發酵的麥芽在飼養和獸醫實踐中的用途的製作方法
2023-06-24 16:17:01
專利名稱：發酵的麥芽在飼養和獸醫實踐中的用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及發酵的麥芽提取物的新用途，特別涉及用於飼養和獸醫目的。本發明的主題還包括含有發酵的麥芽提取物的飼料、營養物和預混合料。
所述發酵的麥芽提取物(下文稱之為VET-HBM)及其生產披露於WO 98/08694中，該文獻披露了它的免疫刺激和轉移抑制作用(上述文獻被收作本文參考)。上面所提到的材料，是通過用釀酒酵母發酵麥芽，然後通過乾燥過濾的發酵液生產的。所獲得的物質以它的2，6-二甲氧基-p-苯醌含量為特徵，該含量大約為0.4mg/g乾物質。
令人吃驚的是，在我們的研究過程中，我們業已發現了VET-HBM能夠出色地應用於畜牧業和動物飼養。VET-HBM提供了體重的更快速的增加，並且提高了動物對疾病的抵抗力，尤其是對各種感染性疾病的抵抗力。它特別適用於在大規模生產條件下提高飼養動物的肉的產量，並且改善肉的質量，尤其是適合飼養家禽和豬，與此同時，它提供了飼料的更好的利用(更好的飼料轉化率)。
豬和家禽的經濟上的大規模生產，是決定畜牧業的收益的因素中的重要因素。減少飼料的數量非常重要，因為飼料的價格較高。在最近幾十年中，業已在生產的肉類和蛋類的數量和質量指標方面取得了良好結果，上述結果是藉助於專業性複合飼料以及藉助於使用適當選擇的補充物實現的。不過，證實了可以毫無顧慮地添加有效的飼料成分，特別是飼料添加劑(不用擔心毒性，抗性)。就是說，證實了它們的效率在經過一定長度的時間之後會減弱，並且從環保以及公眾健康角度出發，它們可能會受到反對。因此，本發明的目的是尋找與身體相同的和天然的材料，可將這種材料有效應用於飼養和培育動物。這一目的滿足了歐盟反對將抗生素和體外材料用於增產劑領域的要求。
在我們的研究過程中，我們嘗試了將上述天然型VET-HBM製劑用於肉仔雞，鵝和火雞的大規模生產場合，以及在斷奶之後的培育之前和增肥過程中用於豬。在我們的實驗過程中，證實了具有VET-HBM的起始，培育和最終營養物的完成對肉仔雞，鵝，火雞和豬的發育具有有利作用，因為它改善了體重的增加和特殊的飼料利用，增強了抵抗力，同時減少了環境汙染。另外，我們發現卵的存活力以及孵化率在雞群中提高了。另外，我們還發現通常與火雞育增肥過程中的快速生長相伴隨的主動脈裂隙實際上可以消除；這一實現是特別有利的。
另外，我們業已研究了VET-HBM對通常在家禽養殖場出現的感染的作用，並且吃驚地發現，VET-HBM能夠保護動物免受由枝原體屬微生物導致的感染，特別是由雞敗血枝原體和關節液枝原體導致的感染，並且抗由柔嫩艾美蟲導致的球蟲病，而且能夠提高對在家禽中發生的其他感染的抵抗力(例如，傳染性粘液囊病)。
雞敗血枝原體和關節液枝原體對家禽的汙染仍然對養禽業造成重大的經濟損失，這種感染的後果是，體重的增加和產蛋量降低，死亡率增加，孵化率降低，在屠宰場中的沒收增加等。在呼吸道中導致的上皮損傷，支持了繼發細菌感染，因此進一步加大了損失。
為了降低經濟損失，提出了使用不同的抗生素(例如，tilozine，thiamuline，諾氟沙星，英氟沙星等)。不過，在近幾年中，不同國家的權威機構希望減少抗生素的使用(例如，包括tilozine在內的某些抗生素被禁止用作增產劑)，並且，它們堅持阻止將所述抗生素用於人類用途。由於這種原因，我們業已研究了VET-HBM的效果，它們在以前的飼養實驗中提供了非常好的結果，能夠抗普遍發生的枝原體感染。
令人吃驚的是，我們業已發現，與施用tiamutine類似，施用VET-HBM能阻止枝原體感染的影響，tiamutine是最知名的抗枝原體抗生素。由於枝原體感染在世界上所有地方的發病率都相當高，這一事實具有重要的經濟價值。通過使用VET-HBM能夠減少由枝原體感染導致的經濟損失。當所述抗生素的使用是為了阻止獸醫實踐和增產時是使用VET-HBM特別優選的。
