M-csf的抗體的製作方法

2023-05-31 06:40:26

專利名稱：M-csf的抗體的製作方法
M-CSF的抗體本申請是申請日為2004年9月9日、申請號為200480028051. X、發明名稱為「M-CSF的抗體」的發明專利申請的分案申請。本申請要求2003年9月10日提交的美國臨時申請60/502，163的權益。
背景技術：
巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)是稱為集落刺激因子(CSFs)的蛋白質家族的一員。M-CSF為一種分泌性或細胞表面糖蛋白，此種糖蛋白包括二個以二硫鍵連結的亞基，且其總分子量在 40 至 90kD 間變化(Stanley E. R.等人，Mol. R印rod. Dev. ,46 :4-10 (1997))。如同其它CSF s，M-CSF是由巨噬細胞、單核細胞及人類關節組織細胞(如軟骨細胞及滑膜成纖維細胞)對蛋白質(如白細胞介素-I或腫瘤壞死因子_α)反應而產生的。M-CSF刺激多潛能造血祖幹細胞形成巨卩遼細胞集落(Stanley E. R.等人，Mol. Reprod. Dev. ,46 4-10(1997))。 M-CSF通常與其受體c-fms結合以發揮生物作用。c_fms包含五種細胞外Ig結構域、一跨透膜結構域及具有二個激酶結構域的細胞內結構域。當M-CSF與c-fms結合時,受體會同-二聚體化並啟始包含JAK/STAT、PI3K及ERK途徑的信號轉導途徑級聯。M-CSF為單核細胞/巨噬細胞的功能、活化及存活的重要調節物。許多動物模型已證實M-CSF於多種疾病(包含類風溼性關節炎(RA)及癌症)中的作用。巨噬細胞包括RA中的關鍵效應細胞。在RA中滑膜巨噬細胞的浸潤程度顯示出與潛在關節破壞程度有密切關係。於類風溼病關節中，由單核細胞/巨噬細胞、成纖維細胞及內皮細胞所內源性產生的M-CSF可作用於單核細胞/巨噬細胞系的細胞以促進其存活並分化為可破壞骨質的破骨細胞並增加前-炎性細胞功能，如細胞毒性、超氧化物產生、吞噬作用、驅化性及次級細胞因子產生。例如在大鼠無乳鏈球菌(Streptococcus agalactiae)超聲處理-誘導的實驗性關節炎模型中用M-CSF的處理導致病變增強(Abd, A. H.等人,Lymphokine Cytokine Res. 10 43-50(1991))。同樣地，於膠原蛋白誘導的關節炎鼠模型(CIA)(其為一種RA模型)中以皮下注射M-CSF導致RA疾病的症狀明顯惡化(Campbell I. K.等人，J. Leuk. Biol. 68 144-150(2000))。此外，對RA及其它自身免疫疾病有高易感性的MRL/lpr鼠具有高的基礎 M-CSF 血清濃度(Yui M.A.等人，Am. j. Pathol. 139 :255-261 (1991))。維持 C I A 需要內源性M-CSF，此可由M-CSF中和鼠單克隆抗體能顯著減少已發生疾病的嚴重程度來證實(Campbell I. K.等人，J. Leuk. Biol. 68 :144-150 (2000))。有關癌症方面，以反義寡核苷酸抑制集落刺激因子可通過減緩巨噬細胞-介導的ECM破壞而抑制腫瘤小鼠中胚胎和結腸腫瘤異種移植物中的腫瘤生長(Seyedhossein,A.等人，Cancer Research, 62 :5317-5324 (2002))。M-CSF與c-fms結合及其後續對單核細胞/巨噬細胞的活化作用對許多疾病狀態十分重要。除RA與癌症外，其餘M-CSF相關疾病狀態實例包含骨質疏鬆症、破壞性關節炎、動脈粥樣硬化生成、腎小球腎炎、川崎病(Kawasaki dsease)及HIV-I感染，其中單核細胞/巨噬細胞與相關細胞類型發揮了重要作用。如破骨細胞類似巨噬細胞並部分由M-CSF調節。破骨細胞成熟初期由M-CSF所誘導的生長及分化信號對破骨細胞後續於骨中的活性為必要的。病灶骨質侵蝕及更具擴散性的近-關節(juxta-articular)骨質疏鬆症二種形式的破骨細胞介導的骨丟失為RA主要未解決的問題。此種骨丟失後果包括關節畸形、功能殘廢、骨折風險增加及死亡率增高。對破骨細胞生成而言，M-CSF為非常必需的，且於關節炎的動物模型中實驗性地阻斷此種細胞因子可成功地阻止關節破壞。已知其它形式的破壞性關節炎(如牛皮癬性關節炎)中也有類似的破壞性途徑運作，並可呈現類似的幹預作用。絕經後的骨丟失起因於缺陷性骨骼重塑，其繼發於失衡的(uncoupling)骨質形成與因雌激素缺乏所導致的高度增生的破骨細胞介導的骨質再吸收。於小鼠活體內使用阻斷性抗體來中和M-CSF顯示完全預防破骨細胞數量增加、骨質重吸收增加及由卵巢切除術誘發所產生的骨質流失。有多重證據顯示M-CSF於動脈粥樣硬化生成及機械性傷害動脈壁後的增殖性內膜增生中的重要作用。動脈粥樣硬化病變中所有主要的細胞類型皆顯示表達M-CSF，且其可通過暴露於氧化脂蛋白而進一步被上調。以中和c-fms抗體阻斷M-CSF信號發生可減少以 高脂肪食物餵食的載脂蛋白E缺陷性小鼠主動脈根部的巨噬細胞-衍生泡沫細胞的堆積。於實驗性及人類腎小球腎炎中，腎小球M-CSF的表達發現會與局部巨噬細胞堆積、活化及增殖共同存在(co-localize)且與腎小球損傷及蛋白尿程度有關。通過針對其受體c-fms的抗體阻斷M-CSF信號發生可顯著地下調於實驗性單側輸尿管阻塞所誘導的腎炎症反應期間小鼠的局部巨噬細胞堆積。川崎病(KD)為一種未知原因的急性、熱性的兒科血管炎。其最常見及嚴重的併發症包含動脈瘤性擴張形式的冠狀動脈血管系統。血清M-CSF水平在急性期川崎病中呈顯著升高，而以靜脈內免疫球蛋白治療後呈正常化。巨細胞關節炎(GCA)為一種炎症性血管病變，主要發生於年長者，其中T細胞及巨噬細胞浸潤中大型動脈壁所導致的臨床後果包含失明及繼發於動脈阻塞的中風。巨噬細胞於GCA中的活性作用可由血管損害中源自炎性介體的巨噬細胞濃度升高而證實。已報告M-CSF可使人類單核細胞衍生的巨噬細胞體外更易受HIV-I感染。在近期的研究中，M-CSF增加單核細胞-衍生的巨噬細胞受感染的頻率、每個受感染細胞中所表達的HIV mRNA的量及每個受感染的培養物中所表達的前病毒DNA的濃度。由於M-CSF在多種疾病中的重要作用，故需要可抑制M-CSF活性的方法。目前強烈需求治療性抗M-CSF抗體。發明簡述本發明提供特異性結合人M-CSF並作為M-CSF拮抗劑的分離的人抗體或其抗原結合部分，以及包含所述抗體或部分的組合物。本發明也提供組合物，其包含該治療中有效的本發明的抗M-CSF抗體的重鏈及/或輕鏈、其可變區或其抗原結合部分，或編碼該抗體、抗體鏈或其可變區的核酸分子，及藥物可接受載體。於某些實施方案中，該組合物可進一步包含另一組分，如治療劑或診斷劑。本發明亦提供診斷及治療方法。於某些實施方案中，該組合物以治療或預防特定疾病或病況所需的治療有效量使用。本發明亦提供以有效量的本發明抗M-CSF抗體或其抗原結合部分、編碼該抗體或其重鏈及/或輕鏈、可變區或其抗原結合部分的核酸來治療或預防各種疾病及病況的方法，如(但不限於)炎症、癌症、動脈粥樣硬化生成、神經障礙及心臟疾患。本發明提供分離的細胞系，如產生抗M-CSF抗體或其抗原結合部分的雜交瘤。本發明還提供編碼抗M-CSF抗體的重鏈及/或輕鏈、其可變區或其抗原結合部分的核酸分子。本發明提供包含核酸分子的載體及宿主細胞以及重組產生由該核酸分子所編碼的多肽的方法。本發明還提供表達抗M-CSF抗體的重鏈及/或輕鏈或其抗原結合部分的非-人類轉基因動物或植物。附圖
簡述
圖IA及IB說明隨時間變化的抗M-CSF抗體導致的雄猴及雌猴體內總單核細胞計數的劑量相關的下降情況。單核細胞計數通過使用Abbott Diagnostics Inc. Cell Dyn系統的光散射確定。單核細胞計數監測時間自給藥後24小時直到3周，給藥內容有載體或抗體8. 10. 3,0,0. I、I或5mg/kg，劑量體積為3. 79mL/kg，給藥時間約5分鐘。圖IA為雄猴。圖IB為雌猴。圖2A及2B說明抗M-CSF治療在雄猴及雌猴中導致⑶14+⑶16+單核細胞百分比下降。監測時間為給藥後0-21日，給藥內容有載體或抗體8. 10.3,0,0. 1、1或511^/1^，劑量體積為3. 79mL/kg，給藥時間約5分鐘。於8. 10. 3注射後第1、3、7、14及21日，於每次抽血後測定每隻受測猴子⑶14+⑶16+亞型中的單核細胞比例。圖2A為雄猴。圖2B為雌猴。圖3A及3B說明與受測前的單核細胞水平相比，所有劑量的抗體8. 10. 3F及抗體9. 14. 41的抗M-CSF治療導致總單核細胞百分比變化減少。圖3A顯示由使用抗體8. 10. 3F的實驗所收集的數據。圖3B顯示由使用抗體9. 14. 41的實驗所收集的數據。圖4為來自26種抗M-CSF抗體的輕鏈及重鏈可變區的預期胺基酸序列的序列與相應的可變區基因的種系胺基酸序列比較的序列比對。抗體序列與種系基因序列間的差異以粗體表示。虛線代表與種系無異。各比對中下劃線的序列由左至右表示為FRUCDR1、FR2、CDR2、FR 3、CDR3 及 FR4 序列。圖4A顯示抗體252的輕鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO :4的殘基21-127)與種系 Vk012, Jk3 序列(SEQ ID NO :103)的比對。圖4B顯示抗體88的輕鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 8的殘基21-127)與種系Vk012，Jk3序列(SEQ ID NO :103)的比對。圖4C顯示抗體100的輕鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID N0:12的殘基21-127)與種系 VkL2，Jk3 序列(SEQ ID NO :107)的比對。圖4D顯示抗體3. 8. 3的輕鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 16的殘基23-130)與種系 VkL5，Jk3 序列(SEQ ID NO :109)的比對。圖4E顯示抗體2. 7. 3的輕鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 20的殘基23-130)與種系 VkL5，Jk4 序列(SEQ ID NO :117)的比對。
圖4F顯示抗體I. 120. I的輕鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 24的殘基21-134)與種系 VkB3, JkI 序列(SEQ ID NO :112)的比對。圖4G顯示抗體252的重鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO :2的殘基20-136)與種系 Vh3-11，Dh7-27 Jh6 序列(SEQ ID NO :106)的比對。圖4H顯示抗體88的重鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 6的殘基20-138)與種系 VH3-7，DH6-13，JH4 序列(SEQ ID NO :105)的比對。圖41顯示抗體100的重鏈可變區的預期胺基酸序 (SEQ ID N0:10的殘基20-141)與種系 VH3-23，DHl-26，JH4 序列(SEQ ID NO :104)的比對。圖4J顯示抗體3. 8. 3的重鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO :14的殘基20-135)與種系 VH3-ll，DH7-27，JH4 序列(SEQ ID NO :108)的比對。圖4K顯示抗體2. 7. 3的重鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 18的殘基20-137)與種系 VH3-33，DHl-26，JH4 序列(SEQ ID NO :110)的比對。圖4L顯示抗體I. 120. I的重鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 22的殘基
