中和等滲細菌病毒漱口採樣液的製作方法
2023-06-24 01:55:56
專利名稱：中和等滲細菌病毒漱口採樣液的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種中和等滲細菌病毒漱口採樣液；特別是一種用於手足口病和呼吸道致病菌、病毒中和等滲漱口採樣液的配方及製備方法。手足口病又名發疹性 水泡性口腔炎，是我國近年出現的一種兒童傳染病，由多種腸道病毒感染引起，以手足、臀 部和口腔前部為好發部位的出疹性疾病，可發生於四季，夏秋季易流行，本病系病毒感染性 疾病，經抗病毒及對症治療後預後良好，很少有併發症。但是重症患者可合併心肌炎及腦膜 炎危及生命。據報告，1998年臺灣發生手足口病的總病例數達到了 12. 9萬，其中重症405 例，死亡78例；危重病例中91%年齡<5歲，70%合併病毒性腦炎。對本病的採樣檢查多採 用咽拭子HANKS液，其優點是作為維持液，能夠很好保存小核糖核酸病毒科的腸道病毒(例 如柯薩奇病毒(Coxsackie virus) A組的4、5、7、9、10、16型，柯薩奇病毒B組的2、5型；部 分埃可病毒(ECHO-viruses)和腸道病毒71型)。提高實驗室病毒分離的陽性率。為衛生 部手足口病採樣規範中推薦的第一採樣保存液。其缺點是配方較複雜，成本高；採用咽拭子 採樣時，容易引起幼兒嘔吐反射，不適感等。如作為漱口液，會被幼兒吞咽下，引起不良反應 (含有鎂離子、酚紅成分)，幼兒家長對此方法不好接受。而目前市面上商品化供應的細胞 的生長液(GM)、細胞的維持液(MM)及Eagle— s液(MEM)，均含有抗生素P. S溶液(青黴素 及鏈黴素)，對過敏性的手足口病患兒有一定性的危害。另外手足口病患兒，在有明顯的臨 床症狀後，大部分應用了抗生素治療，採樣殘餘的抗生素對實驗室診斷有一定的影響。採用 咽拭子採樣是檢查手足口病病毒最可靠的方法。用於在實驗室做細胞培養進行分離，因此， 多年來細胞培養一直做為手足口病檢測的「金標準」，細胞培養對設備、技術、標本採集和運 送等的要求都非常高，從口腔採集的柱狀細胞，不宜混有多核細胞及粘液膿性分泌物，不宜 含有過多的雜質。對採集拭子也有要求應是棉拭子而不應是木製拭子，因為木製拭了可能 抑制病毒生長。標本必須放置在特製的轉運培基中，冷凍，24小時內包埋到細胞培養盤中。 無論在費用上、設備、技術方面都要求非常高，因此，費用和時間是影響基層醫療單位手足 口病病毒診斷方法使用和推廣的最大障礙，很多研究人員在手足口病病毒的採樣方法的改 進上進行了多方面探索。本發明的中和等滲細菌病毒漱口採樣液，具有指導臨床診斷和治 療的作用，為防止濫用抗菌藥物也具有重要意義。
背景技術：
目前，細胞培養仍是診斷手足口病病毒感染最為可靠的實驗方法，習慣 上把細胞培養作為「金標準」。用細胞培養的方法來確定手足口病病毒的感染涉及5個方面 的影響因素均有一定性的副作用。本發明的目的在於提供一種中和等滲細菌病毒漱口採樣 液，與其它類採樣液相比具備下列特點1、配方簡單，易製備，基層實驗室即可製備出合格 品，也能較好保存小核糖核酸病毒科的腸道病毒(例如柯薩奇病毒(Coxsackie virus)A 組的4、5、7、9、10、16型，柯薩奇病毒B組的2、5型；部分埃可病毒(ECHO-viruses)和腸道 病毒71型)。並且在利用PCR診斷技術方面，與HANKS液具有等同保存及運送效果。在衛 生部確定的手足口病採樣規範中，規定可利用生理鹽水作為採樣保存液，現又在生理理鹽 水中加入D-葡萄糖、胎牛血清能夠為病毒提供部分營養，延長保存期，故更能較好保存小 核糖核酸病毒科的腸道病毒，達到提高實驗室病毒分離的陽性率的目的。2、在採集咽部標 本時，可用漱口的方式較輕易採集到所需部位的標本樣，不用咽拭子方式採樣，故不易引起嘔吐等不適感。當幼兒誤吞咽後，因漱口液成分為等滲的糖鹽溶液，對人體無害，很容易取 得幼兒的配合及幼兒家長的接受。胎牛血清和甘氨酸能中和採樣殘餘的抗生素與傳統試劑 比較，檢出率高，汙染小，臨床應用效果滿意。發明內容本發明的要點在於選擇合適的組分，並進行合理混配，經加溫、溶解、混 合、冷卻、分裝、高溫滅菌等工藝而成一種中和等滲細菌病毒漱口採樣液。 