二氫青蒿素在增強化療藥物抗腫瘤療效中的應用的製作方法

2023-05-30 18:07:26

專利名稱：：二氫青蒿素在增強化療藥物抗腫瘤療效中的應用的製作方法
技術領域：
：本發明屬藥物用途，涉及二氫青蒿素在增強化療藥物抗腫瘤療效方面的藥物用途。技術背景惡性腫瘤是威脅人類健康最嚴重的疾病之一，其治療失敗的主要原因是腫瘤細胞對化療藥物產生耐藥性。惡性腫瘤對化療藥物產生耐藥性除了癌細胞本能地變異外，另一個重要原因是腫瘤組織微環境結構和功能異常。這種異常的微環境形成的機制尚未完全闡明，一般認為與腫瘤組織內新生血管結構和功能嚴重缺陷、組織內間隙液體壓升高、低氧環境和酸中毒等因素有關。最近幾年，血管生成抑制劑作為化療藥物的增敏劑日益引起人們的重視，並在治療多種腫瘤中卓有成效。一些臨床研究表明，血管生成抑制劑能特異性抑制內皮細胞增生並明顯抑制腫瘤的生長和轉移，其聯合化療方案使非小細胞肺癌(NSCLC)的治療有望擺脫"瓶頸區"的牽制，有可能成為晚期NSCLC的標準治療方案。血管生成抑制劑作為化療增敏劑的合理之處不僅在於化療藥物和血管生成抑制劑可以損壞腫瘤組織不同的組成部分腫瘤細胞和內皮細胞，而且血管生成抑制劑可以改變腫瘤血管異常的結構及功能，從而增強化療藥物的治療效果。,一先，血管生成抑制劑可以改善腫瘤血管結構紊亂、滲漏的狀態，降低腫瘤內間質液體壓力，增加藥物輸送到腫瘤內部，緩解腫瘤組織缺氧，這樣就會使化療效果大大增強。#汰，血管生成抑制劑可以阻止腫瘤細胞在化療過後的快速復甦。儘管化療或放療可以使大部分腫瘤出現消退，但由於化療藥物或放療的嚴重不良反應而限制了其長期應用。治療結束後腫瘤細胞可以快速地復甦、增殖，且腫瘤細胞再增殖速度並沒有隨著化療或放療次數的增加而減少。因此腫瘤消退並沒有真正延長病人的生命，Hudis提出了在化療停藥期間實施抗血管生成治療的可行辦法，以阻斷腫瘤細胞的快速再增殖仍需要通過鄰近血管所提供的氧氣和營養。r￥^，血管生成抑制劑可以增強化療藥物對內皮細胞的殺傷作用，化療藥物在新的血管形成期間不但對內皮細胞有直接的殺傷作用，而且對那些骨髓源性的功能性、有活力的內皮細胞也具有殺傷作用，這類細胞包括內皮祖細胞，CD54+單核細胞等。內皮祖細胞可分化為成熟的內皮細胞，在血管生成中發揮重要作用；CD54+單核細胞和其他骨髓樣細胞群是血管新生的發源地。化療藥物小劑量節律性治療方式可以直接殺傷內皮細胞，抑制循環系統中的內皮祖細胞。這些內皮細胞大部分可以分泌VEGF，因此在治療過程中化療藥物和一些以VEGF為靶點的藥物合用可以發揮協同或累加的治療效果。臨床研究顯示，化療藥物小劑量節律性治療和血管生成抑制劑長期合用可以發揮明顯的抗腫瘤效果。青蒿素(artemisinin)是我國科學家在1971年首次從菊科植物黃花蒿"他w"/^"做aLinn)中提出的具有新型結構的倍半萜內酯,它具有十分優良的抗瘧作用。二氫青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)為青蒿素類藥物體內的主要活性代謝產物，與青蒿素相比，具有水溶性好，抗瘧療效更強等特點。本課題組前期研究表明，青蒿素類藥物能顯著抑制人卵巢癌裸鼠移植瘤組織及惡性血液腫瘤細胞株K562、RPMI8226中VEGF的表達，具有明確的抗腫瘤血管生成作用。臠薰索二絮資霜素
