黃花倒水蓮總皂苷及其藥物組合物與製備方法

2023-05-29 20:10:01 3

專利名稱：黃花倒水蓮總皂苷及其藥物組合物與製備方法
技術領域：
本發明涉及植物藥黃花倒水蓮有效部位及其提取分離方法，以及含有黃花倒水蓮有效部位的藥物組合物，具體為從黃花倒水蓮中提取分離有降脂及心血管活性的有效部位，並製備成藥物組合物。
背景技術：
黃花倒水蓮是遠志科遠志屬植物黃花倒水蓮(Polygala fallax Hemsl.[PaureocaudaDunn.])的乾燥根，為廣西民間常用藥。主產江西、湖南、廣東、廣西和雲南，生於海拔1150-1650m的山谷林下，水旁陰溼處(參見中國科學院中國植物志，第四十三卷，第三分冊.北京科學出版社，1997151-152.)。本品味甘、微苦，平。具有補益，強壯，祛溼，散瘀功效，主治虛弱虛腫，急慢性肝炎，腰腿酸痛，跌打損傷。黃勝光等報導了黃花倒水蓮治療高血脂症30例的臨床觀察(參見湖南中醫雜誌，1999，15(3)6-7)，但均未涉及黃花倒水蓮具降脂作用及療效的物質基礎。

發明內容
本發明要解決的技術問題是如何以生物活性為導向，對黃花倒水蓮的降脂活性進行有效部位的篩選，並研究有效部位的化學成分，以及含有該有效部位的藥物組合物。
要解決的技術問題還包括研究黃花倒水蓮的降脂有效部位可工業化生產的提取分離方法，其不但要求工藝相對簡單，而且要達到註冊藥品規定的含量標準，同時要保證質量的穩定。因為只有含量符合標準才能達到臨床療效，質量穩定才能保證療效穩定。
為解決上述技術問題，本發明提供如下技術方案。
一種具有降脂作用的黃花倒水蓮總皂苷，其特徵在於按如下方法製備將黃花倒水蓮水提取液，上D101、HP20或AB8型號的大孔樹脂柱，用水及含水乙醇梯度洗脫，收集60-70％乙醇洗脫液，得黃花倒水蓮總皂苷。
一種具有降脂作用的黃花倒水蓮總皂苷的製備方法，其特徵在於將黃花倒水蓮水提取液，上D101、HP20或AB8型號的大孔樹脂柱，用水及含水乙醇梯度洗脫，收集60-70％乙醇洗脫液，得黃花倒水蓮總皂苷。
所述黃花倒水蓮總皂苷的製備方法是將黃花倒水蓮水提取液，上D101或AB8型號的大孔樹脂柱，分別用水及30-40％乙醇洗脫後，收集60-70％乙醇洗脫液，得黃花倒水蓮總皂苷。而且，本發明是將黃花倒水蓮水提取液，不經過濃縮，直接上樹脂柱。
所述黃花倒水蓮總皂苷的製備方法，用樹脂柱分離時，上樣量約為按藥材重量大孔樹脂體積比計2～1∶1。用樹脂柱分離時，較好的方式是上樣量約為按藥材重量大孔樹脂體積比計1.5∶1；收集65％乙醇洗脫液。
所述黃花倒水蓮總皂苷更為理想的製備方法是取黃花倒水蓮粗粉，加水浸泡3小時，提取3次，三次的加水量分別為10，8，6倍量，三次的提取時間分別為1.5，1.5，1小時；將黃花倒水蓮水提取液，直接上D101大孔樹脂柱，先用水洗樹脂柱，再用40％乙醇洗，繼用65％乙醇洗脫，收集65％乙醇部位，真空回收溶劑後，得黃花倒水蓮總皂苷。
一種用於降脂的藥物組合物，其中含有治療有效量的前述任一項的黃花倒水蓮總皂苷和藥學上可接受的載體。
前述任意一項的黃花倒水蓮總皂苷，在製備降脂藥物中的應用。
下面分別詳細介紹黃花倒水蓮有效部位的篩選與總皂苷提取工藝研究。
一、黃花倒水蓮有效部位的篩選本發明以生物活性為導向，對黃花倒水蓮的降脂活性進行有效部位的篩選。從黃花倒水蓮(PAD)水提物中分離出5個部位(Fr.1、Fr.2、Fr.3、Fr.4、Fr.5)，選用正常及腹腔注射75％蛋黃溶液形成的急性小鼠高脂血症模型進行調脂活性部位篩選研究。
Fr.1(12mg/kg)能顯著升高高脂模型小鼠血清中TC含量，而對正常小鼠血清中TC含量與高脂模型小鼠肝中TC含量無明顯作用。