本發明選擇的培養基配方如下(克、ml/每IOOml蒸餾水)氯化納8. 0-0. 85 ；D-葡 萄糖0. 8-1. 2 ；胎牛血清2-5ml ；甘氨酸0. 2-0. 4 ；雙蒸水加至IOOml ；調pH至7. 2-7. 4。氯化納、D-葡萄糖是組織細胞的體液平衡必不可少的物質；胎牛血清、甘氨酸是 組織細胞的營養平衡必不可少的物質；胎牛血清使用前要滅活(56°C，30min)，以消除補體 活性。同時進行無菌試驗。優質血清應該為淡黃色，透明，無溶血，無沉澱，滅活後顏色稍深。 試驗中加入胎牛血清後，採樣液的PH可能還會變化，故亦可先加入小牛血清後調pH值。採 樣液配好後，應先抽取少許放入培養瓶內，於37°C溫箱內置24 48hr，以檢測培養液是否 有汙染。每次配液量以兩周左右為宜，一次配液不要太多，防止營養成分(主要為胺基酸) 損失，造成實驗繁瑣或者汙染。甘氨酸同時用於中和採樣殘餘的抗生素。本發明產品的製備方法是1)、將胎牛血清使用前進行滅活(56°C，30min)，以消除補體活性，同時進行無菌試 驗；2)、按比例將氯化納、D-葡萄糖、甘氨酸加熱溶解於蒸餾水中，冷卻後調 PH7. 2-7. 4，壓力蒸汽滅菌 115°C，20-30min，冷至 50°C ；3)、在無菌條件下加無菌的胎牛血清、混合均勻，無菌分裝，冷藏備用。本發明具有以下優點(1)配方簡單，易製備，基層實驗室即可製備出合格品；(2) 臨床應用效果滿意，解決了咽拭子方式採樣，易引起嘔吐等不適感的採樣困難；(3)等滲的 糖鹽溶液，對人體無害；(4)營養豐富，可防止標本中殘餘的抗生素，達到提高實驗室病毒 分離的陽性率的目的。
具體實施方式
下面結合實施例對本發明作進一步的詳細說明按照下表所列數據(克、ml/每IOOml蒸餾水)及其所述步驟進行配置配方一氯化納8. 0-0. 85 ；D-葡萄糖0. 8-1. 2 ；胎牛血清2. 0-5. Oml ；甘氨酸0. 2-0. 4 ；雙蒸 水加至 IOOml ；調 pH 至 7. 2-7. 4。配方二
氯化納8. 2-0.85; D-葡萄糖0.9-1. 2;胎牛血清3. 0-5. 0ml；甘氨酸0.3-0. 4;雙蒸水加 至 100 ml；調 pH 至 7. 2 — 7. 4。
配方三
氯化納8. 0-0. 83; D-葡萄糖0. 8-1. 0;胎牛血清2. 0-4. 0ml;甘氨酸0. 2-0. 3;雙蒸水加 至 100 ml；調 pH 至 7. 2 — 7. 4。
配方四
氯化納8.1-0.84; D-葡萄糖0.9-1.1:胎牛血清2. 5-3. 5ml;甘氨酸0. 2-0. 3;雙蒸水加 至 100 ml；調 pH 至 7. 2 —7.4。
權利要求
本發明涉及一種中和等滲細菌病毒漱口採樣液，其特徵在於具有如下配方(克、ml/每100ml蒸餾水)氯化納8.0-0.85；D-葡萄糖0.8-1.2；胎牛血清2-5ml；甘氨酸0.2-0.4；雙蒸水加至100ml；調pH至7.2-7.4。
2.—種權利要求1所述中和等滲細菌病毒漱口採樣液的製備方法，其特徵在於具有如 下的步驟1)、將胎牛血清使用前進行滅活(56°C，30min)，以消除補體活性，同時進行無菌試驗；2)、按比例將氯化納、D-葡萄糖、甘氨酸加熱溶解於蒸餾水中，冷卻後調PH7.2-7. 4，壓 力蒸汽滅菌115°C，20-30min，冷至50°C ；3)、在無菌條件下加無菌的胎牛血清、混合均勻，無菌分裝，冷藏備用。
全文摘要
本發明涉及一種中和等滲細菌病毒漱口採樣液；特別是一種用於手足口病和呼吸道致病菌、病毒中和等滲漱口採樣液的配方及製備方法。本發明具有以下優點(1)配方簡單，易製備，基層實驗室即可製備出合格品；(2)臨床應用效果滿意，解決了咽拭子方式採樣，易引起嘔吐等不適感的採樣困難；(3)等滲的糖鹽溶液，對人體無害；(4)營養豐富，可防止標本中殘餘的抗生素，達到提高實驗室病毒分離的陽性率的目的。
文檔編號C12Q1/04GK101845478SQ20091011931
公開日2010年9月29日 申請日期2009年3月24日 優先權日2009年3月24日
發明者林思夏, 王永先 申請人:王永先;林思夏