制黴菌素柔性脂質體及其凝膠劑和製備方法
2023-05-30 09:19:36
專利名稱：制黴菌素柔性脂質體及其凝膠劑和製備方法
技術領域：
本發明涉及一種抗菌藥物的新型製劑領域，特別是提供了一種制黴菌素柔性脂質體及外用劑型凝膠劑，同時公開其製備方法。
背景技術：
1950年發現土壤微生物Streptomyces noursei能分泌一種抗黴菌的物質,從而發現了第一種抗黴菌的抗生素。制黴菌素具有共軛多烯大環內酯結構，能抑制真菌和皮蘚菌的活性，對細菌無抑制作用。制黴菌素屬於膜滲透性增強劑。它對多種真菌如酵母菌、白色念珠菌、皮炎芽生菌等，有強大的抑制作用。制黴菌素口服後胃腸道不吸收，給常用口服量後血藥濃度極低，對全身真菌感染無治療作用。幾乎全部服藥量自糞便內排出。局部外用亦不被皮膚和黏膜吸收，另外，制黴菌素易降解，不易保存。因此嚴重影響了其在抗真菌方面的應用。脂質體作為一種新型的藥物載體具有增加藥物溶解度、降低藥物毒性、良好的生物相容性的特性日益受到人們的重視。但是，由於傳統脂質體的粒徑一般在IOO-IOOOnm之間，且具有一定的剛性，不能夠穿透角質層，進入真皮層或入血。因此脂質體在經皮滲透給藥中的應用受到限制。
發明內容
本發明公開一種制黴菌素柔性脂質體，解決了由於制黴菌素經皮膚不吸收、不易儲存的問題，具有治療皮膚表層及深層感染的作用，並能用於治療全身性真菌感染，且對多種耐藥性真菌敏感。本發明公開一種制黴菌素柔性脂質體凝膠劑，使用方便，穩定性好。本發明還提供了制黴菌素柔性脂質體及其凝膠劑製備方法，適用於工業化生產。本發明採用以下技術解決方案
首先利用薄膜分散法製備制黴菌素柔性脂質體，加入相應的輔料後，以此溶液溶脹水性凝膠基質，並調節PH值，製得能夠用於治療皮膚表層及深層感染，同時也能夠用於多種耐藥性真菌的全身感染的治療的外用製劑。本發明的制黴菌素柔性脂質體，由以下原料按重量分數比製成的
磷脂4-20份、膽固醇1-5份，制黴菌素1-10份，柔性劑10-50份，乙醇150-500份、純化水500-1500份。本發明的制黴菌素柔性脂質體，其優選配比組成如下
磷脂12份、膽固醇3份，制黴菌素4份，柔性劑32份，乙醇300份、純化水1000份。所述的磷脂為氫化大豆磷脂或注射用大豆磷脂。所述的柔性劑包括膽酸鈉或脫氧膽酸鈉。本發明提供的制黴菌素柔性脂質體的製備方法，包括如下步驟
取磷脂及膽固醇溶解在20-30倍(w:v)氯仿中，制黴菌素溶解在200-500倍(w:v)甲醇中，將兩種溶液混合，超聲5-10min，48°C旋轉蒸發除去有機溶劑，吹氮氣4_8h，去除殘留有機溶劑，加入水合溶液，60-65°C水合1-2. 5h，使用薄膜擠出儀，IOOnm碳酸脂膜，過膜2_5 次，即得制黴菌素柔性脂質體；
所述的水合溶液含有9%蔗糖、15-30%乙醇及1-5%柔化劑。本發明提供的制黴菌素柔性脂質體凝膠劑，由以下原料按重量份數比製成的 制黴菌素柔性脂質體50-200份、凝膠基質1-5份、保溼劑3-5份。本發明提供的制黴菌素柔性脂質體凝膠劑的製備方法，步驟如下
取制黴菌素脂質體，加入凝膠基質，溶脹6-12h，用三乙醇胺溶液調節pH6-8，加入保溼劑，攪拌均勻，2000-2500rpm離心10_30min、4°C冰箱放置2_4h脫氣，以Co60，40°C輻射滅菌，即得制黴菌素柔性脂質體凝膠劑。所述的凝膠基質為卡波姆P980、P940或P934，以三乙醇胺調節pH至7。所述的保溼劑為甘油、丙二醇或山梨醇。本發明通過在脂質體中加入膽酸鈉或脫氧膽酸鈉等表面活性劑和促滲劑乙醇，製備柔性脂質體，增加脂質體的柔性，即在穿透皮膚時能夠發生形變，通過比自身孔徑小的孔道，提高脂質體的皮膚透過率。同時，膽酸鈉(或脫氧膽酸鈉)能夠與制黴菌素結合，增加制黴菌素的溶解性及穩定性。