一種化妝品微生物的檢測方法
2023-06-05 07:42:11 2
一種化妝品微生物的檢測方法
【專利摘要】本發明涉及一種化妝品微生物的檢測方法，該檢測方法，包括以下步驟：先分別配製高濃度的化妝品樣品備檢溶液、低濃度的化妝品樣品備檢溶液、不含樣品的空白對照液和含微生物的陽性對照液；然後將製得的高濃度的化妝品樣品備檢溶液、低濃度的化妝品樣品備檢溶液、空白對照液和陽性對照液分別注入四個含有培養基的培養皿中進行培養並進行菌落計數，仔細觀察細菌培養結果，通過對比對細菌進行鑑定。該方法採用SCDLP增菌液對樣品進行稀釋，可明顯提高檢測靈敏度，將卵磷脂吐溫80營養瓊脂作為大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌的培養基，使操作更為簡單，檢測結果更準確。
【專利說明】—種化妝品微生物的檢測方法
【技術領域】
[0001]本發明屬於化妝品安全性檢測領域，具體涉及一種化妝品微生物的檢測方法。
【背景技術】
[0002]隨著我國經濟社會的發展、人民生活質量的提高，化妝品工業近年來得到了快速發展，化妝品的種類與數量也與日俱增，其質量的好壞倍受相關監管部門及眾多消費者的關注與重視。為了提高化妝品的護膚和化妝效果，生產企業往往在其中添加了多種與蛋白質、脂肪、動物組織、維生素、無機鹽和水分等，化妝品的PH值為4-7，因此，化妝品成份中豐富營養成分及合適的PH值，為微生物的生長和繁殖提供了良好的條件，易導致化妝品腐敗變質。
[0003]人們使用含有微生物的化妝品可直接導致皮膚疾病，嚴重危害了人們尤其是女性消費者的健康，因此，化妝品中的微生物檢測是化妝品質量控制的重要項目和檢驗化妝口合格的重要指標。近年來研究表明，在對化妝品進行微生物檢測過程中，金黃色葡萄球菌、大腸桿菌等重要的致病菌檢測率較低，引起這一結果的原因主要有兩件:第一，部分生產企業在生產化妝品的過程中，對質量進行嚴格控制，化妝品未受到微生物的汙染；第二，化妝品中其他成份或現有檢測技術的缺陷使得微生素未能被檢出。2007版《化妝品衛生規範》中提出的對化妝品進行微生物檢測的方法複雜，而且存在技術上的缺陷，因此，為了保證我國化妝品的質量，保障人們的健康，尋找一種對化妝品微生物檢出率高，操作又簡便的檢測方法至關重要。
【發明內容】
[0004]為解決化妝品微生物檢測現有技術中的不足，本發明提供了一種可以對化妝品微生物進行快速檢測，且微生物檢出率高的檢測方法。
[0005]本發明的技術方案如下:
一種化妝品微生物的檢測方法，包括以下步驟:
(1)分別配製高濃度的化妝品樣品備檢溶液、低濃度的化妝品樣品備檢溶液、不含樣品的空白對照液和含微生物的陽性對照液；
(2)將步驟(1)中製得的高濃度的化妝品樣品備檢溶液、低濃度的化妝品樣品備檢溶液、空白對照液和陽性對照液分別注入四個含有培養基的培養皿中進行培養並進行菌落計數，仔細觀察細菌培養結果，通過對比對細菌進行鑑定。
[0006]優選的，所述的高濃度的化妝品樣品備檢溶液由以下方法製備:無菌稱取l(T20g親水性樣品加入到100ml SCDLP增菌液的玻璃瓶中，充分混勻，製得高濃度的化妝品樣品備檢溶液。
[0007]或無菌稱取l0-20g疏水性樣品加入到100ml SCDLP增菌液的玻璃瓶中，加入5ml吐溫80，充分混勻，製得高濃度的化妝品樣品備檢溶液。
[0008]優選的，所述的低濃度的化妝品樣品備檢溶液由以下方法製備:無菌稱取f3g親水性樣品加入到100ml SCDLP增菌液的玻璃瓶中，充分混勻，製得低濃度的化妝品樣品備檢溶液。
[0009]或無菌稱取f 3g疏水性樣品加入到100ml S⑶LP增菌液的玻璃瓶中，加入5ml吐溫80，充分混勻，製得低濃度的化妝品樣品備檢溶液。
[0010]優選的，所述的空白對照液由以下方法製備:將100ml S⑶LP增菌液加入玻璃瓶中，製得空白對照液。
