一種檢測黃麴黴毒素b1的試劑盒及其檢測方法
2023-05-30 08:47:31
專利名稱：一種檢測黃麴黴毒素b1的試劑盒及其檢測方法
一種檢測黃麴黴毒素B1的試劑盒及其檢測方法，用於對糧食、飼料及食品中黃麴黴毒素B1(AFB1)含量的檢測。
由於黃麴黴毒素具有毒性大，致癌力強，含量低(通常0-200μg/Kg，即0-200PPb)和結構相似等特點，這就要求檢測方法靈敏度高，特異性強，集分離與檢測為一體，目前黃麴黴毒素的測定方法有多種，概括起來有化學分析法，儀器分析法，生物鑑定法及免疫分析法等。上述這些分析方法也是緊密相聯的，它們之間沒有絕然的分界線。免疫分析法中的酶聯免疫吸附法(ELISA)是70年代出現的新的免疫測定技術。正如1994年《糧食與飼料工業》雜誌中已報導，酶聯免疫吸附法其原理是抗原(或抗體)吸附於載體上的免疫吸附劑和用酶標記的抗體(或抗原)與標本中的待測物(抗原或抗體)起特異的免疫學反應，最後用測定酶活力的方法來增加測定的敏感度。這一技術應用於黃麴黴毒素的測定大體為二類一是用雙抗體夾心法檢測樣本中的黃麴黴毒素，如Sashidha將黃麴黴毒素B1-牛血清白蛋白塗覆於酶標板孔穴中，經初步培養後，加兔的AFB1抗體和游離AFB1，用磷酸4-硝基苯酯作基質，以鹼性磷酸酶-抗兔免疫球蛋白檢測第一抗體的結合二是用競爭法檢測樣本中的黃麴黴毒素，如在塗抗體的孔穴中，用乙烷萃取黃麴黴毒素B1，並與結合辣根過氧化物酶的黃麴黴素B1交聯物混合，37℃下培養10分鐘後，用水洗除去未結合的黃麴黴毒素B1交聯物，再加底物，在波長405nm進行檢測。為得到特異性更強的ELISA法，發展了AFB1單克隆抗體的酶標記免疫吸附測定法，Kawamura用間接和直接競爭ELISA法分析AFB1檢出限小於1ng。上述所講的黃麴黴毒素B1-辣根過氧化物酶(酶標抗原)的中間體是用Adsorbosil-柱層析法來提純，部分材料需進口，操作要求較嚴格，費用也較高。如採用薄層層析製備來提純，其中的矽膠吸附能力較強，在層析分離產物AFB1-Oxime和原料AFB1時，洗脫比較困難，其產率低，而且洗脫時間較長。
本發明的目的在於提供一種結構簡單，使用方便，廉價，攜帶方便的檢測黃麴黴毒素B1的試劑盒。
本發明的另一個目的是克服上述不足之處，從而提供一種樣品前處理簡單，提取後就可直接測定，不需要淨化過程；一次可測定大量樣本，而且簡便，快速、靈敏、準確、廉價的檢測黃麴黴毒素B1的方法。
本發明試劑盒主要由盒體(1)，酶標板(2)，A試劑瓶(稀釋液)(3)，B試劑瓶(標準AFB1試劑)(4)，C試劑瓶(酶標抗原試劑)(5)，D試劑瓶(酶標抗原稀釋液)(6)，E試劑瓶(含吐溫20的PBS緩衝液)(7)，F試劑瓶(四甲基聯苯胺試劑)(8)、G試劑瓶(H2O2溶液)(9)，H試劑瓶(醋酸鈉-檸檬酸緩衝液)(10)，I試劑瓶(硫酸溶液)(11)、海棉託架(12)所組成，海棉託架(12)上制有孔及凹槽，上述A、B、C、D、E、F、G、H、I試劑瓶安裝在海棉託架(12)的孔和凹槽內，海棉託架(12)酶標板(2)安裝在盒體(1)內。
本發明主要採用酶聯免疫吸附(ELISA)競爭法來檢測AFB1。採用ELISA競爭法的技術主要有兩個方面。特異性抗體(多克隆或單克隆)的製備，利用抗原免疫家免，獲得含有抗體的血清，經過生化提純分離免疫球蛋白；第二，抗原-酶交聯物(即酶標抗原)的製備。由於AFB1(黃麴黴毒素B1)不脂直接與酶結合，必須先將AFB1修飾，引入一個-COOH修飾基團，然後和酶的氨基反應，使其具有酶的活性，即能催化底物的顯色反應。