另外柔性脂質體能夠在皮膚層中有一定得滯留，形成藥物儲庫， 持續釋放藥物，提高療效。本發明的積極效果在於通過納米脂質體技術，將制黴菌素包封脂質體中，增加制黴菌素的溶解性，並改進脂質體配方，加入膽酸鈉或脫氧膽酸鈉，製備成柔性脂質體，增強了脂質體經皮滲透性，而且能夠改善制黴菌素穩定性，開發了制黴菌素的透皮給藥途徑，在皮膚淺表層或深層感染及全身性真菌感染方面發揮治療作用；將制黴菌素柔性脂質體製備成凝膠劑，增強制黴菌素柔性脂質體在皮膚上的滯留時間，使用簡單方便，成本低，並且提高使用者的順應性，降低毒性，能夠在皮膚上形成藥物儲庫，使藥物持續釋放，延長藥物作用時間。
圖I為制黴囷素標準曲線。
具體實施例方式通過以下實施例進一步舉例描述本發明，並不以任何方式限制本發明，在不背離本發明的技術解決方案的前提下，對本發明所作的本領域普通技術人員容易實現的任何改動或改變都將落入本發明的權利要求範圍之內。實施例I :
稱取氫化大豆卵磷脂4g，加入膽固醇2g，溶解與150ml氯仿中；另稱取制黴菌素lg，溶解與500mL甲醇中。將兩種溶液混合，超聲5min。48°C減壓蒸乾，吹氮氣6h，去除殘留有機溶劑。加入含有蔗糖67. 5g、乙醇150g、水600g，膽酸鈉IOg的水合溶液，在65°C下水化2h， IOOnm碳酸脂膜，過膜2次，即得制黴菌素柔性脂質體。實施例2
稱取大豆卵磷脂20g，加入膽固醇lg，溶解與630ml氯仿中；另稱取制黴菌素10g，溶解與2000mL甲醇中。將兩種溶液混合，超聲lOmin。48°C減壓蒸乾，吹氮氣8h，去除殘留有機溶劑，加入含有蔗糖90g、乙醇300g、水700g，脫氧膽酸鈉50g的水合溶液，在60°C下水化 lh, IOOnm碳酸脂膜，過膜3次，即得制黴菌素柔性脂質體。實施例3
稱取氫化大豆卵磷脂15g，加入膽固醇3g，溶解與360ml氯仿中；另稱取制黴菌素Sg， 溶解與4000mL甲醇中。將兩種溶液混合，超聲lOmin。48°C減壓蒸乾，吹氮氣6h，去除殘留有機溶劑，加入含有蔗糖135g、乙醇500g、水lOOOg，脫氧膽酸鈉30g的水合溶液，在65°C下水化2. 5h，IOOnm碳酸脂膜，過膜5次，即得制黴菌素柔性脂質體。實施例4
稱取大豆卵磷脂12g，加入膽固醇3g，溶解與450ml氯仿中；另稱取制黴菌素4g，溶解與500mL甲醇中。將兩種溶液混合，超聲8min。48°C減壓蒸乾，吹氮氣4h，去除殘留有機溶劑。加入含有蔗糖108g、乙醇300g、水9000g，脫氧膽酸鈉32g的水合溶液，在60°C下水化 2h, IOOnm碳酸脂膜，過膜2次，即得制黴菌素柔性脂質體。實施例5 (2000-2500rpm離心10_30min、4°C冰箱放置2_4h脫氣，)刪除取上述實施例I中製備的制黴菌素柔性脂質體50mL,加入Ig卡波姆p940,溶脹6h,以
三乙醇胺調節pH值至7，加入甘油3ml，攪拌均勻，2500rpm離心30min、4°C冰箱放置4h脫氣，分裝以Co60，40°C輻射滅菌，即得制黴菌素柔性脂質體凝膠劑。實施例6
取上述實施例2中製備的制黴菌素柔性脂質體200mL，加入5g卡波姆p934，溶脹，8h 後，以三乙醇胺調節pH值至6,加入丙二醇5ml,攪拌均勻，2000rpm離心10min、4°C冰箱放置3h脫氣，分裝以Co60，40°C輻射滅菌，即得制黴菌素柔性脂質體凝膠劑。實施例7
取上述實施例3中製備的制黴菌素柔性脂質體150mL，加入3g卡波姆p980，溶脹12h 後，以三乙醇胺調節pH值至8，加入山梨醇4g，攪拌均勻，2300rpm離心20min、4°C冰箱放置 2h脫氣，分裝以Co60，40°C輻射滅菌，即得制黴菌素柔性脂質體凝膠劑。實施例8