另外，我們業已用豬肺炎枝原體對豬進行了研究，豬肺炎枝原體存在於普通的豬群體中，並且會導致非常重大的經濟損失；令人吃驚的是，我們業已發現了VET-HBM能夠保護豬免受由豬肺炎枝原體導致的肺炎。
另外，我們業已研究了VET-HBM對由柔嫩艾美蟲導致的另一種寄生蟲病-球蟲病的作用，這種病是在家禽中廣泛傳播的寄生蟲病。在最近幾十年中，在世界上所有地方球蟲病病例的數量都增加了，因為大規模的培育方式以最高程度加大了球蟲感染的機率。極有可能的是，有7個艾美蟲屬株在球蟲病的形成中發揮作用，其中，存在致病株和致病性較弱的株。在導致出血性腸炎和死亡的株中，柔嫩艾美蟲會導致闌尾球蟲病，它具有重要的作用。因此，我們的研究是用純的柔嫩艾美蟲株感染雞進行的。
令人吃驚的是，我們業已發現，與對照相比，獲得了VET-HBM補充的人工感染的雞的卵囊促排便(oocyst defecation)顯著減弱；這意味著破壞了中間體形式，並且在闌尾中造成重大破壞的柔嫩艾美蟲不能夠發育。因此，VET-HBM能夠保護雞免受由柔嫩艾美蟲導致的嚴重疾病。
除了上述研究之外，我們研究了VET-HBM對針對傳染性粘液囊病進行接種的雞的抗體水平的改變(通過CEVAC-疫苗)。我們業已發現，將VET-HBM用在飼料中，能顯著增加雞的抗體生產，同時能提高抗體水平，在雞培育期間增強CEVAC疫苗的作用，為所述動物提供更高程度的保護。
另外，我們業已發現，使用VET-HBM能顯著降低由應激作用導致的經濟損失(例如，熱和運輸應激)。
根據上述發現，本發明涉及發酵的麥芽提取物作為飼料補充物用於生產動物的飼料、營養物或預混合料的用途。本發明所使用的術語「動物」首先表示所有飼養的動物，如牛，馬，豬，家禽，兔，養殖的魚類；寵物，如狗，貓和其他家養動物；以及動物園動物。本發明的飼料補充物可以被用作飼養動物的增產劑，所述飼養動物優選家禽，如肉仔雞，母雞，烤鵝，羽毛鵝，肝鵝，烤鴨，火雞，以及豬和豬崽。
根據另一方面，本發明涉及飼料、營養物和預混合料，除了已知的飼料，營養物和預混合料成分之外，它含有發酵的麥芽提取物。本發明的飼料和營養物含有的麥芽提取物的量為大約0.001-10重量％，優選0.01-5.0重量％，最優選0.3-1.0重量％。本發明的飼料和營養物預混合料可以含有用量為大約0.001-50重量％的麥芽提取物。本發明的製劑能夠以如下方式製備將通過本身已知的方法發酵的麥芽提取物與上述量的固體的、可鍛的賦形劑混合，對於預混合料來說，分別與常用維生素和微量成分以及飼料混合。
本發明的VET-HBM補充物是分別與起始、培育和最終飼料或營養物混合使用的，在培育的部分或整個過程中使用。VET-HBM還可以施用在動物的飲用水中。
根據另一方面，本發明涉及用於提高飼養動物產量的方法。根據這種方法，在所述動物的飼料中添加發酵的麥芽提取物作為增產劑，並且用這種飼料飼養所述動物。上述增產劑的使用量為0.1-6g/飼料kg，優選0.3-3g/飼料kg。
根據另一方面，本發明涉及發酵的麥芽提取物在動物中預防和/或減少枝原體感染，感染性炎症和家禽的球蟲病感染，並且提高接種過的家禽的抗體效價的用途。可以將所述發酵的麥芽提取物有利地用於預防雞敗血枝原體或關節液枝原體感染，預防和/或減弱家禽的球蟲病感染，以及用於預防由豬肺炎枝原體對豬導致的肺炎。本發明涉及發酵的麥芽提取物在製備用於上述目的製劑中的用途。
本發明的含有發酵的麥芽提取物的獸醫製劑可以按照常規方法製備，在所述製備過程中，所述活性成分與一種或多種獸醫學上可接受的輔助材料混合，製成提高動物抵抗力的製劑，製成預防和/或治療枝原體感染和感染性炎症的製劑，製成預防和/或治療家禽球蟲病感染的製劑，以及製成能提高接種過的家禽的抗體效價值的製劑。
使用通常應用於獸醫實踐中的輔助材料的所述製劑可以製成片劑，丸劑，膠囊，凝膠或糊劑。所述輔助材料包括明膠，天然糖類如row sugar，乳糖，麥芽糖和葡萄糖，卵磷脂，果膠，環糊精，葡聚糖，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙酸乙烯酯，合歡膠，蒼耳烷膠，黃芪膠，瓊脂-瓊脂，藻酸，羧甲基纖維素，羧甲基纖維素鈉，羥丙基羧纖維素，羥丙基甲基纖維素或類似的纖維素衍生物，乳化劑，油，脂肪，特別是由飽和脂肪酸衍生的甘油酯或聚甘油酯。