20-139)與種系VHl-18，DH4-23，JH4 序列(SEQ ID NO :111)的比對。圖4M顯示抗體8. 10. 3的輕鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 44的殘基
21-129)與種系VkA27，Jk4 序列(SEQ ID NO :114)的比對。圖4N顯示抗體8. 10. 3的重鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 30的殘基20-141)與種系 VH3-48，DHl-26，JH4b 序列(SEQ ID NO :113)的比對。圖40顯示抗體9. 14. 4的輕鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 28的殘基23-130)與種系 Vk012，Jk3 序列(SEQ ID NO :103)的比對。圖4P顯示抗體9. 14. 4的重鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 38的殘基20-135)與種系 VH3-ll，DH7-27，JH4b 序列(SEQ ID NO :116)的比對。圖4Q顯示抗體9. 7. 2的輕鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 48的殘基23-130)與種系 Vk012, Jk3 序列(SEQ ID NO :103)的比對。圖4R顯示抗體9. 7. 2的重鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 46的殘基20-136)與種系 VH3-11，DH6-13，JH6b 序列(SEQ ID NO :115)的比對。圖4S顯示抗體9. 14. 41的輕鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 28的殘基23-130)與種系 Vk012Jk3 序列(SEQ ID NO :103)的比對。圖4T顯示抗體9. 14. 41的重鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 26的殘基
20-135)與種系VH3-ll，DH7-27，JH4b 序列(SEQ ID NO :116)的比對。圖4U顯示抗體8. 10. 3F的輕鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 32的殘基
21-129)與種系VkA27，Jk4 序列(SEQ ID NO :114)的比對。圖4V顯示抗體8. 10. 3F的重鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 30的殘基20-141)與種系 VH3-48，DHl-26，JH4b 序列(SEQ ID NO :113)的比對。圖4W顯示抗體9. 7. 2IF的輕鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 36的殘基23-130)與種系 Vk012, Jk3 序列(SEQ ID NO :103)的比對。圖4X顯示抗體9. 7. 2IF的重鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 34的殘基20-136)與種系 VH3-11，DH6-13，JH6b 序列(SEQ ID NO :115)的比對。圖4Y顯示抗體9. 7. 2C-Ser的輕鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 52的殘基 23-130)與種系 Vk012，Jk3 序列(SEQ ID NO :103)的比對。圖4Z顯示抗體9. 7. 2C-Ser的重鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 50的殘基 20-136)與種系 VH3-11，DH6-13，JH6b 序列(SEQ ID NO :115)的比對。圖4AA顯示抗體9. 14. 4C_Ser的輕鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 56的殘基23-130)與種系Vk012，Jk3序列(SEQ ID NO :103)的比對。圖4BB顯示抗體9. 14. 4C_Ser的重鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 54的殘基 20-135)與種系 VH3-ll，DH7-27，JH4b 序列(SEQ ID NO :116)的比對。圖4CC顯示抗體8. 10. 3C_Ser的輕鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 60的殘基21-129)與種系VkA27，Jk4序列(SEQ ID NO :114)的比對。圖4DD顯示抗體8. 10. 3C_Ser的重鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 58的殘基 20-141)與種系 VH3-48，DHl-26，JH4b 序列(SEQ ID NO :113)的比對。 圖4EE顯示抗體8. 10. 3-CG2的輕鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 60的殘基21-129)與種系VkA27，Jk4序列(SEQ ID NO :114)的比對。圖4FF顯示抗體8. 10. 3-CG2的重鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 62的殘基 20-141)與種系 VH3-48，DHl-26，JH4b 序列(SEQ ID NO :113)的比對。圖4GG顯示抗體9. 7. 2-CG2的輕鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 52的殘基 23-130)與種系 Vk012，Jk3 序列(SEQ ID NO :103)的比對。圖4HH顯示抗體9. 7. 2-CG2的重鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 66的殘基 20-136)與種系 VH3-11，DH6-13，JH6b 序列(SEQ ID NO :115)的比對。圖411顯示抗體9. 7. 2-CG4的輕鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 52的殘基 23-130)與種系 Vk012，Jk3 序列(SEQ ID NO :103)的比對。圖4JJ顯示抗體9. 7. 2-CG4的重鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 70的殘基 20-135)與種系 VH3-11，DH6-13，JH6b 序列(SEQ ID NO :115)的比對。圖4KK顯示抗體9. 14. 4-CG 2的輕鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 56的殘基23-130)與種系Vk012，Jk3序列(SEQ ID NO :103)的比對。圖4LL顯示抗體9. 14. 4-CG2的重鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 74的殘基 20-135)與種系 VH3-ll，DH7-27，JH4b 序列(SEQ ID NO :116)的比對。圖4MM顯示抗體9. 14. 4-CG4的輕鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 56的殘基23-130)與種系Vk012，Jk3序列(SEQ ID NO :103)的比對。圖4NN顯示抗體9. 14. 4-CG4的重鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 78的殘基 20-135)與種系 VH3-ll，DH7-27，JH4b 序列(SEQ ID NO :116)的比對。圖400顯示抗體9. 14. 4_Ser的輕鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 28的殘基23-130)與種系Vk012，Jk3序列(SEQ ID NO :103)的比對。圖4PP顯示抗體9. 14. 4_Ser的重鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 82的殘基 20-135)與種系 VH3-ll，DH7-27，JH4b 序列(SEQ ID NO :116)的比對。圖4QQ顯示抗體9. 7. 2_Ser的輕鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 48的殘基 23-130)與種系 Vk012，Jk3 序列(SEQ ID NO :103)的比對。圖4RR顯示抗體9. 7. 2-Ser的重鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 86的殘基 20-136)與種系 VH3-11，DH6-13，JH6b 序列(SEQ ID NO :115)的比對。
圖4SS顯示抗體8. 10. 3-Ser的輕鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 44的殘基21-129)與種系VkA27，Jk4序列(SEQ ID NO :114)的比對。圖4TT顯示抗體8. 10. 3-Ser的重鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 90的殘基 20-141)與種系 VH3-48，DHl-26，JH4b 序列(SEQ ID NO :113)的比對。圖4UU顯示抗體8. 10. 3-CG4的輕鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 60的殘基21-129)與種系VkA27，Jk4序列(SEQ ID NO :114)的比對。圖4VV顯示抗體8. 10. 3-CG4的重鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 94的殘基 20-141)與種系 VH3-48，DHl-26，JH4b 序列(SEQ ID NO :113)的比對。圖4WW顯示抗體9. 14. 4G1的輕鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ IDNO 28的殘基23-130)與種系 Vk012, Jk3 序列(SEQ ID NO :103)的比對。圖4XX顯示抗體9. 14. 4G1的重鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ IDNO :102的殘 基 20-135)與種系 VH3-ll，DH7-27，JH4b 序列(SEQ ID NO :116)的比對。圖4YY顯示抗體8. 10. 3FG1的輕鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 32的殘基 21-129)與種系 VkA27，Jk4 序列(SEQ ID NO :114)的比對。