一種利普司他汀的提純方法
2023-06-30 09:52:21 2
專利名稱：一種利普司他汀的提純方法
技術領域：
本發明屬於醫藥技術領域，具體涉及一種利普司他汀的提純方法。
背景技術：
利普司他汀(Lipstatin)是毒三素鏈黴菌(Streptomyces toxytricini )的代謝產物，能選擇性抑制胃腸道中胰腺肪酶的活性，減少人體對食物中脂肪的分解和吸收，從而達到控制體重的目的。由於利普司他汀性質不穩定，在空氣中容易被氧化，而它的四氫衍生物奧利司他(Orlistat)具有相對穩定的特性，已經被羅氏公司成功開發為減肥藥-賽尼可，是目前唯一一個作為非中樞神經系統作用而上市的治療肥胖症的藥物。目前，奧利司他的製備主要通過兩種方法，一種是全合成法，其成本較高；另一種 是半合成法，即利用毒三素鏈黴菌發酵產生利普司他汀，再通過加氫反應生成奧利司他。發酵法生產利普司他汀成本相對較低。對於發酵法生產利普司他汀，近年來發展了很多利普司他汀的提純方法，一般主要包括以下步驟發酵液預處理、有機溶媒浸提、萃取、色譜純化後得到產品。目前提純利普司他汀的方法主要存在以下缺點1、由於毒三素鏈黴菌發酵液粘度大，含有一定量的油性物質，發酵液的預處理大多採用板框壓濾技術，直接壓濾往往容易堵塞濾布，因此在發酵液中加入大量的助濾劑如硅藻土、珍珠巖等，使其勞動強度比較大，而且在過濾過程中還容易造成利普司他汀的損失；2、浸提所用的有機溶媒大多為丙酮和乙醇，由於這兩種溶劑的親水、親脂性，造成提取到的利普司他汀水溶性雜質較多，從而增加了後續的純化難度，也容易引起利普司他汀的降解；3、使用的溶媒種類偏多；4、提純得到的利普司他汀純度和收率偏低。胡為民等在《毒三素鏈黴菌生產利普司他汀的發酵與提取工藝》(《中國醫藥工業雜誌》，2007年第38卷第10期，705-708)—文中公開了利普司他汀提取工藝，該技術方案包括了丙酮萃取與超聲破碎細胞、乙酸乙酯萃取、正相柱色譜粗分離及半製備柱分離純化後，獲得的利普司他汀達到94%，然而對收率及含量均沒有提及，並且該方案比較繁瑣，成本較高。中國發明專利申請公開說明書CN102558104A公開了一種利用超臨界CO2流體萃取，並通過短程蒸餾提純得到的利普司他汀，其純度約為94%，收率僅約為50%。如果利普司他汀的純度偏低，會造成氫化後的奧利司他中有很多雜質，使得現有方法很難製備符合醫用標準的高純度奧利司他。因此，這就對利普司他汀的純度提出了較高的要求，如中國發明專利申請公開說明書CN102070568A公開了一種奧利司他的製備方法，即用一種基於動態軸向壓縮柱的半製備或製備型高效液相系統進行奧利司他純化的方法，製備出了單雜小於O. 1%，含量大於99. 0%的奧利司他，但它要求利普司他汀的純度>85%,含量約50% 70%。
發明內容
為了克服現有工藝技術上的缺點，實現提取純化利普司他汀過程的高效率、低成本，減輕對環境的汙染，並且為後期製備高純度的奧利司他提供方便。發明人經過大量試驗研究提供了一種從毒三素鏈黴菌發酵液中提純利普司他汀的工藝。本發明的技術方案概述如下①萃取含有利普司他汀的發酵液中加入乙酸乙酯，在攪拌的條件下萃取2 5小時，靜置分相後，上清液濃縮至幹，得黃褐色利普司他汀粗品；②溶解、過濾將①所得的黃褐色利普司他汀粗品用有機溶媒進行溶解，過濾除去不溶性雜質，將濾液減壓濃縮至原體積的1/4 1/6，得濃縮液；③矽膠柱層析將矽膠填料裝入層析柱，用庚烷平衡好後，將②所得的濃縮液上到矽膠柱，上樣量為柱體積的10% 20%，用庚烷和乙酸乙酯的混合溶媒作為流動相進行洗雜和洗脫，流速控制在O. 5 1. 5倍柱體積/小時，收集純度> 94%的利普司他汀洗脫液，將洗脫液減壓濃縮至幹，得淺黃色油狀利普司他汀粗品；④結晶將③所得的淺黃色油狀利普司他汀粗品用有機溶媒溶解，降溫法結晶，過濾後得利普司他汀白色晶體。本發明對步驟①中乙酸乙酯的加入量與發酵液的體積比進行了優選，優選地，乙酸乙酯的加入量與發酵液體積比為2 4:1。本發明對步驟②中有機溶媒進行了優選，優選地，上述有機溶媒為環己烷、庚烷或正己烷，更優選地，上述有機溶媒為庚烷。庚烷溶解液過濾濃縮後可直接作為上柱液進行矽膠柱層析，操作更加方便，且減少了溶媒使用種類。本發明對步驟②中有機溶媒的用量進行了優選，優選地，上述有機溶媒與利普司他汀按重量體積比為20 40:1。在此條件下，溶解液粘度較小，容易過濾。