所述製劑中的成分的用量可以改變，並且它取決於各種因素，如接受治療的動物的個體需要。所施用的劑量尤其取決於要治療的動物的大小，以及要預防或治療的疾病的類型。每日的劑量可以單劑施用或分成供一天施用的多劑。
在下面的實施例中將對本發明作進一步說明，不過，這些實施例不被理解為限定性的。
實施例在下面的實施例中使用的VET-HBM，是按照以下方法製備的，該方法大體上相當於WO 99/08694的實施例2的方法。
將300kg麥芽研磨成麵粉質地(根據匈牙利的標準)，並且將100kg的酵母(釀酒酵母)放入5m3的發酵罐中，並且加入飲用水，直到體積為4000l。發酵時間為18小時，在此期間，連續通氣(0.5l空氣/l發酵的液體/分鐘)並且緩慢攪拌(30轉/分鐘)。為了抑制起泡沫，向該混合物中添加1l/m3的向日葵油。在發酵之後，停止通氣和攪拌，並且首先在螺旋傾析器中分離發酵的液體，然後在分離器中分離，最後在磨製分離器中分離。
級份1的製備。
對發酵液進行積聚過濾，並且通過顯微鏡檢查銳度。過濾的發酵液實際上不含有細胞，這意味著在每10個觀察點中最多出現1個酵母細胞。所得到的發酵液含有數量百分比為大約1.5重量％的乾材料，在真空冷凝器中，在40-50℃下對該發酵液進行蒸發，並且在取消真空之後，在大氣壓下蒸煮大約15分鐘。此後測定該溶液的乾材料含量，並且首先將麥芽糖糊精溶解在熱水中，然後冷卻，再將它添加到所述溶液中，使該溶液的乾物質含量為大約30重量％。此後，在剪切噴嘴旋轉乾燥器中對該溶液進行噴霧乾燥，其中，輸出空氣的溫度為大約90℃。所得到的粉末形式的最終產物含有60重量％的本發明的發酵的植物材料，和40重量％的麥芽糖糊精。通過HPLC測定的二甲氧基-p-苯醌含量為0.15mg/g乾材料±20％。
級份2的製備。
在螺旋傾析器上分離的具有25-27重量％的乾材料的生物物質以1∶1的比例在精細研磨的薄片狀玉米載體上在流化乾燥設備中乾燥，並且通過造粒將它的顆粒大小調整到0.2-0.8mm。
最終產品的製備在Lodge系統的勻漿器中混合級份1和級份2，並且仔細地勻化。用這種方法獲得的2，6-二甲氧基-p-苯醌含量為0.11mg/g乾材料±20％。
實施例1將32600隻1日齡的肉仔雞(Shaver Starbo)用於飼養實驗，將這些雞分成三個組。對照組″K″由16300隻肉仔雞組成，兩個實驗實驗組(″I″和″II″)由8150-8150隻肉仔雞組成。所述飼料的內部含量相當於當時培育階段的規定的必須值。將VET-HBM標準化製劑與實驗組″I″和″II″的動物的起始，培育和最終營養物以3g/飼料kg的用量混合。
對照″K″組和實驗″II″組的動物，在3-5天時間內在飲用水中添加英氟沙星[Avian Pathol.19，511-522(1990)]，以便預防細菌感染。實驗組″I″的動物不接受英氟沙星，並且不採用任何其他雞培育中常用的醫學治療。為了預防傳染性粘液囊病，將CEVAC疫苗(Phylaxia，Budapest，Hungary)與所述動物的飲用水混合，所有三個組都使用這種疫苗。
供料系統是自動控制的，並且與兩個能容納10-10噸飼料的槽連接。飼料的改變是逐步進行的。雞窩是分布成6cm厚度的大約120m3的幹松木屑，相當於每一次更換雞窩時大約100噸肥料。通風是通過44臺裝有調速器的通風機解決的；通風機的容量分別為10000m3/小時。
結果1.通過數字和百分比評估死亡在所述肉仔雞飼養實驗中，孵化不足以及異常炎熱的夏季溫度(熱休克)導致比通常情況(5.3％)更高的死亡率。在所述實驗中，對照組的死亡率為5.57％(913)，在實驗組″I″中的死亡率為4.9％(400)，在實驗組″II″中死亡率為4.04％(330)。
因此，根據所述死亡率可以發現，在預防熱休克方面，VET-HBM能夠對所述動物提供顯著的幫助。
