用於結核病診斷的蛋白以及藥物組合物的製作方法

2023-06-16 12:35:41

用於結核病診斷的蛋白以及藥物組合物的製作方法
【專利摘要】本發明屬於生物化學和免疫學領域，涉及一種用於結核病診斷的蛋白以及藥物組合物。具體地，本發明涉及一種分離的蛋白，其胺基酸序列如SEQ?ID?NO：1或SEQ?ID?NO：2所示。本發明的蛋白可以作為作為細胞水平的結核病免疫診斷分子標識或疫苗候選物，具有良好的符合率和反應強度。
【專利說明】用於結核病診斷的蛋白以及藥物組合物

【技術領域】
[0001] 本發明屬於生物化學和免疫學領域，涉及一種用於結核病診斷的蛋白以及藥物組 合物。

【背景技術】
[0002] 結核分枝桿菌是對人類健康威脅最大的病原體之一，結核病是當今世界上成年人 中的主要傳染病，已對國際公共衛生構成嚴峻挑戰。結核菌在感染人體以後，多處於潛伏狀 態或持續感染狀態，它能在感染宿主細胞內逃避宿主的防禦作用而大量繁殖並和宿主達到 一種微妙的平衡，感染者一生中的任何時候都有可能發病。一般情況下，10%的感染者將發 展為活動性肺結核。一個未經治療的活動性肺結核病人，一年能傳染10 - 15人。
[0003] 近五十年來，結核病的控制理論與技術、臨床診斷治療水平與研究均有長足的進 步。由於有效化療藥物（異煙肼、利福平、吡嗪醯銨、鏈黴素、乙胺丁醇等）的普遍應用和卡 介苗在世界範圍的推廣，使得結核病的發病率曾一度降低，以至於人們樂觀地認為，結核病 將同天花一樣被人類徹底消滅。但在八十年代中期，由於過分樂觀的估計形勢，減少投資、 縮減機構，放鬆對結核病的治療與管理，結核病又在許多國家死灰復燃，發病率在全世界範 圍內再次回升。1993年WHO宣布結核病處於"全球緊急狀態"，並呼籲"迅速採取行動與結 核病危機進行鬥爭"，這在WHO歷史上發表這樣的聲明尚屬首次。耐藥及耐多藥結核病也已 成為當前結核病控制工作中的重大威脅。
[0004] 在常用的肺結核診斷技術中存在著陽性率低、周期長、操作複雜、假陽性率高等問 題。故此需要一種快速、簡便、敏感、特異的診斷方法。
[0005] 目前結核病毒診斷方法有：（一)痰菌檢查：痰塗菌檢查和痰結核菌檢查簡便易行， 準確性較高，痰中查出結核菌，就能確診患了結核病。一般初次就診要查三個痰標本，即夜 間痰、清晨痰和即時痰。它雖然是診斷肺結核"金指標"但診斷率低，培養周期長。痰結核 菌培養，結果可信度高，並能做結核菌藥敏試驗，但需時6 - 8周，應用受到限制。（二)X射 線檢查：胸部X線檢查可以早期發現結核病，而且可以確定病灶的部位、性質、範圍，了解發 病情況及用於治療效果的判斷，並且開展方便，病人樂於接受。胸部CT可以發現較小的或 隱蔽部位的病變，可以彌補一般X線檢查的不足。但容易與其他肺部疾病混淆，需要專業醫 生確證。（三）肺結核病免疫學診斷：1.常用的有結核菌素純蛋白衍化物（PPD)試驗，該試 驗陽性是感染過結核菌的證據之一，但是假陽性率高，容易誤診。2.血中、痰中結核抗體檢 測陽性也有助於診斷，也容易出現假陽率。3. BACTEC法測結核分枝桿菌的代謝物，一般兩周 可分離出分枝桿菌，但菌量多少能影響陽性結果出現的天數。5.聚合酶鏈反應（PCR)，優點 是敏感性可達98% - 100%，缺點是特異性較差。（四)其他檢查：只能作為輔助診斷，不能作 為診斷依據。1.纖維支氣管鏡檢查，可以直接觀察或間接判斷支氣管、肺內病變，並且有活 組織檢查、灌洗、錄像、拍攝氣管內照片等功能，對於診斷和鑑別診斷特別有用。2.胸腔鏡和 縱隔鏡檢查，均可用於觀察胸腔、縱隔內腫大淋巴結，並可取出活組織檢查以利診斷和鑑別 診斷。3.超聲波檢查，主要用於胸腔積液的診斷和鑑別診斷。