圖4ZZ顯示抗體8. 10. 3FG1的重鏈可變區的預期胺基酸序列(SEQ ID NO 98的殘基 20-141)與種系 VH3-48，DHl-26，JH4b 序列(SEQ ID NO :113)的比對。發明詳述定義及一般技術除非在此另有定義，本發明所使用的科學及技術術語具有本領域普通技術人員所共同理解的含義。此外，除非是上下文所需，否則單數術語可包含複數型且複數術語可包含單數型。一般來說，在此所使用與細胞及組織培養、分子生物學、免疫學、微生物學、遺傳學及蛋白質與核酸化學及雜交相關的命名和技術皆為本領域所熟知且常用於本領域中。除非另有指定，否則本發明的方法及技術一般按照本領域中所熟知的常規方法進行，並如本專利說明書中所引用的和討論的各種一般及比較特定的文獻中所述。請見如 Sambrook 等人，Molecular Cloning ALaboratory Manual, 2d ed., Cold SpringHarbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. (1989)與 Ausubel 等人，CurrentProtocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates (1992)及 Harlow 與Lane Antibodies A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, ColdSpring Harbor, N. Y. (1990),其是以引用的方式併入本文中。酶反應與純化技術是依廠商說明書進行，以如本領域中通用方法或在此所述方法完成。在此所述的與分析化學、合成有機化學及醫藥與藥物化學相關的命名法和實驗方法及技術是所熟知且常用於本領域的。化學合成、化學分析、藥物製備、調配及遞送與患者治療採用標準技術。除非另外指定，下列名詞具有下列意義術語"多肽"包括天然或人工蛋白質、蛋白質片段及蛋白質序列的多肽類似物。多肽可為單體或聚合物。術語"分離的蛋白質"、"分離的多肽"或"分離的抗體"是指這樣的蛋白質、多肽或抗體，其依其起源或衍生來源具有下列一至四種狀況(1)不伴有在自然狀態中會伴隨其的天然相關組分，(2)不含其它源自相同物種的蛋白質，(3)是由源自不同物種的細胞所表達，或(4)不會天然產生。因此，化學合成或於與其自然產生的細胞不同的細胞系統中所合成的多肽為自其天然相關組分中"分離"的。蛋白質也可通過分離(使用本領域中所熟知的蛋白質純化技術)使其實質上不含天然相伴隨的組分。分離的抗體實例包括已經使用M-CSF進行親和純化的抗M-CSF抗體、於由雜交瘤或其它細胞系體外合成的抗M-CSF抗體及源自轉基因小鼠的人類抗M-CSF抗體。當至少約60-75%的樣本顯示為單一種類多肽時，蛋白質或多肽為"實質上純的"、"實質上同質的"或"實質上純化的"。該多肽或蛋白質可為單體或多聚體。實質上純的多肽或蛋白質典型地包含約50%、60%、70%、80%或90% W/W的蛋白質樣品，更常為約95%且優選為99%以上純的。蛋白質純度或同質性可通過許多本領域中所熟知的方法顯示，如蛋白質樣品的聚丙烯醯胺凝膠電泳，再以本領域中所熟知的染色劑將凝膠染色以便顯現單一多肽帶。為某些目的，使用HPLC或其它本領域普通技術人員所熟知的純化方法可得較高的解析度。在此所用的術語"多肽片段"意指具有氨基末端及/或羧基末端缺失的多肽，但其保留的胺基酸序列與自然產生序列中相應位置相同。在某些實施方案中，片段長度至少 為5、6、8或10個胺基酸。於其它實施方案中，片段長度至少為14、至少20、至少50或至少為 70、80、90、100、150 或 200 個胺基酸。在此所用的術語"多肽類似物"意指包括含有實質上與部分胺基酸序列相同的片段的多肽且其至少具有一種下列特性(I)於適當結合條件下與M-CSF特異性結合，(2)抑制M-CSF能力。典型地，多肽類似物相對於自然產生的序列包含保守性胺基酸替代(或插入或缺失)。類似物長度典型為至少20或25個胺基酸，優選為至少50、60、70、80、90、100、150或
200個胺基酸或者更長，且經常可以與全長多肽一樣長。於某些實施方案中，抗體或其抗原結合部分的胺基酸替代為(I)降低對蛋白水解的敏感性，(2)降低對氧化作用的敏感性，(3)改變形成蛋白複合物的結合親和力，或(4)可賦予或修飾此種類似物其它理化或機能特性。類似物可以包括正常產生的肽序列以外的各種突變蛋白序列。如可於正常產生的序列中產生單個或多個胺基酸替代(優選為保守性胺基酸替代)，優選於形成分子間接觸的結構域以外的多肽部分。保守性胺基酸替代應不實質上改變親本序列的結構特徵，如取代胺基酸不應改變組成免疫球蛋白結合結構域的反平行β-摺疊(於親本序列中所產生)或中斷構成親本序列特徵的其它二級結構形式。通常，甘氨酸及脯氨酸類似物不會用於反平行β-摺疊中。本領域認可的多肽二級與三級結構的實例描述於Proteins, Structures andMolecular Principles (Creighton 編輯，ff. H. Freeman and Company, New York (1984))；Introduction to Protein Structure (C. Branden 及 J. Tooze 編輯，Garland Publishing,New York, N. Y. (1991));及 Thornton 等人，Nature 354 :105 (1991),各文以引用的方式併入本文中。非肽類似物常用於醫藥工業作為與模板肽具有類似特性的藥物。這些非肽化合物類型稱為"妝模擬物(peptide mimetics)"或"peptidomimetics " Fauchere, J. Adv.Drug Res. 15 29 (1986) ;Veber 及 Freidinger, TINS 392 頁(1985);及 Evans 等人,J. Med.Chem. 30 :1229 (1987)，其是以引用的方式併入本文中。此種化合物通常是藉助計算機化分子模建而開發。結構上類似治療可用的肽的肽模擬物可用於產生等同療效或預防作用。通常P印tidomimetic結構上類似於範例多肽(即具有所需的生化特性或醫藥活性的多肽)，如人類抗體，但具有一個或多個任選通過本領域所熟知的方法由選自下列的鍵取代的肽鍵一CH2NH—、一CH2S—、一CH2-CH2—、一CH = CH—(順式及反式)、一COCH2—、一CH(OH)CH2-及-CH2SO-。以相同類型的D-胺基酸(如以D-賴氨酸代替L-賴氨酸)系統地替代共有序列中一個或多個胺基酸也可用於產生更穩定的肽。此外，包含共有序列或實質上與共有序列變異相同的限制性肽可通過本領域中已知的方法產生(Rizo及Gierasch, Ann.Rev. Biochem. 61 :387 (1992),以引用的方式併入本文中)；如通過添加內半胱氨酸殘基能形成環化肽的分子內二硫橋。"抗體"意指完整抗體或可與完整抗體競爭特異性結合的抗原結合部分。一般請見 Fundamental Immunology,第 7 章(Paul, W.編輯，第 2 版.Raven Press, N. Y. (1989))(以引用的方式將其針對所有目的的全部內容併入本文中)。抗原結合部分可通過DNA重組技術或通過酶促或化學裂解完整的抗體來製備。在某些實施方案中，抗原結合部分包括Fab、Fab'、F(ab' )2、Fd、Fv、dAb及互補決定區(CDR)片段、單鏈抗體(scFv)、嵌合抗體、二體(diabody)與至少包含足以賦予該多肽特異性抗原結合的抗體部分的多肽。
由N-末端至C-末端，成熟的輕鏈及重鏈可變區都包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、Q)R3及FR4區。將胺基酸分配至各區是依照Kabat的定義，Sequences of Proteinsof Immunological Interest(Nationallnstitutes of Health, Bethesda, Md. (1987 及1991))，Chothia 及 Lesk, J. Mol. Biol. 196 :901-917 (1987)或 Chothia 等人，Nature 342 878-883(1989)。在此所用的以數字提及的抗體是與由相同數字的雜交瘤所獲得的單克隆抗體相同。如單克隆抗體3. 8. 3與由雜交瘤3. 8. 3所獲得的抗體相同。在此所用的Fd片段意指由Vh及ChI結構域所組成的抗體片段；Fv片段是由抗體的單臂的Vl與Vh結構域組成；而dAb片段(Ward等人，Nature 341 :544-546(1989))是由Vh結構域組成。於某些實施方案中,抗體為單鏈抗體(scFv),其中的\^及Vh結構域通過能使其形成單一蛋白鏈的合成接頭配對而形成單價分子(Bird等人，Science 242 :423-426 (1988)及 Huston 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883(1988)。於某些實施方案中，抗體為二體(即二價抗體)，其中的Vh及' 結構域於單一多肽鏈上表達，但其所使用的接頭過短無法供相同鏈上該兩個結構域間的配對，從而迫使所述結構域與另一鏈的互補結構域配對並產生二個抗原結合部位(請見如Holliger P.等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 6444-6448(1993) R Poljak R. J.等人，Structure 2:1121-1123(1994))。在某些實施方案中，一個或多個源自本發明抗體的CDR可共價或非共價併入一分子中形成可與M-CSF特異性結合的免疫粘附素(immunoadhesin)。在此類實施方案中，CDR(s)可合併為較大多肽鏈的一部分，其可共價連接至另一多肽鏈或其可為非共價性併入。在具有一個或多個結合位點的實施方案中，結合位點可彼此相同或不同。在此所用的術語"人類抗體"意指任何抗體，其中的可變區及恆定區序列為人類序列。該術語包含具有源自人類基因的序列的抗體，但其已經被改變，如以減少可能的免疫原性、增加親和力、排除可能引起不希望的摺疊的半胱氨酸等。該術語包含在非人類細胞中重組產生的抗體，其可能帶來非典型人類細胞的蛋白質糖基化作用。這些抗體可通過下述各種方法製備。在此所用的術語"嵌合抗體"意指抗體包括源自兩個或多個不同抗體的區域。在一個實施方案中，一個或多個CDR是源自人類抗M-CSF抗體。於另一實施方案中，所有CDR皆源自人類抗M-CSF抗體。於另一實施方案中，源自一個以上人類抗M-CSF抗體的⑶R組合於嵌合抗體中。例如，嵌合抗體可包括源自第一人類抗M-CSF抗體輕鏈的CDRl、源自第二人類抗M-CSF抗體輕鏈的⑶R2及源自第三人類抗M-CSF抗體輕鏈的⑶R3與源自一個或多個其它抗M-CSF抗體重鏈的⑶R。此外，構架區可源自一種如下的抗M-CSF抗體，一個或多個CDR取自該抗體或取自一種或多種不同人類抗體。抗體或免疫球蛋白分子的片段或類似物可容易地由本領域普通技術人員依照本專利說明書的指導來製備。優選片段或類似物的氨基末端與羧基末端存在於接近功能性結構域的邊緣。結構性與功能性結構域可通過比較核苷酸及/或胺基酸序列數據與公共或專利序列資料庫來鑑別。優選採用計算機化比較方法來鑑別出現於其它已知結構及/或功能的蛋白質中的序列基序或預期的蛋白質構象結構域。已知鑑別可摺疊成為已知三維結構的 蛋白質序列的方法。請見Bowie等人，Science 253:164(1991)。在此所用的術語"表面胞質共振(surface plasmon resonance)"意指一種光學現象，其可以通過檢測生物感應基質內蛋白質濃度變化分析實時生物特異性交互作用，如使用 BIAC0RE 系統(Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Sweden and Piscataway,N.J.)