一種具有抗腫瘤功效的中藥發酵飲料及其製備方法與流程

2023-05-30 22:18:11

本發明涉及一種發酵飲料及其製備方法，尤其是一種具有抗腫瘤功效的中藥發酵飲料及其製備方法。
背景技術：
：惡性腫瘤是由於機體細胞失去正常調控,過度增殖而引起的疾病。過度增殖的細胞稱癌細胞，癌細胞常可侵犯周圍組織(浸潤，invasion),甚至可經體內循環系統和/或淋巴系統轉移到身體其他部分(癌症轉移)。癌症有許多類型，而病症的嚴重程度取決於癌細胞所在部位、惡性程度及是否發生轉移。一旦確診，常以結合手術、化療和放療的方式進行治療。如果癌症未經治療，通常最終結果將導致死亡。現階段，對於惡性腫瘤的傳統療法主要是採用放化療治療，傳統化療藥物具有多種副作用，包括免疫抑制，黏膜損傷等，直接影響病人的生存質量，因此急需尋找化療藥物的代替藥品。中醫抗腫瘤主要歸納為祛邪和扶正兩種方法，祛邪法分清熱解毒、活血祛瘀、除痰散結、以毒攻毒法；扶正法即扶正培本，扶正法依人體陰陽氣血、臟腑經絡的孰盛孰衰而有的放矢，分健脾、養血、補腎、滋陰四法。主要以辨證治療為主，能夠有效控制腫瘤發展、提高生存時間、改善生存質量。很多中草藥含有抗腫瘤成分，並通過多途徑、多靶點抑制或殺滅腫瘤細胞。研究提示，中藥抗癌機理主要有以下幾個方面：細胞毒作用、誘導腫瘤細胞凋亡、誘導腫瘤細胞分化、抑制染色體端粒酶活性、抑制腫瘤血管生成、調節細胞信號傳導、調節機體免疫功能、逆轉癌細胞多藥耐藥作用等等，中藥抗腫瘤具有副作用相對較小的優勢，能夠防止癌細胞復發、轉移，改善患者免疫力，因此越來越廣泛的在臨床應用，但是由於中藥抗腫瘤起效較慢，臨床病人情況複雜，因此臨床難以單獨應用，具有一定的局限性，主要配合化療、放療、手術、生物治療、熱療5種主流的腫瘤治療方法。技術實現要素：本發明所要解決的技術問題在於提供一種具有極高的水中懸浮率的具有抗腫瘤功效的中藥發酵飲料。本發明所要解決的另一技術問題在於提供上述具有抗腫瘤功效的中藥發酵飲料的製備方法。為解決上述技術問題，本發明的技術方案是：一種具有抗腫瘤功效的中藥發酵飲料，有效成分由枸杞金銀花共提物、糖液、乳酸菌、酵母菌和醋酸菌組成，其中，每500ml枸杞金銀花共提物中有糖液300ml、乳酸菌1×103-1×1013cfu，酵母菌1×103-1×1013cfu，醋酸菌1×103-1×1013cfu。優選的，上述具有抗腫瘤功效的中藥發酵飲料，所述枸杞金銀花共提物是由下述方法製備得到的：每10-80g幹枸杞與10-80g金銀花混合併加入500ml純淨水70-100℃浸提10-120min，40目篩過濾，濾出渣再用純淨水70-100℃浸提10-120min，40目篩過濾，將兩次濾液合併在一起，即得。優選的，上述具有抗腫瘤功效的中藥發酵飲料，所述糖液是由下述方法製備得到的：每10-100g白砂糖與10-100g蜂蜜混合後加入300ml純淨水溶化過濾至澄清，即得。優選的，上述具有抗腫瘤功效的中藥發酵飲料，每500ml枸杞金銀花共提物中有糖液300ml、乳酸菌1×1011cfu，酵母菌1×109cfu，醋酸菌1×1010cfu。優選的，上述具有抗腫瘤功效的中藥發酵飲料，所述幹枸杞與金銀花的質量比為7:3。上述具有抗腫瘤功效的中藥發酵飲料的製備方法，具體步驟為：(1)按組方量將枸杞金銀花共提物加糖液混合併加純淨水配平至1l，121℃，20min滅菌，待液體降溫至室溫，接入乳酸菌、酵母菌和醋酸菌，20-40℃發酵，發酵周期3-15d；(2)將發酵液在無菌條件下離心：2000-10000rpm離心5-20min，將上層澄清液體進行0.2μm微孔濾膜過濾除菌，灌裝即得。