軟棗獼猴桃組織培養方法

2023-05-30 18:41:21 1

專利名稱：軟棗獼猴桃組織培養方法
技術領域：
本發明涉及到東北地區的一種漿果的無性繁殖方法，即軟棗獼猴桃的組織培養法。本發明屬於植物 組織培養技術和森林培育領域。
背景技術：
軟棗獼猴桃果實是一種珍稀的、天然的、綠色的可食用漿果，因其潛在的營養價值和商用價值，是一 種世界珍稀的、純天然的、綠色的可食用漿果，是極具有開發前景的第三代水果之一。然而由於無計劃掠 奪式的採摘，致使軟棗獼猴桃資源遭到嚴重破壞，自然修復能力降低，蘊藏量和可採量銳減，供需矛盾日 益加劇。
我國軟棗獼猴桃的育苗技術主要是無性繁殖(即分株、壓條、硬枝扦插、綠枝扦插)等技術，利用組 培技術繁育軟棗獼猴桃的資料極少。査閱大量相關資料發現，只有劉瑞林曾於2001年發表過組織培養方 面的簡報。但軟冬獼猴桃組織培養體系尚未建立，優良品種的推廣普及尚未完成，苗木供求矛盾日益加劇， 嚴重影響了軟棗獼猴桃深加工業的發展。2007年我所對軟棗獼猴桃組織培養體系進行了系統地研究。

發明內容
本發明對軟棗獼猴桃採用組織培養技術，以休眠枝條水培後萌發的嫩枝為外植體，經外植體滅菌、嫩 芽接種、分化增殖培養基篩選、生根培養基篩選等步驟，研究培養過程中試管苗的營養需求、激素對苗木 生長分化的調控，解決軟棗獼猴桃的微體快速增殖、誘導生根的重要技術問題，建立了完善的軟棗獼猴桃 組織培養體系，達到了高效誘導外植體分化增殖和高質量保證幼苗成活的目的，並且保存了母體的全部優 良性狀，遺傳性狀穩定。這種方法可在短期內形成大量優良試管苗，進行規模化、工廠化生產。


