一種從沉澱組分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ中回收白蛋白的方法
2023-05-29 16:38:06 3
專利名稱：一種從沉澱組分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ中回收白蛋白的方法
技術領域：
本發明涉及一種從製備人血漿蛋白的廢棄沉澱中回收殘留白蛋白的工藝。
背景技術：
白蛋白是人血漿中含量最高的蛋白質，白蛋白作為治療及營養補充劑在國內外已經大量應用。從人血漿中分離純化白蛋白經典方法是E.J.Cohn教授創立的低溫乙醇分級沉澱技術。該技術通過有效控制蛋白質沉澱的五個因素pH值、溫度、蛋白濃度、離子強度、乙醇濃度來逐級沉澱血漿中的不同蛋白質，一般步驟是首先沉澱組分I、II、III，然後沉澱組分IV，最後沉澱組分V即白蛋白粗製品。也可一步反應沉澱出組分I、II、III、IV，然後沉澱組分V得到白蛋白粗製品。
然而由於白蛋白的分離沉澱影響因素多，血漿中的白蛋白往往在分級沉澱的過程中有大量損失，損失率一般在40％，部分白蛋白夾帶在組分沉澱I、II、III中，還有部頒白蛋白夾帶在組分沉澱IV中，採用一步反應沉澱組分I、II、III、IV的白蛋白損失更多。
因此從組分沉澱中回收白蛋白是一項具有實際意義的工作。傳統的白蛋白回收一般採用改變沉澱條件結合柱層析的方法，從組分沉澱中選擇性吸附白蛋白從而達到回收的目的。
發明內容
為解決上述問題，本發明的目的是提供一種從沉澱組分I、II、III、IV中回收白蛋白的方法，其克服了傳統回收工藝中層析柱處理量小、離心分離固液投資大、能耗高的缺點。
為實現上述目的，本發明採用的技術方案是一種從沉澱組分I、II、III、IV中回收白蛋白的方法，其特徵在於包括以下步驟①用生理鹽水溶解沉澱組分I、II、III、IV配製成蛋白液；②加入穩定劑，加熱處理使蛋白液中的雜蛋白變性；③通過加壓過濾使固液分離；④將上清液超濾濃縮得到白蛋白粗製品；⑤進一步提純，除去雜蛋白，製成白蛋白成品。
本發明通過調整蛋白液的pH值、溫度、蛋白濃度、離子強度、乙醇濃度，採用熱處理除掉雜蛋白結合加壓過濾分離技術，使殘留在組分I、II、III、IV中的白蛋白能有效回收，回收量約為0.4-0.8千克白蛋白/噸血漿。採用本方法克服傳統回收工藝中層析柱處理量小、離心分離固液投資大、能耗高的缺點，能有效提高白蛋白的總收得率，降低了生產成本，提高了生產利潤。
具體實施例方式
以下通過詳細的白蛋白回收步驟進一步闡述本發明的技術方案，包括以下順序步驟(按照噸血漿產生的組分沉澱I、II、III、IV計算)首先，將組分沉澱I、II、III、IV用10-12倍重量的生理鹽水溶解，配製成蛋白含量3-4％的蛋白液，要保證足夠的時間使白蛋白充分溶解。
向上述蛋白液按照每噸血漿添加600-750克穩定劑的比例添加穩定劑，穩定劑可選用辛酸鈉，調節pH6.2-6.6，添加乙醇到溶液的百分比含量的6-10％。
然後，將蛋白液加入恆溫水箱熱處理40-60min，恆溫溫度控制在63±1.5℃。熱處理結束後快速冷卻到10-18℃，攪拌一小時以上，調節pH4.0-4.4。
然後進行壓濾。壓濾前壓濾機用含硅藻土的洗液預處理，洗液用蒸餾水300升，酒精28±3升，氯化鈉3000克配製成，溫度10-18℃。向待壓濾的蛋白液中按照每千克血漿添加50克助濾劑硅藻土，然後將其泵入壓濾機中過濾，收集濾出液。過濾完畢按照每噸血漿600升洗液的比例用洗液衝洗壓濾機，洗出液和濾出液合併。