。進一步描述請見 Jonsson U.等人，Ann. Biol. Clin. 51 :19-26 (1993) ； JonssonU.等人，Biotechniques 11 :620-627 (1991) ； Jonsson B.等人，J. Mol. Recognit. 8 125-131 (1995);及 Johnsson B.等人，Anal. Biochem. 198:268-277(1991)。" KD" —詞意指特定抗體-抗原相互作用的平衡解離常數。"表位"一詞包含任何可與免疫球蛋白或T-細胞受體特異性結合或與分子互相作用的蛋白質決定簇。表位決定簇通常由化學活性的表面分子組(如胺基酸或糖類側鏈等分子)構成且通常具有特異的三維結構特徵以及特異的電荷特徵。表位可為"線性"或"構象的(conformational)"。於線性表位中，所有蛋白質與相互作用分子(如抗體)間的相互作用的位點是沿著該蛋白質一級胺基酸序列線性地發生。於構象表位中，相互作用的位點是穿過蛋白質上互相分離的胺基酸殘基。當解離常數< ImM，優選為< IOOnM且最優選為彡IOnM時，可稱抗體能與抗原特異性結合。於某些實施方案中，Kd為IpM至500pM。於其它實施方案中，Kd是介於500pM至IyM間。於其它實施方案中，Kd是介於I μ M至IOOnM間。於其它實施方案中，Kd是介於IOOmM至ΙΟηΜ。一旦測定出抗原上所需的表位，即可使用如本發明中所述的技術產生該表位的抗體。或者，於發現表位期間，抗體產生及表徵可說明所需的表位的信息。接著由該信息可競爭性篩選與相同表位結合的抗體。一種可達到此目的的方法為進行交叉競爭性研究以尋找互相競爭性結合的抗體，如競爭與抗原結合的抗體。一種根據交叉競爭性進行"binning"抗體的高通量方法描述於國際專利申請號WO03/48731。在此所用的20種常見胺基酸及其縮寫遵循慣例使用。請見Immunology-ASynthesis (第 2版，E. S. Golub,S.D. R. Gren,Eds. , Sinauer Associates, Sunderland,Mass.(1991))，其以引用的方式併入本文中。"多核苷酸"一詞在此是指長度至少為10個鹼基的核苷酸聚合物形式，無論是核糖核苷酸或脫氧核苷酸或任一類型核苷酸的經修飾形式。該術語包含單鏈及雙鏈形式。在此所用的"分離的多核苷酸"一詞意指基因組、cDNA或合成來源或其某些組合的多核苷酸，根據起源或衍生來源，該"分離的多核苷酸"包含有下列一至三項特徵(I)與該"分離的多核苷酸"天然一起發現的全部或部分多核苷酸無關，(2)可操作地連接至在天然不會連接在一起的多核苷酸，或(3)天然情況下不會成為較大序列的一部分。在此所用的"寡核苷酸"一詞包含自然產生，及經修飾的核苷酸，其通過自然產生及非自然產生的寡核苷酸鍵連接在一起。寡核苷酸為多核苷酸的子集，其通常包括200個鹼基或更少的長度。優選寡核苷酸長度為10至60個鹼基且最優選長度為為12、13、14、15、16、17、18、19或20至40個鹼基。寡核苷酸通常為單鏈，如引物及探針；但寡核苷酸也可為雙鏈(如用於構建基因突變子)。本發明的寡核苷酸可為有義或反義寡核苷酸。在此所用的"自然產生的核苷酸"一詞包含脫氧核糖核苷酸及核糖核苷酸。在
此所用的"經修飾核苷酸"包含具有經修飾或取代糖基等的核苷酸。在此所用的"寡核苷酸鍵"意指包含寡核苷酸鍵，如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硒代磷酸酯、二硒代磷酸酯、phosphoroaniIothioate> phoshoraniIadate> phosphoroamidate 等。請見如 LaPlanche等人，Nucl. Acids Res. 14 :9081 (1986) ;Stec 等人，J. Am. Chem. Soc. 106 :6077 (1984);Stein 等人，Nucl. Acids Res. 16 :3209 (1988) ;Zon 等人，Anti-Cancer Drug Design 6:539(1991) ;Zon 等人，Oligonucleotides and Analogues APractical Approach,87-108頁(F. Eckstein, Ed. , Oxford University Press, Oxford England(1991));美國專利第5，151，510 號；Uhlmann 及 Peyman, Chemical Reviews 90 :543 (1990),其公開內容以引用的方式併入本文中。若需要時寡核苷酸可包含標記以供檢測。"可操作地連接"的序列既包含鄰近目的基因的表達控制序列還包含以反式或遠距離來控制目的基因的表達控制序列。在此所用的"表達控制序列"一詞意指實現其所連接的編碼序列表達和加工所必需的多核苷酸序列。表達控制序列包含適當的轉錄起始、終止、啟動子及增強子序列；有效的RNA加工信號(如剪接及多腺核苷酸化信號)；可穩定細胞質mRNA的序列、可提聞翻譯效率的序列(即Kozak共有序列)、可增加蛋白質穩定性的序列，且當需要時可包含能增加蛋白質分泌的序列。此種控制序列的性質依宿主生物而不同；於原核生物中，此種控制序列通常包含啟動子、核糖體結合位點及轉錄終止序列；於真核生物中，此種控制序列通常包含啟動子及轉錄終止序列。"控制序列"一詞意欲包含至少所有表達及加工所必須的組分，且亦可包含其它的有益組分，如前導序列及融合配偶體序列。在此所用的"載體"一詞意指可運送與其連接的另一核酸的核酸分子。於某些實施方案中，載體為質粒，即另外DNA片段可連接至其中的環狀雙鏈DNA環。於某些實施方案中，載體為病毒性載體，其中另外的DNA片段可連接至病毒基因組中。於某些實施方案中，載體可在其所導入的宿主細胞中進行自我複製(如具有細菌性複製起點的細菌載體及游離型哺乳動物載體)。於其它實施方案中，載體(如非游離型哺乳動物載體)於導入宿主細胞後可整合入宿主細胞基因組，並因此可與宿主基因組一起複製。此外，某些載體可指導其操作性所連結的基因的表達。此種載體在此稱為"重組表達載體"(或簡稱為"表達載體")。在此所用的"重組宿主細胞"(或簡稱"宿主細胞")一詞意指一已導入重組表達載體的細胞。應了解"重組宿主細胞"及"宿主細胞"不僅指特定的受試細胞，且亦指該細胞的子代。由於突變或環境影響，因此某些修飾可能發生在子代，事實上此種子代可能不會與親代細胞完全相同，但仍包含於在此所用的"宿主細胞"一詞範圍內。在此所用的"選擇性雜交"一詞意指進行可檢測地且特異性結合。本發明的多核苷酸、寡核苷酸及片段可於雜交並洗滌條件下與核酸鏈進行選擇性雜交，所述條件儘量減少大量的與非特異核酸的可檢測結合。"高嚴格性"或"高度嚴格的"條件可用於達成本領域中已知且在在此討論的選擇性雜交條件。一"高嚴格性"或"高嚴格的"條件實例為將多核苷酸與另一種多核苷酸溫育(其中的一種多核苷酸可附著於固體表面(如膜))於雜交緩衝液 6X SSPE 或 SSC、50% 甲醯胺(formamide)、5X Denhardt' s 試劑、O. 5% SDS、100 μ g/ml變性片段化的鮭精DNA中，雜交溫度為42°C，12-16小時，隨後再於55°C、使用IXSSC.0. 5% SDS的洗滌緩衝液兩次洗滌。亦見於Sambrook等人，前述，9. 50-9. 55頁。"序列相同性百分比"在描述核酸序列時，意指比較及比對第一連續序列與第二連續序列時其最大相同殘基百分比。序列相同性比較的長度可大於至少約9個核苷酸，通常至少約18個核苷酸，更通常為至少約24個核苷酸，典型地至少約28個核苷酸， 更典型地為至少約32個核苷酸，且優選為至少約36、48或更多個核苷酸。有一些本領域中已知的不同算法可用於測量核苷酸序列相同性。如多核苷酸序列的比對可使用FASTA、Gap 或 Bestfit,其為 Wisconsin Package version 10. O 的程序，Genetics ComputerGroup (GCG), Madison, Wisconsin。包含如FASTA2及FASTA 3的FASTA程序可提供查詢及檢索序列間最佳重疊區的比對及序列相同性(Pearson,Methods Enzymol. 183 :63-98(1990) ；Pearson,Methods Mol.Biol. 132 185-219 (2000) ；Pearson, Methods Enzymol. 266 :227-258(1996) ；Pearson,J. Mol. Biol. 276 :71-84(1998);以引用的方式併入本文中)。除非另外指定，否則使用特定程序或算法的預設參數。例如，測定核酸序列間的序列相同性可使用FASTA及其預設參數(字大小為6及供作評比基礎的NOPAM係數)或使用Gap及其預設參數(如GCG第6. I版所提供的)，其以引用的方式併入本文中。除非另外指定，當提及一核苷酸序列時包含其補序列。因此，當提及具有特定序列核酸時應了解其是包含其互補鏈，及其互補性序列。"序列相同性百分比"一詞意指一種比例，其表示為相同殘基數與所比較的殘基數的百分比。當提及核酸或其片段時，"實質上類似"或"實質上序列類似"等詞意指當將具有適當核苷酸插入或缺失的核酸或片段與另一核酸(或其互補鏈)進行最佳化比對時，其核苷酸序列相同性為至少約85 %，優選為至少約90 %，且更優選為至少約95 %、96 %、97%、98%或99%核苷酸鹼基，以上可以任何所熟知的上述序列相同性算法(如FASTA、BLAST或Gap)來測量。當形容多肽時，"實質上相同"一詞意指二個肽序列，當進行最佳化比對時(如以GAP或BESTFIT程序、依程序所提供使用的預設ga pweights)，共同擁有至少70%、75%或80 %序列相同性，優選為至少90 %或95 %序列相同性，且更優選為至少97 %、98 %或99%的序列相同性。於某些實施方案中，不同的殘基位置因保守性胺基酸替換而不同。"保守性胺基酸替換"意指其中的胺基酸殘基以另一具有類似化學特性(如電荷或疏水性)的側鏈R基的胺基酸殘基所替換。保守性胺基酸替換通常並不會實質上改變蛋白質的功能特性。在二個或多個胺基酸序列因保守性替換而互異的情況下，其序列相同性可向上調整以修正替換的保守性本質。可進行該調整的方法為本領域普通技術人員所熟知。請見如Pearson, Methods Mol. Biol. 243 :307-31 (1994)。具有類似化學特性的側鏈的胺基酸組的實例包含1)脂族側鏈甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸及異亮氨酸；2)脂族-羥基側鏈絲氨酸及蘇氨酸；3)含醯胺的側鏈天冬醯胺及穀氨醯胺；4)芳族側鏈苯丙氨酸、酪氨酸及色氨酸；5)鹼性側鏈賴氨酸、精氨酸及組氨酸；6)酸性側鏈天冬氨酸及穀氨酸；及7)含硫的側鏈半胱氨酸及甲硫氨酸。保守性胺基酸替換組為纈氨酸-亮氨酸-異亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、賴氨酸-精氨酸、丙氨酸-纈氨酸、穀氨酸-天冬氨酸及天冬醯胺-穀氨醯胺。或者，保守性置換為PAM250對數相似矩陣(log-likelihood matrix)中任何具有正值的改變，其描述於Gonnet等人，Science 256 :1443-45 (1992)，其以引用的方式併入本文中。"適度保守性"置換為PAM250對數相似矩陣中任何具有非負值的改變。多肽的序列相同性典型是使用序列分析軟體來測量。蛋白質分析軟體使用測量不同替換、缺失及其它修飾(包含保守性胺基酸替換)的相同性來匹配序列。例如包含如"Gap"及"Bestfit"等程序的GCG可採用程序特定的預設參數來測定緊密相關的多肽間的序列同源性或序列相同性，如測定源自不同種生物的同源多肽或野生型蛋白質及其 突變蛋白間的相同性。請見如GCG 6. I版。比較多肽序列亦可使用FASTA並採用預設的或建議的參數，請見 GCG 6. I 版(University of Wisconsin WI)。