[0011]優選的，所述的陽性對照液由以下方法製備:將Hg標準菌株加入到100mlSCDLP增菌液的玻璃瓶中，充分混勻，製得陽性對照液。
[0012]優選的，所述的標準菌株為金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌或酵母菌標準菌株中的一種或幾種。
[0013]優選的，所述的大腸埃希菌為大腸埃希菌標準菌株AMMS8099、所述的白色念珠菌為白色念珠菌ATCC10231、所述的金黃色葡萄球菌為金黃色葡萄球菌菌株NICPBP26112、所述的銅綠假單胞菌為銅綠假單胞菌標準菌株NICPBP10211。
[0014]優選的，所述的培養基為卵磷脂-吐溫80營養瓊脂或虎紅瓊脂。
[0015]優選的，所述的步驟(2)具體為:取高濃度的化妝品樣品備檢溶液、低濃度的化妝品樣品備檢溶液、陽性對照液及空白對照液各2~5ml分別加入到不同的培養皿中，所述培養皿中加入卵磷脂-吐溫80營養瓊脂作為培養基，將培養皿置入37°C恆溫生化培養箱培養48h，然後進行菌落計數；
或取高濃度的化妝品樣品備檢溶液、低濃度的化妝品樣品備檢溶液、陽性對照液及空白對照液各2-5ml分別加入到不同的培養皿中，所述的培養皿中含有虎紅瓊脂作為培養基，將培養皿置入28°C恆溫生化培養箱培養72h，然後進行菌落計數。
[0016]優選的，所述的對細菌進行鑑定的具體方法為:經過培養後，
高濃度的化妝品樣品備檢溶液和/或低濃度的化妝品樣品備檢溶液與陽性對照液中同時培養出特定特徵的菌落，且空白對照液中未培養出特定特徵的菌落說明待測樣品中含有和具有所述特定特徵的菌落；
所述特定特徵菌落的具體特徵為:糞大腸菌群菌落呈中等大小、灰白的半透明、中間凸起有菌心，溼潤菌落；
銅綠假單胞菌在卵磷脂吐溫80營養瓊脂平板上菌落比糞大腸菌群小，呈白色不透明較溼潤，可產生綠色的綠膿菌素；
金黃色葡萄球菌在卵磷脂吐溫80營養瓊脂培養基上菌落周圍可產生與平板相似的透明暈圈；
酵母菌在虎紅瓊脂平板上菌落大而厚，圓形， 光滑溼潤，粘性，顏色單調，多為白色、土黃色或紅色。
[0017]本發明同現有技術相比，具有以下有益效果:
(I)大多數化妝品中含有不同不同種類和劑量的防腐劑，而增菌液中含有卵磷脂和吐溫，這兩種成分可以中和化妝品中的防腐劑，使處於休眠狀態下細菌修復和生長，傳統的檢測技術中採用生理鹽水對樣品進行稀釋，在樣品濃度為1:10時菌落數不超標甚至未見細菌菌落，而本發明中採用SCDLP增菌液對樣品進行稀釋，可明顯提高檢測靈敏度。
[0018](2) SCDLP增菌液代替大腸菌群的肉湯培養基，並不影響檢測結果，本發明中我們採用SCDLP增菌液代替大腸埃希菌的肉湯培養基並不影響檢測結果，卻使檢測過程更為簡便。
[0019](3)卵磷脂吐溫80營養瓊脂為廣譜培養基，本發明中，大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌在該培養基中均可生長良好，均有典型菌落特徵，採用卵磷脂吐溫80營養瓊脂對上述菌種進行細菌培養，並不影響這些菌種的檢測結果，卻使檢測過程更為簡便。
【具體實施方式】
[0020]下面結合具體實施例對本發明進行詳細說明:
實施例1:
(2)將步驟(1)中製得的高濃度的化妝品樣品備檢溶液、低濃度的化妝品樣品備檢溶液、空白對照液和陽性對照液分別注入四個含有培養基的培養皿中進行培養並進行菌落計數，仔細觀察細菌培養結果，通過對比對細菌進行鑑定。
[0021](I)無菌稱取IOg親水性樣品加入到100ml S⑶LP增菌液的玻璃瓶中，充分混勻，製得lg/ml高濃度的化妝品樣品備檢溶液；無菌稱取Ig親水性樣品加入到100ml SCDLP增菌液的玻璃瓶中，充分混勻，製得0.lg/ml低濃度的化妝品樣品備檢溶液。[0022](2)將100ml S⑶LP增菌液加入玻璃瓶中，製得空白對照液。