發明內容本發的明目的是提供二氫青蒿素在製備增強化療藥物抗腫瘤療效藥物中的應用。即作為一種靶向腫瘤血管生成抑制劑增強化療藥物在抗腫瘤療效方面的作用。所述二氫青蒿素的分子式為C15H2405。本發明所製備的藥物為抗腫瘤化療藥物。含有製劑允許的藥物賦形劑或載體。所述藥物的製劑形式為固體製劑。給藥方式為口服給藥。本發明具有以下優點(1)二氫青蒿素是傳統的的青蒿素類抗瘧藥中最具有代表性的藥物，一直以來用於抗瘧治療，本發明的特點是首次提出二氫青蒿素作為一種靶向腫瘤血管生成抑制劑增強化療藥物抗腫瘤的治療效果。惡性腫瘤是威脅人類健康最腸i嚴重的疾病之一，化學治療仍將是腫瘤治療的主要手段，二氫青蒿素能在腫瘤治療中通過阻斷腫瘤血管生成，克服化療藥物靶向不明確，副作用較大的不足。因此，聯合化療增強抗腫瘤治療效果將會得到重要應用。(2)本發明為二氫青蒿素開發成為化療藥物增敏劑提供藥效學及其作用機制的研究依據，具有將青蒿素類藥物開發成為腫瘤靶向治療藥物的價值。(3)本發明初步探討二氫青蒿素增強化療藥物抗腫瘤療效的給藥方案研究，為臨床聯合化療方案合理化給藥提供藥理學依據。圖la為二氫青蒿素(DHA)與環磷醯胺(CTX)聯合治療方案I腫瘤生長曲線。圖lb為DHA與CTX聯合治療方案II腫瘤生長曲線。圖2a為DHA與CTX聯合治療方案I腫瘤實體圖。圖2b為DHA與CTX聯合治療方案II腫瘤實體圖。圖3為DHA聯合CTX對荷瘤小鼠腫瘤重量的影響圖4a為DHA與CTX聯合治療方案I小鼠肺組織轉移灶實體圖。圖4b為DHA與CTX聯合治療方案II小鼠肺組織轉移灶實體圖。圖5a為DHA與CTX聯合治療方案I腫瘤組織VEGF表達。圖5b為DHA與CTX聯合治療方案II腫瘤組織VEGF表達。圖6為DHA對LLC細胞增殖的影響。圖7為DHA誘導LLC細胞凋亡的形態學觀察。圖8a、8b為DHA誘導LLC細胞凋亡的流式細胞術定量分析。圖9為DHA對LLC細胞KDR/flk-1蛋白表達的影響。具體實施方式本發明結合具體實施例和附圖作進一步的說明。應理解，這些實施例僅用於說明目的，而不用於限制本發明範圍。就作用機制而言，二氫青蒿素適用於一切依賴血液供應才能生長的實體瘤(如胃癌、肝癌、腸癌和乳腺癌等)，以及血液腫瘤(白血病、多發性骨髓瘤等)的治療。實施例l:二氫青蒿素增強環磷醯胺對Lewis肺癌生長和轉移的治療作用試驗材料二氫青蒿素片劑(浙江華立南湖製藥有限公司)，LLC(LewisLungCarcinoma)細胞株(中科院上海細胞生物學研究所提供)，C57BL/6小鼠100隻，雄性，體重20土2g，6~8周齡(中科院上海實驗動物中心提供)，免疫組化ElivisionTMplus廣譜試劑盒(KIT-9901/9902/9903)(福州邁新生物技術有限公司)，鼠抗人VEGF單克隆抗體(SantaCruz公司)。方法(1)Lewis肺癌生長和轉移模型建立及給藥方案用含10。/。小牛血清的DMEM培養液培養小鼠LLC細胞，於37。C、5%CO2細胞培養箱中孵育，待長滿70-90%面積後傳代。取對數生長期細胞，用無血清培養液調整細胞濃度至lxl0Vr1，在6-8周齡雄性C57BL/6小鼠背部皮下接種，0.2ml/只，共兩隻。待腫瘤長至500mmS大小，處死小鼠，無菌條件下取出瘤塊並切割成約lmn^大小，用套管針接種到新的6-8周齡雄性C57BL/6小鼠右前肢腋下，共100隻。接種後隨機分為10組，每組10隻，按環磷醯胺開始給藥時間不同，應用兩個給藥方案給藥方案I:溶劑對照組每天生理鹽水灌胃，二氫青蒿素在接種後次日開始給藥，每日1次，連續25次；環磷醯胺在接種後第5日開始給藥，隔日1次，連續5次。