[0006] 結核分枝桿菌（MTB)培養物濾液中有一種早期分泌抗原革巴蛋白（early secretory antigenic target，ESAT-6)，GenBank 登錄號為：NC_00962，gi :57117165,相對分子質量為 6000,在MTB感染早期即可被機體的免疫系統所識別，是重要的T細胞抗原抗原。ESAT-6 來源的合成多肽被廣泛地用於外周血MTB特異性γ-幹擾素（IFN-γ)應答情況的檢測， 臨床上用於診斷是否有MTB感染指標之一 [Ravn P. Munk ME. Andersen AB Prospective evaluation of a whole-blood test using Mycobacterium tuberculosis-specific antigens ESAT_6and CFP-10for diagnosis of active tuberculosis2005 ；Harbce M. Oetteinger T. ffiker HG Evidence for oceurrence of the ESAT-6 protein in Mycobacterium tuberculosis and virulent Mycobacterium bovis and for its absence in Mycabacterium bovis BCG1996 ；Zhang, Μ. , H. Wang, M. Liao, et al. (2010) ·''Diagnosis of latent tuberculosis infection in bacille Calmette-Guerin vaccinated subjects in China by interferon-gamma ELISpot assay.〃Int J Tuberc Lung Disl4(12):1556-1563. ]〇
[0007] 儘管如此，目前尚需要發現新的診斷結核病或者檢測結核分枝桿菌的標識，以及 新的檢測診斷結核病或者檢測結核分枝桿菌的方法和試劑。


【發明內容】

[0008] 本發明人經過深入的研究和創造性的勞動，得到了一類蛋白，本發明人驚奇地發 現，本發明的蛋白能夠作為診斷結核病或者檢測結核分枝桿菌的標識，並且其具有良好的 敏感性和特異性。由此提供了下述發明：
[0009] 本發明的一個方面涉及一種分離的蛋白，其胺基酸序列如SEQ ID N0 :1(本發明中 有時稱為Rv0232)或SEQ ID N0:2 (本發明中有時稱為Rvl031)所示。所述蛋白為用於結 核病診斷或結核桿菌檢測的蛋白。
[0010] Rv0232的胺基酸序列：150aa
[0011] KGSLFQYFADKRDLYAFIADIASQRVRSYMEDLIRELDPNR PFFEFLTDLLDGWVAYFAE HPRERALHAAATLEVDTDARISVRS VLHRHYLDVLRPLVRDAHARGDLRADSDTGALMSLLLLIFPHL ALAPYMRGLDPILGLDEPTPEQ (SEQ ID NO ：1)
[0012] Rvl031的胺基酸序列：189aa
[0013] MRRQLLPALTMLLVFTVITGIVYPLAVTGVGQLFFGDQAN GALLERDGQVIGSAHIGQQFTAAKYFH PRPSSAGDGYDAAASSG SNLGPTNEKLLAAVAERVTAYRKENNLPADTLVPVDAVTGSGS GLDPAISVVNAKLQA PRVAQARNISIRQVERLIEDHTDARGLGF LGERAVNVLRLNLALDRL (SEQ ID NO ：2)
[0014] 本發明的另一方面一種分離的核苷酸，其編碼本發明的蛋白；具體地，所述核苷酸 的序列如SEQ ID N0 :3或SEQ ID N0 :4所示。
[0015] Rv0232的核苷酸序列（讀碼框）：450bp
