一種紫杉醇粗提物的製備方法
2023-05-31 04:13:46 1
一種紫杉醇粗提物的製備方法
【專利摘要】本發明公開了一種紫杉醇粗提物的製備方法。它首先將硝酸銨溶液與甲醇復配後製成混合溶液M1；將紅豆杉屬植物的組織加入溶液M1，攪拌浸提、壓濾除去糟渣後，將濾液加入萃取相M2(乙酸乙酯：丙酮＝1：1)，攪拌，靜置；待完全分層後，去除下部雜質部分，留上層油相溶液；收集上層油相溶液減壓濃縮，在濃縮液中加入反萃取相溶劑石油醚，當石油醚加完後，出現絮狀沉澱，離心去除溶劑後收集沉澱物；將沉澱物真空乾燥後得到紫杉醇粗提物。所得紫杉醇粗提物中紫杉醇含量為≥0.095％。本發明的提取方法簡單，收率高和純度高，溶劑用量少，設備要求不高，便於大規模生產。
【專利說明】一種紫杉醇粗提物的製備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種提取方法，尤其是涉及一種紫杉醇粗提物的製備方法。
【背景技術】
[0002]紫杉醇，英文名稱Paclitaxel，別名泰素，紫素，特素，化學名稱5 β，20-環氧-1，2α，4，7 0，10 0，13 0-六羥基紫杉烷-11-烯-9-酮-4，10-二乙酸酯_2_苯甲酸酯-13 [ (2，R，3，S) -N-苯甲醯-3-苯基異絲氨酸酯]，分子量853.92，分子式C47H51NO140它是紅豆杉屬植物中的一種 複雜的次生代謝產物，也是目前所了解的惟一一種可以促進微管聚合和穩定已聚合微管的藥物。紫杉醇目前主要應用於卵巢癌和乳腺癌的治療，對肺癌、大腸癌、黑色素瘤、頭頸部癌、淋巴瘤和腦瘤也都有一定療效。因此，紫杉醇原料藥的生產具有廣闊的市場前景！
[0003]目前，紫杉醇的獲取方式有:天然提取、人工合成、半人工合成和生物發酵。後三種方法大都停留在實驗室階段。天然提取方法主要有以下四種:溶劑萃取、超臨界萃取、超聲萃取和微波萃取，其中溶劑萃取研究的最多，也較為成熟。溶劑萃取法常用於紫杉醇的粗提階段，溶劑萃取後得到的粗提物進一步採用柱層析等方法進行分離精製可以得到純度較高的產品。日本學者對紫杉醇提取的溶劑種類進行了詳細的研究，結果表明:在乙酸乙酯、乙醚、乙腈、丙酮、甲醇、已烷、異丙醇、乙酸乙酯-甲醇、乙酸乙酯-二氯甲烷、乙酸乙酯-丙酮、乙酸乙酯-乙醚等溶劑中，以乙酸乙酯-丙酮(1:1)混和溶劑提取的效果最好，所得浸膏僅為植物乾重的7.70%，紫杉醇的含量高達浸膏的0.084%，而用甲醇提取所得浸膏為植物乾重的20.98%，紫杉醇的含量為浸膏的0.027%,尚需要多次抽提才能得到紫杉醇含量較聞的浸骨。
[0004]目前，國內外溶劑法提取紫杉醇主要用水作為分液相，用乙酸乙酯及丙酮或甲醇作為萃取相，蒸汽吹渣，其用量都是濾液的3-4倍。它主要存在的問題是:1、用水和甲醇作為分液相，其中的胺基酸、蛋白質、核酸、多糖、醇類、醛類、生物鹼、有機酸等多種有機物質難以得到分離，影響純度；2、單一溶劑作為萃取相和反萃取相，溶劑用量過大，需要大量溶劑和巨型設備，在溶劑回收上投資和能耗加大，成本上升！ 3、提純產物的純度低，一次性提取純度低於0.05%。
【發明內容】
[0005]本發明克服了上述現有技術的不足，提供了一種紫杉醇粗提物的製備方法。該方法簡單、收率和純度高,設備要求不高,便於大規模生產。
[0006]本發明的技術方案:一種紫杉醇粗提物的製備方法，其特徵是，
[0007](I)用純淨水配製濃度為5-30%的硝酸銨溶液Dl，調節pH值6.5±0.2，加入甲醇(^ 98% )混合，製成混合溶液Ml，備用:所述Ml中按體積比計，Dl:甲醇=1:1_9 ；
[0008](2)將紅豆杉屬植物的組織(葉子、皮等)乾燥粉碎至90-100目，加入其質量2-3.5倍的溶液M1，攪拌浸提1.5-3小時後，壓濾除去糟渣，將濾液加入其體積0.8-1.2倍的萃取相M2 (按體積比計，乙酸乙酯:丙酮=1:1)，攪拌0.5-2小時，靜置；