參見表l。給藥方案n，溶劑對照組每天生理鹽水灌胃，二氫青蒿素在接種後次日開始給藥，每日1次，連續25次；環磷醯胺在接種後第7日開始給藥，隔日1次，連續5次。參見表2。表l.二氫青蒿素增強環磷醯胺對Lewis肺癌治療作用動物實驗給藥方案I劑量x給藥次數組別動物數(只)DHA(mg/kg,qd,ig)x25CTX(mg/kg,qod,ip)溶劑對照10DHA10100CTX(d5-13)1050DHA+CTX(d5-13)105050DHA+CTX(d5-13)1010050DHA+CTX(d5-13)1020050表2.二氫青蒿素增強環磷醯胺對Lewis肺癌治療作用動物實驗給藥方案II組別動物數(只)劑量x給藥次數DHA(mg/kg,qd,ig)x25CTX(mg/kg,qod,ip)x5溶劑對照10DHA10腦CTX(d7國15)1050DHA+CTX(d7-15)105050DHA+CTX(d7-15)1010050DHA+CTX(d7-15)1020050兩個給藥程序均於末次給藥24h後，處死小鼠，取出瘤塊，取肺部用Bouin's液固定。(2)腫瘤體積變化及藥物的毒副作用給藥期間觀察小鼠的一般情況及移植瘤生長情況，每3天測定一次腫瘤體積。測定方法為用遊標卡尺測量腫瘤長軸(a)、短軸(b)，根據公式V:0.5ab2計算腫瘤體積，繪製腫瘤體積增長曲線，同時測定小鼠體重。小鼠處死後，剖取腫瘤組織稱重，並計算抑瘤率抑瘤率=1-(用藥組平均瘤重/對照組平均瘤重)X100%。(3)對腫瘤肺轉移的治療作用治療結束後處死小鼠，剖取肺組織固定於Bouin's液，24h後檢測肺表面腫瘤轉移灶，肺組織呈黃色，腫瘤轉移灶呈白色隆起。(4)協同作用評價標準合併用藥效果按金氏公式評價q=Ea+b/(Ea+Eb-EaEb)，其中Ea+b為兩藥合用的抑制率，Ea和Eb為各藥單用時的抑制率，當q〈1.15時表示兩藥合用有拮抗作用，q〉1.15時，表示兩藥有協同作用。(5)免疫組織化學上述腫瘤組織取出後用多聚甲醛固定，經常規處理後製成5pm厚石蠟切片，後免疫組化,步驟按福州邁新生物技術有限公司的即用型第二代免疫組化Elivisionplus光譜試劑盒中提供的操作說明進行。DAB顯色，梯度乙醇脫水，中性樹膠封片。一抗採用鼠抗人VEGF單克隆抗體(1:50稀釋)，陰性對照組採用PBS代替特異性一抗。以棕黃色的強弱程度為觀察指標。結果(1)抑制腫瘤生長在小鼠Lewis肺癌移植瘤動物模型中，二氫青蒿素聯合環磷醯胺用藥各組的腫瘤生長速度緩慢(圖la,lb)，在治療結束後腫瘤重量較溶劑對照組明顯減少(p<0.05)(圖2a，b)。二氫青蒿素聯合環磷醯胺對Lewis肺癌有較好的治療作用按給藥方案I，50mg/kgDHA+50mg/kgCTX(d5-13)給藥組、100mg/kgDHA+50mg/kgCTX(d5-13)給藥組、200mg/kgDHA+50mg/kgCTX(d5-13)給藥組平均瘤重分別為1.33士1.02g，0.84土0.48g，0.65士0.45g;三個劑量組的平均瘤重與溶劑對照組(2.69士1.62g)、單用二氫青蒿素組(1.67±1.22g)、單用環磷醯胺(d5-13)組(2.16士1.06g)相比均呈明顯抑制(^<0.05)。