠原蛋白酶
__%w/w__%w/w__%w/w__%w/w__%w/w
A0 ~ 0 ~ 99.800.2 ~
BIO-O- 89.800.2
C15 ~ 0 ~ 84.800.2
I)20 ~ 0 ~ 79.9 " 0.40.2 ~
E30 " 069 — 0.90.2
F50 ~ Q ~ 49.3 " 1.20.2
(.68 ~ 0 ~ 29.8 " 2.00.2 —
H* — 8312.54.5 ~ 00.2
I* I 70 29.8 I 0 I 0 I 0.2*PEG_1450加到PEG-400中形成半固態，分別產生約96%和100%的總PEG。通過上述的體外人工焦痂模型確定每一種分散體的酶學清創活性，結果在圖I中繪出。如從圖I的結果可看出，基於24小時曲線，PEG-400的最佳量為約20%w/w PET-400。實例2 :凡士林中膠原蛋白酶/PEG 600的分散體表2中的分散體由分散在凡士林中不同濃度的聚乙二醇600(PEG_600)製備。表權利要求
1.ー種傷ロ清創組合物，包含 (a)含有液態親水多元醇和至少ー種蛋白水解酶的分散相；以及 (b)含有疏水基質的連續相； 其中液態親水多元醇的量在液態親水多元醇最佳量的±10% w/w範圍內。
2.根據權利要求I所述的組合物，其中液態親水多元醇的量在液態親水多元醇最佳量的±7% w/w範圍內。
3.根據權利要求I所述的組合物，其中液態親水多元醇的量在液態親水多元醇最佳量的±5% w/w範圍內。
4.根據權利要求1-3任一項所述的組合物，其中蛋白水解酶是金屬蛋白酶。
5.根據權利要求4所述的組合物，其中金屬蛋白酶是膠原蛋白酶。
6.根據權利要求4所述的組合物，其中金屬蛋白酶是嗜熱菌蛋白酶。
7.根據權利要求1-3任一項所述的組合物，其中蛋白水解酶是半胱氨酸蛋白酶。
8.根據權利要求7所述的組合物，其中半胱氨酸蛋白酶是木瓜蛋白酶。
9.根據權利要求1-3任一項所述的組合物，其中蛋白水解酶是絲氨酸蛋白酶。
10.根據權利要求9所述的組合物，其中絲氨酸蛋白酶是胰蛋白酶。
11.根據權利要求1-3任一項所述的組合物，其中蛋白水解酶是天冬氨酸肽酶。
12.根據權利要求11所述的組合物，其中天冬氨酸肽酶是胃蛋白酶。
13.根據權利要求1-12任一項所述的組合物，其中液態親水多元醇是液態聚こニ醇、液態泊洛沙姆或它們的混合物。
14.根據權利要求1-13任一項所述的組合物，其中蛋白水解酶懸浮於分散相中。
15.根據權利要求1-13任一項所述的組合物，其中蛋白水解酶溶解於分散相中。
16.根據權利要求1-15任一項所述的組合物，其中疏水基質包括凡士林。
17.根據權利要求1-16任一項所述的組合物，其中分散相進ー步地包含固態親水多元醇。
18.根據權利要求17所述的組合物，其中固態親水多元醇是固態聚こニ醇、固態泊洛沙姆或它們的混合物。
19.根據權利要求1-18任一項所述的組合物，其中組合物是半固態。
20.根據權利要求1-19任一項所述的組合物，其中組合物是無水的。
21.根據權利要求1-20任一項所述的組合物，其中組合物是無菌的。
22.ー種用於治療需要清創的傷ロ的方法，包括在傷口上應用組合物，所述組合物包含含有液態親水多元醇和有效清創濃度的至少ー種蛋白水解酶的分散相；以及含有疏水基質的連續相；其中液態親水多元醇的量在最佳量的±10% w/w範圍內。
23.根據權利要求22所述的方法，其中組合物是權利要求1-21所述的組合物的任一種。