[0009](3)待完全分層後，去除下部雜質部分，留上層油相溶液；
[0010](4)收集上層油相溶液，50_55°C下減壓濃縮，當濃縮液體積為所收集的油相體積的1/6-1/4倍時，停止濃縮；
[0011](5)在濃縮液中加入其體積3-6倍的反萃取相溶劑石油醚，邊加邊攪拌；石油醚加完後，出現絮狀沉澱，離心去除溶劑，收集沉澱物；
[0012](6)將沉澱物置於40_45°C真空乾燥，即可獲得紫杉醇膏狀物質，即為紫杉醇粗提物。所得紫杉醇粗提物中紫杉醇含量> 0.095%。
[0013]優選地，所述步驟(1)中，Dl:甲醇=1:4。
[0014]優選地，所述步驟(1)中，硝酸銨溶液的濃度為15-25%，更優選地，所述硝酸銨溶液的濃度為20%。
[0015]優選地，所述步驟(2)將紅豆杉的樹皮乾燥粉碎至90-100目，加入質量3倍的Ml，攪拌浸提2小時後，壓濾除去糟渣，將濾液加入等體積的萃取相M2，攪拌50分鐘，靜置。
[0016]優選地，所述步驟(4)當濃縮液體積為所收集的油相體積1/5時，停止濃縮。
[0017]優選地，所述步驟(5 )在濃縮液中加入其體積5倍的反萃取相溶劑石油醚。
[0018]上述紫杉醇粗提物進一步採用柱層析、樹脂吸附分離等方法進行分離精製可以得到純度較高的紫杉醇產品。
[0019]本發明通過試驗表明:硝酸銨溶液與甲醇混合液Ml中Dl:甲醇=1:4最穩定，油相與水相分層最好，產率最高，因此，該配比為穩定值。而不同僅硝酸銨含量對紫杉醇提取指標的影響是不同的，見表1。
[0020]表1不同僅硝銨含量對紫杉醇提取指標的影響(紅豆杉樹皮)
[0021]
【權利要求】
1.一種紫杉醇粗提物的製備方法，其特徵是， (1)用純淨水配製濃度為5-30wt%的硝酸銨溶液D1，調節pH值6.5±0.2，加入甲醇混合，製成混合溶液M1，備用:所述Ml中按體積比計，Dl:甲醇=1:1-9 ； (2)將紅豆杉屬植物的組織乾燥粉碎至90-100目，加入其質量2-3.5倍的溶液M1，攪拌浸提1.5-3小時後，壓濾除去糟渣；將濾液加入其體積0.8-1.2倍的萃取相M2，攪拌0.5-2小時，靜置；所述萃取相M2按體積比計，乙酸乙酯:丙酮=1:1 ； (3)待完全分層後，去除下部雜質部分，留上層油相溶液； (4)收集上層油相溶液，50-55°C下減壓濃縮，當濃縮液體積為所收集的油相體積的1/6-1/4倍時，停止濃縮； (5)在濃縮液中加入其體積3-6倍的反萃取相溶劑石油醚，邊加邊攪拌；石油醚加完後，出現絮狀沉澱，離心去除溶劑，收集沉澱物； (6)將沉澱物置於40-45°C真空乾燥，獲得紫杉醇粗提物。
2.如權利要求1所述的一種紫杉醇粗提物的製備方法，其特徵是，所述步驟(1)中，Ml中按體積比計，Dl:甲醇=1:4。
3.如權利要求2所述的一種紫杉醇粗提物的製備方法，其特徵是，所述步驟(1)中，硝酸銨溶液的濃度為15- 25wt%。
4.如權利要求3所述的一種紫杉醇粗提物的製備方法，其特徵是，所述硝酸銨溶液的濃度為20wt%。
5.如權利要求1-4中任意一項所述的一種紫杉醇粗提物的製備方法，其特徵是，所述步驟(2)將紅豆杉的樹皮乾燥粉碎至90-100目，加入其質量3倍的M1，攪拌浸提2小時後，壓濾除去糟渣，將濾液加入等體積的萃取相M2，攪拌50分鐘，靜置。
6.如權利要求1-4中任意一項所述的一種紫杉醇粗提物的製備方法，其特徵是，所述步驟(4)當濃縮液體積為所收集的油相體積1/5時，停止濃縮。
7.如權利要求6所述的一種紫杉醇粗提物的製備方法，其特徵是，所述步驟(5)在濃縮液中加入其體積5倍的反萃取相溶劑石油醚。
【文檔編號】C07D305/14GK104031008SQ201410300569
【公開日】2014年9月10日 申請日期:2014年6月30日 優先權日:2014年6月30日
【發明者】牛兆穎, 牛贍光 申請人:牛兆穎