[0016] AAGGGCAGCCTGTTCCAGTACTTCGCGGACAAGCGCGAC CTCTACGCGTTTATTGCCGACATCGCCAG CCAGCGAGTCCGC TCCTACATGGAGGACCTGATCCGCGAGCTGGACCCGAACCG GCCGTTCTTCGAATTCCTCAC CGACCTGCTCGATGGCTGGGT CGCCTACTTCGCCGAGCATCCTCGGGAACGTGCGTTGCATGC TGCGGCGACCCT GGAGGTCGACACCGATGCCCGCATCAGCG TGCGCAGCGTCCTGCACCGCCACTACCTGGACGTGCTACGG CCGCT GGTGCGCGACGCGCACGCGCGGGGCGACCTGCGCGC AGATTCCGACACCGGTGCATTGATGTCGCTGCTGCTGCTG AT CTTTCCGCACCTGGCGCTGGCTCCATACATGCGTGGTTTGGA TCCGATCCTGGGCCTCGACGAGCCCACACCT GAGCAG (SEQ ID NO ：3)
[0017] Rvl031的核苷酸序列（讀碼框）：570bp
[0018] ATGCGTCGTCAATTACTGCCCGCGCTCACCATGCTGTTG GTGTTCACCGTCATCACCGGCATCGTCTA CCCGCTTGCCGTG ACCGGCGTCGGGCAACTGTTCTTCGGTGACCAGGCGAACGG CGCGCTGCTCGAGCGGGACGG GCAGGTCATCGGCTCCGCCC ACATCGGCCAGCAGTTCACCGCCGCGAAGTACTTCCACCCGC GCCCCTCGTCGGC AGGCGACGGTTACGACGCTGCGGCGAGC TCGGGCTCCAACCTGGGACCGACGAACGAGAAGCTGCTGGC GGCCGT CGCTGAACGGGTCACCGCCTACCGCAAGGAAAACA ATCTGCCGGCCGATACGCTGGTTCCGGTCGACGCGGTTACC GGCTCGGGTTCCGGGCTGGACCCGGCCATATCGGTGGTCAA TGCCAAGCTGCAGGCACCGCGGGTGGCGCAGGCGC GCAATA TCTCGATAAGGCAGGTCGAGCGTCTGATCGAGGACCACACC GACGCGCGTGGTCTCGGCTTCCTGGGCG AGCGCGCGGTGAA CGTGCTCAGGCTGAACCTCGCATTGGATCGCCTCTGA (SEQ ID NO ：4)
[0019] Rv0232和Rvl031的讀碼框的核苷酸序列可以由實施例1或2中的相應的質粒或 PCR產物測序得到，並可進一步根據讀碼框核苷酸序列推知編碼的胺基酸序列。當然，上述 的讀碼框的核苷酸序列也可以通過人工合成得到。所述蛋白可以通過將讀碼框序列通過合 適的表達載體和宿主細胞得到。
[0020] 本發明的再一方面涉及一種重組載體，其含有本發明的核苷酸。
[0021] 本發明的再一方面涉及一種重組宿主細胞，其含有本發明的重組載體。
[0022] 本發明的再一方面涉及一種引物對，其包含SEQ ID N0 :7和SEQ ID N0 :8所示的 核苷酸序列，和/或包含SEQ ID N0 :9和SEQ ID N0:10所示的核苷酸序列。具體地，所述 引物對的核苷酸序列如SEQ ID N0 :7和SEQ ID N0 :8所示，和/或如SEQ ID N0 :9和SEQ ID N0 :10 所示。
[0023] 本發明的再一方面涉及一種抗體，其能夠與本發明的蛋白（Rv0232和/或Rvl031) 特異性結合；具體地，所述抗體為單克隆抗體或多克隆抗體；具體地，所述抗體連接有可檢 測的標記物。
[0024] 所述多克隆抗體或單克隆抗體可以參照本領域人員知悉的方法製備。
[0025] 在本發明中，術語"特異性結合"具有免疫學的一般含義，例如抗原抗體間的結合。
[0026] 本發明的再一方面涉及一種抗體偶聯物，包括抗體部分和偶聯部分，其中，所述抗 體部分為本發明的抗體，所述偶聯部分為選自放射性核素、藥物、毒素、細胞因子、酶、螢光 素、載體蛋白、脂類、和生物素中的一種或多種。