Fr.2(44mg/kg)能顯著降低正常小鼠血清中TC的含量，而升高高脂模型小鼠血清中TC含量，對高脂小鼠肝中TC含量也有一定的升高作用。
Fr.3(50mg/kg)部位能顯著降低正常小鼠血清中TC的含量，也均能顯著降低高脂模型小鼠肝中TC含量P＜0.05。對高脂小鼠血清中TC含量無明顯影響。
Fr.4(50mg/kg)部位可以極顯著降低高脂模型小鼠肝中TC含量，同時也對高脂模型小鼠肝血清中TC含量以及正常小鼠血清中TC含量也有一定的降低作用。其可能機理是抑制肝中TC的合成，或加速肝臟對TC代謝，排洩，生物利用。
Fr.5(4.8mg/kg)能顯著降低高脂模型小鼠肝中TC含量P＜0.05，對高脂模型小鼠血清中TC含量卻能升高。而對正常小鼠血中TC含量無明顯作用。
PAD調脂作用機理比較複雜，各部位可能是通過不同的調脂途徑而起作用並且相互影響。其中Fr.4部位為PAD調節血脂的主要有效部位。
實驗目的利用正常及腹腔注射75％蛋黃溶液形成的急性小鼠高脂血症模型篩選PAD調節血脂的有效部位，研究考查PAD各部位調脂作用，為開發二類新藥及進一步深入研究提供實驗依據。
受試藥物黃花倒水蓮水提物(簡稱PAD)和提取部位(Fr.1、Fr.2、Fr.3、Fr.4、Fr.5)提供單位中國藥科大學中藥複方研究室，批號20010805，配製方法為將各藥物溶解於蒸餾水，配製成所需的濃度，小鼠ig 0.1ml/10g、大鼠ig1ml/100g。
血脂康(簡稱XZK)提供單位北京大學維信生物科技有限公司，批號20010203，規格為2g/膠囊。
總膽固醇(TC)試劑盒提供單位上海榮盛公司，批號20011103。
昆明種小鼠隨機分組。總膽固醇(TC)試劑盒規格100ml/盒試驗動物昆明種小鼠，雄性，體重18-22g，由青龍山飼養場提供。
黃花倒水蓮水提物(簡稱PAD)和提取部位(Fr.1、Fr.2、Fr.3、Fr.4、Fr.5)的製備工藝 造模方法與TC測定連續給藥5d，正常組和模型組分別給等量蒸餾水，第5d給藥後禁食20hr，用毛細管經眼眶取血，在4℃下放置1hr，然後3000rpm離心15min，再將血清吸出測定TC含量，考查藥物對正常小鼠的作用。第7d繼續給藥或水，第9d起連續禁食16hr後給藥或水，2hr後，腹腔注射新鮮配製的75％蛋黃溶液0.5ml/只，造成小鼠高脂血症模型，造模後20hr內用毛細管經眼眶取血，測TC含量。然後將小鼠脫頸椎處死取肝臟，用肝左葉部分(200mg)，加抽提液(乙醇∶丙酮＝1∶1)2ml，在勻漿器中勻漿。勻漿液置冰箱4℃下12hr後離心(3000rpm)15min，取上清液，待測(參見杜冠華(Du GH)譯H.G沃格爾編藥理學實驗指南-新藥發現和藥理學評價[M]科技出版社2001.785-787.)。
分組與給藥劑量取90隻雄性昆明種小鼠，標準體重，隨機分成10組。正常組、模型組、陽性對照組(XZK 180mg/kg)、水提物組(733.5mg/kg)、Fr.1部位組(12mg/kg)、Fr.2部位組(44mg/kg)、Fr.3部位組(50mg/kg)、Fr.4部位組(50mg/kg)、Fr.5部位組(4.8mg/kg)。按1.項進行實驗。
對正常小鼠血清中TC含量的影響由表1.可見Fr.2、Fr.3、Fr.4部位均能降低正常小鼠血清中TC含量。
