一種去除新生牛血清內毒素的工藝的製作方法
2023-06-08 21:15:01 1
一種去除新生牛血清內毒素的工藝的製作方法
【專利摘要】本發明公開了一種去除新生牛血清內毒素的工藝，步驟如下：取新生牛血清，4000r/min離心10min，取上清，加入上清液質量0.2%的活性炭進行吸附，吸附30min；吸附後，4000r/min離心20min，取上清，依次用0.8μm濾膜、0.65μm濾膜、0.45μm濾膜、0.22μm濾膜、0.1μm濾膜過濾，即得到去除了內毒素的新生牛血清。本發明採用活性炭吸附及逐級過濾的方法，可顯著降低以往在新生牛血清生產過程中作為廢棄物的高內毒素含量牛血清中內毒素的含量，增加新生牛血清生產的效率和附加值。
【專利說明】一種去除新生牛血清內毒素的工藝
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種去除新生牛血清內毒素的工藝。
【背景技術】
[0002]內毒素是革蘭氏陰性菌的菌體中存在的毒性物質的總稱，是多種革蘭氏陰性菌的細胞壁成分，由菌體裂解後釋出，又稱之為「熱原」。其化學成分有磷脂多糖-蛋白質複合物，其毒性成分主要為類脂質A。內毒素位於細胞壁的最外層、覆蓋於細胞壁的黏肽上。各種細菌的內毒素大都具有一定的毒性，可引起發熱、微循環障礙、內毒素休克及播散性血管內凝血等。因此，含有內毒素的血清不能用於疫苗的生產，只有去除內毒素、保留血清中的營養成分，才可以使這類血清用於疫苗生產，從而變廢為寶，得到充分利用。
[0003]在現有新生牛血清生產過程中，由於採血、存放等諸多原因造成細菌汙染，會產生大量內毒素超標的血清，因此，為了充分利用生物資源、減少資源浪費，設計一種高效去除新生牛血清內毒素的工藝是亟需解決的難題。
【發明內容】
[0004]針對上述現有技術，本發明提供了一種去除新生牛血清內毒素的工藝，本發明採用活性炭吸附及逐級過濾的方法，可顯著降低以往在新生牛血清生產過程中作為廢棄物的高內毒素含量牛血清中內毒素的含量，增加新生牛血清生產的效率和附加值。
[0005]本發明是通過以下技術方案實現的:
[0006]一種去除新生牛血清內毒素的工藝，步驟如下:取新生牛血清，4000r/min離心IOmin,取上清，加入上清液質量0.2%的活性炭進行吸附，吸附30min ;吸附後，4000r/min離心20min,取上清，依次用0.8 μ m濾膜、0.65 μ m濾膜、0.45 μ m濾膜、0.22 μ m濾膜、0.1 μ m
濾膜過濾，即得到去除了內毒素的新生牛血清。
[0007]本發明採用活性炭吸附及逐級過濾的方法，可顯著降低以往在新生牛血清生產過程中作為廢棄物的高內毒素含量牛血清中內毒素的含量，增加新生牛血清生產的效率和附加值。本發明的活性炭的加入量，以及過濾膜的選擇，均是特定的，是通過優化實驗得到的最佳方案，該最佳方案，可以去掉新生牛血清中的內毒素，且對血清的增殖效果、血清蛋白濃度的影響最低。
【具體實施方式】
[0008]下面結合實施例對本發明作進一步的說明。
[0009]實施例去除新生牛血清內毒素實驗
[0010](I)原料新生牛血清的準備
[0011]採用新生牛血清生產過程中內毒素含量較高的新生牛血清作為本發明的原料牛血清。
[0012]血清內毒素含量`的檢測使用湛江博康海洋生物有限公司鱟試劑內毒素檢測試劑盒。
[0013](2)去除牛血清中內毒素的工藝
[0014]將稱量的不同投加量活性炭(0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、1%、2%、5%)緩慢撒進血清並柔和攪拌至均勻，持續柔和攪拌30min後，經逐級過濾去除活性炭並獲得新生牛血清。過濾後的血清經無菌試驗驗證，達到無菌要求。
[0015](3)內毒素含量的檢測
[0016]將鱟試劑用無內毒素蒸餾水100 μ L溶解，然後分別加入稀釋40倍的原料血清留樣100 μ L與鱟試劑混合，同時設有陰性對照和陽性對照，37°C孵育Ih後通過觀察凝集情況判斷標本中的細菌內毒素含量範圍。
[0017]活性炭處理含內毒素新生牛血清的結果見表1，試驗中> 0.5%活性炭投加量的血清標本均未發生凝集，表明血清中的細菌內毒素低於0.125EU/mL (試劑盒檢測限量為0.125EU/mL),而0.1%、0.2%、0.3%、0.4%的活性炭投加量的血清內毒素含量也都符合國標規定標準(中國藥典2010版要求≤10EU/mL)。
[0018]表1活性炭處理血清內毒素檢測結果
[0019]
【權利要求】
1.一種去除新生牛血清內毒素的工藝，其特徵在於:步驟如下:取新生牛血清，40001./min離心IOmin,取上清,加入上清液質量0.2%的活性炭進行吸附，吸附30min ;吸附後，4000r/min離心20min,取上清，依次用0.8 μ m濾膜、0.65 μ m濾膜、0.45 μ m濾膜、0.22 μ m濾膜、0.1 μ m濾膜過濾，`即得到去除了內毒素的新生牛血清。
【文檔編號】C12N5/073GK103725645SQ201410007483
【公開日】2014年4月16日 申請日期:2014年1月7日 優先權日:2014年1月7日
【發明者】張子毅 申請人:濟南勁牛生物科技有限公司