一種抗破傷風藥物及其製備方法
2023-05-30 20:55:01
專利名稱：一種抗破傷風藥物及其製備方法
破傷風是一種急性、特異性、感染性疾病，其發病機理為破傷風桿菌在化膿菌感染的傷口中，繁殖產生的外毒素——神經毒素有選擇地作用於神經系統，引起脊髓前角細胞中毒，從而發生伸肌痙攣性收縮，呈角弓反張強直狀態的破傷風特有的抽搐症狀。常用治療方法為運用抗菌藥物、破傷風抗毒素(TAT)與免疫球蛋白預防和治療。然而，注射破傷風抗毒素雖療效肯定，卻有人體過敏現象，使得對破傷風抗毒素過敏的人群因無法注射破傷風抗毒素而失去應有的保護。傳統抗破傷風藥劑由於多使用天南星而毒性較大，使其使用受到限制。
本發明的目的是提供一種抗破傷風注射液，使其具有不需要皮試，可直接肌肉注射，即可起到預防和治療的作用，不發生過敏反應等優點，使對破傷風抗毒素過敏的人群也能得到保護，同時使其具有安全無毒的特點，克服傳統藥劑毒性大的不足。
本發明提供的抗破傷風注射液的具體實施方案是本發明抗破傷風藥物是由防風、膽南星和藥劑學上可接受的載體、賦形劑和/或添加劑製成的藥劑，其中防風、膽南星的重量配比是1比1，該藥劑是任何一種藥劑學上所說的劑型，特別是注射液。
本發明抗破傷風藥物注射液的製備方法是1)取膽南星，用蒸餾水洗淨後，加適量蒸餾水浸泡過夜；2)取防風，洗淨，加適量蒸餾水浸漬1小時，按水蒸汽蒸餾法收集蒸餾液，將餾液進行重蒸餾，收集蒸餾液，藥渣及藥液留用；3)取浸泡過夜的膽南星，搗碎成小塊，加入提取防風的藥渣，分別加藥材的6～10、4～6倍量蒸餾水，煎煮二次，第一次1～2小時，第二次0.5～1小時，將所得藥液合併，加入上述提取防風的藥液，此所得藥液每ml相當於1g生藥；4)將所得藥液濃縮至相對密度為1.05～1.20(50℃測)，依次加乙醇至含醇量為60～65％、70～75％、80～85％，每次加乙醇後室溫放置24小時以上，濾過，濾液回收乙醇，藥液加活性炭煮沸10～15分鐘，過濾，加入蒸餾液、氯化鈉、苯甲醇、吐溫-80，攪拌溶解濾過，加注射水至全量，調節PH值為7.0～8.0，冷藏過夜，次日抽濾後，用微孔濾膜(0.6～1.0μm)過濾至澄明，灌裝入2ml/支的安瓿，熔封，100℃30min滅菌，即得本發明抗破傷風注射液。
本發明抗破傷風注射液為深褐色澄明液體，每毫升本發明抗破傷風注射液相當於生藥0.4g，臨床人用量為一次4ml肌肉注射，用於外傷後破傷風的預防和治療。
本發明抗破傷風注射液不需要皮試，直接肌肉注射，即可起到預防和治療的作用。該藥經實驗研究和臨床應用證明為無毒、安全、有效的抗破傷風藥物。本發明抗破傷風注射液安全性大於TAT，臨床應用未見注射後感染破傷風的病例，無過敏反應，安全可靠，體外抑菌實驗結果表明，本發明藥物對破傷風桿菌有抑制作用，體內實驗結果表明，對實驗小鼠破傷風的發病具有保護作用。其安全無毒的特點克服了傳統抗破傷風中藥製劑毒性大的缺點；其無過敏反應的特點則克服了目前廣泛使用的TAT具有過敏反應之不足，使對TAT過敏的患者能的到有效的治療和預防。
本發明抗破傷風注射液的有關實驗資料1.本發明抗破傷風注射液急性毒性試驗分別按處方1、2製成兩種抗破傷風注射液，處方1天南星、防風；處方2膽南星、防風，分別編號為1號組、2號組，按本發明提供的方法分別製成注射液，兩者均一次皮下注射給藥，測定LD50。結果表明1號組測得LD50為12.27g生藥/kg，2號組為38.81g生藥/kg。由本發明藥物處方2製成的製劑毒性作用明顯小於使用天南星的傳統處方1製成的製劑。[受試藥物]1號注射液其處方為天南星(泡7次)、防風。