2.通過百分比評估每周的體重增加在所述飼養過程中，與對照相比，在通過VET-HBM輔助材料獲得的實驗動物的每一種情況下，分配到每一個培育周中的體重增加都較大。在下面的表1中示出了每周的重量測定結果和每周相對對照的實施例4本實施例報告了對口味的一個比較試驗，評價了兩個配方。第一個是實施例2的配方，其中檸檬酸鋅以複合的不可溶小球形式存在。比較試驗用與實施例2同樣的配方，區別是相同量的檸檬酸鋅在配方中是可溶的而非不可溶小球。
滋味品嘗小組由13個人組成。他們在刷牙後，根據一系列影響感官的品質對檸檬酸鋅小球牙膏和非小球可溶形式牙膏進行鑑定評級。評定分1至5五個等級，其中1＝差的，5＝極好的。在用兩組產品刷牙之後，品嘗小組選擇他們的偏愛。下面的表3列出了滋味試驗的結果。除了「偏愛」一行以外，第二列和第三列的值都是平均值。「偏愛」一行有9個人選擇了小球產品，3個人選擇了對照產品(可溶性檸檬酸鋅)，1人沒有選擇。
表III滋味試驗
試驗表明小球形式的檸檬酸鋅在測試的七種口味類別中有六個得到偏愛。只有泡沫在對照配方中佔優。整體偏愛上小球形式的檸檬酸鋅比溶解形式的高出一大截。
實施例5檸檬酸鋅小球在一個Chilsonator中製備。該設備靠兩個相對旋表2在大規模培育肉仔雞過程中VET-HBM的作用
另外，產出肉仔雞的最終期限縮短了1周時間，並且屠宰實驗證實了瘦肉量，特別是雞胸肉和雞腿肉量增加。
應當強調的是，在實驗組″I″中取消了在常規培育技術中一直採用的藥物治療，並且所述動物只接受VET-HBM。儘管存在這一事實，所述肉仔雞被證實了與接受常規培育技術和補充的VET-HBM的實驗組″II″的成員具有相同的抗性。
糞便的稠度發生了改變，腹瀉病例的數量減少，並且同窩動物的一致性改善了，因為排出了較硬的糞便。從環保角度來看，它具有重大作用，因為必須改變大量的雞窩，而不是更罕見地改變雞窩，這一事實導致了材料和人力的節省。
在以0.3g/飼料kg的用量使用VET-HBM時，我們獲得了類似的結果。
實施例2在大規模生產場合下的豬圈中，將三組35日齡的斷奶的肉豬崽用於實驗，所有組中都是50-50。在大約60天的飼養預實驗過程中，將3g VET-HBM與1千克動物飼料混合。對照組的動物用直到本生產之前一直是用常規的飼料飼養。不過，兩組實驗動物從35日齡開始一直到92日齡都食用含有VET-HBM輔助材料的飼料。
在斷奶時，將所述動物的同窩崽分成兩組，其中的第一組是對照組″A″，而第二組是實驗動物的″B″組和″C″組，因此，消除了遺傳學因素。在本實驗中，所有三組動物都具有混合的性別。在飼養過程中，採用了生產中常用的培育，飼養和飲水技術。從35日齡開始直到95日齡，所述豬崽食用Starter豬崽營養物。所述飼料的配料是通過BigDutchman MC44-V03系統的供料裝置完成的。每天的飼料消耗是通過LCD SCAN型的供料計算機記錄的。在所述實驗過程中，記錄了對照和實驗組的以下數據-動物的起始數量和最終數量，-在實驗開始時動物的體重，-每一組所消耗的飼料，-動物的衛生和臨床狀態的變化，以及偶然發生的疾病和死亡的原因，-結束時的平均個體體重，以及總體重(分別稱重，活體重量)。
結果如表3所示。
表3VET-HBM對飼養豬崽的影響
從表3中可以看出，用VET-HBM補充豬崽的飼料，降低了死亡水平。對於35-92日齡的豬崽來說，添加了VET-HBM的飼料，能影響所述動物的體重增加，即「B」組的豬崽的體重超過了對照動物5.4％(31.10kg)，而″C″組的豬崽的體重超過對照動物9.43％(32.26kg)。
飼料轉化率(飼料的單位利用率)比沒有得到補充物的對照動物(″A″)低，即「B」組的動物比對照動物低5.67％，「C」組的動物比對照動物低9.91％。
糞便的稠度改變了，在實驗組的所有豬崽中都沒有發生腹瀉。同窩崽的一致性一直好於對照組的動物，因為排洩了堅硬的糞便。