[0027] 本發明的再一方面涉及一種組合物，其含有本發明的蛋白（Rv0232和/或 Rvl031)、本發明的核苷酸、本發明的重組載體、本發明的重組宿主細胞、本發明的引物對、 本發明的抗體、或者本發明的抗體偶聯物；可選地，所述組合物(藥物組合物）還含有藥學上 可接受的載體或賦形劑；具體地，所述組合物為疫苗組合物，並且所述藥學上可接受的載體 或賦形劑為疫苗用載體或賦形劑。
[0028] 在本發明中，術語"疫苗用載體或賦形劑"是指選自如下物質的一種或多種，包括 但不限於：pH調節劑、表面活性劑、佐劑、離子強度增強劑。具體地，例如，pH調節劑包括但 不限於磷酸鹽緩衝液，表面活性劑包括但不限於陽離子，陰離子或者非離子型表面活性劑。 其中，非離子型表面活性劑包括但不限於：Tween-80。佐劑包括但不限於氫氧化鋁，氟氏完 全佐劑。離子強度增強劑包括但不限於氯化鈉。
[0029] 本發明的再一方面涉及一種試劑盒，其包含本發明的抗體、本發明的抗體偶聯物、 或者本發明的引物對；具體地，所述試劑盒為用於診斷結核病特別是肺肺結核或者檢測結 核桿菌的試劑盒。
[0030] 本發明的再一方面涉及一種篩選藥物的模型，其包含本發明的蛋白（Rv0232和/ 或Rvl031)或者本發明的核苷酸；具體地，所述藥物為診斷和/或治療和/或預防和/或輔 助治療結核病特別是肺結核的藥物或者為抗結核桿菌的藥物。
[0031] 例如，可以通過被篩選的藥物是否能夠檢測本發明的蛋白（Rv0232和/或Rvl031) 或者本發明的核苷酸，來判斷被篩選的藥物是否能夠用作診斷和/或治療和/或預防和/ 或輔助治療結核病特別是肺結核的藥物或者為抗結核桿菌的藥物。
[0032] 本發明的再一方面涉及本發明的蛋白或者本發明的核苷酸在製備或者作為篩選 藥物的模型中的用途，具體地，所述所述藥物為診斷和/或治療和/或預防和/或輔助治療 結核病特別是肺結核的藥物或者為檢測結核桿菌或抗結核桿菌的藥物。
[0033] 本發明的再一方面涉及本發明的蛋白（Rv0232和/或Rvl031)、本發明的核苷酸、 本發明的重組載體、本發明的重組宿主細胞、本發明的引物對、本發明的抗體或者本發明的 抗體偶聯物在製備診斷和/或治療和/或預防和/或輔助治療結核病特別是肺結核的藥物 (包括但不限於疫苗）或者製備檢測結核桿菌或抗結核桿菌的藥物中的用途。
[0034] 本發明的再一方面涉及一種在體內或體外檢測結核桿菌的方法，包括使用本發明 的抗體或者本發明的引物對的步驟；具體地，所述方法為抗原檢測方法(例如western blot 或者ELISA)或者PCR法。一種在體內或體外檢測結核桿菌的方法，其為ELISP0T法。檢測 的樣本包括但不限於：被檢測者的痰液、血液、組織、淋巴細胞、DNA等等。
[0035] 本發明的再一方面涉及一種診斷結核病特別是肺結核的方法，包括使用本發明的 抗體或者本發明的引物對的步驟；具體地，所述方法為抗原檢測方法(例如western blot 或者ELISA)或者PCR法。一種診斷結核病特別是肺結核的方法，其為ELISP0T法。
[0036] 下面還給出了本發明涉及的部分術語的解釋。
[0037] 表達載體
[0038] 本發明還涉及包含本發明核酸序列、啟動子和轉錄及翻譯終止信號的重組表達載 體。可以將上述各種核酸和調控序列連接在一起來製備重組表達載體，該載體可以包括一 個或多個方便的限制位點，以便在這些位點插入或取代編碼本發明的蛋白或抗體的核酸序 列。或者，可以通過將核酸序列或包含該序列的核酸構建體插入適當表達載體而表達本發 明所述核酸序列。製備表達載體時，可使編碼序列位於載體中以便與適當的表達調控序列 可操作地連接。
[0039] 重組表達載體可以是任何便於進行重組DNA操作並表達核酸序列的載體(例如質 粒或病毒)。載體的選擇通常取決於載體與它將要導入的宿主細胞的相容性。載體可以是 線性或閉環質粒。