表1.藥物對正常小鼠血清中TC含量的影響(X±SD n＝10)組別劑量Content of TC in serum 變化率％(mg/kg) (mg/ml)正常組0.9193±0.1404XZK組180.00.8813±0.0580 -4.13水提物組 733.50.9295±0.1356 1.11Fr.1部位組 12.0 0.8980±0.9012 -2.32Fr.2部位組 44.0 0.7708±0.1239ΔΔ-16.15Fr.3部位組 50.0 0.7949±0.05880ΔΔ-13.53Fr.4部位組 50.0 0.7935±0.1792ΔΔ-13.68Fr.5部位組 4.8 0.9140±0.2632 -0.58Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01VS 正常組對高脂小鼠血清中TC含量的影響表2.可見小鼠高脂模型造模成功(p＜0.01)。XZK、Fr.4部位能降低TC含量，Fr.3部分也有一定的降低TC含量的趨勢。表2.藥物對高脂模型小鼠血清中TC含量的影響(X±SD n＝10)組別 劑量 Content of TC in serum 變化率％(mg/kg) (mg/ml)正常組 1.2762±0.02508138.46模型組 3.0432±0.01284ΔΔXZK組 1802.4092±0.8468*-20.83水提物組 733.5 1.7801±0.1883**-41.51Fr.1部位組12 3.1239±0.8337 2.65Fr.2部位組44 3.1161±0.5802 2.40Fr.3部位組50 2.4454±0.9406 -19.64Fr.4部位組50 2.1039±0.6332**-30.86Fr.5部位組4.83.1143±0.8352 2.34Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01 VS正常組，*p＜0.05，**p＜0.01 VS模型組表3.藥物對高脂模型小鼠肝中TC含量的影響(X±SD n＝10)組劑量Content of TC in serum變化率％(mg/kg) (mg/mg)正常組0.005156±0.000706模型組0.006052±0.000582ΔΔ17.38XZK組 180 0.005354±0.000511**-11.53水提物組 733.5 0.005794±0.000552 -4.26Fr.1部位組12 0.005910±0.000476 -2.35Fr.2部位組44 0.006488±0.000506 7.20Fr.3部位組50 0.005368±0.000709*-11.30Fr.4部位組50 0.005309±0.000624*-12.28Fr.5部位組4.8 0.005117±0.000568**-15.45Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01 VS正常組，*p＜0.05，**p＜0.01 VS模型組對高脂模型小鼠肝中TC含量的影響由表3.可見小鼠急性高脂模型肝臟中TC顯著升高(P＜0.05)。XZK能顯著降低肝中含量(P＜0.05)；Fr.3、Fr.4、Fr.5也均能顯著降低TC含量(P＜0.05)。水煎液有一定的降低作用(P＜0.05)。
實驗結果(見表4.)表明PAD調脂作用機理比較複雜，各部位可能通過不同的調脂途徑而起作用並且相互影響。其中Fr.4部位可能是PAD調節血脂的主要有效部位。
Fr.4(50mg/kg)部位可以極顯著降低高脂模型小鼠肝中TC含量，同時也對高脂模型小鼠肝血清中TC含量以及正常小鼠血清中TC含量也有一定的降低作用。其可能機理是抑制肝中TC的合成，或加速肝臟對TC代謝，排洩，生物利用。