2號注射液，其處方為膽南星、防風。[動物]昆明種小鼠，體重19～21g，雌雄各半，由湖北省衛生防疫站提供，動物質量合格證編號20000311。實驗動物室溫度20～22℃，相對溼度50％。[試驗方法]小鼠按性別、體重隨機分組。給藥前小鼠不禁食，一次皮下注射不同濃度藥物，記錄動物的反應和死亡情況。[試驗結果]給藥20分鐘後，兩組小鼠均出現精神不振，活動減少，俯臥不動，呼吸深慢，被毛鬆弛等症狀。1號組症狀20分鐘後消失，2號組症狀30分鐘後消失，小鼠恢復正常活動。
所測得LD50值具體結果見表1表1 兩種抗破傷風注射液LD50值測定1號注射液 2號注射液劑量動物數 死亡數 死亡率 劑量 動物數 死亡數 死亡率g生藥/kg (％) g生藥/kg (％)8.0 10 0 0 28.0 10 0 010.0 10 2 20 32.0 10 1 1012.0 10 5 50 36.0 10 3 3014.0 10 6 60 40.0 10 5 5016.0 10 9 90 44.0 10 8 80
18.0101010048.01010100以改良寇氏法設計並統計處理，結果為1號組LD50值為12.27g生藥/kg，2號組LD50值為38.81g生藥/kg。
死亡動物屍檢結果顯示，未見臟器有明顯異常。[試驗結論]通過兩組製劑的急性毒性試驗比較，結果顯示，1號組測得LD50為12.27g生藥/kg，2號組測得LD50為38.81g生藥/kg。可見，由處方1、處方2製成的1號注射液、2號注射液在毒性反應上，2號組毒性明顯低於1號組，即使用膽南星的本發明藥劑與使用天南星的傳統組方相比更具有安全性，更符合臨床用藥的要求。
2.本發明抗破傷風注射液過敏反應觀察1)抗破傷風注射液致I型變態反應觀察小鼠腹腔注射抗破傷風注射液，以破傷風抗毒素(以下簡稱TAT)為對照，觀察試驗小鼠I型變態反應發生率。結果表明，TAT組致I型變態反應發生率為30％，死亡率為5％；抗破傷風注射液組致I型變態反應發生率為5％，死亡率基本為0。該注射液的安全性明顯優於TAT組。[受試藥物]TAT，批號為990918-17，購於武漢市生物製品檢定所。其用量按人和小鼠體表面積比換算，使用時將原藥液按1∶200稀釋。
本發明抗破傷風注射液，其用量按人和小鼠體表面積比換算，使用時將原藥液按1∶0.5稀釋。[試驗動物]昆明種小鼠，體重20±1g，雌雄各半，由湖北省衛生防疫站提供，動物質量合格證編號為20000311。實驗動物室溫度為20～22℃。[試驗方法]小鼠按性別、體重隨機分兩組，每組20隻。分別腹腔注射TAT與抗破傷風注射液各0.5ml，使動物致敏。四周後，再分別腹腔注射同等劑量的TAT及抗破傷風注射液，記錄動物的反應及死亡情況。[試驗結果]實驗動物在注射後出現I型變態反應，輕度反應可表現為聳毛，肌肉鬆弛，精神不振；重度反應可表現為大、小便失禁，驚厥，甚至死亡。根據動物的反應，將實驗記錄結果分為輕度、重度、死亡。具體結果見表2表2 TAT與抗破傷風注射液致I型變態反應結果比較項目 動物數 出現不同反應動物數(只)組別 (只)輕度 重度 死亡 發生率(％) 死亡率(％)TAT組 20 3 2 1 30 5抗破組 20 1 0 0 50X2＝4.33 p＜0.05[試驗結論]由上表可見，TAT組I型變態反應發生率為30％，死亡率為5％；抗破傷風注射液組I型變態反應發生率為5％，死亡率為0。兩組數據經統計學分析，差異有顯著性意義。其結果表明，本發明抗破傷風注射液安全性大於TAT。