[0040] 載體可以是自主複製型載體（即存在於染色體外的完整結構，可獨立於染色體進 行複製)，例如質粒、染色體外元件、微小染色體或人工染色體。載體可包含保證自我複製的 任何機制。或者，載體是一個當導入宿主細胞時，將整合到基因組中並與所整合到的染色體 一起複製的載體。此外，可應用單個載體或質粒，或總體包含將導入宿主細胞基因組的全部 DNA的兩個或多個載體或質粒，或轉座子。
[0041] 優選本發明所述載體含有一個或多個便於選擇轉化細胞的選擇標記。選擇標記是 這樣一個基因，其產物賦予對殺生物劑或病毒的抗性、對重金屬的抗性，或賦予營養缺陷體 原養型等。細菌選擇標記的例子如枯草芽孢桿菌或地衣芽孢桿菌的dal基因，或者抗生素 如氨苄青黴素、卡那黴素、氯黴素或四環素的抗性標記。
[0042] 優選本發明所述載體包含能使載體穩定整合到宿主細胞基因組中，或保證載體在 細胞中獨立於細胞基因組而進行自主複製的元件。
[0043] 就進行自主複製的情況而言，載體還可以包含複製起點，使載體能在目標宿主細 胞中自主地複製。複製起點可以帶有使其在宿主細胞中成為溫度敏感型的突變(參見例如， fEhrlich，1978,美國國家科學院學報75 :1433)。
[0044] 可以向宿主細胞插入一個以上拷貝的本發明核酸序列以提高該基因產物的產量。 該核酸序列的拷貝數增加可以通過將該序列的至少一個附加拷貝插入宿主細胞基因組中， 或者與該核酸序列一起插入一個可擴增的選擇標記，通過在有合適選擇試劑存在下培養細 胞，挑選出含有擴增拷貝的選擇性標記基因、從而含有附加拷貝核酸序列的細胞。
[0045] 用於連接上述各元件來構建本發明所述重組表達載體的操作是本領域技術人員 所熟知的(參見例如Sambrook等，分子克隆實驗手冊，第二版，冷泉港實驗室出版社，冷泉 港，紐約，1989)。
[0046] 宿主細胞
[0047] 本發明還涉及包含可用來重組生產本發明的蛋白或抗體的本發明所述核酸序列 (多核苷酸)的重組宿主細胞。可將包含本發明之核酸序列的載體導入宿主細胞，從而使該 載體以上述染色體整合體或自我複製的染色體外載體形式得以維持。術語"宿主細胞"涵 蓋任何由於複製期間發生的突變而與親本細胞不同的後代。宿主細胞的選擇很大程度上取 決於本發明的蛋白或抗體編碼基因及其來源。
[0048] 宿主細胞可以是原核細胞或者真核細胞，例如細菌或酵母細胞。可以通過本領域 技術人員熟知的技術將載體導入宿主細胞。
[0049] 製備方法
[0050] 本發明還涉及重組製備本發明本發明的蛋白或抗體的方法，該方法包括：（a)在 適於產生本發明的蛋白或抗體的條件下，培養含有核酸構建體的宿主細胞，該核酸構建體 包含編碼所述本發明的蛋白或抗體的核酸序列；和（b)回收該肽。
[0051] 在本發明所述製備方法中，用本領域已知方法在合適本發明的蛋白或抗體產生的 營養培養基中培養細胞。例如，可以在合適的培養基中，在允許本發明的蛋白或抗體表達和 /或分離的條件下，通過搖瓶培養、實驗室或工業發酵罐中小規模或大規模發酵(包括連續、 分批、分批加料或固態發酵）來培養細胞。在包含碳源和氮源以及無機鹽的合適的培養基 中，採用本領域已知的步驟進行培養。合適的培養基可由供應商提供或者可以參照公開的 組成(例如，美國典型培養物保藏中心的目錄中所述）來製備。如果本發明的蛋白或抗體被 分泌到培養基中，則可以直接從培養基中回收。如果本發明的蛋白或抗體不分泌，可以從細 胞裂解物中回收。
[0052] 可以用本領域已知方法回收所產生的本發明的蛋白或抗體。例如，可以通過常規 操作(包括，但不限於離心、過濾、抽提、噴霧乾燥、蒸發或沉澱）從培養基中回收。
[0053] 可以通過各種本領域已知的操作來純化本發明所述本發明的蛋白或抗體，這些操 作包括，但不限於層析(例如，離子交換層析、親和層析、疏水作用層析、層析聚焦、和大小排 阻層析)、HPLC、電泳(例如，製備性等電點聚焦)、差示溶解度(例如硫酸銨沉澱)、SDS-PAGE 或抽提（例如參見，蛋白質純化，J. C. Janson和Lars Ryden編，VCH Publishers, New York, 1989) 〇