按給藥方案II，50mg/kgDHA+50mg/kgCTX(d7-15)給藥組、100mg/kgDHA+50mg/kgCTX(d7-15)給藥組、200mg/kgDHA+50mg/kgCTX(d7-15)給藥組平均瘤重分別為U3土0.51g，0.49士0.28g，0.45士0.22g，三個劑量組的平均瘤重與溶劑對照組(2.69士1.62g)、單用二氫青蒿素組(1.67土1.22g)、單用CTX(d7-15)組(1.94士0.69g)相比均呈更明顯抑制(;K0.05)。表明二氫青蒿素確實能增強環磷醯胺對Lewis肺癌的治療作用。同時在相同劑量的二氫青蒿素和環磷醯胺合用組，由於聯合給藥的時間點不同表現出對腫瘤生長抑制作用的不同，100mg/kgDHA+50mg/kgCTX(d5-13，給藥方案I)的腫瘤重量與100mg/kgDHA十50mg/kgCTX(d7-15，給藥方案II)的腫瘤重量相比以給藥方案II的抑瘤作用更明顯，同樣200mg/kgDHA+50mg/kgCTX(d5-13，給藥方案I)的腫瘤重量與200mg/kgDHA+50mg/kgCTX(d7-15，給藥方案II)的腫瘤重量相比以給藥方案II的抑瘤作用更明顯(pO.05)(圖3，表3)。圖la中參溶劑對照組，〇DHA(100mg/kg)單用組，▲CTX(50mg/kg，d5-13)單用組，△DHA(50mg/kg)+CTX(50mg/kg,d5-13)聯合用藥組，■DHA(100mg/kg)十CTX(50mg/kg,d5-13)聯合用藥組，□DHA(200mg/kg)十CTX(50mg/kg，d5-13)聯合用藥組。圖lb中參溶劑對照組，〇DHA(100mg/kg)單用組，▲CTX(50mg/kg，d7-15)單用組，△DHA(50mg/kg)十CTX(50mg/kg,d7-15)聯合用藥組，■DHA(100mg/kg)十CTX(50mg/kg,d7-15)聯合用藥組，□DHA(200mg/kg)十CTX(50mg/kg,d7-15)聯合用藥組。圖2a中(A)溶劑對照組，(B)DHA(100mg/kg)單用組，(C)CTX(50mg/kg,d5-13)單用組，(D)DHA(50mg/kg)+CTX(50mg/kg,d5-13)聯合用藥組，(E)DHA(100mg/kg)+CTX(50mg/kg,d5-13)聯合用藥組，(F)DHA(200mg/kg)+CTX(50mg/kg,d5-13)聯合用藥組。圖2b中(A)溶劑對照組，(B)DHA(100mg/kg)單用組，(C)CTX(50mg/kg,d7-15)單用組，(D)DHA(50mg/kg)+CTX(50mg/kg,d7-15)聯合用藥組，(E)DHA(100mg/kg)+CTX(50mg/kg，d7-15)聯合用藥組，(F)DHA(200mg/kg)十CTX(50mg/kg,d7-15)聯合用藥組。圖3中(A)溶劑對照組，(B)DHA(100mg/kg)單用組，(C)CTX(50mg/kg,d5-13)單用組，(D)DHA(50mg/kg)+CTX(50mg/kg，d5-13)聯合用藥組，(E)DHA(100mg/kg)+CTX(50mg/kg，d5-13)聯合用藥組，(F)DHA(200mg/kg)+CTX(50mg/kg，d5-13)聯合用藥組，(G)CTX(50mg/kg，d7-15)單用組，(H)DHA(50mg/kg)+CTX(50mg/kg,d7-15)聯合用藥組，(I)DHA(100mg/kg)+CTX(50mg/kg,d7-15)聯合用藥組，(J)DHA(200mg/kg)+CTX(50mg/kg，d7-15)聯合用藥組。