首先將多克隆(或單克隆)抗體包被在酶標板(2)上，酶標板(2)放在4℃左右冰箱過夜。再進行試劑及酶底物混合液的配製，在B試劑(標準AFB1中)加20-30mlA試劑混勻，在C試劑(酶標抗原)中加入10-20mlD試劑(無酶標抗原稀釋液)，溶解、混勻，在2-8℃下保存，E試劑(含吐溫20的PBS固體)中加入蒸餾水配製成洗滌液，用E洗滌液洗酶標板2-4次，洗液不得溢出，每次間隔0.5-1.5分鐘，放在吸水紙上拍幹，在酶標板小孔中加入配製好的試劑及樣品稀釋液進行競爭免疫反應，在37-38℃放置28-35分鐘，再用洗滌液洗板4-6次，每次間隔1-2分鐘，拍幹，再加入酶底物混合液，混勻，在37-38℃放置13-18分鐘，顯色，最後加入I終止液(硫酸溶液)中止反應，測定。
黃麴黴毒素B1-辣根過氧化物酶(AFB1-HRP)酶標抗原的製備1、黃麴黴毒素B1-羧甲基肟(B1-Oxime)的製備(中間體)(1)合成取20-30mg黃麴黴毒素B1，30-40mg羧甲基羥胺半鹽酸鹽於圓底瓶中，加入10-20ml吡啶甲醇的反應溶劑，回流2-4小時，再室溫攪拌15-20小時，減壓揮幹溶劑，得固體。
(2)、提純
在上述固體中加入5-10ml蒸餾水，採用0.1-0.5N碳酸氫鈉調pH至鹼性，轉移至分液漏鬥中，2-5ml氯仿萃取，靜置分層，得水相層，再用0.1-0.5N鹽酸調水相層至酸性，用4-8ml氯仿萃取，得氯仿層，用0.5-2ml蒸餾水洗氯仿層，棄去水層，減壓蒸餾，揮幹溶劑，得淡桔黃色固體。
2、黃麴黴毒素B1-辣根過氧化物酶(AFB1-HRP)酶標抗原的製備(1)、合成取0.5-1.0mg黃麴黴毒素B1-羧甲基肟(AFB1-Oxime)淡桔黃色固體溶於10-20ml的乙醇液中，混勻，依次加入150-200mg乙二胺3，3-二甲胺丙基-碳化二亞胺鹽酸鹽及5-10mg的辣根過氧化物酶，慢速攪拌15-30分鐘，再加150-200mg乙二胺3，3-二甲胺丙基-碳化二亞胺鹽酸鹽，在2-8℃攪拌15-18小時，並在5000-10000轉/分鐘，離心5-10分鐘，取上清液。
(2)、提純將上述上清液通過pH7.0-8.0磷酸鹽緩衝液平衡的Sephadex層析柱，並用該緩衝液洗脫，部分收集器收集，洗脫液分別在波長350-370nm和390-420nm處測定吸光度值，繪製洗脫曲線，收集雙峰並存的洗脫液，在pH7.0-8.0的磷酸鹽緩衝液透析3-5天，得含黃麴黴毒素B1-辣根過氧化物酶(AFB1-HRP)的溶液，小瓶分裝冷凍乾燥，得粉狀固體。
實施例1本發明主要採用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測黃麴黴毒素B1的含量。具體操作步驟如下一、多克隆抗黃麴黴毒素B1抗體的製備1、免疫用抗原首次免疫用5ml黃麴黴毒素B1-牛血清白蛋白與5ml完全福氏佐劑混合後作為免疫抗原，加強免疫時取5ml黃麴黴毒素B1-牛血清白蛋白與5ml不完全福氏佐劑混合作為免疫抗原。
2、免疫程序先將購買的紐西蘭大白免飼養數周后，在背部脊柱兩側脫毛區取5-10個接種點，每點內接種完全佐劑抗原0.2-0.3ml，然後每隔4周四肢肌肉加強接種不完全佐劑抗原1ml，共加強免疫2次。
3、採血首先免疫前可取耳緣靜脈採血，以後每次加強免疫前各採血1次，第二次加強免疫後第四周再採血一次，測定血清抗體效價後頸動脈放血。
4、分離血清分別以30％和60％的硫酸銨分級沉澱血清中雜蛋白與抗體免疫球蛋白，離心後得含有抗黃麴黴毒素B1多克隆抗體的溶液。