表4.PAD各部位對TC含量的影響的結果分析組別 正常小鼠高脂小鼠血清中TC的含量血清中TC含量 肝中TC含量XZK 無明顯作用 顯著降低 顯著降低水煎液 無明顯作用 極顯著降低降低Fr1部位 無明顯作用 一定升高作用 無明顯作用Fr.2部位 顯著降低 一定升高作用 一定升高作用Fr.3部位 極顯著降低 無明顯作用顯著降低Fr.4部位 降低 極顯著降低顯著降低Fr.5部位 無明顯作用 一定升高作用 顯著降低二、總皂苷提取工藝研究1、水提取後，合併三次水提取液，過濾或離心除去雜質，過D101(HP20，AB8)大孔樹脂，上樣量為藥材(重量)∶大孔樹脂(體積)為1.5∶1，待樹脂充分吸附皂苷後，用蒸溜水洗，去除水溶性雜質，再用35-40％乙醇洗，進一步去除雜質，繼用60-70％乙醇洗滌脫，收集60-70％乙醇部位，以黃花倒水蓮中Tenuifolin為對照品，測定總皂苷含量，黃花倒水蓮總皂苷含量達50％以上。
2、曾用不同濃度的醇溶液進行提取，醇提取物與水提取物用高脂血症模型小鼠進行降脂作用的藥效學觀察和比較，結果表明兩者藥效學無明顯差異。
3、將醇提物過大孔樹脂，由於醇提物提出的脂溶性成分較多，在大孔樹脂上有極細的沉積物，致使提取液不能順利被通過和吸附，所以後來採用水提工藝進行提取黃花倒水蓮總皂苷。
4、在水提工藝中還進行了提取液的濃縮後，過大孔樹脂的試驗，結果表明，水提液濃縮後，再上大孔樹脂，總皂苷的得率及含量均明顯下降1)投料150kg，按最佳水提工藝提取，水提液濃縮至藥材(重量)∶提取液(體積)1∶2，濃縮液過大孔樹脂，經上述分離純化工藝，總皂苷得率為0.46％；2)投料150kg，最佳水提工藝提取，水提液濃縮至藥材(重量)∶提取液(體積)1∶2，濃縮液噴霧乾燥成藥粉，藥粉溶於水後再過大孔樹脂，經上述分離純化工藝，總總皂苷得率為0.5％3)同樣的藥材，按前述1項下(即本發明的製備方法)所述提取，分離，總皂苷得率為2-2.3％，經研究可能是由於黃花倒水蓮皂苷酸性所致，在加熱濃縮過程中皂苷類成分不斷被破壞而引起了皂苷得率和含量的下降。
具體實施例方式
實例1黃花倒水蓮總皂苷的製備取黃花倒水蓮150kg，粉碎成粗粉，加水浸泡3小時，採用藥材重量10倍的去離子水煎煮三次，提取時間分別為1.5小時。合併三次水提取液，過濾或離心除去雜質，過HP20大孔樹脂，上樣量為藥材(重量)∶大孔樹脂(體積)為2∶1，待樹脂充分吸附皂苷後，用500L蒸溜水洗，去除水溶性雜質，再用400L 40％乙醇洗，進一步去除雜質，繼用500L 65％乙醇洗滌脫，收集65％乙醇部位，真空回收乙醇，真空乾燥提取物，得黃花倒水蓮總皂苷3.6kg(得率2.3％)以黃花倒水蓮中Tenuifolin為對照品，比色法測定總皂苷含量，黃花倒水蓮總皂苷含量達50％。(總皂甙含量測定方法參見劉友平，萬德光，劉濤等；分光光度法測定不同產地遠志總皂苷的含量《成都中醫藥大學學報》2000，23(1)26-28，下同)。
實例2黃花倒水蓮總皂苷的製備取黃花倒水蓮150kg，粉碎成粗粉，加水浸泡3小時，提取3次，三次的加水量分別為10，8，6倍量，三次的提取時間分別為1.5，1.5，1小時。
合併三次水提取液，過濾或離心除去雜質，過D101大孔樹脂，上樣量為藥材(重量)∶大孔樹脂(體積)為1.5∶1，待樹脂充分吸附皂苷後，用400L蒸溜水洗，去除水溶性雜質(用斐林試劑測定，至無糖反應)，再用300L 40％乙醇洗，進一步去除雜質，繼用400 65％乙醇洗滌脫，收集65％乙醇部位，真空回收乙醇，真空乾燥提取物，得黃花倒水蓮總皂苷3kg(得率2％)，以黃花倒水蓮中Tenuifolin為對照品，比色法測定總皂苷含量，黃花倒水蓮總皂苷含量達60％。