(2)協同治療作用根據金氏公式評價二氫青蒿素和環磷醯胺合用的聯合治療效果，單用100mg/kg二氫青蒿素組(DHA)的抑瘤率為37.75%，接種後第五天開始單用50mg/kg環磷醯胺(d5-13)組的抑瘤率為19.76%，合用組100mg/kgDHA+50mg/kgCTX(d5-13)的抑瘤率為68.89n/。，得q值為1.38;接種後第七天開始單用50mg/kg環磷醯胺(d7-15)組的抑瘤率為27.97。/。，合用組100mg/kgDHA+50mg/kgCTX(d7-15)的抑瘤率為81.71%，得q值為1.48，表明在兩個給藥程序下合用二氫青蒿素和環磷醯胺均有較好的協同作用，且以接種後第七天開始合用環磷醯胺(給藥方案n)的協同作用更好。(3)藥物的毒副作用用藥期間，各組荷瘤小鼠活動良好，未見特殊不良反應，無一例死亡。用藥25天後溶劑對照組及單用二氫青蒿素(100mg/kg)的去瘤體重分別為22.05土1.91g，22.15土1.59g，接種後第5天開始單用環磷醯胺(50mg/kg)組去瘤體重為22.55±2.32g，環磷醯胺在接種後第5天開始和50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg二氫青蒿素合用的各組小鼠去瘤體重分別為21.89±1.47g、20.72±0.89g、21.58±1.17g，接種後第7天開始單用環磷醯胺(50mg/kg)組去瘤體重為22.82±2.17g，環磷醯胺在接種後第7天開始和50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg二氫青蒿素合用的各組小鼠去瘤體重分別為22.03±1.32g、21.21±0.58g、21.80±1.00g。比較去瘤小鼠體重，各治療組與溶劑對照組均無顯著差異(p〉0.05，表3)。表3、二氫青蒿素聯合環磷醯胺對荷瘤小鼠腫瘤重量及小鼠去瘤體重的影響tableseeoriginaldocumentpage10(4)對荷瘤小鼠肺轉移的影響在皮下移植瘤模型中，發現溶劑對照組小鼠大部分出現自發性肺轉移，單用DHA、CTX組肺表面轉移灶數較溶劑對照組有不同程度下降，二氫青蒿素聯合環磷醯胺治療則可以完全抑制腫瘤自發性肺轉移(圖4a,b,表4)。表4二氫青蒿素聯合環磷醯胺對荷瘤小鼠腫瘤自發性肺轉移的影響tableseeoriginaldocumentpage11圖4a中(A)溶劑對照組，(B)DHA(100mg/kg)單用組，(C)CTX(50mg/kg，d5-13)單用組，(D)DHA(50mg/kg)+CTX(50mg/kg,d5-13)聯合用藥組，(E)DHA(100mg/kg)+CTX(50mg/kg,d5-13)聯合用藥組，(F)DHA(200mg/kg)+CTX(50mg/kg，d5-13)聯合用藥組。圖4b中(A)溶劑對照組，(B)DHA(100mg/kg)單用組，(C)CTX(50mg/kg,d7-15)單用組，(D)DHA(50mg/kg)+CTX(50mg/kg,d7-15)聯合用藥組，(E)DHA(100mg/kg)+CTX(50mg/kg，d7-15)聯合用藥組，(F)DHA(200mg/kg)+CTX(50mg/kg，d7-15)聯合用藥組。(5)二氫青蒿素下調腫瘤組織中VEGF蛋白表達免疫組織化學檢測腫瘤組織VEGF蛋白的表達，以細胞內棕黃色強弱來判斷腫瘤細胞內VEGF表達量的變化。