取上述實施例4中製備的制黴菌素柔性脂質體IOOmL,加入4g卡波姆p940,溶脹4h後， 以三乙醇胺調節pH值至7，加入甘油4g，攪拌均勻，2500rpm離心10min、4°C冰箱放置3h脫氣，分裝以Co60，40°C輻射滅菌，即得制黴菌素柔性脂質體凝膠劑。以下試驗例表明
本發明制黴菌素脂質體的穩定性可以通過測定脂質體粒徑、Zata電位、藥物包封率及儲存後藥物含量變化反應；制黴菌素柔性脂質體的變形性可以通過流動性實驗反應；制黴菌素柔性脂質體凝膠劑的皮膚透過性可以通過體外經皮滲透模型反應。一、穩定性試驗
以制黴菌素溶液劑制黴菌素普通脂質體作為對照，通過以下實驗評價脂質體及制黴菌素的穩定性。制黴菌素溶液制黴菌素溶解於甲醇中，製成100μ g/mL的溶液。制黴菌素普通脂質體不加膽酸鈉及乙醇，其他與柔性脂質體組相同。I、藥物含量測定(I)標準曲線的製備
以甲醇溶解制黴菌素製成1000 μ g/mL的儲備液，準確的稱取儲備溶液O. 4,0. 8、I. 2、 I. 6、2ml,以甲醇定容至IOml0進樣體積20 μ I。色譜柱AgilentC18 (250mmX4. 6mm, 5 μ m);紫外檢測波長304nm ；流速
I.Oml · rniiT1 ;流動相甲醇4水=70 :30，過濾並脫氣；柱溫25°C ;進樣量20μ I。以制黴菌素濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標進行線性擬合，擬合方程為 Υ=17440. 1886Χ, R2 為 O. 9996，標準曲線見圖 I。(2)樣品含量的測定
取脂質體樣品50 μ L，加入950 μ L甲醇，破壞脂質體，破壞脂質體，釋放制黴菌素，觀察，溶液由乳狀變至澄清，說明脂質體被完全破壞，過O. 22 μ m有機濾膜，如上HPLC法測定脂質體中藥物和游離藥物的總含量。2、脂質體粒徑與Zata電位的測定
本發明的制黴菌素柔性脂質體的粒徑及Zata電位的測定，是採用馬爾文雷射粒度分析儀進行，結果見表I所示。3、藥物包封率的測定
本發明的制黴菌素柔性脂質體的包封率測定，是採用透析法進行，取2mL的脂質體，測定其中的藥物含量，以500mL的O. 01mol/L的檸檬酸為透析溶液，恆溫磁力攪拌器，IOOrpm, 25°C，透析2h，測定透析袋內的藥物含量及溶液體積。藥物的包封率計算公式如下
^+ _ 脂質體中藥物含量藥物包^率=包^率=脂質體中及游離藥物總含量
從表I中可以看出，而制黴菌素溶液在儲存30、60天後的降解率分別為31. 5%及 45. 2%，說明制黴菌素溶液儲存後有明顯的降解。實施例1-4製備的制黴菌素柔性脂質體的平均粒徑在100-130nm之間，且在4°C儲存30、60天後，粒徑、包封率沒有明顯的差異，且降解率小於5%，說明實施例1-4製備的制黴菌素柔性脂質體比較穩定。剛制黴菌素普通脂質體的粒徑為132. Onm，包封率為93. 4%，儲存30、60天後粒徑分別為369. 4nm及500. 3nm，包封率分別為60. 5%及40. 3%，降解率也較實施例的柔性脂質體稍高，說明柔性脂質體中的柔性劑及乙醇的加入明顯的增加了脂質體及制黴菌素的穩定性。二、脂質體流動性實驗
考察在外壓作用(O. Γ0. 3MPa)下，制黴菌素柔性脂質體混懸溶液變形通過孔徑為 50nm的微孔濾膜的性能。首先記錄5mL水通過微孔濾膜的時間Utl),然後記錄5mL脂質體溶液的透過時間U1)，以此計算相對透過速率P= t0 /%*100%。結果見表2。從表I中可以看出，制黴菌素普通脂質體與實施例製備的制黴菌素柔性脂質體的粒徑均大於lOOnm。如果脂質體不發生變形則不能通過微孔濾膜。而從表2中可以看出，4 個實施例所製備的制黴菌素柔性脂質體在壓力為0. 1-0. 4Mpa時，其透過率均大於70%，且隨著壓力的增加而增加。與普通脂質體相比，有非常顯著地差異(P〈0. 01)。三、體外經皮滲透實驗