本發明對步驟③中所用的矽膠填料進行了優選，優選地，上述矽膠填料為100 200目、200 300目或300 400目中的一種，更優選地，上述矽膠填料為200 300目。矽膠填料太粗，吸附量較小。矽膠填料太細，雖然吸附量大，但洗脫速度較慢。本發明對步驟③中所用的流動相進行了優選，優選地，上述洗雜所用的流動相中庚烷與乙酸乙酯的體積比為95:5 88:12，洗脫所用的流動相中庚烷與乙酸乙酯的體積比為85:15 70:30，在此條件下，更有利於雜質，特別是色素類物質的去除，對利普司他汀純度和含量的提高起到關鍵性作用。本發明對步驟④中的有機溶媒進行了優選，優選地，上述有機溶媒為石油醚、庚烷或正己烷，更優選地，上述有機溶媒為庚烷。本發明對步驟④中的有機溶媒進行了優選，優選地，上述有機溶媒，按重量體積比計，有機溶媒的加入量與利普司他汀的比為15 25:1。有機溶媒加入量太多，造成利普司他汀濃度偏低，結晶收率太低；有機溶媒加入量太少，會使得利普司他汀在結晶過程中出現粘稠狀態，從而影響結晶效果。本發明與現有技術相比具有以下優勢①本發明通過大量實驗研究後，省略對發酵液進行預處理的步驟，而選用非水溶性有機溶媒乙酸乙酯直接萃取的方法，得到的利普司他汀純度較高，而且萃取收率可達92%以上； ②本發明通過實驗證明，獲得了純度≥97%，含量在75% 85%的利普司他汀，總收率達72%，為後期製備高純度的奧利司他提供方便；在最優選的條件下，僅使用乙酸乙酯和庚烷兩種溶媒，即可獲得純度> 97%，含量達84%的利普司他汀；③本發明工藝簡單，操作方便，溶媒回收後可重複使用，生產成本比較低，減輕了對環境的汙染。
具體實施例方式下面通過實施例對本發明作進一步說明，但並不因此將本發明限制在所述的實施例中。實施例1取發酵液2. OL (發酵單位6. 6g/L)，加入乙酸乙酯8. 0L，在攪拌條件下，萃取5h。靜置Ih後分相，將上層萃取液減壓濃縮至幹，得到黃褐色利普司他汀粗品66. 2g。用240mL庚烷將黃褐色利普司他汀粗品溶解、過濾後，將濾液減壓濃縮至體積為60. OmL，得濃縮液。 矽膠柱選用100 200目的矽膠作為填料，用庚烷平衡好後，將濃縮液上柱。先用庚烷與乙酸乙酯體積比為95:5的流動相洗雜3倍柱體積，再用庚烷與乙酸乙酯體積比為70:30的流動相洗脫，流速為O. 5倍柱體積/小時，收集利普司他汀HPLC檢測純度> 94%(按峰面積歸一化法計算)的洗脫液。將洗脫液合併後，減壓濃縮至幹，得到淺黃色利普司他汀粗品。用230mL石油醚溶解利普司他汀粗品後，通過降溫法進行結晶，過濾後得到利普司他汀白色晶體12. 7g (含利普司他汀9. 6g)，HPLC檢測純度97. 1%，含量75. 6%，總收率72. 7%。實施例2取發酵液2. OL (發酵單位6. 5g/L)，加入乙酸乙酯4. 0L，在攪拌條件下，萃取4h。靜置Ih後分相，將上層萃取液減壓濃縮至幹，得到黃褐色利普司他汀粗品64. Sg。用350mL庚烷將黃褐色利普司他汀粗品溶解、過濾後，將濾液減壓濃縮至體積為64. OmL，得濃縮液。矽膠柱選用200 300目的矽膠作為填料，用庚烷平衡好後，將濃縮液上柱。先用庚烷與乙酸乙酯體積比為88:12的流動相洗雜3倍柱體積，再用庚烷與乙酸乙酯體積比為80:20的流動相洗脫，流速為O. 8倍柱體積/小時，收集利普司他汀HPLC檢測純度> 94%(按峰面積歸一化法計算)的洗脫液。將洗脫液合併後，減壓濃縮至幹，得到淺黃色利普司他汀粗品。用160mL庚烷溶解利普司他汀粗品後，通過降溫法進行結晶，過濾後得到利普司他汀白色晶體11. 5g(含利普司他汀9. 7g)，HPLC檢測純度97. 8%，含量84. 3%，總收率73. 5%。實施例3取發酵液2. OL(發酵單位6. 2g/L)，加入乙酸乙酯6. OL,在攪拌條件下，萃取2h。靜置Ih後分相，將上層萃取液減壓濃縮至幹，得到黃褐色利普司他汀粗品63. Sg。用460mL正己烷將黃褐色利普司他汀粗品溶解、過濾後，將濾液減壓濃縮至體積為76. OmL，得濃縮液。矽膠柱選用300 400目的矽膠作為填料，用庚烷平衡好後，將濃縮液上柱。先用庚烷與乙酸乙酯體積比為90:10的流動相洗雜3倍柱體積，再用庚烷與乙酸乙酯體積比為75:25的流動相洗脫，流速為1. 2倍柱體積/小時，收集利普司他汀HPLC檢測純度> 94%(按峰面積歸一化法計算)的洗脫液。將洗脫液合併後，減壓濃縮至幹，得到淺黃色利普司他汀粗品。