實施例3根據上述有利的結果，VET-HBM的施用一直持續到增肥過程結束。從第95天開始，所述豬在增肥過程中食用增肥營養物，直到屠宰當天(在172天期間)。在這種情況下，所述飼料同樣含有3g VET-HBM。結果如表4所示。
從表4中可以看出，直到增肥過程結束都沒有出現死亡。所述豬的最終體重高於對照的體重(108kg)，即「B」組比對照高1.8％(110kg)，「C」組比對照高5.5％(114kg)。
與對照組動物比，實驗組動物的飼料轉化率(飼料的單位利用率)較低，即分別低10.9和15.2％。糞便的稠度發生了改變，在實驗動物中沒有發生腹瀉。不過，對於對照動物來說，存在發生腹瀉的豬。
表4VET-HBM對培育增肥豬的影響
實施例4在大規模生產烤鵝的情況下進行了飼養實驗，並且研究了VET-HBM的作用。將250-250隻一級的剛孵化出來的混合性別的幼鵝用於實驗，其中的一個組構成了實驗組，而另一個組構成了對照組。所述飼料的內部含量參數相當於當前培育期所規定的必須值。在實驗組中，將VET-HBM輔助材料以0.3g/飼料kg與所述動物的起始、培育和增肥營養物混合。
所述動物的圈舍相當於鵝飼養的當前規定(禽類的數量8隻/m2)。從圈養後第3天開始直到第14天，將室溫從32℃逐漸降低到20-22℃。在預培育過程中，用人工光照補充天然光照。在預飼養過程中(4周)，動物對水的攝取是通過尖形飲水裝置完成的，然後通過管狀飲水裝置隨意飲水。
在所述實驗過程中，在這兩組中紀錄了以下參數-動物的起始數量和最終數量，-臨床狀態，-死亡損失，同樣表明了死亡的原因，在28-55日齡時的個體體重，以及-在28-55天期間的飼料轉化率。
結果如表5所示。
從所獲得的結果中可以看出，在鵝飼養過程中，補充了發酵的麥芽提取物的營養物能夠非常有效的利用。
表5.在烤鵝培育過程中VET-HBM的作用
與對照動物相比，實驗動物的臨床狀態沒有表現出任何偏差。與對照組的4.8％的值相比，在持續了8周時間的預培育階段實驗組的死亡率降低到3.6％。與對照組相比，實驗組表現出體重的顯著增加。直到第28天，實驗組的體重增加一直比對照組高6.7％，而在第55天，實驗組烤鵝的體重超過對照組動物的體重4.7％。
實驗組的飼料利用顯著改善。與對照組相比，實驗組的飼料轉化率(單位利用率)更好，即在前28比對照組低5.9％，而直到生命的第55天比對照組低9.35％。
實施例5在大規模生產條件下對肉仔火雞進行飼養實驗，並且研究了餵食補加VET-HBM的飼料的作用。
所述實驗是用分成四組的1日齡的幼火雞進行的。在對照組中包括9300隻母火雞(A)和8700隻公火雞(C)，而在實驗組中包括9600隻母火雞(C)和9100隻公火雞(D)，並且達到了肉用類型(BIG-6)。在B和D組的動物的飼料中，每千克飼料添加0,3g VET-HBM。
該實驗是在大型火雞養殖場進行的，其中，將被稱為BIG-6(Gigant)(起源地Nádudvar，Hungary)的1日齡的肉用雜交火雞引入上述組。所有四組的飼養密度相同(4隻動物/m2)。在採用厚墊培育技術的建造結構中，室溫，通風和溼度，是按照技術規定確保與當前年齡相當的。所述肉仔火雞的飼料分別是常用於火雞培育和增肥的起始、培育和最終火雞營養物[並且它們是根據匈牙利飼料代碼的規定(1990)配製的]；在實驗組B和D中，在每千克飼料中補加0.3g VET-HBM。
所述動物接受起始營養物，直到它們的生命的第56天，從它們的生命的第57天到112天食用培育營養物，並且從它們的生命的第113天直到增肥結束食用最終營養物。為了預防和治療細菌感染，在所有四個組中都採用了常用於火雞增肥的Lincospectin。
在該實驗過程中，在對照組和實驗組紀錄了以下數據-最初的和最終的動物數量，-死亡損失，還標明了死亡原因，-在實驗開始時的體重和在實驗結束時的體重，
-健康，臨床狀態發生的變化，-在培育過程中的技術錯誤，以及-飼料利用數據。
所獲得的結果如表6所示。
表6.在火雞增肥過程中VET-HBM的作用
與對照動物相比，實驗動物的臨床狀態沒有表現出任何異常。對照組的動物有更多的動物死亡，分別為2.28％和1.58％。