FASTA(如 FASTA2 及 FASTA3)提供查詢及檢索序列間的最佳重疊區的比對及序列相同性百分比(Pearson, MethodsEnzymol. 183 :63-98(1990) ；Pearson, Methods Mol. Biol. 132 :185-219 (2000))。當比較本發明序列與包含大量源自各種生物的序列的資料庫時，另一優選算法為電腦程式BLAST，特別是blastp或tblastn,其使用該程序所提供的預設參數。請見如Altschul等人，J. Mol.Biol. 215 :403-410(1990) ；Altschul 等人，Nucleic Acids Res. 25 :3389-402 (1997)。比較多肽序列同源性所需的長度通常至少約16個胺基酸殘基，通常為至少約20個殘基，更常為至少約24個殘基，典型為至少約28個殘基，且優選為多於約35個殘基。當檢索包含大量源自各種生物的序列的資料庫時，最好比較胺基酸序列。在此所用的"標記"或"標記的"是指將另一分子摻入抗體中。於一實施方案中，標記為一種可檢測的標記，如摻入放射標記的胺基酸或附著至生物素化部分的多肽，其可通過標記的抗生物素蛋白(如包含螢光標記或酶促活性的鏈黴抗生物素蛋白，其可由光學或比色法檢測)進行檢測。於另一實施方案中，標記或標記可具治療性，如藥物綴合物(drug conjugate)或毒素。標記多肽及糖蛋白的各種方法在本領域中已知且可運用。多肽的標記實例包含(但不限於)下列放射性同位素或放射性核素(如3H、14C、15N、35S、9°Y、99Tc、mI n、125I、131I、突光標記(如FITC、羅丹明(rhodamine)、鑭系兀素磷光體(lanthanidephosphors))、酶促標記(如辣根過氧化酶(horseradish peroxida e)、β _半乳糖苷酶、螢光素酶、鹼性磷酸酶)、化學發光標記、生物素化基團、可由二級報告子(如亮氨酸拉鏈成對序列，二抗的結合位點、金屬結合結構域、表位標籤)識別的預先測定的多肽表位、磁性劑(如釓螯合物)、毒素，如百日咳毒素、紫杉醇、細胞鬆弛素B(cytochalaSin B)、短桿菌肽 D (gramicidin D)、溴化乙錠(ethidium bromide)、吐根鹼(emetine)、絲裂黴素(mitomycin)、鬼臼亞乙苷(etoposide)、替尼泊苷(tenoposide)、長春花新鹼、長春花鹼、秋水仙素、阿黴素、道諾紅黴素(daunorubicin)、dihydroxy anthracindione、米託蒽醌(mitoxantrone)、光神黴素(mithramycin)、放線菌素D、l_脫氫睪酮、糖皮質激素、普羅卡因(procaine)、丁卡因(tetracaine)、利多卡因(Iidocaine)、普蔡洛爾(propranolol)及嘌呤黴素(puiOmycin)與其類似物或同源物。於某些實施方案中，標記通過不同長度的間隔臂附著以降低可能的空間障礙。縱觀本說明書及權利要求，應了解"包含(comprise)"等詞或如"包含(comprises)"或"包含(comprising)"等變形意味著包含指定的整體或整體群但不排除任何其它整體或整體群。人類抗M-CSF抗體及其特性於一實施方案中，本發明提供人源化抗M-CSF抗體。於另一實施方案中,本發明提供人類抗M-CSF抗體。於某些實施方案中，人類抗M-CSF抗體的製備是通過免疫非人類轉基因動物(如嚙齒類動物)，其基因組包括人類免疫球蛋白基因以便嚙齒類動物可產生人類抗體。
本發明抗M-CSF抗體可包括人類K或人類λ輕鏈或由此衍生的胺基酸序列。於某些包括K輕鏈的實施方案中，輕鏈可變區(\)是部分由人類Vk012、VkL2、VkL5、VkA27或VkB3基因及Jkl、Jk2、Jk3或Jk4基因所編碼。於本發明特定實施方案中，輕鏈可變區是由Vk012/JK3、VkL2/JK3、VkL5/JK3、VkL 5/JK4、VkA27/JK4 或 VkB3/JKl 基因編碼。於某些實施方案中，M-CSF抗體的'相對於種系胺基酸序列包括一個或多個胺基酸替換。於某些實施方案中，抗M-CSF抗體的八包括1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸替換(相對於種系胺基酸序列)。於某些具體實施方案中，一個或多個源自種系的替換位於輕鏈的CDR區。於某些具體實施方案中，相對於種系的胺基酸替換位於一個或多個與位於下列抗體中任一個或多個'中的相對於種系的替換相同的位置上252、88、100、3. 8. 3,2. 7. 3,1. 120. 1,9. 14. 41,8. 10. 3F、9. 7. 2IF、9. 14. 4、8· 10. 3、9· 7. 2、9· 7. 2C_Ser、9. 14. 4C-Ser、8. 10. 3C_Ser、8. 10. 3_CG2、9. 7. 2_CG2、9. 7. 2_CG4、9. 14. 4_CG2、9. 14. 4—CG4、9. 14. 4-Ser、9. 7. 2_Ser、8. 10. 3-Ser,8. 10. 3_CG4、8. 10. 3FG1 或 9. 14. 4G1。如抗 M-CSF 抗體的\可包含一個或多個相對於種系的發現於抗體88的 '中的胺基酸替換，和相對於種系的見於抗體252的\中的一個或多個其它胺基酸替換，其中抗體252使用與抗體88相同的Vk基因。於某些具體實施方案中，其胺基酸改變位於參考抗體的一個或多個相同位置，但涉及不同於參考抗體的突變。於某些具體實施方案中，相對於種系的胺基酸改變於一個或多個與抗體252、
88,100,3.8. 3,2. 7. 3,1. 120. 1,9. 14. 41,8. 10. 3F、9. 7. 2IF、9. 14. 4、8· 10. 3、9· 7. 2、9. 7. 2C-Ser、9. 14. 4C_Ser、8. 10. 3C_Ser、8. 10. 3_CG2、9. 7. 2_CG2、9. 7. 2_CG4、9. 14. 4—CG2、9. 14. 4-CG4、9. 14. 4_Ser、9. 7. 2_Ser、8. 10. 3-Ser,8. 10. 3_CG4、8. 10. 3FG1 或 9. 14. 4G1 的
任一 \上的相同位置產生，但所述改變可能反映了在相對於參考抗體中的胺基酸位置上的保守性胺基酸替換基。如，若於這些抗體之一中的特定位置已相對種系發生改變且為穀氨酸，則可於該位置替代天冬氨酸。同樣地，若相對於種系的胺基酸替換為絲氨酸，可於該位置以蘇氨酸取代絲氨酸。保守性胺基酸替換先前已有敘述。於某些具體實施方案中，人類抗M-CSF抗體的輕鏈包括與抗體252 (SEQ ID NO4) ,88 (SEQ ID NO :8)、100 (SEQ ID NO : 12)、3· 8. 3 (SEQ ID NO : 16)、2. 7. 3 (SEQ ID NO:20)、I. 120. I (SEQ ID NO :24)、9· 14. 41 (SEQ ID NO :28)、8· 10. 3F (SEQ I D NO :32)、9. 7. 2IF(SEQ ID NO :36)、9· 14. 4 (SEQ ID NO :28)、8. 10. 3 (SEQ ID NO :44)、9. 7. 2 (SEQ IDNO :48)、9. 7. 2C-Ser(SEQ ID NO :52)、9.14.4C_Ser(SEQ ID NO :56)、8.10. 3C_Ser(SEQ IDNO 60)、8. 10. 3-CG2(SEQ ID NO :60)、9.7. 2-CG2(SEQ ID NO :52)、9.7. 2-CG4(SEQ ID NO 52)、9. 14. 4-CG2(SEQ ID NO :56)、9. 14. 4-CG4 (SEQ ID NO :56)、9. 14. 4_Ser (SEQ ID NO:28)、9. 7. 2-Ser (SEQ ID NO :48)、8. 10. 3_Ser (SEQ ID NO :44)、8. 10. 3-CG4 (SEQ ID NO:60)8. 10. 3FG1 (SEQ ID NO :32)或 9. 14. 4G1 (SEQ ID NO :28)的 Vl 的胺基酸序列相同的胺基酸序列，或者具有多達1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個保守性胺基酸替換及/或總數多達3個的非-保守性胺基酸替換的該胺基酸序列。於某些具體實施方案中，輕鏈包括任何一種上述抗體的⑶Rl起點至⑶R3末端的胺基酸序列。於某些具體實施方案中，抗M-CSF抗體的輕鏈至少包括 種系或在此所述的抗體序列的輕鏈⑶R1、⑶R2或⑶R3。於另一具體實施方案中，該輕鏈可包括獨立地選自抗體 252、88、100、3· 8. 3,2. 7. 3,1. 120. 1,9. 14. 41,8. 10. 3F、9. 7. 2IF、9. 14. 4、8· 10. 3、9. 7. 2、9· 7. 2C-Ser、9. 14. 4C_Ser、8. 10. 3C_Ser、8. 10. 3_CG2、9. 7. 2-CG 2、9. 7. 2-CG4、9. 14. 4-CG2、9. 14. 4_CG4、9. 14. 4_Ser、9. 7. 2-Ser,8. 10. 3-Ser, 8. 10. 3_CG4、8. 10. 3FG1 或9. 14. 4G1的⑶Rl、⑶R2或⑶R3區，或者各具有少於4個或少於3個保守性胺基酸替換及/或總計3個或更少非-保守性胺基酸替換的CDR區。於其它具體實施方案中，抗M-CSF抗體的輕鏈包括輕鏈⑶R1、⑶R2或⑶R3，其各獨立地選自具有包括選自SEQ ID NOS :4、8、12、16、20、24、28、32、36、44、48、52、56 或 60 的 \ 區胺基酸序列，或者由選自 SEQ ID NOS
3、7、11、27、31、35、43或47的編碼Vl區的核酸分子編碼的輕鏈可變區的抗體的⑶R1、⑶R2及⑶R3區。抗M-CSF抗體的輕鏈可包括抗體的⑶R1、⑶R2及⑶R3區，該抗體包括選自 252、88、100、3· 8· 3、2· 7. 3、1· 120. 1、9· 14. 4Ι、8· 10. 3F、9. 7. 21 F、9. 14. 4、8· 10. 3、9· 7· 2、9· 7· 2C-Se r、9. 14. 4C_Ser、8. 10. 3C_Se r、8. 10. 3-CG 2、9. 7. 2-CG 2、9. 7. 2-CG4、9. 14. 4-CG2、9. 14. 4_CG4、9. 14. 4_Ser、9. 7. 2-Ser,8. 10. 3-Ser,8. 10. 3_CG4、8. 10. 3FG1 或9. 14. 4G1 的 Vl 區或 SEQ ID NOS :4、8、12、16、20、24、28、32、36、44、48、52、56 或 60 的胺基酸序列。於某些具體實施方案中，輕鏈包括抗體252、88、100、3.8.3、2.7.3、1. 120. I、9. 14. 41,8. 10. 3F、9. 7. 21 F、9. 14. 4、8· 10. 3、9· 7. 2、9· 7. 2C_Ser、9. 14. 4C_Ser、
8.10. 3C-Ser、8. 10. 3-CG 2、9· 7. 2_CG2、9. 7. 2_CG4、9. 14. 4_CG2、9. 14. 4_CG4、9. 14. 4_Ser、