結果顯示，溶劑對照組表現為較強至中等的棕黃色，與溶劑對照組相比，二氫青蒿素單用組及二氫青蒿素與環磷醯胺聯合治療各組的腫瘤細胞內棕黃色明顯減弱(圖5a，b)。圖5a中(A)溶劑對照組，(B)DHA(100mg/kg)單用組，(C)CTX(50mg/kg，d5-13)單用組，(D)DHA(50mg/kg)+CTX(50mg/kg,d5-13)聯合用藥組，(E)DHA(100mg/kg)+CTX(50mg/kg,d5畫13)聯合用藥組，(F)DHA(200mg/kg)+CTX(50mg/kg,d5-13)聯合用藥組。圖5b中(A)溶劑對照組，(B)DHA(100mg/kg)單用組，(C)CTX(50mg/kg,d7-15)單用組，(D)DHA(50mg/kg)+CTX(50mg/kg，d7-15)聯合用藥組，(E)DHA(100mg/kg)+CTX(50mg/kg,d7-15)聯合用藥組，(F)DHA(200mg/kg)+CTX(50mg/kg,d7-15)聯合用藥組。實施例2:二氫青蒿素體外誘導Lewis肺癌(LLC)細胞凋亡以及下調VEGF受體KDR/flk-l表達二氫青蒿素廣西桂林製藥廠惠贈方法(1)MTT法檢測細胞增殖5xl(^ml"LLC細胞接種於96孔板，以DMSO作為溶劑對照，用不同濃度二氫青蒿素作用48h後，MTT法檢測，用酶標儀在570nm波長下測定吸光度(A57。nm)值，計算細胞增殖率，細胞增殖率(％):實驗組A57o^/溶劑對照組A57nmxl00%。採用IC5o計算軟體計算二氫青蒿素抑制LLC細胞增殖的IC5o值，用SPSS10.0統計軟體計算95G/o的置信區間。(2)形態學檢測細胞凋亡LLC細胞接種於24孔板，加入不同濃度的二氫青蒿素作用48h後，用無血清培養液洗兩次，加入吖啶橙IOOmg七"和溴化乙啶100mg丄"於暗室混合染色5min，螢光倒置顯微鏡下觀察細胞形態。(3)流式細胞儀測定細胞凋亡率和細胞周期LLC細胞經過二氫青蒿素作用48h後，離心收集，經PBS清洗2次，調整細胞數至lxl0Sm1/1，然後緩慢滴入70%冰冷乙醇固定細胞，置4。C過夜，已固定的細胞經PBS離心洗滌2次，加入50mg七"碘化丙啶，0.1%Triton-X100，37g丄"EDTA，50mg丄"RnaseA,室溫下避光進行DNA染色30min,過300目尼龍網篩，24h內上流式細胞儀測定。採用CellQuest3.lf軟體(美國BectonDickinson)獲取直方圖，ModFit3.0軟體(美國BectonDickinson)計算細胞凋亡率及分析細胞周期相分布。(4)Western-blot法定量分析KDR/flk-l的表達LLC細胞經不同濃度的二氫青蒿素作用48h後，離心收集，裂解細胞提取蛋白，用Bradford法測定蛋白濃度，在12%SDS-PAGE上進行電泳，每個泳道上總蛋白50嗎。電泳後蛋白條帶轉移至PVDF膜上，膜用含5%脫脂奶粉的TPBS室溫封閉lh，鼠抗人flk-l多克隆抗體(l:500稀釋)4'C放置過夜，經TPBS洗膜，辣根過氧化物酶標記的二抗室溫作用lh(l:5000稀釋)，TPBS洗膜，採用ECL法對目標條帶進行檢測。採用同一張膜通過抗體的洗脫，重新對p-actin的蛋白條帶進行檢測，作為內參。結果(1)抑制LLC細胞增殖MTT實驗分析表明，用二氫青蒿素處理48h後，LLC細胞增殖被明顯抑制，且隨藥物濃度增加其抑制率呈遞增趨勢，二氫青蒿素抑制LLC細胞增殖的ICs。值為53.14—.1/，95%置信區間為48.69-58.18pmol'L'1。