[0054] 在本發明中，術語"結核桿菌"，包括但不限於，例如，結核分枝桿菌；術語"結核分 枝桿菌"包括但不限於，結核分枝桿菌H37Rv。
[0055] 發明的有益效果
[0056] 本發明的蛋白可以作為作為結核病(例如肺結核）或結核桿菌細胞免疫診斷分子 標識，具有良好的符合率和反應強度。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0057] 圖1 :目的基因 Rv0232和Rvl031的電泳結果，各泳道的樣品從左往右依次是： Rvl031、DNA marker、Rv0232。
[0058] 圖2 :表達後Rv0232和Rvl031的PAGE結果。各泳道的樣品從左往右依次是蛋白 marker、Rv 1031、Rv2032。
[0059] 圖3 :Rv0232和Rvl031蛋白純化的PAGE結果。各泳道的樣品從左往右依次是蛋 白 marker、Rvl031、Rv2032。
[0060] 圖4 :表達蛋白初篩結果示例。
[0061] 圖5 :部分蛋白的ELISP0T鑑定部分結果。

【具體實施方式】
[0062] 下面將結合實施例對本發明的實施方案進行詳細描述。本領域技術人員將會理 解，下面的實施例僅用於說明本發明，而不應視為限定本發明的範圍。實施例中未註明具體 技術或條件者，按照本領域內的文獻所描述的技術或條件(例如參考J.薩姆布魯克等著， 黃培堂等譯的《分子克隆實驗指南》，第三版，科學出版社）或者按照產品說明書進行。所用 試劑或儀器未註明生產廠商者，均為可以通過市購獲得的常規產品。
[0063] 實施例1 :MTB H37Rv的相關某閔的克降和表汰（Gateway法)
[0064] Invitrogen公司的Gateway技術為蛋白的重組和表達提供了一種可能，它是從 PCR產物開始創建Gateway?入門克隆。這種方法是通過合併attB位點到上遊和下遊引物 上，然後共同孵育PCR擴增產物和pDONR?(包含attP位點）以及Gateway? BP Clonase? 酶混合物。接著轉化進大腸桿菌中，將會獲得包含目的基因的入門克隆，同時目的基因兩側 具有attL重組位點。這個入門克隆可以與Gateway?目的載體pDEST17進行重組表達，快速 高效得到目的蛋白[Walhout AJ, Temple GF，Brasch MA.et al. GATEWAY recombinational cloning:application to the cloning of large numbers of open reading frames or ORFeomes. Methods Enzymol, . 2000, 328:575-592 ；Rachael M.Goldstone, Nicole J. Moreland, Ghader Bashiri，et al.A new Gateway_vector and expression protocol for fast and efficient recombinant protein expression in Mycobacterium smegmatis. Protein Expression and Purification57(2008) 81 - 87 ;A high throughput screen to identify secreted and transmembrane proteins involved in Drosophila embryogenesis. PNAS1998;95;9973-9978.]。
[0065] 本實驗以於MTB H37Rv的基因組為模板，利用Invitrogen公司提供的Gateway技 術，表達全部0RF編碼的蛋白質，經過western blot方法檢測臨床血楽獲得具有較高敏感 性特異性抗原，為臨床診斷、疾病治療、預防控制提供堅實的物質基礎。