9.7. 2-Ser,8. 10. 3-Ser,8. 10. 3_CG4、8. 10. 3FG1 或 9. 14. 4G1 的 CDRU CDR2 及 CDR3 區，或者各自具有少於4個或少於3個保守性胺基酸替換及/或總數為3個或更少的非-保守性胺基酸替換的該CDR區。關於重鏈，於某些具體實施方案中，重鏈可變區胺基酸序列是由人類Vh3_11、Vh3-23、Vh3-7、Vh1-18、Vh3_33、Vh 3-48 基因及 JH4、JH6、JH4b 或 JH6b 基因部分編碼。於本發明特定具體實施方案中，重鏈可變區是由Vh3-11/Dh7-27/Jh6、Vh3_7/Dh6_13/Jh4、Vh3_23/Dh1-26/Jh4、Vh3-11/Dh7-27/Jh4、Vh3_33/Dh卜26/Jh4、Vh1-18/Dh4_23/Jh4、Vh3_1 1/Dh7_27/JH4b、VH3-48/DHl-26/JH4b、VH3-ll/DH6_13/JH6b、VH3-ll/DH7_27/JH4b、VH3-48/DHl_6/JH4b 或VH3-ll/DH6-13/JH6b基因編碼。於某些具體實施方案中，抗M-CSF抗體的Vh包含一個或多個相對於種系胺基酸序列的胺基酸替換、缺失或插入(添加)。於某些具體實施方案中，重鏈的可變區包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18個相對於種系胺基酸序列的突變。於某些具體實施方案中，該突變為相對於種系胺基酸序列的非-保守性替換。於某些具體實施方案中，突變位於重鏈的⑶R區。於某些具體實施方案中，胺基酸改變於一個或多個與源自任一個或多個抗體 252、88、100、3. 8. 3,2. 7. 3,1. 120. 1,9. 14. 41,8. 10. 3F、9. 7. 21 F、9. 14. 4、8· 10. 3、9· 7. 2、9· 7. 2C_Ser、9. 14. 4C_Ser、8. 10. 3C_Ser、8. 10. 3—CG2、9. 7. 2-CG2、9. 7. 2_CG4、9. 14. 4_CG2、9. 14. 4_CG4、9. 14. 4_Ser、9. 7. 2-Ser,8. 10. 3-Ser,
8.10. 3-CG4、8. 10. 3FG1或9. 14. 4G1的Vh的種系的突變相同的位置上產生。於其它具體實施方案中，胺基酸改變是位於一個或多個參考抗體的相同位置，但包含不同的突變。於某些具體實施方案中，重鏈包括抗體252 (SEQ ID NO 2), 88 (SEQ ID NO :6)、100 (SEQ ID NO : 10)、3· 8. 3 (SEQ ID NO : 14)、2. 7. 3 (SEQ ID NO : 18)、I. 120. I (SEQ. IDNO :22)、9· 14. 41(SEQ ID NO :26)、8· 10. 3F(SEQ ID NO :30)、9· 7. 2IF(SEQ ID NO :34)、
9.14. 4 (SEQ ID NO :38)、8· 10. 3 (SEQ ID NO :30)、9. 7. 2 (SEQ ID NO :46)、9. 7. 2C_Ser (SEQID NO :50)、9·14.4C-Ser(SEQ ID NO :54)、8·10.3C_Ser (SEQ ID NO :58)、8.10.3-CG2(SEQ ID NO :62)、9. 7. 2-CG2(SEQ ID NO :66)、9. 7. 2-CG4 (SEQ ID NO :70)、9. 14. 4-CG2 (SEQ IDNO 74)、9. 14. 4-CG4(SEQ ID NO :78)、9.14.4-Ser (SEQ ID NO :82)、9.7.2-Ser (SEQ ID NO 86)、8.10.3-Ser(SEQ ID NO :90)8.10. 3-CG4(SEQ ID NO :94),8. 10. 3FG1(SEQ ID NO :98)或9. 14. 4G1 (SEQ ID NO :102)的可變區(Vh)的胺基酸序列，或者具有多達1、2、3、4、5、6、7、
8、9或10個保守性胺基酸替換及/或總共3個的非-保守性胺基酸替換的該胺基酸序列。於某些具體實施方案中，該重鏈包括任一前述抗體中自CDRl起點至CDR 3末端的胺基酸序列。於某些具體實施方案中，該重鏈包括抗體252、88、100、3. 8. 3、2. 7. 3、I. 120. I、
9.14. 41,8. 10. 3F、9. 7. 2IF、9. 14. 4、8· 10. 3、9· 7. 2、9· 7. 2C_Se r、9. 14. 4C_Se r、
8.10. 3C-Ser、8. 10. 3_CG2、9. 7. 2_CG2、9. 7. 2_CG4、9. 14. 4-CG 2、9. 14. 4_CG4、9. 14. 4_Ser、9. 7. 2-Ser,8. 10. 3-Ser,8. 10. 3_CG4、8. 10. 3FG1 或 9. 14. 4G1 的重鍵 CDR1、CDR2 及 CDR 3
區，或者各具有少於8個，少於6個，少於4個或少於3個保守性胺基酸替換及/或總共3個或更少的非-保守性胺基酸替換的該CDR區。於某些具體實施方案中，重鏈如前所述包括了在此所述的抗體序列的種系或抗體⑶R 3，且亦可包括種系序列的⑶Rl及⑶R2區，或者可包括抗體序列的⑶Rl及⑶R2區，其各自獨立地選自包括選自 252、88、100、3· 8. 3,2. 7. 3,1. 120. 1,9. 14. 41,8. 10. 3F、9. 7. 2IF、
9.14. 4、8· 10. 3、9· 7. 2、9· 7. 2C_Ser、9. 14. 4C_Ser、8. 10. 3C_Ser、8. 10. 3_CG2、9. 7. 2-CG2、9. 7. 2-CG4、9. 14. 4_CG2、9. 14. 4_CG4、9. 14. 4_Ser、9. 7. 2-Ser,8. 10. 3-Ser,8. 10. 3-CG4、
8.10. 3FG1或9. 14. 4G1抗體的重鏈的抗體。於另一具體實施方案中，重鏈包括在此所述的抗體序列的⑶R 3，且亦可包括⑶Rl及⑶R2區，其各自獨立地選自重鏈可變區的⑶Rl及CDR2 區，該重鏈可變區包括選自 SEQ ID NOS :2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90、94、98或102的Vh區胺基酸序列，或者其可由選自SEQ IDNOS :1、5、9、25、29、33、37、45、97或101的編碼Vh區的核酸序列編碼。於另一具體實施方案中，該抗體包括如上所述的輕鏈及如上所述的重鏈。一種可產生的胺基酸替換類型為將一個或多個抗體中的半胱氨酸(其可能為化學活性的)改變為另一種殘基，如(不限於)丙氨酸或絲氨酸。於一具體實施方案中，存在非典型半胱氨酸的替換。該替換可位於可變區的構架區或抗體恆定區中。於另一具體實施方案中，該半胱氨酸是位於抗體的非典型(non-canonical)區。另一種可產生的胺基酸替換類型為移除抗體中任何可能的蛋白質水解位點，特別是位於抗體中可變區的CDR或構架區或恆定區中的。替換半胱氨酸殘基及移除蛋白質水解位點可減少抗體產物中任何異質性的風險並從而增強其同質性。另一類的胺基酸替換是移除可能形成脫胺作用位點的天冬醯胺-甘氨酸對，其是通過改變該殘基的一或二個殘基同時改變來完成。於某些具體實施方案中，本發明抗M-CSF抗體重鏈的C-末端賴氨酸並不存在(Lewis D.A.等人，Anal. Chem，66(5) :585-95 (1994))。於本發明多個具體實施方案中，抗M-CSF抗體的重鏈及輕鏈任選包含信號序列。一方面，本發明涉及抑制人類抗-M-CSF單克隆抗體及製備該抗體的改造的細胞系。表I列舉編碼下列單克隆抗體的重鏈及輕鏈的可變區的核酸及相對應的預期的胺基酸序列的序列識別碼(SEQ ID N0S) :252、88、100、3· 8· 3、2· 7. 3、1· 120. 1、9· 14. 41、 8.10. 3F、9. 7. 2IF、9. 14. 4、8· 10. 3 及 9· 7· 2。另外的變異抗體 9. 7. 2C_Ser、9. 14. 4C_Ser、
8.10. 3C-Ser、8. 10. 3_CG2、9. 7. 2_CG2、9. 7. 2_CG4、9. 14. 4_CG2、9. 14. 4_CG4、9. 14. 4_Ser、
9.7. 2-Ser,8. 10. 3-Ser,8. 10. 3-CG48. 10. 3FG1 或 9. 14. 4G1 可通過本領域普通技術人員所知方法來製備。表I
權利要求
1.一種可以與M-CSF特異性結合的人類單克隆抗體或其抗原結合部分。
2.如權利要求I的人類單克隆抗體或其抗原結合部分，其中該抗體或部分具有至少一種下列特性 (a)可以與M-CSF的人類分泌同種型及M-CSF的膜結合同種型結合； (b)對M-CSF的選擇性比其對GM-CSF或G-CSF的選擇性至少大100倍； (c)與M-CSF結合的Kd為I.OxKT7M或更低； (d)其與M-CSF的解離率U為2.OxKT4s-1或更少；或 (e)在有人類c-fms存在的情況下可以與人類M-CSF結合。
3.權利要求2的人類單克隆抗體或部分，其中所述的抗體或片段阻斷對c-fms的結合，並以I. Ox 10_7M或更少的Kd與M-CSF結合。
4.一種可以與M-CSF特異性結合的人類單克隆抗體8. 10. 3F或其抗原結合部分。
5.一種可以與M-CSF特異性結合的人類單克隆抗體9. 14. 41或其抗原結合部分。
6.一種可以特異性結合併抑制人類M-CSF的人源化、嵌合的或人類單克隆抗體或其抗原結合部分，其中的抗體或其部分具有至少一種選自下列的特性(a)和選自下列的抗體交叉競爭與M-CSF結合抗體252、88、100、3.8. 3,2. 7. 3、I.120. 1,9. 14. 41,8. 10. 3F、9. 7. 2IF、9. 14. 4、8. 10. 3、9. 7. 2、9. 7. 2C_Ser、9. 14. 4C_Ser、8.10. 3C-Ser、8. 10. 3_CG2、9. 7. 2_CG2、9. 7. 2_CG4、9. 14. 4_CG2、9. 14. 4_CG4、9. 14. 4_Ser、9.7. 2-Ser、8. 10. 3_Ser、8. 10. 3_CG4、8. 10. 3FG1 及 9. 14. 4G1 ；(b)和選自下列的抗體競爭與M-CSF結合抗體252、88、100、3.8. 3、2. 7. 3、I.120. 1、9. 14. 41,8. 10. 3F、9. 7. 2IF、9. 14. 4、8. 10. 3、9. 7. 2、9. 7. 2C_Ser、9. 14. 4C_Ser、8.10. 3C-Ser、8. 10. 3_CG2、9. 7. 2_CG2、9. 7. 2_CG4、9. 14. 4_CG2、9. 14. 4_CG4、9. 14. 4_Ser、9.7. 2-Ser、8. 10. 3_Ser、8. 10. 3_CG4、8. 10. 3FG1 及 9. 14. 4G1 ；(c)與選自下列的抗體結合至相同的M-CSF表位抗體252、88、100、3.8. 3,2. 7. 3、I.120. 1,9. 14. 41,8. 10. 3F、9. 7. 2IF、9. 14. 4、8. 10. 3、9. 7. 2、9. 7. 2C_Ser、9. 14. 4C_Ser、8.10. 3C-Ser、8. 10. 3_CG2、9. 7. 2_CG2、9. 7. 2_CG4、9. 14. 4_CG2、9. 14. 4_CG4、9. 14. 4_Ser、9.7. 2-Ser、8. 10. 3_Ser、8. 10. 3_CG4、8. 10. 3FG1 及 9. 14. 4G1 ； (d)以與選自下列的抗體實質上相同的Kd值與M-CSF結合抗體252、88、100、3.8. 3,2. 7. 3,1. 120. 1,9. 14. 41,8. 10. 3F、9. 7. 2IF、9. 14. 4、8. 10. 3、9. 7. 2、9. 7. 2C_Ser、9. 14. 4C-Ser、8. 10. 3C_Ser、8. 10. 3_CG2、9. 7. 2_CG2、9. 7. 2_CG4、9. 14. 4_CG2、9. 14. 4—CG4、9. 14. 4-Ser、9. 7. 2_Ser、8. 10. 3_Ser、8. 10. 3_CG4、8. 10. 3FG1 及 9. 14. 4G1 ;及 (e)以與選自下列的抗體實質上相同的解離率與M-CSF結合抗體252、88、100、3.8. 3,2. 7. 3,1. 120. 1,9. 14. 41,8. 10. 3F、9. 7. 2IF、9. 14. 4、8. 10. 3、9. 7. 2、9. 7. 2C_Ser、9.14. 4C-Ser、8. 10. 3C_Ser、8. 10. 3_CG2、9. 7. 2_CG2、9. 7. 2_CG4、9. 14. 4-CG2、9.14. 4-CG49. 14. 4_Ser、9. 7. 2_Ser、8. 10. 3_Ser、8. 10. 3_CG4、8. 10. 3FG1 及 9. 14. 4G1。