在實驗結束時，兩個實驗組的體重增加更多，即B組比對照組多增加12.32％，C組比對照組多增加9.68％。
兩個實驗組的飼料轉化率同樣更好；與對照組相比，B組和D組的飼料轉化率分別比對照組低6.12％和5.87％。
應當強調的是，作為一種顯著優點，在火雞增肥過程中主動脈裂隙和因為這種裂隙而死亡，通常是由於快速生長而發生的，這一事實因為使用VET-HBM而不再存在。
實施例6.對雞敗血枝原體作用的研究所述研究是用沒有關節液枝原體感染的肉用型Arbor Acress雞進行的。所述動物沒有關節液枝原體，是藉助於雞敗血枝原體和關節液枝原體抗原(Intervet International B.V.m.；Boxmeer，The Netherlands)通過系統血清學篩選檢查證實的。另外，通過ELISA-測驗檢驗所述動物，該測驗基於單克隆抗體，並且使用了MYGA檢測試劑盒(Diagnosztikum Kft；Budapest，Hungary)和MYSA試劑盒(Svanova，Uppsala，Sweden)[Czifra，Gy.等Avian Dis.37，680-688(1993)]。所述血清學檢查得到了陰性結果。另外，通過產生所述實驗動物的相同的孵化，嘗試了從20隻1日齡小雞的鼻腔，氣管和氣囊中分離枝原體，使用了培養基B[Erno H.，和Stipkovits，L.Acta Vet.Scand.14，436-449(1973)]和Frey′s培養基[Frey，M.C.等Am.J.Vet.Res.29，2164-2171(1968)]。該培養同樣得到了陰性結果。
將120隻動物用於所述實驗，將這些動物以相同的數量(30-30隻動物)分成4組，使4組的平均體重在斯氏t檢驗中彼此沒有偏差。
為了感染實驗動物，採用了雞敗血枝原體№1226，所述細菌事先在培養基B中擴增了24小時。細菌的含量為9.5×108pfu/ml(pfu＝噬斑形成單位)。
按以下方法處理和感染實驗組將第1組放入200升的盒子中，該盒子與外界隔絕，向其中噴灑10ml無菌培養基B，然後將所述動物放在該盒子中20分鐘時間。然後，將該組放入獨立的房間，並且不對這些動物進行任何處理。這一組被視為陰性對照。
將第2組放入相同的盒子中，在該盒子中噴灑10ml雞敗血枝原體培養液，然後將所述動物放在該盒子中20分鐘時間，然後將該組放入獨立房間中，並且不對這些動物作任何處理；該組被視為對照組，用於監測感染。
以與第2組相同的方式感染第3組，然後在放入第三個房間之後，在實驗過程中給這些動物餵食含有濃度為3g/kg的VET-HBM的雞培育營養物。
以與第2組相同的方式感染第4組，在放入第四個房間之後，在實驗過程中給這些動物食用含有200mg/kg tiamutine(BiochemieGmbH，Kundl，Austria)的營養物。
為了判斷所述治療的效果，研究了以下參數臨床症狀，體重改變，飼料轉化率；除了它們的病理學、組織學和血清學檢查之外，還進行了枝原體再分離。在它們的評估過程中，獲得了以下結果。
結果1.臨床檢查每天研究臨床症狀和可能的死亡。在處理過的動物(第3組和第4組)中沒有任何臨床症狀，而在感染的、未處理過的組中，從第6天開始出現了呼吸道症狀，另外，在第7和第9天還出現了1-1死亡。
2.體重增加與對照組、未處理過的組以及兩個處理組，感染的未處理過的組的體重增加在統計學上明顯更低。與此同時，在兩個處理組中，體重增加與對照組程度相同。
3.飼料轉化率在感染的未處理過的組中飼料轉化率提高了0.45kg/kg，而在處理組和對照組中保持相同水平。
4.病理學檢查在該實驗結束時，對所有動物進行病理學解剖檢查，檢查雞敗血枝原體感染所特有的氣囊和腹膜炎症特徵。
在第1組中，所有動物都是陰性的，而在第2組中所有動物都表現出不同嚴重程度的氣囊和腹膜感染。在處理過的第3組和第4組中，顯著發生的病理學改變更少出現，並且它們的嚴重程度與第2組的動物相比明顯更輕。分別用VET-HBM和tiamutine處理過的組的結果彼此沒有差別。