本發明的有益效果是：上述具有抗腫瘤功效的中藥發酵飲料，經體外試驗證明，對ht29(人結腸癌細胞株)s180(小鼠腹水型肉瘤細胞株)hpg2(人肝癌細胞株)體外72h抑制率分別為78.56％，82.13％，68.38％；s180細胞荷瘤小鼠實驗中所述中藥發酵飲料能夠通過改善小鼠體內微生態環境，增強小鼠免疫力，有效抑制癌細胞在動物體內生長，其抑制率達到46.1％。並且能夠提高小鼠攝食量，體重以及精神狀態。可見，本發明所述中藥發酵飲料，通過組分間的協同作用，可以有效抑制腫瘤生長，同時，飲料口感酸甜，適口性好，在動物實驗過程中未發現動物非正常死亡或其他不良情況，表明該產品安全性較高，無毒副作用，有望在臨床上替代或部分替代化療藥物，減少化療藥物用量，提高病人生存質量，節約大量醫療費用，其製備方法簡單，具有廣泛應用前景。附圖說明圖1是發酵飲料及水提物對ht29細胞抑制作用圖；圖2是發酵飲料及水提物對s180細胞抑制作用圖；圖3是發酵飲料及水提物對hepg-2細胞抑制作用圖；圖4是發酵飲料對小鼠攝食量的影響圖；圖5是發酵飲料對小鼠體重的影響圖。具體實施方式下面結合具體實施例對本發明所述技術方案作進一步的說明。實施例1一種具有抗腫瘤功效的中藥發酵飲料，有效成分由枸杞金銀花共提物、糖液、乳酸菌(植物乳桿菌，lp45，石家莊一然生物科技有限公司)、酵母菌(發酵畢赤酵母，cicc20442，中國工業微生物菌種保藏管理中心)和醋酸菌(巴氏醋桿菌，cicc20064，中國工業微生物菌種保藏管理中心)組成，其中，每500ml枸杞金銀花共提物中有糖液300ml、乳酸菌1×1011cfu，酵母菌1×109cfu，醋酸菌1×1010cfu。其中，所述枸杞金銀花共提物是由下述方法製備得到的：每70g幹枸杞與30g金銀花混合併加入500ml純淨水90℃浸提100min，40目篩過濾，濾出渣再用純淨水80℃浸提80min，40目篩過濾，將兩次濾液合併在一起，即得。所述糖液是由下述方法製備得到的：每50g白砂糖與50g蜂蜜混合後加入300ml純淨水溶化過濾至澄清，即得。上述具有抗腫瘤功效的中藥發酵飲料的製備方法，具體步驟為：(1)按組方量將枸杞金銀花共提物加糖液混合併加純淨水配平至1l，121℃，20min滅菌，待液體降溫至室溫，接入乳酸菌、酵母菌和醋酸菌，30℃發酵，發酵周期10d；(2)將發酵液在無菌條件下離心：8000rpm離心15min，將上層澄清液體進行0.2μm微孔濾膜過濾除菌，灌裝即得。實施例2一種具有抗腫瘤功效的中藥發酵飲料，有效成分由枸杞金銀花共提物、糖液、乳酸菌(植物乳桿菌，lp45，石家莊一然生物科技有限公司)、酵母菌(雙倒卵形紅冬孢酵母菌，cicc31994，中國工業微生物菌種保藏管理中心)和醋酸菌(巴氏醋桿菌，cicc20056，中國工業微生物菌種保藏管理中心)組成，其中，每500ml枸杞金銀花共提物中有糖液300ml、乳酸菌1×103cfu，酵母菌1×1013cfu，醋酸菌1×103cfu。其中，所述枸杞金銀花共提物是由下述方法製備得到的：每80g幹枸杞與10g金銀花混合併加入500ml純淨水100℃浸提120min，40目篩過濾，濾出渣再用純淨水70℃浸提10min，40目篩過濾，將兩次濾液合併在一起，即得。所述糖液是由下述方法製備得到的：每10g白砂糖與100g蜂蜜混合後加入300ml純淨水溶化過濾至澄清，即得。上述具有抗腫瘤功效的中藥發酵飲料的製備方法，具體步驟為：(1)按組方量將枸杞金銀花共提物加糖液混合併加純淨水配平至1l，121℃，20min滅菌，待液體降溫至室溫，接入乳酸菌、酵母菌和醋酸菌，20℃發酵，發酵周期15d；(2)將發酵液在無菌條件下離心：10000rpm離心5min，將上層澄清液體進行0.2μm微孔濾膜過濾除菌，灌裝即得。