二、單克隆抗黃麴黴毒素B1的製備1、抗原製備通過黃麴黴毒素B1的肟化反應和交聯反應製備免疫用人工抗原黃麴黴毒素B1-羧甲基肟-牛血清白蛋白人工抗原(AFB1-Oxime-BSA)。
2、免疫動物採用BALB/C小白鼠作為免疫動物，免疫抗原劑量為10-100ng，經腹腔注射，在4-6周後靜脈加強免疫2-4次，取脾細胞。
3、細胞融合取對數生長期的骨髓瘤細胞SP2/0與脾細胞在聚乙二醇(4000)的溶劑中進行細胞融合，在HAT培養液中作選擇培養。
4、雜交瘤細胞克隆化採用有限稀釋法篩選雜交瘤細胞，直至得到完全同質的單克隆抗體和穩定的單克隆雜交瘤細胞株。
6、單克隆抗體的保存在液氮-20℃下保存，37℃水浴快速解凍，使細胞存活率保持80％以上。
7、單克隆抗體大量生長及提純在小鼠腹腔內注射一定量的雜交瘤細胞，採集腹水，經HPLC提純後小瓶分裝待用。
三、黃麴黴毒素B1-辣根過氧化物酶(AFB1-HRP)酶標抗原的製備(試劑盒中C試劑瓶)。
1、黃麴黴毒素B1-羧甲基肟(AFB1-Oxime)的製備(1)合成稱取20mg黃麴黴毒素B1(AFB1)和30mg羧甲基羥胺半鹽酸鹽(CMO)放在30-50ml圓底蒸餾瓶中，再加入10ml吡啶∶甲醇(1∶3-1∶6)的反應溶劑，回流2小時，再室溫攪拌15小時。當黃麴黴毒素B1(AFB1)已大部分轉化為其衍生物羧甲基黃麴黴毒素肟時，停止反應，減壓揮幹反應溶劑，得黃色固體。
(2)、提純在含上述黃色固體的圓底蒸餾瓶中，加入5ml蒸餾水，用0.1N碳酸氫納(NaHCO3)調PH至鹼性，使固體全部溶解，然後轉移至分液漏鬥中，用2ml氯份(CHCl3)萃取，靜置分層，棄氯仿(CHCl3)層，得水相層，再用0.1N鹽酸(HCl)調水相層至酸性，出現沉澱，用4ml氯仿(CHCl3)萃取，沉澱溶解在氯仿(CHCl3)層中，得氯仿(CHCl3)層，用0.5ml蒸餾水洗氯仿層，棄去水層，減壓蒸餾揮幹溶劑得淡桔黃色固體。
2、黃麴黴毒素B1-辣根過氧化物酶(AFB1-HRP)(酶標抗原)的製備。
(1)、合成
稱取上述0.5mg黃麴黴毒素B1-羧甲基肟(AFB1-Oxime)固體溶於10ml的乙醇溶液中，混勻，依次加入150mg乙二胺3，3-二甲胺丙基-碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC·HCl)和5.0mg的辣根過氧化物酶(HRP)混勻，慢速攪拌15分鐘，再加入150ml乙二胺3，3-二甲胺丙基-碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC·HCl)，在2℃溫度下攪拌15小時，在轉速為5000-10000轉/分下離心5分鐘，取上清液。
(2)、提純將上清液通過pH7.0磷酸鹽緩衝液(PBS)平衡的Sephadex層析柱，再用該緩衝液洗脫，採用BS-100A自動部分收集器收集。洗脫液分別在波長350-370nm和390-420nm處測定吸光度值，繪製洗脫曲線，見圖3所示。收集雙峰並存的洗脫液，在pH7.0的磷酸鹽緩衝液(PBS)透折3天，得含AFB1-HRP的溶液，小瓶分裝冷凍乾燥得粉狀固體，為黃麴黴毒素B1-辣根過氧化物酶(AFB1-HRP)。
圖4為酶標抗原合成原理反應式可以看出，其反應分兩步進行，即AFB1-Oxime的肟化反應和AFB1-O-HRP交聯反應。
具體檢測步驟如下將多克隆(或單克降)抗黃麴黴毒素B1抗體包裝在酶標板上，然後進行樣品的處理。