用240mL庚烷溶解利普司他汀粗品後，通過降溫法進行結晶，過濾後得到利普司他汀白色晶體11. lg(含利普司他汀9. 0g)，HPLC檢測純度97. 5%，含量81. 1%，總收率72. 6%。實施例4取發酵液2. OL(發酵單位6. 9g/L)，加入乙酸乙酯8. 0L,在攪拌條件下，萃取3h。靜置Ih後分相，將上層萃取液減壓濃縮至幹，得到黃褐色利普司他汀粗品75. 5g。用380mL環己烷將黃褐色利普司他汀粗品溶解、過濾後，將濾液減壓濃縮至體積為70. OmL，得濃縮液。矽膠柱選用200 300目的矽膠作為填料，用庚烷平衡好後，將濃縮液上柱。先用庚烷與乙酸乙酯體積比為90:10的流動相洗雜3倍柱體積，再用庚烷與乙酸乙酯體積比為85:15的流動相洗脫，流速為1. 5倍柱體積/小時，收集利普司他汀HPLC檢測純度> 94%(按峰面積歸一化法計算)的洗脫液。將洗脫液合併後，減壓濃縮至幹，得到淺黃色利普司他汀粗品。
用210mL正己烷溶解利普司他汀粗品後，通過降溫法進行結晶，過濾後得到利普司他汀白色晶體12. 9g (含利普司他汀10. 0g), HPLC檢測純度97. 0%，含量77. 6%，總收率72. 5%。
權利要求
1.一種利普司他汀的提純方法，其特徵在於包括如下步驟①萃取含有利普司他汀的發酵液中加入乙酸乙酯，在攪拌的條件下萃取2 5小時， 靜置分相後，上清液濃縮至幹，得黃褐色利普司他汀粗品；②溶解、過濾將①所得的黃褐色利普司他汀粗品用有機溶媒進行溶解，過濾除去不溶性雜質，將濾液減壓濃縮至原體積的1/4 1/6，得濃縮液；③矽膠柱層析將矽膠填料裝入層析柱，用庚烷平衡好後，將②所得的濃縮液上到矽膠柱，上樣量為柱體積的10% 20%，用庚烷和乙酸乙酯的混合溶媒作為流動相進行洗雜和洗脫，流速控制在O. 5 1. 5倍柱體積/小時，收集純度> 94%的利普司他汀洗脫液，將洗脫液減壓濃縮至幹，得淺黃色油狀利普司他汀粗品；④結晶將③所得的淺黃色油狀利普司他汀粗品用有機溶媒溶解，降溫法結晶，過濾後得利普司他汀白色晶體。
2.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於步驟①所述乙酸乙酯的加入量與發酵液體積比為2 4:1。
3.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於步驟②所述有機溶媒為環己烷、庚烷或正己燒。
4.根據權利要求3所述的方法，其特徵在於步驟②所述有機溶媒為庚烷。
5.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於步驟②所述有機溶媒，按重量體積比計，有機溶媒的加入量與利普司他汀的比為20 40:1。
6.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於步驟③所述矽膠填料為100 200目、 200 300目或300 400目中的一種。
7.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於步驟③所述洗雜所用的流動相中庚烷與乙酸乙酯的體積比為95:5 88:12。
8.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於步驟③所述洗脫所用的流動相中庚烷與乙酸乙酯的體積比為85:15 70:30。
9.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於步驟④所述的有機溶媒為石油醚、庚烷或正己烷。
10.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於步驟④所述的有機溶媒，按重量體積比計，其加入量與利普司他汀的比為15 25:1。
全文摘要
本發明屬於醫藥技術領域，具體涉及一種利普司他汀的提純方法。本發明的技術方案主要包括發酵液直接萃取濃縮、有機溶媒溶解過濾、矽膠柱層析以及結晶等步驟，從而得到重量含量75%-85%，HPLC檢測純度≥97%的利普司他汀，總收率達72%。本發明的提純方法具有步驟簡單、周期短、產品收率高、質量好，所用溶媒均可以回收再利用，大大降低了生產成本，減輕了對環境的汙染。
文檔編號C07D305/12GK102993134SQ20121059418
公開日2013年3月27日 申請日期2012年12月31日 優先權日2012年12月31日
發明者趙志全, 梁紅寶 申請人:魯南新時代生物技術有限公司