實施例3一種具有抗腫瘤功效的中藥發酵飲料，有效成分由枸杞金銀花共提物、糖液、乳酸菌(植物乳桿菌，lp-g18，潤盈生物工程(上海)有限公司)、酵母菌(釀酒酵母，cicc1002，中國工業微生物菌種保藏管理中心)和醋酸菌(巴氏醋桿菌，cgmcc1.24，中國普通微生物菌種保藏管理中心)組成，其中，每500ml枸杞金銀花共提物中有糖液300ml、乳酸菌1×1013cfu，酵母菌1×103cfu，醋酸菌1×1013cfu。其中，所述枸杞金銀花共提物是由下述方法製備得到的：每10g幹枸杞與80g金銀花混合併加入500ml純淨水70℃浸提10min，40目篩過濾，濾出渣再用純淨水100℃浸提120min，40目篩過濾，將兩次濾液合併在一起，即得。所述糖液是由下述方法製備得到的：每100g白砂糖與10g蜂蜜混合後加入300ml純淨水溶化過濾至澄清，即得。上述具有抗腫瘤功效的中藥發酵飲料的製備方法，具體步驟為：(1)按組方量將枸杞金銀花共提物加糖液混合併加純淨水配平至1l，121℃，20min滅菌，待液體降溫至室溫，接入乳酸菌、酵母菌和醋酸菌，40℃發酵，發酵周期3d；(2)將發酵液在無菌條件下離心：2000rpm離心20min，將上層澄清液體進行0.2μm微孔濾膜過濾除菌，灌裝即得。實施例4一種具有抗腫瘤功效的中藥發酵飲料，有效成分由枸杞金銀花共提物、糖液、乳酸菌(植物乳桿菌，lp-g18，潤盈生物工程(上海)有限公司)、酵母菌(發酵畢赤酵母，cicc20442，中國工業微生物菌種保藏管理中心)和醋酸菌(漢氏葡糖酸醋桿菌，cgmcc1.1811，中國普通微生物菌種保藏管理中心)組成，其中，每500ml枸杞金銀花共提物中有糖液300ml、乳酸菌1×1012cfu，酵母菌1×107cfu，醋酸菌1×109cfu。其中，所述枸杞金銀花共提物是由下述方法製備得到的：每60g幹枸杞與40g金銀花混合併加入500ml純淨水80℃浸提60min，40目篩過濾，濾出渣再用純淨水80℃浸提40min，40目篩過濾，將兩次濾液合併在一起，即得。所述糖液是由下述方法製備得到的：每60g白砂糖與40g蜂蜜混合後加入300ml純淨水溶化過濾至澄清，即得。上述具有抗腫瘤功效的中藥發酵飲料的製備方法同實施例1。實施例5一種具有抗腫瘤功效的中藥發酵飲料，有效成分由枸杞金銀花共提物、糖液、乳酸菌(植物乳桿菌，lp-g18，潤盈生物工程(上海)有限公司)、酵母菌(釀酒酵母，cicc1002，中國工業微生物菌種保藏管理中心)和醋酸菌(蘋果醋酸杆狀菌，cgmcc1.5116，中國普通微生物菌種保藏管理中心)組成，其中，每500ml枸杞金銀花共提物中有糖液300ml、乳酸菌1×109cfu，酵母菌1×105cfu，醋酸菌1×107cfu。其中，所述枸杞金銀花共提物是由下述方法製備得到的：每70g幹枸杞與20g金銀花混合併加入500ml純淨水90℃浸提60min，40目篩過濾，濾出渣再用純淨水80℃浸提40min，40目篩過濾，將兩次濾液合併在一起，即得。所述糖液是由下述方法製備得到的：每40g白砂糖與60g蜂蜜混合後加入300ml純淨水溶化過濾至澄清，即得。上述具有抗腫瘤功效的中藥發酵飲料的製備方法同實施例2。上述實施例中所述各組分用量按照相同比例增加或減少，所得各組分的重量份數關係均屬於本發明的保護範圍。上述實施例組方分析：枸杞性平味甘，具有養陰補血、滋補肝腎、益精明目的功效，常用於治療肝腎虛損、精血不足所致的腰膝酸軟、頭暈、耳鳴、遺精等症。其主要活性成分為：枸杞多糖：枸杞多糖是一種水溶性多糖，是枸杞中最主要的活性成分，相對分子質量為68-200，成為國內外研究熱點。