[0066] 一、實驗方法
[0067] 1.基因序列的獲取
[0068] 根據已經公開的MTB H37Rv的ORFs基因序列，用Primer designer設計引物序列， 按照Gateway系統的引物設計方案，為引物序列添加 attB臂，由北京新擎科公司完成引物 的合成。
[0069] 其為正向引物臂為：
[0070] GGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTTC (SEQ ID NO ：5)；
[0071] 反向引物臂為：
[0072] GGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTCCTA (SEQ ID NO ：6)〇
[0073] 共完成引物設計3535對，因篇幅所限，部分引物如下面的表1所示。
[0074] 表1 :部分合成引物(不含att臂的部分）
[0075]

【權利要求】
1. 一種分離的蛋白，其胺基酸序列如SEQIDN0:1或SEQIDN0:2所示。
2. -種分離的核苷酸，其編碼權利要求1所述的蛋白；具體地，所述核苷酸的序列如 SEQ ID NO :3 或 SEQ ID NO :4 所示。
3. -種重組載體，其含有權利要求2所述的核苷酸。
4. 一種重組宿主細胞，其含有權利要求3所述的重組載體。
5. -種引物對，其包含SEQ ID N0:7和SEQ ID N0:8所示的核苷酸序列，和/或包含 SEQ ID NO :9和SEQ ID NO :10所示的核苷酸序列。
6. -種抗體，其能夠與權利要求1所述的蛋白特異性結合；具體地，所述抗體為單克隆 抗體或多克隆抗體；具體地，所述抗體連接有可檢測的標記物。
7. -種抗體偶聯物，包括抗體部分和偶聯部分，其中，所述抗體部分為權利要求6所述 的抗體，所述偶聯部分為選自放射性核素、藥物、毒素、細胞因子、酶、螢光素、載體蛋白、月旨 類、和生物素中的一種或多種。
8. -種組合物，其含有權利要求1所述的蛋白、權利要求2所述的核苷酸、權利要求3 所述的重組載體、權利要求4所述的重組宿主細胞、權利要求5所述的引物對、權利要求6 所述的抗體或者權利要求7所述的抗體偶聯物；可選地，所述組合物還含有藥學上可接受 的載體或賦形劑；具體地，所述組合物為疫苗組合物，並且所述藥學上可接受的載體或賦形 劑為疫苗用載體或賦形劑。
9. 一種試劑盒，其包含權利要求6所述的抗體、權利要求7所述的抗體偶聯物、或者權 利要求5所述的引物對；具體地，所述試劑盒為用於診斷結核病特別是肺肺結核或者檢測 結核桿菌的試劑盒。
10. -種篩選藥物的模型，其包含權利要求1所述的蛋白或者權利要求2所述的核苷 酸；具體地，所述藥物為診斷和/或治療和/或預防和/或輔助治療結核病特別是肺結核的 藥物或者為抗結核桿菌的藥物。
11. 權利要求1所述的蛋白或者權利要求2所述的核苷酸在製備或者作為篩選藥物的 模型中的用途，具體地，所述所述藥物為診斷和/或治療和/或預防和/或輔助治療結核病 特別是肺結核的藥物或者為檢測結核桿菌或抗結核桿菌的藥物。
12. 權利要求1所述的蛋白、權利要求2所述的核苷酸、權利要求3所述的重組載體、權 利要求4所述的重組宿主細胞、權利要求5所述的引物對、權利要求6所述的抗體或者權利 要求7所述的抗體偶聯物在製備診斷和/或治療和/或預防和/或輔助治療結核病特別是 肺結核的藥物(包括但不限於疫苗）或者製備檢測結核桿菌或抗結核桿菌的藥物中的用途。
【文檔編號】C07K19/00GK104151411SQ201310176083
【公開日】2014年11月19日 申請日期:2013年5月14日 優先權日:2013年5月14日
【發明者】劉立國, 金奇, 張笑冰, 張維佳 申請人:中國醫學科學院病原生物學研究所