2)抗破傷風注射液致IV型變態反應(皮膚浸潤反應)觀察小鼠皮下注射抗破傷風注射液，以TAT為對照，觀察試驗小鼠IV型變態反應情況。結果表明，抗破傷風注射液組致IV型變態反應所致皮膚硬結明顯小於TAT組，即其安全性明顯優於TAT組。TAT，批號為990918-17，購於武漢市生物製品研究所。其用量按人和小鼠體表面積比換算，使用時將原藥液按1∶200稀釋。
本發明抗破傷風注射液，其用量按人和小鼠體表面積比換算，使用時將原藥液按1∶50稀釋。[實驗動物]昆明種小鼠，體重20±1g，雌雄各半，由湖北省衛生防疫站提供，動物質量合格證編號為20000311。實驗動物室溫度為20～22℃。[試驗方法]小鼠按性別、體重隨機分兩組，每組20隻。分別於腹腔注射TAT與抗破傷風注射液各0.5ml，使動物致敏。八周後，將已致敏的小鼠背毛剃除，兩組小鼠分別背部皮下注射與上次同等劑量的TAT或抗破傷風注射液，48小時後，觀察並記錄動物注射部位體表皮膚的反應。[試驗結果]實驗動物在注射後出現IV型變態反應，表現為皮膚出現紅斑、硬結，測量其大小並作記錄。具體結果見表3表3 TAT與抗破傷風注射液皮膚浸潤反應比較皮膚浸潤反應(mm)編號TAT組 抗破組1 4.0 3.32 4.8 3.33 5.1 4.14 4.3 3.35 4.0 1.86 3.5 2.87 2.5 2.38 3.0 1.89 5.0 2.710 4.3 2.211 4.7 1.812 4.7 3.313 2.2 1.314 3.7 1.215 1.8 1.216 0.5 0.8
17 3.5 2.218 1.8 1.519 4.1 4.320 5.1 3.3t＝3.29p＜0.05將兩組數據進行統計學處理，其結果顯示TAT組與抗破傷風注射液組差異有顯著性意義。[試驗結論]該試驗結果顯示，TAT組和抗破傷風注射液組對實驗小鼠致IV型變態反應結果差異有顯著性意義，因此，本發明抗破傷風注射液的安全性大於TAT。
3.本發明抗破傷風注射液對實驗小鼠破傷風發病的保護性觀察以TAT為對照，比較抗破傷風注射液對實驗小鼠破傷風發病的保護性作用。結果表明，抗破傷風注射液對感染破傷風桿菌的實驗小鼠有較好的保護作用。[試驗目的]觀察抗破傷風注射液對實驗小鼠破傷風發病的保護性作用。[受試藥物]TAT，批號為990918-17，購於武漢市生物製品檢定所。其用量按人與小鼠體表面積比換算，使用時將原藥液按1∶200稀釋。
抗破傷風注射液，由武漢市第一醫院製備並提供。其用量按人與小鼠體表面積比換算，使用時將原藥液按1∶50稀釋。[實驗動物]昆明種小鼠，體重20±1g，雌雄各半，由湖北省衛生防疫站提供，動物質量合格證編號為20000311。實驗動物室溫度為20～22℃。該實驗動物採用附件3中已剔除出現變態反應的小鼠進行實驗。[試驗方法](1)昆明種小鼠30隻，隨機分兩組，於實驗前分別注射TAT和抗破傷風注射液各0.5ml，再在其後肢傷口上塗抹破傷風桿菌培養原液，觀察並記錄感染動物10小時內發生驚厥反應及死亡的情況。