濾液調節pH7.0-7.2，用規格為NMWL10000的超濾機濃縮到蛋白含量10％即回收白蛋白的粗製品。
最後調整參數進一步除去雜蛋白提高白蛋白的純度，製成白蛋白的最終成品。
權利要求
1.一種從沉澱組分I、II、III、IV中回收白蛋白的方法，其特徵在於包括以下步驟①用生理鹽水溶解沉澱組分I、II、III、IV配製成蛋白液；②加入穩定劑，加熱處理使蛋白液中的雜蛋白變性；③通過加壓過濾使固液分離；④將上清液超濾濃縮得到白蛋白粗製品；⑤進一步提純，除去雜蛋白，製成白蛋白成品。
2.根據權利要求1所述的一種從沉澱組分I、II、III、IV中回收白蛋白的方法，其特徵在於所述步驟①配製成的蛋白液的蛋白含量為3-4％。
3.根據權利要求1所述的一種從沉澱組分I、II、III、IV中回收白蛋白的方法，其特徵在於所述步驟②中的穩定劑為辛酸鈉。
4.根據權利要求1所述的一種從沉澱組分I、II、III、IV中回收白蛋白的方法，其特徵在於所述步驟②中在加熱處理前，蛋白液pH調節至6.2～6.6，並添加乙醇到百分比含量的6～10％。
5.根據權利要求1所述的一種從沉澱組分I、II、III、IV中回收白蛋白的方法，其特徵在於所述步驟②中的加熱處理，加熱溫度為63±1.5℃，加熱時間為40～60分鐘。
6.根據權利要求1所述的一種從沉澱組分I、II、III、IV中回收白蛋白的方法，其特徵在於所述步驟②中加熱處理後，快速冷卻蛋白液至10～18℃，攪拌1小時以上，並調節pH至4.0～4.4。
7.根據權利要求1所述的一種從沉澱組分I、II、III、IV中回收白蛋白的方法，其特徵在於所述步驟③中，向蛋白液中按照每千克血漿添加50克助濾劑硅藻土後，泵入壓濾機中過濾，收集濾出液。
8.根據權利要求1所述的一種從沉澱組分I、II、III、IV中回收白蛋白的方法，其特徵在於所述步驟③中，壓濾前的壓濾機先用含硅藻土的洗液進行預處理。
9.根據權利要求8所述的一種從沉澱組分I、II、III、IV中回收白蛋白的方法，其特徵在於所述的洗液配比為每1000升蒸餾水加入90±10升乙醇，10000克氯化鈉。
10.根據權利要求1所述的一種從沉澱組分I、II、III、IV中回收白蛋白的方法，其特徵在於所述步驟④中進行超濾濃縮的溶液pH調節至7～7.2。
全文摘要
本發明公開了一種從沉澱組分I、II、III、IV中回收白蛋白的方法，首先用生理鹽水溶解沉澱組分I、II、III、IV配製成蛋白液，然後加熱處理使蛋白液中的雜蛋白變性，再通過加壓過濾使固液分離，將上清液超濾濃縮得到白蛋白粗製品。本發明通過調整蛋白液的pH值、溫度、蛋白濃度、離子強度、乙醇濃度，採用熱處理除掉雜蛋白結合加壓過濾分離技術，使殘留在沉澱組分中的白蛋白能有效回收，回收量約為0.4－0.8千克白蛋白/噸血漿。採用本方法克服傳統回收工藝中層析柱處理量小、離心分離固液投資大、能耗高的缺點，能有效提高白蛋白的總收得率，降低了生產成本，提高了生產利潤。
文檔編號C07K1/00GK1660903SQ20041007749
公開日2005年8月31日 申請日期2004年12月22日 優先權日2004年12月22日
發明者朱光祖, 梅偉伶 申請人:三九集團湛江開發區雙林藥業有限公司