實例2總皂苷部位的調脂作用儀器與試藥Beckman DU640核酸蛋白質分析儀，舒降之(SJZ)由杭州默沙東提供；TC、TG、LDL-C和HDL-C試劑盒為北京中生公司產品。MDA和SOD試劑盒為南京建成公司產品。實施1中製備的黃花倒水蓮總皂苷(Total Saponins of PAD簡稱PTS)，臨用前用水稀釋。
SD雄性大鼠，180g-220g，由青龍山飼養場提供，動物合格證號SCXK(蘇)2001-0010。
實驗方法(參見佟繼銘(Tong XM)劉玉玲(Liu YL)符景春(Fu JC).黃芩莖葉總黃酮調血脂作用研究[J].中草藥(Chin Trad and Herb Drugs)，2000.31(3)196-199；蔡秀成(CaiXC)郭英(Guo Y)閻雁(Yan Y).琉璃苣油對脂質代謝和脂質過氧化的影響[J].中國藥理學通報(Chin Pharm Bull)1996，12(6)551-553；杜冠華(Du GH)譯H.G沃格爾編藥理學實驗指南-新藥發現和藥理學評價[M]科技出版社2001.785-787；.趙水平(Zhao SP)臨床血脂學[M]湖南科學技術出版社1997，357)高脂飼料配方1.5％膽固醇、0.5％牛膽鹽、0.2％甲基硫氧嘧啶、10％豬油、87.8％基礎飼料。
造模方法雄性SD大鼠正常飼料餵養一周，測定血清TC含量，根據TC含量和體重進行分組正常對照組、模型對照組、陽性對照組(舒降之10mg/kg SJZ)、PTS低劑量組(25mg/kg)、中劑量組(50mg/kg)、高劑量組(100mg/kg)。預防性給藥時除正常對照組外其餘各組大鼠連續給高脂飼料造模同時各給藥組連續給藥，21d後改用正常飼料，並繼續給藥14d，正常對照組、模型對照組分別給等量蒸餾水。治療性給藥時除正常對照組外其餘各組大鼠連續給高脂飼料造模，21d後停止造模改用正常飼料，同時各給藥組連續給藥14d，正常對照組和模型對照組分別給等量蒸餾水。
預防性給藥60隻大鼠隨機分成6組每組10隻。按2.2.項下造模與給藥。分別於第21d、35d，連續禁食12hr，乙醚輕度麻醉後經眼眶取血，在4℃下放置1hr，然後3500rpm離心15min，取血清測定TC、TG及MDA含量。治療性給藥48隻大鼠隨機分成6組每組8隻。按2.2.項下造模與給藥。於第35d大鼠連續禁食12h，乙醚輕度麻醉後經眼眶取血，在4℃下放置1h，然後3500rpm離心15min，取血清測定TC、TG、LDL-C、HDL-C及MDA含量和SOD活性。然後將大鼠脫頸椎處死取肝臟，取肝左葉前緣部分(約200mg)加抽提液(乙醇∶丙酮＝1∶1)2ml勻漿。勻漿液4℃下放置12h後3500rpm離心15min，取上清液，測定TC及TG含量(參見12.蔡秀成(Cai XC)郭英(Guo Y)閻雁(Yan Y).琉璃苣油對脂質代謝和脂質過氧化的影響[J].中國藥理學通報(Chin Pharm Bull)1996，12(6)551-553)。
統計學處理所有數據均以X±S形式表示，採用t檢驗進行統計學分析。
預防性給PTS對血清中TC、TG、MDA的影響由表5、表6可見，高脂飼料餵21d後模型組大鼠血清中TC、TG和MDA含量都顯著升高。PTS對TC、TG和MDA含量有一定的降低趨勢，尤其是高劑量具有顯著性差異。停止造模繼續給藥14天後模型組TC、TG和MDA含量都有所下降，但與正常組相比具有顯著性差異。與模型組相比PAD總皂苷高劑量仍能顯著地降低血清中TC、TG和MDA含量。以上結果表明PTS有一定的預防作用。