5.組織學檢查在第2組中，由於感染，與未感染的第1組相比，淋巴細胞組織細胞支氣管炎和小葉性間質性肺炎的數量顯著增加。與此同時，分別用VET-HBM和tiamutine處理的第3組和第4組的參數保持與第1組相同的水平，小葉性間質性肺炎例外，在第3組中它的數量明顯高於對照組。在檢查的有關改變方面，第3組和第4組彼此沒有統計學的差別。
6.血清學檢查在雞敗血枝原體凝集實驗中在載玻片上研究了所有雞的血漿。對反應的嚴重性進行評分，並且通過卡方檢驗比較了得分的總和。到實驗結束時第1組保持為陰性。在處理過的第3組和第4組中，顯著更少的動物表現出血清學反應(分別為6和8，而第1組為25)。與未處理過的第2組相比(得分75)，它們的得分明顯更低(分別為6和11)。
7.枝原體再分離傳染性枝原體屬菌株的再分離是通過以下方式進行的。在感染1小時之後，將5-5隻動物處死。將一段1-1cm長的氣管放入2ml的液體培養基B中，並且在搖晃3分鐘之後，在所述培養基中進行振蕩細菌計數。在該實驗結束時，用於感染的菌株的再分離是從所有雞的呼吸器官(氣管，肺，氣囊)和其他器官(腦，肝臟，脾，腎，心臟)中分離的，通過棉球將從上述器官中取出的樣品放入固體培養基B中。將所述瓊脂斜面培養10天，然後對它們進行評估。使用特異性免疫血清，用epifluorescent方法對一部分分離物進行鑑定。
一旦感染之後，就不再能從第1組動物的氣管中成功地分離枝原體。與此同時，可以在來自第2組感染動物的氣管中表現出1×102-2.7×103pfu/ml的雞敗血枝原體。
在該實驗結束時，不可能再培養用於感染第1組的菌株，而在第2組中，可以在64種場合下(首先來自氣管，肺和氣囊)對它們進行再培養。另一方面，第3組和第4組的再分離明顯更少成功(分別為10和3次)，並且僅來自某些肺和氣管，而不能來自其他內部器官。在分別用VET-HBM和tiamutine處理的組中觀察不到顯著差別。
實施例7.檢驗抗柔嫩艾美蟲的作用將48隻1日齡的雞用於該實驗，將這些雞分成四組(每組12-12隻)。將這些雞分組圈養在籠子中；在實驗過程中室溫為28℃。在培育過程中，所述動物食用通常的起始營養物，並且自由地飲用水，直到達到14日齡(第1組和第2組)。第3組和第4組的營養物在每千克飼料中補充0.3g VET-HBM。
通過含有2×103柔嫩艾美蟲形成孢子的卵囊的懸浮液口服感染第2組和第4組的動物。
表1每周測定的雞體重的結果
3.增肥形成指標的評估從下面的表2中可以看出，在實驗結束時，獲得了VET-HBM輔助材料的動物的體重增加超過了對照組的增加值，在″I″組比對照多2.45％，在″II″組比對照多5.22％。
相反，實驗組的飼料單位利用率(飼料轉化率)比沒有獲得輔助材料的″K″組的對照動物低。實驗組″I″比對照組低大約12％(1.85kg/kg)，實驗組″II″比對照組低大約(1.84kg/kg)。
實施例8.測定接種過的雞的抗體水平將7-7隻1日齡的Ross-308型小雞(供應來源Bábolna，Hungary)分組用於本實驗，曾經用傳染性粘液囊病疫苗(CEVAC疫苗，購自Phylaxia，Budapest，Hungary)對處於卵中的這些小雞進行過處理。在半數雞群的基礎營養物中添加了用量為0.3g/飼料kg的VET-HBM。所述動物能自由地食用飼料和飲用水。分別在第1天和每周從對照和處理雞逐漸取血。分別收集它們的血液，並且通過離心分離血清，然後在-18℃的溫度下保存，直到進行處理。
通過ELISA試驗測定抗體的數量。在該試驗過程中，通常將抗原吸附在具有96個孔的聚苯乙烯板的壁上。要研究的血清的特異性抗體與所述抗原結合，而未結合的抗體通過洗滌而被除去，然後用這種物種特異性抗球蛋白血清補充所述系統，所述球蛋白業已與辣根過氧物酶或其他酶綴合。所述抗球蛋白-綴合物分子不能進入所述反應，可以通過洗滌將它們除去。通過添加所述酶的底物，可以通過顏色反應的形式觀察所述抗原-抗體-抗球蛋白綴合物「夾心結構」。在該實驗中，將檢測傳染性粘液囊炎抗體(ProfFLOKOIBDELISA試劑盒，由Kirkegaard Perry Laboratories，Guilford，UK生產；產品目錄號54-81-01)的試劑盒用於測定。