分組設置游離制黴菌素凝膠劑組、制黴菌素普通脂質體組(不加膽酸鈉及乙醇，其他與柔性脂質體組相同)、制黴菌素柔性脂質體凝膠劑組。將完整去毛小鼠皮膚至於Franz擴散池上，在給藥池中分別加入上述三種藥物，測定不同時間點接收池中得藥物濃度計算藥物的穩態流量，並測定給藥部位小鼠皮膚中藥物的滯留量。實驗結果見表2。從表2中可以看出，制黴菌素普通脂質體組與柔性脂質體組均能夠顯著提高藥物的穩態流量及皮膚內滯留量，而柔性脂質體組明顯高於普通脂質體組。由此可以看出，柔性脂質體能夠明顯增加制黴菌素的經皮滲透能力，並能在皮膚上形成藥物儲庫，持續釋放藥物。
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權利要求
1.一種制黴菌素柔性脂質體，是由以下原料按重量份比製成的磷脂4-20份、膽固醇1-5份，制黴菌素1-10份，柔性劑10-50份，蔗糖60-90份、乙醇 150-500 份、純化水 500-1500 份。
2.如權利要求I所述的制黴菌素柔性脂質體，是由以下原料按重量份比製成的磷脂12份、膽固醇3份，制黴菌素4份，柔性劑32份，乙醇300份、純化水1000份。
3.如權利要求I或2所述的制黴菌素柔性脂質體，其特徵是所述的磷脂為氫化大豆磷脂或注射用大豆磷脂。
4.如權利要求I或2所述的制黴菌素柔性脂質體，其特徵是所述的柔性劑包括膽酸鈉或脫氧膽酸鈉。
5.如權利要求I所述的制黴菌素柔性脂質體的製備方法取磷脂及膽固醇溶解在 20-30倍(w: V)氯仿中，制黴菌素溶解在200-500倍(w: V)甲醇中，將兩種溶液混合，超聲 5-1011^11，481旋轉蒸發除去有機溶劑，吹氮氣4-811，去除殘留有機溶劑，加入水合溶液， 60-65°C水合1-2. 5h，使用薄膜擠出儀，IOOnm碳酸脂膜，過膜2_5次，即得制黴菌素柔性脂質體；所述的水合溶液含有9%蔗糖、15-30%乙醇及1-5%柔化劑。
6.一種制黴菌素柔性脂質體凝膠劑，主要由下列配比原料及輔料組成制黴菌素柔性脂質體50-200份、凝膠基質1-5份、保溼劑3-5份。
7.如權利要求6所述制黴菌素柔性脂質體凝膠劑的製備方法，步驟如下取制黴菌素脂質體，加入凝膠基質，溶脹6-12h，用三乙醇胺溶液調節pH6-8，加入保溼劑，攪拌均勻，2000-2500rpm離心10_30min、4°C冰箱放置2_4h脫氣，以Co60，40°C輻射滅菌，即得制黴菌素柔性脂質體凝膠劑。
8.如權利要求7所述制黴菌素柔性脂質體凝膠劑的製備方法，其特徵是凝膠基質為卡波姆P980、P940或P934，以三乙醇胺調節pH至7。
9.如權利要求7所述制黴菌素柔性脂質體凝膠劑的製備方法，其特徵是保溼劑為甘油、丙二醇或山梨醇。
全文摘要
本發明提供了一種制黴菌素柔性脂質體及外用劑型凝膠劑，同時公開其製備方法，通過納米脂質體技術，將制黴菌素包封脂質體中，增加制黴菌素的溶解性，並改進脂質體配方，加入膽酸鈉或脫氧膽酸鈉，製備成柔性脂質體，增強了脂質體經皮滲透性，而且能夠改善制黴菌素穩定性，開發了制黴菌素的透皮給藥途徑，在皮膚淺表層或深層感染及全身性真菌感染方面發揮治療作用；將制黴菌素柔性脂質體製備成凝膠劑，增強制黴菌素柔性脂質體在皮膚上的滯留時間，使用簡單方便，成本低，並且提高使用者的順應性，降低毒性，能夠在皮膚上形成藥物儲庫，使藥物持續釋放，延長藥物作用時間。
文檔編號A61K31/7048GK102600079SQ20121007185
公開日2012年7月25日 申請日期2012年3月19日 優先權日2012年3月19日
發明者姜丹, 孟慶繁, 尹秀菊, 權宇彤, 湯海峰, 滕利榮, 王貞佐, 趙敏, 逯家輝 申請人:吉林大學