其中又以枸杞多糖的免疫調節和抗腫瘤作用的研究最多。現已有很多研究表明枸杞多糖具有促進免疫、抗衰老、抗腫瘤、清除自由基、抗疲勞、抗輻射、保肝、生殖功能保護和改善等作用。甜菜鹼：化學名稱為1-羧基-n，n，n-三甲氨基乙內酯，在化學結構上與胺基酸相似，屬於季胺鹼類物質。甜菜鹼是枸杞果、葉、柄中主要的生物鹼之一。枸杞對脂質代謝或抗脂肪肝的作用主要是由於所含的甜菜鹼引起的，它在體內起甲基供應體的作用。關於枸杞甜菜鹼的研究僅限於國內在含量的測定、提取工藝和對枸杞植物的生理作用(增強耐鹽性)研究方面，關於枸杞甜菜鹼的藥理藥效研究很少。枸杞色素：枸杞色素是存在於枸杞漿果中的各類呈色物質，是枸杞籽的重要生理活性成分。主要包括-胡蘿蔔素、葉黃素和其他有色物質。枸杞所含有的類胡蘿蔔素則具有非常重要的藥用價值。很多研究已經證明枸杞籽色素具有提高人體免疫功能、預防和抑制腫瘤及預防動脈粥樣硬化等作用。胡蘿蔔素是枸杞色素的主要活性成分，具有抗氧化和作為維生素a的合成前體等重要的生理功能。金銀花為清熱解毒的良藥。它性甘寒氣芳香，甘寒清熱而不傷胃。芳香透達而又可祛邪。化學成分主要有機酸、黃酮類、三萜皂甘、和揮髮油等。金銀花既能宣散風熱，還善清熱解毒，用於各種熱性病，如生熱，發疹，發斑、熱毒瘡癰咽喉腫痛等症，均效果顯著。金銀花的主要活性成分有：有機酸類：綠原酸類化合物是金銀花的主要有效成分，包括綠原酸(chlorogenicacid)和異綠原酸(isochlorogenicacid),其中異綠原酸為一混合物它的異構體有7種，分別為4，5-二咖啡酸醯奎尼酸，3，4-二咖啡酸醯奎尼酸，3，5-二咖啡酸醯奎尼酸，1，3-二咖啡酸酸奎尼酸，3-阿魏醯奎尼酸，4-阿魏醯奎尼酸，5-阿魏酸奎尼酸，其它有機酸還有咖啡酸和棕櫚酸。黃酮類1949年衝七太郎首先從金銀花中分離出木犀草素(luteolin)，1961年他又分離出忍冬苷(lonicerin),1995年高玉敏等首次從金銀花中分離出4個黃酮類化合物。三萜皂苷類:1990年陳敏等從金銀花中分離出一個新的含有六個糖基的三萜皂苷。1993年茅青等也分離得到3個三萜皂苷。1994年陳敏等又分離出2個新的雙咖啡醯基奎尼酸醋化合物。婁紅祥等分離出三個三萜皂苷。揮髮油等其它成分:揮髮油是金銀花的有效成分。通過氣質聯用分離出芳樟醇、雙花醇、棕櫚酸、二氫香葦醇、二十四碳酸甲酯、十八碳二烯酸乙酯、棕櫚酸乙酯、1,1-聯二環已烷等成分。金銀花乾花、鮮花成分差異較大。鮮花揮髮油成分以芳樟醇為主，含量高達14％以上，而乾花揮髮油成分以棕櫚酸為主，一般佔26％以上。2002年邢俊波等首次從該植物中發現5-羥基7,4-二甲氧基黃酮，首次從該植物花蕾中發現槲皮素、忍冬苷、齊墩果酸和胡蘿蔔苷。金銀花的藥理作用主要為：抑菌、抗病毒，抗炎解熱，利膽保肝，降血脂，提高免疫力等。體內試驗表明，枸杞和金銀花水提物經乳酸菌、酵母菌、醋酸菌發酵後，抗腫瘤能力顯著提高。試驗例(實驗組採用實施例1所述中藥發酵飲料)腫瘤細胞增殖抑制試驗(mtt法)取對數生長期的ht29、s180、hepg-2細胞，用含有10％胎牛血清的rpmi-1640培養基調整細胞濃度2.0×104-1.0×105個/孔，接種於96孔細胞培養板，每孔200μl，37℃，5％co2培養，每孔加過濾除菌的發酵飲料或水提物20μl，採用mtt法觀察12、24、48、72小時細胞凋亡情況，實驗結果如圖1-3所示。荷瘤小鼠實驗實驗動物：spf級昆明小鼠105隻，體重20±3g荷瘤小鼠準備：昆明小鼠接種s180腹水瘤4d後，小鼠腹部膨大，頸椎脫臼處死，用75％乙醇浸泡5min消毒，在超淨工作檯內做腹部切口，暴露腹腔，用注射器抽出白色或淡黃色腹水，將腹水用無菌生理鹽水稀釋4-5倍，緩慢混勻，進行造模。