所述測定是按照在上文所披露的方法進行的。在該測定中，將50-50μl血清添加到用抗原敏化的平板的孔中。將陽性和陰性對照血清放入ELISA平板的前部(-1，+2，-3)和後部(-94，+95，-96)的孔中。在室溫下將具有血清的平板溫育30分鐘，然後用洗滌溶液(300μl)洗滌所述平板，讓所述溶液在孔中保持3分鐘時間，然後將其倒出。在2分鐘之後重複上述洗滌步驟。然後將100μl來自所述試劑盒的綴合物逐孔添加到所述樣品中，然後在室溫下溫育30分鐘，最後按照上述方法將它們洗滌2次。然後，將100μl底物添加到該系統中，並且，在室溫下將它們溫育15分鐘。用100μl終止溶液阻斷所述反應。在ELISA讀數裝置上，在405-410nm的波長下讀出形成的藍綠色的顏色。根據所獲得的吸光度數據計算抗體效價，每周分別對它們進行評估。
根據所述測定值可以確定，所述動物在第1天的血液的血清的效價值與對照組的正常值相同(平均為13.5)。與對照組的值相比，在第1周採集的血清樣品的效價值有所提高(平均值為17.4)。在第2周，這種增長與對照組相比進一步提高(平均為21.2)。在第3周，與對照組相比觀察到了在VET-HBM處理的作用下出現的效價值的顯著提升(平均為30.3)。在第4周，處理組的效價值與對照相比增加3倍(平均為42.1)。到第5周，所述效價值比對照組的高4倍(平均為55.6)。到第6周，所述效價值幾乎比在第6周測定的對照組的效價值高5倍(平均為69.4)。
根據統計學評估，證實了所獲得的值是顯著的(p＜0.001)，並且與對照相比表現出急劇上升。
權利要求
1.將發酵的麥芽提取物作為飼料補充物用於生產飼料，營養物或預混合料的用途。
2.飼料或營養物，除了常用的飼料成分和營養物成分之外，還包括含量為0.001-10重量％的發酵的麥芽提取物。
3.飼料或營養物預混合料，除了常用的預混合料成分之外，還包括含量為0.001-50重量％的發酵的麥芽提取物。
4.如權利要求2或3的飼料、營養物或預混合料，它包括麥芽提取物，該麥芽提取物來自於在釀酒酵母存在下在含水培養基中發酵麥芽的過程中所獲得的發酵培養液。
5.用於提高飼養動物的產量的方法，其特徵在於，在所述動物的飼料中提供發酵的麥芽提取物作為增產劑，並且用按這種方法獲得的飼料飼養所述動物。
6.如權利要求5的方法，其特徵在於上述增產劑的使用量為0.1-6g/kg飼料，優選0.3-3g/kg飼料。
7.如權利要求5或6的方法，其中，所述飼養動物是牛，馬，兔，豬崽，增肥豬，肉仔雞，下蛋母雞，火雞，鵝或鴨。
8.發酵的麥芽提取物在提高飼養動物產量中的用途。
9.發酵的麥芽提取物在製備用於預防和/或治療動物的枝原體感染的製劑中的用途。
10.發酵的麥芽提取物在製備用於預防和/或治療動物的感染性炎症，特別是由豬肺炎枝原體導致的肺炎的製劑中的用途。
11.發酵的麥芽提取物在製備用於預防和/或治療家禽的球蟲病感染的製劑中的用途。
12.發酵的麥芽提取物在提高接種過的家禽的抗體效價中用途。
13.發酵的麥芽提取物在預防和/或減少家禽的雞敗血枝原體或關節液枝原體感染和/或球蟲病感染中的用途。
14.發酵的麥芽提取物在預防由豬肺炎枝原體導致的肺炎中的用途。
15.如權利要求8或權利要求11-13的用途，其中，所述麥芽提取物是以0.1-6g/飼料kg的量混入常用飼料中使用的。
全文摘要
本發明涉及發酵的麥芽提取物的新用途，即用於動物飼養和獸醫治療。本發明的主題還涉及含有發酵的麥芽提取物的飼料、營養物、預混合料和獸醫製劑。
文檔編號A23K1/18GK1649508SQ02829451
公開日2005年8月3日 申請日期2002年8月13日 優先權日2002年8月13日
發明者梅特·希德弗吉, 阿科斯·雷瑟塔 申請人:梅特·希德弗吉, 阿科斯·雷瑟塔