1、先將樣品粉碎至20目，稱取5g樣品於磨口的50ml試管中，加入提取液25ml(甲醇∶水為7∶3)，加塞振蕩5-10min，過濾。濾液按下表用A試劑適當稀釋。
樣品 濾液量(ml) A試劑量(ml)稀釋倍數豆類發酵食品，其它糧食0.1 0 0大米食用油、肉雞、生長0.1 0.11∶1雞飼料玉米(食品用)、混合、0.05 0.15 1∶3配合飼料玉米(飼料用)、花生餅、粕0.02 0.18 1∶92、試劑的配製(1)標準黃麴黴毒素B1(AFB1)B試劑中加入稀釋液A試劑20ml混勻；(2)酶標抗原(AFB1-HRP)C試劑中加入10ml酶標抗原稀釋液D試劑，溶解，混勻，在2-8℃下保存；(3)在含0.05％吐溫-20(Tween-20)的磷酸鹽(PBS)的E試劑中加入200ml蒸餾水配製洗滌液；(4)底物混合液配製根據每次測定所需底物混合液用量，用醋酸鈉-檸檬酸緩衝液H試劑四甲基聯苯胺F試劑按H∶F＝7-9.5∶3-0.5的比例稀釋F試劑，再按每毫升此稀釋液需加入14μl的雙氧水G試劑配成底物混合液(臨用前半小時內配製)。
3、將試劑盒平衡至室溫4、用E洗滌液洗酶板2次，洗液不得溢出，每次間隙0.5分鐘，放在吸水紙上拍幹。
5、反應物組成按下表所列，依次加入配製好的試劑及待測樣品稀釋液。1-3號孔為標準對照孔。4-12號孔為樣品孔。
>6、反應按上表所列加入各試劑在38℃放置28分鐘。
7、洗滌顯色用E洗滌液洗酶標板4次，加入50μl底物混合液，混勻，在38℃放置13分鐘。
8、中止加底物液I試劑50μl中止反應。
9、測定先比較1-3號孔顏色，若1號最深，2號孔次之，3號孔按近無色，說明標準準確。
(1)、目視法比較樣品孔與2號孔顏色，若淺者，則為陽性，反之為陰性，若顏色接近，則用儀器法或國標法驗證。
(2)、儀器法用酶標儀(通用)測定吸光度值，通過標準曲線確定樣品中黃麴黴毒素B1的含量(定量)。
10、結果判讀若樣品經目視法為陽性則AFB1含量如下表稀釋倍數AFB1含量(PPb)0 ＞51∶1＞101∶3＞201∶9＞50本發明試劑盒體(1)內裝有海棉託架(12)，酶標板(2)，有塑料支架和各自分開的帶孔穴的塑料條組成，海棉託架(12)上制有孔及凹槽，孔及凹槽內放有A試劑瓶(稀釋液)(3)，B試劑瓶(標準AFB，試劑)(4)，C試劑瓶(酶標抗原試劑)(5)，D試劑瓶(酶標抗原稀釋液試劑)(6)，E試劑瓶(含吐溫20的PBS固體)(7)，F試劑瓶(四甲基聯苯胺)(8)，G試劑瓶(H2O2溶液)(9)，H試劑瓶(醋酸鈉-檸檬酸緩衝液)(10)，I試劑瓶(硫酸溶液)(11)。試劑盒放在2-8℃貯存，忌0℃下凍存，有效期12個月。詳見
圖1、圖2實施例21、多克隆(或單克隆)抗黃麴黴毒素B1抗體的製備與實施例1相同，略。
二、黃麴黴毒素B1-辣根過氧化物酶(AFB1-HRP)酶標抗原的製備(試劑盒中C試劑瓶)。
1、黃麴黴毒素B1-羧甲基肟(AFB1-Oxime)的製備(1)、合成稱取25mg黃麴黴毒素B1(AFB1)，35mg羧甲基羥胺半鹽酸醇鹽(CMO)回流3小時，室溫攪拌18小時，其它工藝條件操作步驟同實施例1。
(2)、提純蒸餾水取7.5ml，0.3N碳酸氫鈉(NaHCO3)，3ml氯仿(CHCl3)萃取，0.3N鹽酸(HCl)再取6ml氯仿(CHCL3)萃取，用1.2ml蒸餾水洗氯仿層，其它工藝流程條件操作步驟相同於實施例1。
2，黃麴黴毒素B1-辣根過氧化物酶(AFB1-HRP)酶標抗原的製備。