表5總皂苷給藥21天後對血清中TC和TG的作用(X±S，n＝10)組別劑量(mg/kg) TC(mmol/l) TG(mmol/l) MDA(mmol/l)正常組 - 2.11±0.70 0.26±0.064 4.78±0.68對照組 - 12.42±3.30ΔΔ0.53±0.22ΔΔ6.53±1.52ΔΔSJZ 10 11.36±2.800.36±0.155.51±1.30PTS 25 11.51±3.070.36±0.115.88±1.1350 10.87±3.540.34±0.087*5.68±1.051009.45±3.01*0.32±0.071**5.40±0.56*Δp＜0.01VS正常組；*p＜0.05，**p＜0.01VS對照組表6總皂苷給藥35天後對血清中TC和TG的作用(X±S，n＝10)劑量組別TC(mmol/l) TG(mmol/l) MDA(mmol/l)(mg/kg)正常組 - 1.85±0.250.22±0.054 4.55±0.44對照組 - 2.61±0.48ΔΔ0.33±0.065Δ5.33±0.86ΔSJZ 10 2.21±0.35*0.25±0.038**4.45±0.33**PTS 25 2.43±0.310.31±0.062*4.74±0.4850 2.24±0.300.31±0.11 4.68±0.40*1002.21±0.28*0.25±0.049**4.53±0.42*Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01 VS正常組；*p＜0.05，**p＜0.01VS對照組治療性給PTS對脂質與MDA、SOD的影響由表7可見高脂飼料餵大鼠21d後改餵正常飼料14d後模型組血清中TC、TG、LDL-C含量顯著升高而HDL-C顯著降低。但PTS組大鼠血清中TC、TG和LDL-C含量明顯低於模型組相，而HDL-C顯著升高並有一定的劑量相關性。結果表明PTS對高脂血症大鼠的血脂有調節作用。
表7總皂苷對血脂的影響(X±S，n＝8)組別 劑量(mg/kg)TC(mmol/l) TG(mmol/l)LDL-C(mmol/l)HDL-C(mmol/l)正常組 - 1.74±0.23 0.46±0.13 0.63±0.26 0.70±0.089對照組 - 3.50±0.62ΔΔ0.58±0.084Δ1.85±0.57ΔΔ0.57±0.063ΔΔSJZ 10 2.85±0.48*0.48±0.085*1.28±0.32*0.66±0.12*PTS 25 3.07±0.67 0.52±0.084 1.41±0.41 0.61±0.1250 2.94±0.33*0.50±0.13 1.30±0.24*0.67±0.13*100 2.75±0.42**0.47±0.099*1.14±0.37**0.69±0.098**Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01 VS正常組；*p＜0.05，**p＜0.01 VS對照組對肝臟中脂質含量的影響由表8可見，模型對照組肝臟中TC和TG含量均明顯高於正常組，PTS組TC含量明顯低於模型組，尤其是PTS高劑量組(P＜0.05)。而PTS對肝臟TG含量無明顯影響。結果表明PTS對肝臟脂質的作用與SJZ相似，能降低TC含量而對TG無明顯作用。
表8總皂苷對肝中脂質的影響(X±S，n＝8)組別劑量(mg/kg)TC(μmol/mg) TG(μmol/mg)正常組 - 2.22±0.12 3.92±1.43對照組 - 3.74±0.54ΔΔ7.11±0.84ΔΔSJZ10 3.04±0.39**6.93±0.60PTS25 3.58±0.136.80±0.8950 3.23±0.537.08±0.62100 3.14±0.55*7.15±0.72Δp＜0.01 VS正常組；*p＜0.05，**p＜0.01 VS對照組PTS對血清中MDA和SOD的影響由表9可見與正常組相比模型組大鼠血清中MDA含量顯著升高P＜0.01，SOD活性顯著降低。各給藥組與模型組比較，SJZ和PTS能顯著降低血清MDA，且PTS能顯著升高血清SOD活性，有一定的劑量相關性。結果表明PTS有一定的抗氧化能力，可能是通過提高SOD活性和降低血清中脂質含量而起作用。