7.一種可以與M-CSF特異性結合的單克隆抗體，其中的抗體選自下列 (a)包含SEQID NO :2所示的重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO :4所示的輕鏈胺基酸序列的抗體，無信號序列； (b)包含SEQID NO :6所示的重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO :8所示的輕鏈胺基酸序列的抗體，無信號序列；(C)包含SEQ ID NO :10所示的重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO : 12所示的輕鏈胺基酸序列的抗體，無信號序列； (d)包含SEQID NO: 14所示的重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO : 16所示的輕鏈胺基酸序列的抗體，無信號序列； (e)包含SEQID NO : 18所示的重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO :20所示的輕鏈胺基酸序列的抗體，無信號序列； (f)包含SEQID NO :22所示的重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO :24所示的輕鏈胺基酸序列的抗體，無信號序列； (g)包含SEQID NO :26所示的重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO :28所示的輕鏈胺基酸序列的抗體，無信號序列； (h)包含SEQID NO :38所示的重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO :28所示的輕鏈胺基酸序列的抗體，無信號序列； (i)包含SEQID NO :54所示的重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO :56所示的輕鏈胺基酸序列的抗體，無信號序列； (j)包含SEQ ID NO :74所示的重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO :56所示的輕鏈胺基酸序列的抗體，無信號序列； (k)包含SEQ ID NO :78所示的重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO :56所示的輕鏈胺基酸序 列的抗體，無信號序列； (I)包含SEQ ID NO :82所示的重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO :28所示的輕鏈胺基酸序列的抗體，無信號序列； (m)包含SEQ ID NO :102所示的重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO :28所示的輕鏈胺基酸序列的抗體，無信號序列； (n)包含SEQ ID NO :30所示的重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO :32所示的輕鏈胺基酸序列的抗體，無信號序列； (O)包含SEQ ID NO :30所示的重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO :44所示的輕鏈胺基酸序列的抗體，無信號序列； (P)包含SEQ ID NO :58所示的重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO :60所示的輕鏈胺基酸序列的抗體，無信號序列； (q)包含SEQ ID NO :62所示的重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO :60所示的輕鏈胺基酸序列的抗體，無信號序列； (r)包含SEQ ID NO :90所示的重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO :44所示的輕鏈胺基酸序列的抗體，無信號序列； (s)包含SEQ ID NO :94所示的重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO :60所示的輕鏈胺基酸序列的抗體，無信號序列； (t)包含SEQ ID NO :98所示的重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO :32所示的輕鏈胺基酸序列的抗體，無信號序列； (U)包含SEQ ID NO :34所示的重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO :36所示的輕鏈胺基酸序列的抗體，無信號序列； (V)包含SEQ ID NO :46所示的重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO :48所示的輕鏈胺基酸序列的抗體，無信號序列； (W)包含SEQ ID NO :50所示的重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO :52所示的輕鏈胺基酸序列的抗體，無信號序列； (X)包含SEQ ID NO :66所示的重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO :52所示的輕鏈胺基酸序列的抗體，無信號序列； (y)包含SEQ ID NO :70所示的重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO :52所示的輕鏈胺基酸序列的抗體，無信號序列 '及 (z)包含SEQ ID NO :86所示的重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO :48所示的輕鏈胺基酸序列的抗體，無信號序列。
8.根據權利要求I的人類單克隆抗體或其抗原結合部分，其中所述的抗體或抗原結合部分包含 (a)獨立選自下列的抗體的重鏈的重鏈⑶R1、⑶R2及⑶R3:單克隆抗體252、88、100、3. 8. 3,2. 7. 3,1. 120. 1,9. 14. 41,8. 10. 3F、9. 7. 2IF、9. 14. 4、8. 10. 3、9. 7. 2、9. 7. 2C_Ser、9. 14. 4C-Ser、8. 10. 3C_Ser、8. 10. 3_CG2、9. 7. 2_CG2、9. 7. 2_CG4、9. 14. 4_CG2、9. 14. 4—CG4、9. 14. 4-Ser、9. 7. 2_Ser、8. 10. 3_Ser、8. 10. 3_CG4、8. 10. 3FG1 及 9. 14. 4G1 ;或 (b)獨立選自選自下列下列的抗體的輕鏈的輕鏈CDR1、CDR2及CDR3:單克隆抗體252、88、100、3. 8. 3,2. 7. 3,1. 120. 1,9. 14. 41,8. 10. 3F、9. 7. 2IF、9. 14. 4、8. 10. 3、9. 7. 2、9. 7. 2C-Ser、9. 14. 4C_Ser、8. 10. 3C_Ser、8. 10. 3_CG2、9. 7. 2_CG2、9. 7. 2_CG4、9. 14. 4—CG2、9. 14. 4-CG4、9. 14. 4_Ser、9. 7. 2_Ser、8. 10. 3_Ser、8. 10. 3_CG4、8. 10. 3FG1 及 9. 14. 4G1。
9.一種可以特異性結合M-CSF的單克隆抗體或其抗原結合部分，其中 a)重鏈包含選自下列的抗體的重鏈CDR1、CDR2和CDR3:抗體252、88、100、3. 8. 3、2.7. 3,1. 120. 1,9. 14. 41,8. 10. 3F、9. 7. 2IF、9. 14. 4、8. 10. 3、9. 7. 2、9. 7. 2C_Ser、9. 14. 4C-Ser、8. 10. 3C_Ser、8. 10. 3_CG2、9. 7. 2_CG2、9. 7. 2_CG4、9. 14. 4_CG2、9. 14. 4—CG4、9. 14. 4-Ser、9. 7. 2_Ser、8. 10. 3_Ser、8. 10. 3_CG4、8. 10. 3FG1 及 9. 14. 4G1 ； b)輕鏈包含選自下列的抗體的重鏈⑶R1、⑶R2和⑶R3 :抗體252、88、100、3.8. 3,2. 7. 3,1. 120. 1,9. 14. 41,8. 10. 3F、9. 7. 2IF、9. 14. 4、8. 10. 3、9. 7. 2、9. 7. 2C_Ser、9. 14. 4C-Ser、8. 10. 3C_Ser、8. 10. 3_CG2、9. 7. 2_CG2、9. 7. 2_CG4、9. 14. 4_CG2、9. 14. 4—CG4、9. 14. 4-Ser、9. 7. 2_Ser、8. 10. 3_Ser、8. 10. 3_CG4、8. 10. 3FG1 及 9. 14. 4G1 ； c)該抗體包括(a)的重鏈及(b)的輕鏈；或者 d)(c)的抗體，其中的重鏈及輕鏈CDR胺基酸序列選自相同抗體
10.一種可以與M-CSF特異性結合的單克隆抗體或其抗原結合部分，其中的抗體包含 (a)重鏈，其包含選自下列的抗體中的重鏈的起自CDRl頭端至CDR3尾端的胺基酸序列抗體 252、88、100、3. 8. 3,2. 7. 3,1. 120. I. 9. 14. 41. 8. 10. 3F. 9. 7. 2IF、9. 14. 4,8. 10. 3、.9. 7. 2,9. 7. 2C-Ser、9. 14. 4C_Ser、8. 10. 3C_Ser、8. 10. 3_CG2、9. 7. 2_CG2、9. 7. 2-CG4、.9. 14. 4-CG2、9. 14. 4_CG4、9. 14. 4_Ser、9. 7. 2_Ser、8. 10. 3_Ser、8. 10. 3_CG4、8. 10. 3FG1 及.9. 14. 4G1 ； (b)輕鏈,其包含選自下列的抗體中的起自CDRl頭端至CDR3尾端的胺基酸序列抗體 252、88、100、3. 8. 3,2. 7. 3,1. 120. 1,9. 14. 41,8. 10. 3F、9. 7. 2IF、9. 14. 4、8. 10. 3、9. 7. 2、.9. 7. 2C-Ser、9. 14. 4C_Ser、8. 10. 3C_Ser、8. 10. 3_CG2、9. 7. 2_CG2、9. 7. 2_CG4、9. 14. 4—CG2、·9.14. 4-CG4、9. 14. 4_Ser、9. 7. 2_Ser、8. 10. 3_Ser、8. 10. 3_CG4、8. 10. 3FG1 及 9. 14. 4G1 ； (c)(a)的重鏈及(b)的輕鏈；或 (d)(a)的重鏈及(b)的輕鏈的胺基酸序列選自相同抗體。