以上結果表明，二氫青蒿素對LLC增殖有明顯抑制作用，且呈濃度依賴性，參見圖6，圖中DHA對LLC細胞增殖的半數抑制濃度(IC5o)=53.14pmoH/1，95%置信區間為48.69-58.18jimol.L-1。(2)二氫青蒿素誘導LLC細胞凋亡的形態學觀察LLC細胞經吖啶橙/溴化乙啶雙染色後，螢光顯微鏡下可見，溶劑對照組細胞核呈現密度均勻的綠色螢光，表現為正常細胞的染色特徵，而經二氫青蒿素作用48h後，細胞呈現出典型的凋亡形態學改變如染色質高度凝集，邊緣化等，螢光觀察可見橙色螢光增強，呈緻密塊狀分布，並出現凋亡小體，參見圖7，圖7中(A)溶劑對照組，(B)DHA20pmol'L-1，(C)DHA40^imol'I/1，(D)DHA80pmo1.1/1。(3)二氫青蒿素誘導的LLC細胞凋亡的流式定量分析經流式細胞儀分析，根據PI螢光直方圖顯示，LLC細胞經SOpmohL-1二氫青蒿素作用48h後，細胞凋亡百分率有明顯增加，經40，80pmol七"二氫青蒿素作用48h後，Gl峰前出現了代表凋亡細胞的亞二倍體峰，細胞凋亡率分別上升至9.82%和13.86%(圖8a，b)。其中圖8a中(A)溶劑對照組，(B)DHA20pmol.L國1，(C)DHA40pmol.L國1，(D)DHA80pmol-L-1。(4)二氫青蒿素抑制LLC細胞KDR/flk-l的表達LLC細胞經不同濃度二氫青蒿素處理後，提取蛋白，Western-blot方法檢測細胞內KDR/flk-l蛋白的表達，結果表明，隨著藥物濃度的增加，細胞KDR/flk-l蛋白的表達量依次下降。40、80pmol丄"二氫青蒿素濃度組細胞KDR/flk-l的蛋白表達量分別降為溶劑對照組的33.8%和12.6%，與溶劑對照組相比存在顯著性差異(pO.OOl)，結果參見圖9。權利要求1.二氫青蒿素在製備增強化療藥物抗腫瘤療效藥物中的應用，所述二氫青蒿素的分子式為C15H24O5。2.根據權利要求1所述的二氫青蒿素在製備增強化療藥物抗腫瘤療效藥物中的應用，其特徵是二氫青蒿素作為一種靶向腫瘤血管生成抑制劑在製備增強化療藥物抗腫瘤療效藥物中的應用。3.根據權利要求1所述的二氫青蒿素在製備增強化療藥物抗腫瘤療效藥物中的應用，其特徵是所製備的藥物還含有製劑允許的藥物賦形劑或載體。4.根據權利要求1所述的二氫青蒿素在製備增強化療藥物抗腫瘤療效藥物中的應用，其特徵是所製備的藥物為抗腫瘤化療藥物。5.根據權利要求1所述的二氫青蒿素在製備增強化療藥物抗腫瘤療效藥物中的應用，其特徵是所述藥物的製劑形式為固體製劑。6.根據權利要求5所述的二氫青蒿素在製備增強化療藥物抗腫瘤療效藥物中的應用，其特徵是所述藥物的給藥方式為口服給藥。全文摘要本發明提供二氫青蒿素在製備增強化療藥物抗腫瘤療效藥物中的應用。該藥物製劑含有製劑允許的藥物賦形劑或載體。其製劑形式為固體製劑。本發明提供的藥物製劑可增強化療藥物抗腫瘤療效，可用於腫瘤化療過程中的輔助治療。本發明以血管生成抑制劑能改變腫瘤微環境的理論為背景，研究並闡明中藥有效單體增強化療藥物抗腫瘤作用和機制，為青蒿素類藥物新的用途開發提供藥理學依據，為發掘血管生成抑制劑新的臨床價值提供重要依據，是發展中醫藥理論新的研究方向。文檔編號A61K9/00GK101125140SQ20071007118公開日2008年2月20日申請日期2007年9月18日優先權日2007年9月18日發明者周慧君,傲李,增王申請人:浙江大學