(1)、合成取0.75mg上述固體，乙醇溶液15ml175mg乙二醇3，3-二甲胺丙基-碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC·HCl)7.5mg辣根過氧化物酶(HRP)，攪拌25分鐘再加入175mg(EDC·HCL)乙二胺3，3-二甲胺丙基-碳化二亞胺鹽酸胺，4℃攪拌16.5小時，離心7.5分鐘，其它工藝條件操作步驟同實施例1。
(2)、提純pH7.5透析4天，其它工藝條件、操作步驟同實施例1。
檢測步驟樣品處理同實施例1。
試劑配製B試劑中加入A試劑25mlC試劑中加入15mlD試劑，洗滌液洗酶板3次，每次間隔1分鐘，在37.5℃下放置30分鐘，第二次洗酶板5次，每次間隔1.5分鐘，在37.5℃下放置15分鐘，其它工藝條件操作步驟同於實施例1。
實施例3一、多克隆(或單支隆)抗黃麴黴毒素B抗體的製備同實施例1，略。
二、黃麴黴毒素B1-辣根過氧化酶(AFB1-HRP)酶標抗原的製備(試劑盒中C試劑瓶)1、黃麴黴毒素B1-羧甲基肟(AFB1-Oxime)的製備(1)、合成稱取30mg黃麴黴毒素B1(AFB1)，40mg羧甲基羥胺半鹽酸鹽(CMO)，回流4小時，室溫攪拌20小時，其它工藝條件操作步驟相同實施例1(2)、提純蒸餾水取10ml，0.5N碳酸氫鈉(NaHCO3)，5ml氯仿(CHCl3)萃取，0.5N鹽酸(HCl)，再取6ml氯仿(CHCl3)萃取，用2ml蒸餾水洗氯仿層，其它工藝條件製作步驟相同於實施例1。
2、黃麴黴毒素B1-辣根過氧化物酶(AFB1-HRP)酶標抗原的製備1、合成取1.0mg上述固體，乙醇溶液20ml，200mg乙二醇3，3-二甲胺丙基-碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC· HCl)、10mg辣根過氧化物酶(HRP)，攪拌30分鐘，再加入200mg乙二胺3，3-二甲胺丙基-碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC·HCl)，8℃攪拌18小時，離心10分鐘，其它操作步驟同於實施例1。
(2)、提純pH8.0透析5天，其它工藝條件製作步驟相同於實施例1檢測步驟樣品處理同於實施例1試劑配製B試劑中加入A試劑30ml，C試劑中加入20mlD試劑，洗滌液洗板4次，每次間隔1.5分鐘，在37℃下放置35分鐘，第二次洗酶板6次，每次間隔2分鐘，在37℃下放置18分鐘，其它操作步驟同於實施例1。
本發明與已有技術相比具以下優點1、試劑盒結構簡單，攜帶使用配製方便，2、靈敏度高，特異性好，操作簡單、方便，3、檢測結果易判讀，4、試劑來源方便，價格低廉，尤其適用於糧食、食品、飼料中黃麴黴毒素B1的檢測。
權利要求
1. 一種檢測黃麴黴毒素B1的試劑盒由盒體(1)，酶標板(2)、A試劑瓶(稀釋液)(3)，B試劑瓶(標準AFB1試劑)(4)，C試劑瓶(酶標抗原試劑)(5)，D試劑瓶(酶標抗原稀釋液試劑)(6)，E試劑瓶(含吐溫-20的PBS固體)(7)，F試劑瓶(四甲基聯苯胺試劑(8)，G試劑瓶(H2O2溶液)(9)、H試劑瓶(醋酸鈉-檸檬酸緩衝液)(10)，I試劑瓶(硫酸溶液)(11)，海棉託架(12)所組成，海棉託架(12)內裝有上述A、B、C、D、E、F、G、H、I試劑瓶，海棉託架(12)及酶標板(2)均安裝在盒體(1)內。
2.根據權利要求1所述的檢測黃麴黴毒素B1的試劑盒，其特徵在於所述的海棉託架(12)上制有孔和凹槽。
3.根據權利要求1所述的檢測黃麴黴毒素B1的試劑盒，其特徵在於所述的酶標板(2)有塑料支架和各自分開的帶孔穴的塑料條組成。