11.如權利要求10的單克隆抗體或其抗原結合部分，其中該單克隆抗體或部分包含 (a)選自下列的抗體的重鏈可變區(VH)胺基酸序列，無信號序列抗體252、88、100、3.8. 3,2. 7. 3,1. 120. 1,9. 14. 41,8. 10. 3F、9. 7. 2IF、9. 14. 4、8. 10. 3、9. 7. 2、9. 7. 2C_Se r、9.14. 4C-Ser、8. 10. 3C_Ser、8. 10. 3_CG2、9. 7. 2_CG2、9. 7. 2_CG4、9. 14. 4_CG2、9. 14. 4—CG4、9.14. 4-Ser、9. 7. 2_Ser、8. 10. 3_Ser、8. 10. 3_CG4、8. 10. 3FG1 及 9. 14. 4G1 ； (b)選自下列的抗體的輕鏈可變區(VL)胺基酸序列，無信號序列抗體252、88、100、3.8. 3,2. 7. 3,1. 120. 1,9. 14. 41,8. 10. 3F、9. 7. 21 F、9. 14. 4、8. 10. 3、9. 7. 2、9. 7. 2C_Ser、9.14. 4C-Ser、8. 10. 3C_Ser、8. 10. 3_CG2、9. 7. 2_CG2、9. 7. 2_CG4、9. 14. 4_CG2、9. 14. 4—CG4、9.14. 4-Ser、9. 7. 2_Ser、8. 10. 3_Ser、8. 10. 3_CG4、8. 10. 3FG1 及 9. 14. 4G1 ； (c)(a)的VH胺基酸序列及(b)的VL胺基酸序列；或 (d)(a)的VH胺基酸序列及(b)的VL胺基酸序列，其中VH與VL是源自相同抗體。
12.—種多肽，其選自 a)包含SEQID NO 2的胺基酸序列的多肽，無信號序列； b)包含SEQID NO 6的胺基酸序列的多肽，無信號序列； c)包含SEQID NO 10的胺基酸序列的多肽，無信號序列； d)包含SEQID NO 14的胺基酸序列的多肽，無信號序列； e)包含SEQID NO 18的胺基酸序列的多肽，無信號序列； f)包含SEQID NO 22的胺基酸序列的多肽，無信號序列； g)包含SEQID NO 26的胺基酸序列的多肽，無信號序列； h)包含SEQID NO 30的胺基酸序列的多肽，無信號序列； i)包含SEQID NO 34的胺基酸序列的多肽，無信號序列； j)包含SEQ ID NO 38的胺基酸序列的多肽，無信號序列； k)包含SEQ ID NO 46的胺基酸序列的多肽，無信號序列； I)包含SEQ ID NO 50的胺基酸序列的多肽，無信號序列； m)包含SEQ ID NO 54的胺基酸序列的多肽，無信號序列； n)包含SEQ ID NO 58的胺基酸序列的多肽，無信號序列； 0)包含SEQ ID NO 62的胺基酸序列的多肽，無信號序列； P)包含SEQ ID NO 66的胺基酸序列的多肽，無信號序列； q)包含SEQ ID NO 70的胺基酸序列的多肽，無信號序列； r)包含SEQ ID NO 74的胺基酸序列的多肽，無信號序列； s)包含SEQ ID NO 78的胺基酸序列的多肽，無信號序列； t)包含SEQ ID NO 82的胺基酸序列的多肽，無信號序列； u)包含SEQ ID NO 86的胺基酸序列的多肽，無信號序列； V)包含SEQ ID NO 90的胺基酸序列的多肽，無信號序列； w)包含SEQ ID NO 94的胺基酸序列的多肽，無信號序列； X)包含SEQ ID NO 98的胺基酸序列的多肽，無信號序列；y)包含SEQ ID NO :102的胺基酸序列的多肽，無信號序列。
13.根據權利要求12的多肽，包含SEQID NO 30的胺基酸序列，無信號序列。
14.根據權利要求12的多肽，包含SEQID NO 26的胺基酸序列，無信號序列。
15.—種選自下列的多肽 a)包含SEQID NO 4的胺基酸序列的多肽，無信號序列； b)包含SEQID NO 8的胺基酸序列的多肽，無信號序列； c)包含SEQID NO : 12的胺基酸序列的多肽，無信號序列； d)包含SEQID NO 16的胺基酸序列的多肽，無信號序列； e)包含SEQID NO 20的胺基酸序列的多肽，無信號序列； f)包含SEQID NO 24的胺基酸序列的多肽，無信號序列； g)包含SEQID NO 28的胺基酸序列的多肽，無信號序列； h)包含SEQID NO 32的胺基酸序列的多肽，無信號序列； i)包含SEQID NO 36的胺基酸序列的多肽，無信號序列； j)包含SEQ ID NO 44的胺基酸序列的多肽，無信號序列； k)包含SEQ ID NO 48的胺基酸序列的多肽，無信號序列； I)包含SEQ ID NO 52的胺基酸序列的多肽，無信號序列； m)包含SEQ ID NO 56的胺基酸序列的多肽，無信號序列；及 n)包含SEQ ID NO 60的胺基酸序列的多肽，無信號序列。
16.根據權利要求15的多肽，包含SEQID NO 32的胺基酸序列，無信號序列。
17.根據權利要求15的多肽，包含SEQID NO 28的胺基酸序列，無信號序列。
18.—種可以與M-CSF特異性結合的單克隆抗體或其抗原結合部分，其中該抗體或其抗原結合部分包含選自由下列的抗體的一或多種FR1、FR2、FR 3或F4胺基酸序列抗體 252、88、100、3. 8. 3,2. 7. 3,1. 120. 1,9. 14. 41,8. 10. 3F、9. 7. 2IF、9. 14. 4、8. 10. 3、9.7. 2、9. 7. 2C-Ser、9. 14. 4C_Ser、8. 10. 3C_Ser、8. 10. 3-CG 2、9. 7. 2_CG2、9. 7. 2-CG4、9.14. 4-CG2、9. 14. 4_CG4、9. 14. 4_Ser、9. 7. 2_Ser、8. 10. 3_Ser、8. 10. 3_CG4、8. 10. 3FG1 及9.14. 4G1。
19.如權利要求I的人類單克隆抗體，其中的抗體包含 a)重鏈胺基酸序列，其與單克隆抗體252、88、100、3.8. 3,2. 7. 3,1. 120. 1,9. 14. 41、8.10. 3F、9. 7. 2IF、9. 14. 4、8. 10. 3、9. 7. 2、9. 7. 2C_Ser、9. 14. 4C_Ser、8. 10. 3C_Ser、8.10. 3-CG2、9. 7. 2_CG2、9. 7. 2_CG4、9. 14. 4_CG2、9. 14. 4_CG4、9. 14. 4_Ser、9. 7. 2_Ser、8.10. 3-Ser、8. 10. 3_CG4、8. 10. 3FG1或9. 14. 4G1的重鏈胺基酸序列至少90%相同，無信號序列； b)輕鏈胺基酸序列，其與單克隆抗體252、88、100、3.8. 3,2. 7. 3,1. 120. 1,9. 14. 41、8.10. 3F、9. 7. 2IF、9. 14. 4、8. 10. 3、9. 7. 2、9. 7. 2C_Ser、9. 14. 4C_Ser、8. 10. 3C_Ser、8.10. 3-CG2、9. 7. 2_CG2、9. 7. 2_CG4、9. 14. 4_CG2、9. 14. 4_CG4、9. 14. 4_Ser、9. 7. 2_Ser、8.10. 3-Ser、8. 10. 3_CG4、8. 10. 3FG1或9. 14. 4G1的輕鏈胺基酸序列至少90%相同，無信號序列；或 c)(a)的重鏈胺基酸序列及(b)的輕鏈胺基酸序列。
20.根據權利要求1-19任一項中的單克隆抗體或其抗原結合部分，其中所述抗體或抗原結合部分的重鏈C-末端賴氨酸不存在。
21.一種藥物組合物，其包含如權利要求1-20中任何一項的抗體或其抗原結合部分及藥物可接受載體。
22.權利要求21的藥物組合物，其中的抗體是單克隆抗M-CSF抗體9.14.41或8.10. 3F。
23.治療受試者包括人體中選自下述病況的方法關節炎、牛皮癬性關節炎、強直性脊柱炎、萊特氏症候群、類風溼性關節炎、痛風、創傷性關節炎、風疹關節炎及急性滑膜炎與其它關節炎病況、膿毒症、膿毒性休克、內毒素休克、革蘭氏陰性膿毒症、中毒性休克症候群、阿爾茨海默氏病、中風、神經創傷、哮喘、成人呼吸道窘迫症候群、腦型瘧、慢性肺炎性疾病、矽肺、肺部類肉瘤病、骨質再吸收疾病、骨質疏鬆症、再狹窄、心臟及腎臟再灌注傷害、血栓形成、腎小球腎炎、糖尿病、移植物與宿主的反應、同種異體移植物排斥、炎性腸病、局限性迴腸炎、潰瘍性結腸炎、多發性硬化症、肌肉變性、溼疹、接觸性皮炎、牛皮癬、曬傷及結膜炎性休克，所述方法包括給予有此需要的所述受試者治療有效量的權利要求1-20任一項中的抗體或其抗原結合部分或權利要求21-22的藥物組合物的步驟，其中所述抗體或部分抑制 M-CSF。
24.如權利要求23的方法，其中的病況為類風溼性關節炎。
25.權利要求23或24的方法，其中使用的抗體是單克隆抗M-CSF抗體8.10. 3F或9.14. 41。
26.治療受試者包括人體中的實體腫瘤,例如肉瘤、癌或淋巴瘤的方法,其包括給予所述受試者根據權利要求1-20任一項的抗體或抗原結合部分或權利要求21-22任一項的藥物組合物，其中所述的抗體或抗原結合部分抑制M-CSF結合c-fms。
27.一種分離細胞系，其可以產生如權利要求1-20中任何一項的抗體或其抗原結合部分或該抗體或該抗原結合部分的重鏈或輕鏈。
28.如權利要求27的細胞系，其可產生選自下列的抗體抗體252、88、100、3.8. 3、2.7. 3,1. 120. 1,9. 14. 41,8. 10. 3F、9. 7. 2IF、9. 14. 4、8. 10. 3、9. 7. 2、9. 7. 2C_Ser、9.14. 4C-Ser、8. 10. 3C_Ser、8. 10. 3_CG2、9. 7. 2_CG2、9. 7. 2_CG4、9. 14. 4_CG2、9. 14. 4—CG4、9.14. 4-Ser、9. 7. 2_Ser、8. 10. 3_Ser、8. 10. 3_CG4、8. 10. 3FG1 及 9. 14. 4G1,及具有如前所述抗體中任一個相同胺基酸序列的抗體。
29.分離的核酸分子，其包含編碼根據權利要求1-20中任一項的抗體的重鏈或其抗原結合部分或輕鏈或其抗原結合部分的核苷酸序列。
30.包含權利要求29的核酸分子的載體，其中該載體任選地包含與所述核酸分子可操作性連接的表達控制序列。
31.宿主細胞,其包含權利要求30的載體或權利要求29的核酸分子。
32.權利要求31的宿主細胞，其包含編碼權利要求1-20任一項中的抗體或其抗原結合部分的重鏈的核酸分子和編碼權利要求1-20任一項中的抗體或其抗原結合部分的輕鏈的核酸分子。
33.一種製備抗M-CSF抗體或其抗原結合部分的方法，其包括於適當條件下培養如權利要求32的宿主細胞或權利要求28的細胞系及回收該抗體或抗原結合部分。
34.製備可以特異性結合M-CSF的人類單克隆抗體的方法，其包括步驟a)用M-CSF、M-CSF的免疫原性部分或表達M-CSF的細胞或組織免疫能產生人類抗體的非人轉基因動物； b)使所述的轉基因動物產生對M-CSF的免疫應答；並且 c)從所述的轉基因動物分離B淋巴細胞。
全文摘要
本發明涉及可與M-CSF(優選為人類M-CSF)特異性結合併發揮抑制M-CSF的作用的抗體及其抗原結合部分。本發明還涉及人類抗M-CSF的抗體及其抗原結合部分。本發明還涉及抗體，其可為嵌合的、雙特異性(bispecific)的、衍生的、單鏈抗體或融合蛋白的部分。本發明還涉及來自人類抗M-CSF抗體的分離的重鏈及輕鏈免疫球蛋白及編碼此種免疫球蛋白的核酸分子。本發明還涉及製備人類抗M-CSF抗體的方法、包含這些抗體的組合物及使用該抗體與組合物用於診斷及治療的方法。本發明還提供使用編碼重鏈及/或輕鏈免疫球蛋白分子的核酸分子的基因療法，其中該免疫球蛋白包括人類抗M-CSF抗體。本發明還涉及包含本發明核酸分子的轉基因動物及轉基因植物。
文檔編號A61P31/04GK102807617SQ201210133918
公開日2012年12月5日 申請日期2004年9月9日 優先權日2003年9月10日
發明者瓦埃·拜帝恩, 梅德亥·那拉辛亥·黛維拉雷傑, 約瑟·艾德文·羅, 詹姆斯·雷司裡·摩伯雷, 西瑞德-艾咪·凱勒曼, 岸恩·福爾茨, 瑪麗·哈克-福倫德丘 申請人:沃尼爾·朗伯有限責任公司, 安進弗裡蒙特公司