(2)昆明種小鼠30隻，隨機分兩組，先在其背部塗抹破傷風桿菌，分別給兩組小鼠注射TAT和抗破傷風注射液各0.5ml，觀察並記錄感染動物10小時內發生驚厥反應及死亡情況。[試驗結果](1)實驗動物感染破傷風桿菌前注射TAT和抗破傷風注射液，觀察二者對小鼠的保護性作用，具體結果見表4表4 抗破傷風注射液對實驗動物的保護性觀察(感染前注射)類別動物數 驚厥反應動物數 死亡動物數死亡率(％)TAT組 15 00 0抗破組15 54 27(2)實驗動物感染破傷風桿菌後注射TAT和抗破傷風注射液，觀察二者對小鼠的保護性作用，具體結果見表5表5 抗破傷風注射液對實驗動物的保護性觀察(感染後注射)類別動物數 驚厥反應動物數 死亡動物數 死亡率(％)TAT組 15 0 0 0抗破組15 5 5 33[試驗結論]通過本發明抗破傷風注射液對實驗小鼠感染破傷風桿菌的保護性實驗，比較其與TAT的保護性作用的大小。結果表明，經統計學比較，本發明抗破傷風注射液與TAT的保護作用差異有顯著性意義，但其對實驗小鼠破傷風發病有一定的保護作用。
4.抗破傷風注射液體外抑菌實驗[受試藥物]抗破傷風注射液100ml，密封。由武漢市第一醫院製備並提供。
破傷風桿菌，購於中國藥品生物製品檢定所。[試驗方法]用試管法進行中藥抗破傷風注射液的最低抑菌濃度(MIC)的檢測。具體實施步驟如下(1)將在血平板上增菌24h的培養物在生理鹽水中調製0.5麥氏單位濃度，然後取2ml加入8ml生理鹽水中，作為應用菌液備用；(2)配製8個倍比稀釋濃度的含藥培養基，加上中藥原液稀釋培養基以及培養基陽性對照共10個稀釋度，分裝至小試管中，每管1.5ml含藥(或不含藥)培養基，與液體石蠟同時高溫高壓消毒備用；(3)取應用菌液0.05ml加入到消毒並已冷卻的小試管中，立即假如液體石蠟，移至厭氧罐中37℃培養24h，觀察結果。[試驗結果]具體測定結果見表6表6 抗破傷風注射液MIC測定結果稀釋倍數 PG 破傷風1∶1 1∶2 1∶4 1∶8 1∶16 1∶32 1∶64 1∶128 0.48mg/L桿菌測試結果對照 對照MIC I I I I I G G GI G注I抑制 G 菌生長豐盛即抗破傷風注射液的最低抑菌濃度為1∶16。[試驗結論]
抗破傷風注射液對破傷風桿菌有一定的抑制作用。
5.本發明抗破傷風注射液臨床應用資料本發明抗破傷風注射液作為院內製劑經臨床應用證明為無毒、安全、有效的抗破傷風藥物。我們通過近三年的臨床應用跟蹤，對破傷風注射液防治破傷風的安全、有效性作了進一步的肯定。三年中，門診共注射破傷風注射液總用量為9萬9千餘支，通過對門診注射室、急診科的應用情況的統計，列出詳細應用記錄如下抗破傷風注射液三年臨床應用人數一覽表1998年 1999年 2000年科室三年總數月均數總數 月均數 總數月均數 總數(支)(支) (支) (支) (支) (支) (支)注射室991 11894 1003 120398771052934462急診科1709 20508 1699 203902222 2444265340我們對以上部分病例進行了追蹤調查，將療效觀察結果記錄如下抗破傷風注射液療效觀察使用抗破傷風 接受調 觀察時間內發病人數注射液人數查人數1個月 2個月 3個月 半年 1年 2年33700 6569 0 0 0 0 00注「觀察時間內發病人數」指在2年內於不同時間破傷風發病。
在統計資料中未見有注射後因感染破傷風桿菌而發病的病例。