採用腹股溝下接種：小鼠暴露腹股溝，75％酒精消毒，從腹股溝下1cm處30度角進針，至皮下改為平行進針，每隻小鼠注射0.2ml腹水稀釋液。小鼠分組及治療方式見表1。表1組別治療方式a：空白組(不造模)灌胃生理鹽水b：陰性對照組灌胃生理鹽水c：陽性對照組注射氟尿嘧啶0.2ml(20mg/kgbw)d：高劑量組灌胃發酵飲料原液0.4mle：中等劑量組灌胃發酵飲料2倍稀釋液0.4mlf：低劑量組灌胃發酵飲料4倍稀釋液0.4mlg：水提物組灌胃未發酵水提物0.4ml每組小鼠15隻小鼠造模後第二天起每天進行治療，治療共進行7d，每天記錄小鼠攝食量及體重，第9d處死小鼠，分離完整腫瘤組織，稱重、記錄。實驗結果：發酵飲料對小鼠攝食量的影響：如圖4所示，通過實驗結果可以看出：化療組攝食量最低且與正常組相比有顯著差異，可見化療對小鼠攝食量有較大影響，空白組攝食量最高，高劑量組攝食量最高，中劑量組和低劑量組攝食量依次減少，但均與化療組有顯著差異，且高於陰性對照組。水提物組攝食量高於化療組，但差異並不顯著。有上述實驗可以看出，該飲料能夠有效改善荷瘤小鼠攝食量。發酵飲料對小鼠體重影響：如圖5所示，通過實驗結果可以看出：化療組小鼠體重顯著降低，可見化療對小鼠體重及營養狀況有較大影響，空白組體重最高，高劑量組體重僅次於空白組，中劑量組和低劑量組體重依次減少，但均與化療組有顯著差異，且高於陰性對照組。水提物組體重高於化療組，且差異顯著。由上述實驗可以看出，該飲料能夠有效增加荷瘤小鼠體重。發酵飲料對小鼠腫瘤抑制率的影響，見表2：表2組別數量腫瘤重量(g)抑制率(％)a：空白組150--b:陰性對照組(不治療)150.74±0.380c：陽性對照組(氟尿嘧啶)150.31±0.1657.8d：高劑量組150.40±0.2246.1e：中等劑量組150.54±0.2927.1f：低劑量組150.57±0.2822.3g：水提物組150.71±0.464.5通過實驗結果可以看出：氟尿嘧啶對小鼠腫瘤抑制最強，抑制率達到58.7％，高劑量組對小鼠腫瘤抑制作用次之，達到46.1％，未經發酵的水提物組對小鼠腫瘤也有一定的抑制作用，但僅為4.5％。發酵飲料對小鼠腸道菌群影響，見表3：表3由上述實驗結果可以看出，小鼠經化療後，腸道菌群發生較大變化：腸桿菌、腸球菌、乳酸菌、雙歧桿菌的數量都有顯著下降。未經發酵的水提物對小鼠腸道菌群有一定的恢復和保護作用，且與化療組相比有顯著差異。高劑量組和中劑量組能夠有效提高小鼠各種腸道菌群數量，且與水提物組有顯著差異。通過體外試驗發現，本發明所述中藥發酵飲料對ht29(人結腸癌細胞株)s180(小鼠腹水型肉瘤細胞株)hpg2(人肝癌細胞株)體外72h抑制率分別為78.56％，82.13％，68.38％，而水提物的抑制率僅有：28.7％，38.03％，29.34％。通過s180細胞荷瘤小鼠實驗，該產品能夠通過改善小鼠體內微生態環境，增強小鼠免疫力，有效抑制癌細胞在動物體內生長，其抑制率達到46.1％。並且能夠提高小鼠攝食量，體重以及精神狀態。綜上，枸杞和金銀花共提物經醋酸菌、乳酸菌、酵母菌混合發酵後能夠有效提高其抗腫瘤能力。與傳統化療方法比較，該發酵飲料抑瘤率雖低於氟尿嘧啶化療但遠遠高於現有中藥提取物，且具有口服可接受度高的優點，動物營養狀況及攝食情況均有顯著改善，且能夠保護和修復腸道菌群。上述參照實施例對該一種具有抗腫瘤功效的中藥發酵飲料及其製備方法進行的詳細描述，是說明性的而不是限定性的，可按照所限定範圍列舉出若干個實施例，因此在不脫離本發明總體構思下的變化和修改，應屬本發明的保護範圍之內。當前第1頁12