24.一種確定加到目標組合物的液態親水多元醇的最佳量的方法，所述目標組合物包含含有蛋白水解酶的分散相以及含有疏水基質的連續相，該方法包括 (I)獲得包含所述分散相以及所述連續相的一系列組合物，其中所述分散相進ー步包含液態親水多元醇，其中所述系列組合物中各組合物包含相同量的蛋白水解酶和不同量的液態親水多元醇；(2)確定所述系列組合物中各組合物的酶活性； (3)在圖上確定最高點，所述圖繪出相對於包含在系列組合物的各組合物中的液態親水多元醇的量的酶活性， 其中圖上的最高點與加到所述目標組合物中的液態親水多元醇的最佳量相關。
25.根據權利要求24所述的方法，進ー步包括將液態親水多元醇的最佳量的±10%w/w加入到目標組合物中。
26.根據權利要求24所述的方法，其中所述系列組合物包括至少五種組合物。
27.根據權利要求26所述的方法，其中所述系列組合物中的多元醇的量以至少10%w/w的增量變化。
28.根據權利要求27所述的方法，其中第一種組合物包含10%w/w的液態親水多元醇，第二種組合物包含30% w/w的液態親水多元醇，第三種組合物包含50% w/w的液態親水多元醇，第四種組合物包含70% w/w的液態親水多元醇，以及第五種組合物包含90% w/w的液態親水多元醇。
29.根據權利要求26所述的方法，其中第一種組合物包含O至30%w/w的液態親水多元醇，第二種組合物包含10到50% w/w的液態親水多元醇，第三種組合物包含20到60%w/w的液態親水多元醇，第四種組合物包含30至80% w/w的液態親水多元醇，以及第五種組合物包含40至100% w/w的液態親水多元醇。
30.根據權利要求24-29任一項所述的方法，其中目標組合物是權利要求1-21中所述組合物的任ー種。
31.ー種提高目標組合物中酶活性的方法，所述目標組合物包含含有蛋白水解酶的分散相以及含有疏水基質的連續相，該方法包括 (1)獲得包含分散相和連續相的一系列組合物，其中分散相進ー步含有液態親水多元醇，其中所述系列組合物中的各組合物含有相同量的蛋白水解酶和不同量的液態親水多元醇； (2)確定所述系列組合物中各組合物的酶活性； (3)在圖上確定最高點，所述圖繪出相對於包含在系列組合物的各組合物中的液態親水多元醇的量的酶活性，其中圖上的最高點與加到目標組合物的液態親水多元醇的最佳量相關；以及 (4)將液態親水多元醇最佳量的±10%w/w加入到目標組合物中，由此提高目標組合物中的酶活性。
32.根據權利要求31所述的方法，其中所述系列組合物包括至少五種組合物。
33.根據權利要求32所述的方法，其中所述系列組合物中多元醇的量以至少10%w/w的增量變化。
34.根據權利要求33所述的方法，其中第一種組合物含有10%w/w的液態親水多元醇，第二種組合物含有30% w/w的液態親水多元醇，第三種組合物含有50% w/w的液態親水多元醇，第四種組合物含有70% w/w的液態親水多元醇，以及第五種組合物含有90% w/w的液態親水多元醇。
35.根據權利要求32所述的方法，其中第一種組合物含有O至30%w/w的液態親水多元醇，第二種組合物含有10至50% w/w的液態親水多元醇，第三種組合物含有20至60%w/w的液態親水多元醇，第四種組合物含有30至80% w/w的液態親水多元醇，以及第五種組合物含有40至100% w/w的液態親水多元醇。
36.根據權利要求31-35任一項所述的方法，其中目標組合物是權利要求1-21中所述組合物的任ー種。
全文摘要
本發明涉及到具有增強酶活性的局部用酶學傷口清創組合物。這些組合物包含含有至少一種蛋白水解酶和至少一種親水多元醇的分散相，以及含有疏水基質的連續相。
文檔編號A61L15/38GK102711808SQ201080055918
公開日2012年10月3日 申請日期2010年12月8日 優先權日2009年12月8日
發明者A·喬瓦諾維奇, D·奧斯特, 磊·石 申請人:海爾斯波因特公司