豬細小病毒病油乳劑滅活疫苗的製作方法
2023-06-05 08:03:51
專利名稱：豬細小病毒病油乳劑滅活疫苗的製作方法
技術領域：
本發明屬獸醫生物新醫藥技術領域，是一種豬細小病毒病油乳劑滅活疫苗，能預防由豬細小病毒(PPV)引起的母豬繁殖障礙病。
背景技術：
原有的豬細小病毒AEI滅活疫苗是將豬細小病毒(PPV)接種細胞培養，獲得的病毒液經AEI滅活後加入油佐劑經乳化配製而成的雙相油乳劑疫苗。該疫苗免疫效果好，但存在以下不足和問題1、疫苗的穩定性較差、分層快，經貯藏後乳劑苗很快分為乳白色和淡紅色二層，在乳液面上層可以折出少量油層，外觀物理性狀欠佳，在保質期內有時發生破乳，影響了疫苗質量。其中的主要原因是油佐劑的問題，配製疫苗的油佐劑由石臘油和羊毛脂組成(石臘油∶羊毛脂＝9∶1)。
2、豬體注射疫苗後有時會出現食欲不振，精神欠佳，有的還會發熱、過敏等不良反應，接種部位紅腫明顯。引起的主要原因與油佐劑有關，也與疫苗使用的劑量大有關。
3、該疫苗使用的劑量是1頭豬要注射2次，每次5毫升，間隔二周，總劑量10毫升。為此，用戶反映疫苗使用的手續麻煩，增加防疫的勞動強度。
發明內容
本發明提供一種優化後的豬細小病毒病滅活疫苗——豬細小病毒病油乳劑滅活疫苗。通過改變油佐劑的配方，解決原有產品疫苗的穩定性較差、分層快和保質期等技術問題，在保持疫苗免疫效果可靠前提下，減少疫苗的使用劑量和減少使用次數，解決使用手續麻煩等不足之處。
為解決上述技術問題，本發明是這樣實現的一種豬細小病毒病油乳劑滅活疫苗，其特徵在於是將用烷化劑滅活的豬細小病毒(PPV)加入油佐劑經乳化配製而成，油佐劑配製是按容量計，94％白油和6％司本-80混合後加入2％硬脂酸鋁，即100毫升混合液加入2克硬脂酸鋁。
採用一步法乳化。
採用二步法乳化。
將該疫苗確定的免疫劑量和免疫次數為2毫升1次免疫。
本發明具有如下技術效果1、改善疫苗的物理性狀，提高疫苗質量。採用新的油佐劑配製疫苗，使得疫苗的外觀和物理性狀得到明顯改善，以白油、司本-80和硬脂酸鋁組成的油佐劑為油相，病毒中加2％吐溫為水相，按二步乳化法能配製出粘度＜2」，穩定性較好，在4℃保存不破乳的雙相(W/O/W)油乳劑滅活疫苗。從而建立了檢驗疫苗物理性狀的方法和標準。
2、使用的劑量和次數減少。原有疫苗的用法用量是肌肉注射2次，每次5毫升，間隔兩周；優化疫苗的用法用量是2毫升1次肌肉注射。
具體實施例方式一種豬細小病毒病油乳劑滅活疫苗，是將豬細小病毒(PPV)接種細胞培養，獲得的病毒液經烷化劑滅活後加入油佐劑經乳化配製而成。油乳劑配製按容量計，94％白油和6％司本-80混合後加入2％硬脂酸鋁，即100毫升混合液加入2克硬脂酸鋁。
油佐劑中含硬脂酸鋁的量與疫苗的穩定性有關，進行多次乳化試驗證明，當油佐劑中含1-1.5％硬脂酸鋁時，配製的疫苗經3000r.p.m離心15分鐘後，可分二層，上層乳白色，下層淡紅色容量佔2/5-3/5；當含2％硬脂酸鋁時，經3000r.p.m 15分鐘離心後分二層，下層佔1/5-1/6；當含4％時，疫苗的粘度明顯增加，而且會出現少量的白色沉澱。
將原來使用的油佐劑(由9份石臘油和1份羊毛脂組成)改用白油為主組成的油佐劑。對這二種油佐劑配製的疫苗經多次比較，在物理性狀方面(外觀、粘度、穩定性、劑型等)有明顯的差異，即使採用不同的乳化方法也是如此。用新的油佐劑無論採用一步法乳化還是二步法乳化，疫苗在常溫下放置1-2天，5000毫升疫苗裝量的瓶底僅出現很少量的淡紅色乳液，用舊的油佐劑配製的疫苗穩定性較差，分層快，配好的疫苗不久就可分成二層。
經優化的豬細小病毒病油乳劑滅活疫苗接種2-3日齡乳鼠，安全通過。接種豚鼠四周後全部產生抗體反應，HI128～1024。接種6批敏感豬無明顯不良反應，體溫、食慾正常，接種部無明顯紅腫塊。
通過本動物的安全性和免疫力試驗，免疫持續期和保存期試驗，證實了減少疫苗用量和次數的效果。
原有疫苗用法用量是肌肉注射2次，每次5毫升，間隔兩周。通過試驗，優化疫苗的用法用量確定為2毫升1次肌肉注射。
本發明的具體使用效果，請參閱下表
*安全性指有否非特異性不良反應接種部位有無明顯紅腫塊，食慾、精神、體溫是否正常。
綜合上所述，經改造和優化後的豬細小病毒病油乳劑滅活疫苗不僅在外觀和物理性狀、疫苗的穩定性和安全性明顯優於原來的疫苗，而且免疫劑量減少5倍，免疫次數減為1次，疫苗的免疫效果確實，各項免疫力指標不變，從而大大降低了成本，方便了用戶。
權利要求
1.一種豬細小病毒病油乳劑滅活疫苗，其特徵在於是將用烷化劑滅活的豬細小病毒(PPV)加入油佐劑經乳化配製而成，油佐劑配製是按容量計，94％白油和6％司本-80混合後加入2％硬脂酸鋁，即100毫升混合液加入2克硬脂酸鋁。
2.根據權利要求1所述的豬細小病毒病油乳劑滅活疫苗，其特徵在於採用一步乳化。
3.根據權利要1所述的豬細小病毒病油乳劑滅活疫苗，其特徵在於採用二步法乳化。
4.根據權利要求1所述的豬細小病毒病油乳劑滅活疫苗，其特徵在於免疫劑量是每頭豬肌肉注射2毫升。
全文摘要
本發明屬獸醫生物新醫藥技術領域，是一種豬細小病毒病油乳劑滅活疫苗，能預防由豬細小病毒(PPV)引起的母豬繁殖障礙病。它是通過豬細小病毒接種細胞培養，獲得的病毒液用烷化劑滅活後加入油佐劑經乳化配製而成。油佐劑按容量計，由94％白油和6％司本－80混合後加入2％硬脂酸鋁，即100毫升混合液加入2克硬脂酸鋁。本發明通過改變油佐劑的配方，解決原有產品疫苗的穩定性較差、分層快和保質期等技術問題，通過技術研究減少疫苗的使用劑量和使用次數，解決原有疫苗使用手續麻煩和某些不足之處。
文檔編號A61K39/12GK1706497SQ200410025439
公開日2005年12月14日 申請日期2004年6月24日 優先權日2004年6月24日
發明者葉向陽, 張婉華, 潘雪珠, 曹偉明, 粟壽初, 徐平, 唐騏駿, 嚴仲烈, 楊水奶 申請人:上海市農業科學院畜牧獸醫研究所, 上海佳牧生物製品有限公司