4.一種檢測黃麴黴毒素B1的試劑盒及用該試劑盒檢測黃麴黴毒素B1的方法，先進行樣品處理，將樣品粉碎至20目，取樣品。放在50ml試管中，加入提取液(甲醇∶水為7∶3)。加塞振蕩5-10分鐘，過濾，濾液採用A試劑液適當稀釋，其特徵為首先採用多克隆(或單克隆)抗體包被在酶標板(2)上，酶標板(2)放在4℃冰箱過夜，然後進行試劑及酶底物混合液的配製在B試劑(標準AFB1)中加20-30mlA試劑混勻，在C試劑(酶標抗原)中加入10-20mlD試劑(酶標抗原稀釋液)，溶解混勻，在2-8℃下保存，E試劑(含吐溫-20的PBS固體)中加入蒸餾水配製成洗滌液，用E洗滌液洗酶板2-4次，洗液不得溢出，每次間隔0.5-1.5分鐘，放在吸水紙上拍幹，在酶板小孔中加入配製好的試劑及樣品稀釋液進行競爭免疫反應，在37-38℃放置28-35分鐘，再用洗滌液洗板4-6次，每次間隔1-2分鐘，拍幹，再加入酶底物混合液，混勻，在37-38℃放置13-18分鐘顯色，最後加入I終止液(硫酸溶液)中止反應，測定。
5.根據權利要求4所述的檢測黃麴黴毒素B1的方法，其特徵是C試劑為黃麴黴毒素B1-辣根過氧化物酶(AFB1-HRP)酶標抗原，(酶標抗原)分二步進行製備①黃麴黴毒素B1-羧甲基肟(AFB1-Oxime)(中間體)的製備(1)、合成取20-30mg黃麴黴毒素B1、30-40mg羧甲基羥胺半鹽酸鹽於圓底蒸餾瓶中，加入10-20ml吡啶甲醇的反應溶劑，回流2-4小時，再室溫攪拌15-20小時，減壓揮幹溶劑，得固體。(2)，提純在上述固體中加入5-10ml蒸餾水，採用0.1-0.5N碳酸氫鈉調pH至鹼性，轉移至分液漏鬥中，2-5ml氯仿萃取，靜置分層，得水相層，再用0.1-0.5N鹽酸調水相層至酸性，再用4-8ml氯仿萃取，得氯仿層，用0.5-2ml蒸餾水洗氯仿層，棄去水層，減壓蒸餾，揮幹溶劑得淡桔黃色固體②黃麴黴毒素B1-辣根過氧化物酶(AFB1-HRP)酶標抗原的製備。(1)、合成取0.5-1.0mg黃麴黴毒素B-羧甲基肟(AFB1-Oxime)淡桔黃色固體溶於10-20ml的乙醇液中，混勻，依次加入150-200mg乙二胺3，3-二甲胺丙基-碳化二亞胺鹽酸鹽及5-10mg的辣根過氧化物酶，混勻，慢速攪拌15-30分鐘，再加入150-200mg乙二胺3，3-二甲胺丙基-碳化二亞胺鹽酸鹽，在2-8℃攪拌15-18小時，並在5000-10000轉/分鐘，離心5-10分鐘，取上清液。(2)、提純將上述上清液通過pH7.0-8.0磷酸鹽緩衝液平衡的Sephadex層析柱，再用該緩衝液洗脫，部分收集器收集，洗脫液分別在波長350-370nm和390-420nm處測定吸光度值，繪製洗脫曲線，收集雙峰並存的洗脫液，在pH7.0-8.0的磷酸鹽緩衝液透析3-5天，將含黃麴黴毒素B1-辣根過氧化物酶(AFB1-HRP)的溶液，小瓶分裝冷凍乾燥得粉狀固體。
6.根據權利要求4所述的的檢測黃麴黴毒素B1的方法，其特徵在於所述的底物混合液，採用H試劑(醋酸鈉-檸檬酸緩衝液)和F試劑(四甲基聯苯胺)按H∶F＝7-9.5∶3-0.5和每毫升此稀釋液加14μlG試劑(H2O2)混合配製而成。(臨用前半小時內配製)。
全文摘要
一種檢測黃麴黴毒素B
文檔編號G01N33/53GK1153908SQ9611680
公開日1997年7月9日 申請日期1996年1月4日 優先權日1996年1月4日
發明者成恆嵩, 潘中華, 宓曉黎, 趙曉聯, 袁建興, 楊焱, 殷旭仁, 餘傳信, 徐燕芳, 葛其德 申請人:江蘇省微生物研究所