圖l軟棗獼猴桃水培嫩芽接種IO天的長勢情況，葉片展開，葉色濃綠
圖2 a部分處理繼代增殖培養25天分化的試管苗數 b不同處理繼代增殖培養25天試管苗苗高 圖3 a軟棗獼猴桃四種生根處理培養30天，只有處理l未見生根，其餘3個處理均已生根，其中處理4 的生根狀況為最好，生根率達87.0%。
具體實施例方式
以軟棗獼猴桃休眠枝條經水培後萌發的嫩枝為外植體，具體由以下四個步驟組成-
(1) 外植體滅菌首先採用常規法將水培抽出的嫩芽用洗衣粉溶液洗淨，然後用0. 1%升汞滅菌5 分鐘，以無菌水浸泡40分鐘；
(2) 接種在無菌的條件下將嫩芽接種在初代培養基上，該培養基是在MS常規培養基中添加了 0. 5mg/L的6-節基腺嘌呤(6-BA) 、 lmg/L的赤黴素(GA3) ， PH5.8,培育基礎苗。培養溫度為25土2'C， 光照周期12h/d，光強度為20001ux，待培養20天後，苗高約3 4cm，即開始下一個階段；
(3) 繼代增殖將基礎苗轉移到繼代增殖培養基上進行增殖培養。以MS+6-BA (0.5mg/L、 lmg/L) +ZT (0.5mg/L、 lmg/L)或IAA (0. 5mg/L、 lmg/L ) 8種培養基進行篩選，培養溫度為25土2'C,光照周期 12h/d，光強度為20001ux，培養30天。結果最佳增殖培養基是在MS常規培養基中添加了 0.5mg/L的6-苄基腺嘌呤(6-BA) 、 lmg/L的玉米素(ZT);培養25天，增殖倍數達4.0;
(4) 生根剪取增殖培養中長度為1. 5 2. Ocm的健壯苗接種到四種生根培養基上，採用單因素試驗 設計進行生根培養篩選。培養溫度為25士2'C，光照周期12h/d，光強度為20001ux。結果在MS培養基中 添加了0.2mg/L的吲哚丁酸(IBA)的培養基生根效果最好，在培養30天生根率達87. 0% 。
權利要求
軟棗獼猴桃(Actinidia arguta)的組織培養方法，其特徵在於由以下四個步驟組成1.外植體滅菌 採用常規法將水培抽出的嫩芽用洗衣粉溶液洗淨，然後在超靜工作檯中用0.1％升汞滅菌5分鐘，以無菌水浸泡40分鐘；2.接種 在無菌的條件下將嫩芽接種在初代培養基上，該培養基是在MS常規培養基中添加了0.5mg/L的6-苄基氨基嘌呤(6-BA)、1mg/L的赤黴素(GA3)，PH 5.8，培養溫度為25±2℃，光照周期12h/d，光強度為2000lux，待培養20天後，苗高約3～4cm，即開始下一個階段；3.繼代增殖 將所得的苗木轉移到增殖培養基上進行增殖，該培養基是在MS常規培養基中添加了0.5mg/L的6-苄基腺嘌呤(6-BA)、1mg/L的玉米素(ZT)，PH 5.8，培養溫度為25±2℃，光照周期12h/d，光強度為2000lux，培養25天，增殖倍數達4.0；4.生根 剪取增殖培養中長度為1.5～2.0cm的健壯苗接種到生根培養基，該培養基是在MS培養基中，添加了0.2mg/L的吲哚丁酸(IBA)，PH 5.8，培養溫度為25±2℃，光照周期12h/d，光強度為2000lux，30天生根率達87.0％。
1. 外植體滅菌採用常規法將水培抽出的嫩芽用洗衣粉溶液洗淨，然後在超靜工作檯中用0. 1%升汞滅 菌5分鐘，以無菌水浸泡40分鐘；
2. 接種在無菌的條件下將嫩芽接種在初代培養基上，該培養基是在MS常規培養基中添加了 0.5mg/L 的6-苄基氨基嘌呤(6-BA) 、 lmg/L的赤黴素(GA3) ， ffl5.8，培養溫度為25士2。C，光照周期12h/ d，光強度為20001ux,待培養20天後，苗高約3 4cm，即開始下一個階段；
3. 繼代增殖將所得的苗木轉移到增殖培養基上進行增殖，該培養基是在MS常規培養基中添加了 0. 5mg/L的6-苄基腺嘌呤(6-BA) 、 lmg/L的玉米素(ZT) ， PH 5.8，培養溫度為25士2。C，光照周 期12h/d，光強度為20001ux，培養25天，增殖倍數達4. 0;
4. 生根剪取增殖培養中長度為1. 5 2. Ocm的健壯苗接種到生根培養基，該培養基是在MS培養基中， 添加了 0. 2mg/L的吲哚丁酸(IBA)， PH 5. 8，培養溫度為25土2。C，光照周期12h/ d ,光強度為20001ux, 30天生根率達87.0% 。
全文摘要
本發明屬於植物組織培養技術和森林培育領域，涉及軟棗獼猴桃(Actinidia arguta)的高效繁殖方法。該方法分為外植體滅菌、接種、繼代增殖、生根四個階段。該方法解決了軟棗獼猴桃的微體快速增殖、誘導生根的重要技術問題，達到了高效誘導外植體分化增殖和高質量保證幼苗成活的目的，並且保存了母體的全部優良性狀，遺傳性狀穩定。這種方法可在短期內形成大量優良試管苗，進行規模化、工廠化生產。
文檔編號A01H4/00GK101574056SQ20081006446
公開日2009年11月11日 申請日期2008年5月8日 優先權日2008年5月8日
發明者蘭世波, 周志軍, 李海霞, 田新華, 邢亞娟 申請人:黑龍江省林業科學研究所