表9總皂苷對血清中MDA和SOD的影響m(X±S，n＝8)劑量 MDA SOD組別(mg/kg)(mmol/l) (NU/ml)正常組 - 9.65±0.58300.77±26.95對照組 - 12.79±0.89ΔΔ266.97±19.70ΔΔSJZ 10 10.66±0.89**283.35±24.61PTS 25 11.33±1.37**296.06±23.31*50 10.66±1.26**297.24±26.99*100 10.51±1.20**300.67±20.54**ΔΔp＜0.01 VS正常組，*p＜0.05**p＜0.01 VS對照組
權利要求
1.一種具有降脂作用的黃花倒水蓮總皂苷，其特徵在於按如下方法製備，將黃花倒水蓮水提取液，上D101、HP20或AB8型號的大孔樹脂柱，用水及含水乙醇梯度洗脫，收集60-70％乙醇洗脫液，得黃花倒水蓮總皂苷。
2.一種具有降脂作用的黃花倒水蓮總皂苷的製備方法，其特徵在於將黃花倒水蓮水提取液，上D101、HP20或AB8型號的大孔樹脂柱，用水及含水乙醇梯度洗脫，收集60-70％乙醇洗脫液，得黃花倒水蓮總皂苷。
3.根據權利要求2所述的黃花倒水蓮總皂苷的製備方法，其特徵在於將黃花倒水蓮水提取液，上D101或AB8型號的大孔樹脂柱，分別用水及30-40％乙醇洗脫後，收集60-70％乙醇洗脫液，得黃花倒水蓮總皂苷。
4.根據權利要求2所述的黃花倒水蓮總皂苷的製備方法，其特徵在於將黃花倒水蓮水提取液，不經濃縮，直接上樹脂柱。
5.根據權利要求2所述的黃花倒水蓮總皂苷的製備方法，其特徵在於用樹脂柱分離時，上樣量約為按藥材重量大孔樹脂體積比計2～1∶1。
6.根據權利要求5所述的黃花倒水蓮總皂苷的製備方法，其特徵在於用樹脂柱分離時，上樣量約為按藥材重量大孔樹脂體積比計1.5∶1。
7.根據權利要求2所述的黃花倒水蓮總皂苷的製備方法，其特徵在於收集65％乙醇洗脫液。
8.根據權利要求6所述的黃花倒水蓮總皂苷的製備方法，其特徵在於取黃花倒水蓮粗粉，加水浸泡3小時，提取3次，三次的加水量分別為10，8，6倍量，三次的提取時間分別為1.5，1.5，1小時；將黃花倒水蓮水提取液，直接上D101大孔樹脂柱，先用水洗樹脂柱，再用40％乙醇洗，繼用65％乙醇洗脫，收集65％乙醇部位，真空回收溶劑後，得黃花倒水蓮總皂苷。
9.用於降脂的藥物組合物，其中含有治療有效量的權利要求1-8任一項的黃花倒水蓮總皂苷和藥學上可接受的載體。
10.權利要求1-8中任意一項的黃花倒水蓮總皂苷，在製備降脂藥物中的應用。
全文摘要
具有降脂活性的黃花倒水蓮總皂苷及其藥物組合物與製備方法，本發明以生物活性為導向，用市售血脂康作為對照藥，對黃花倒水蓮降脂作用的有效部位進行篩選，結果表明，黃花倒水蓮降脂作用的有效部位的主要化學成分為皂苷類化合物，將黃花倒水蓮水提取液，直接上D101、HP20或AB8型號的樹脂柱，用水及含水乙醇梯度洗脫，收集60－70％乙醇洗脫液，得黃花倒水蓮總皂苷。
文檔編號C07J63/00GK1431221SQ0311278
公開日2003年7月23日 申請日期2003年1月29日 優先權日2003年1月29日
發明者朱丹妮, 王秋娟, 高山林, 寇俊萍, 徐宏江, 李 浩 申請人:中國藥科大學