大量臨床資料結果表明，本發明抗破傷風注射液為防治破傷風的安全有效藥物。
圖1為本發明藥物製備方法的工藝流程圖。
實施例取膽南星2000g，用蒸餾水洗淨後，加適量蒸餾水浸泡過夜。取防風2000g，用蒸餾水洗淨，加適量蒸餾水浸漬1小時，按水蒸汽蒸餾法收集蒸餾液12000ml，將蒸餾液進行重蒸餾，收集蒸餾液6000ml，藥渣及藥液留用。取浸泡過夜的膽南星，搗碎成小塊，加入提取防風的藥渣，分別加藥材的8、4倍量蒸餾水，煎煮二次，第一次1小時，第二次0.5小時。將所得藥液合併，加入上述提取防風的藥液，該藥液每ml應相當於1g生藥。將該藥液濃縮至相對密度為1.10～1.15(50℃測)。依次加乙醇至含醇量為65％、75％、85％，每次加醇後室溫放置24小時以上，濾過，濾液回收乙醇。藥液加活性炭煮沸10分鐘，過濾，加入蒸餾液、氯化鈉、苯甲醇、吐溫-80，攪拌溶解濾過，加注射用水至全量，調節PH值為7.0～8.0，冷藏過夜，次日抽濾後，用微孔濾膜(0.8μm)過濾至澄明，灌裝入2ml/支的安瓿，熔封，100℃30min滅菌，即得本發明抗破傷風注射液，該品為深褐色澄明液體，每毫升本發明抗破傷風注射液相當於生藥0.4g，臨床人用量為一次4ml肌肉注射，用於外傷後破傷風的預防和治療。
權利要求
1.一種抗破傷風藥物，其特徵在於它是由防風、膽南星和藥劑學上可接受的載體、賦形劑和/或添加劑製成的藥劑。
2.根據權利要求1所述的抗破傷風藥物，其中防風、膽南星的重量配比是1比1。
3.根據權利要求1、2所述的抗破傷風藥物，其特徵在於所說的藥劑是任何一種藥劑學上所說的劑型。
4.根據權利要求3所述的抗破傷風藥物，其特徵在於所說的藥劑是注射液。
5.根據權利要求4所述抗破傷風藥物的製備方法，其特徵在於取膽南星，用蒸餾水洗淨後，加適量蒸餾水浸泡過夜；取防風，用蒸餾水洗淨，加適量蒸餾水浸漬1小時，按水蒸汽蒸餾法收集蒸餾液，將餾液進行重蒸餾，收集蒸餾液，藥渣及藥液留用；取浸泡過夜的膽南星，搗碎成小塊，加入提取防風的藥渣，分別加藥材的6～10、4～6倍量蒸餾水，煎煮二次，第一次1～2小時，第二次0.5～1小時，將所得藥液合併，加入上述提取防風的藥液；將該藥液濃縮至相對密度為1.05～1.20(50℃測)，依次加乙醇至含醇量為60～65％、70～75％、80～85％，每次加醇後室溫放置24小時以上，濾過，濾液回收乙醇；藥液加活性炭煮沸10～15分鐘，過濾，加入蒸餾液、氯化鈉、苯甲醇、吐溫-80，攪拌溶解濾過，加注射水至全量，調節PH值為7.0～8.0，冷藏過夜，次日抽濾後，用微孔濾膜(0.6～1.0μm)過濾至澄明，灌裝入2ml/支的安瓿，熔封，100℃30min滅菌，即得注射液。
全文摘要
一種抗破傷風藥物及其製備方法,該藥物由防風、膽南星和藥劑學上可接受的載體、賦形劑和/或添加劑制組成,其中防風、膽南星的重量配比是1比1,其注射液為深褐色澄明液體,臨床人用量為一次4ml肌肉注射,用於外傷後破傷風的預防和治療,不需要皮試,無過敏反應,無毒性,安全可靠,體外抑菌實驗表明對破傷風桿菌有抑制作用,體內實驗表明對實驗小鼠破傷風的發病具有保護作用。
文檔編號A61P31/04GK1371701SQ01106519
公開日2002年10月2日 申請日期2001年2月28日 優先權日2001年2月28日
發明者張介眉 申請人:武漢市中西醫結合醫院