[0023](3)將Ig標準金黃色葡萄球菌NICPBP26112、大腸埃希菌標準菌株AMMS8099、銅綠假單胞菌菌株NICPBP10211、白色念珠菌菌株ATCC10231和酵母菌標準菌株加入到100mlSCDLP增菌液的玻璃瓶中，充分混勻，製得陽性對照液。
[0024](4)取lg/ml高濃度的化妝品樣品備檢溶液、0.lg/ml低濃度的化妝品樣品備檢溶液、陽性對照液及空白對照液各2ml分別加入到不同的含有卵磷脂-吐溫80營養瓊脂的培養皿中，將培養皿置入37 °C恆溫生化培養箱培養48h，然後進行菌落計數。
[0025]經過培養後，含有空白對照液的培養皿中未培養出菌株，含有lg/ml高濃度的化妝品樣品備檢溶液的培養皿、含有0.lg/ml低濃度的化妝品樣品備檢溶液的培養皿、含有陽性對照液的培養皿均有中等大小、灰白的半透明、中間凸起有菌心，溼潤菌落，說明樣品中含有大腸埃希菌。
[0026]實施例2:
(I)無菌稱取20g親水性樣品加入到100ml S⑶LP增菌液的玻璃瓶中，充分混勻，製得2g/ml高濃度的化妝品樣品備檢溶液；無菌稱取2g親水性樣品加入到100ml SCDLP增菌液的玻璃瓶中，充分混勻，製得0.2g/ml低濃度的化妝品樣品備檢溶液。
[0027](2)將100ml S⑶LP增菌液加入玻璃瓶中，製得空白對照液。
[0028](3)將Ig標準金黃色葡萄球菌NICPBP26112、大腸埃希菌標準菌株AMMS8099、銅綠假單胞菌菌株NICPBP10211、白色念珠菌菌株ATCC10231和酵母菌標準菌株加入到100mlSCDLP增菌液的玻璃瓶中，充分混勻，製得陽性對照液。
[0029](4)取2g/ml高濃度的化妝品樣品備檢溶液、0.2g/ml低濃度的化妝品樣品備檢溶液、陽性對照液及空白對照液各5ml分別加入到不同的含有卵磷脂-吐溫80營養瓊脂的培養皿中，將培養皿置入37°C恆溫生化培養箱培養48h，然後進行菌落計數。
[0030]經過培養後，含有空白對照液的培養皿中未培養出菌株，含有2g/ml高濃度的化妝品樣品備檢溶液的培養皿、含有0.lg/ml低濃度的化妝品樣品備檢溶液的培養皿、含有陽性對照液的培養皿均有菌落，菌落周圍有與平板相似的透明暈圈，說明樣品中含有金黃色葡萄球菌。
[0031]實施例3:
(I)無菌稱取IOg疏水性樣品加入到100ml S⑶LP增菌液的玻璃瓶中，加入5ml吐溫80，充分混勻，製得lg/ml高濃度的化妝品樣品備檢溶液；無菌稱取Ig親水性樣品加入到100ml S⑶LP增菌液的玻璃瓶中，充分混勻，製得0.lg/ml低濃度的化妝品樣品備檢溶液。
[0032](2)將100ml S⑶LP增菌液加入玻璃瓶中，製得空白對照液。
[0033](3)將Ig標準金黃色葡萄球菌NICPBP26112、大腸埃希菌標準菌株AMMS8099、銅綠假單胞菌菌株NICPBP10211、白色念珠菌菌株ATCC10231和酵母菌標準菌株加入到100mlSCDLP增菌液的玻璃瓶中，充分混勻，製得陽性對照液。
[0034](4)取lg/ml高濃度的化妝品樣品備檢溶液、0.lg/ml低濃度的化妝品樣品備檢溶液、陽性對照液及空白對照液各5ml分別加入到不同的含有虎紅瓊脂的培養皿中，將培養皿置入28°C恆溫生化培養箱培養48h，然後進行菌落計數。
[0035]經過培養後，含有空白對照液的培養皿中未培養出菌株，含有lg/ml高濃度的化妝品樣品備檢溶液的培養皿、含有0.lg/ml低濃度的化妝品樣品備檢溶液的培養皿、含有陽性對照液的培養皿均有大而厚，圓形，光滑溼潤，粘性，白色或土黃色的菌落，說明化妝品樣品中含有酵母菌。
[0036]實施例4:
(I)無菌稱取20g疏水性樣品加入到100ml S⑶LP增菌液的玻璃瓶中，加入5ml吐溫80，充分混勻，製得2g/ml高濃度的化妝品樣品備檢溶液；無菌稱取2g親水性樣品加入到100ml S⑶LP增菌液的玻璃瓶中，充分混勻，製得0.2g/ml低濃度的化妝品樣品備檢溶液。
[0037](2)將100ml S⑶LP增菌液加入玻璃瓶中，製得空白對照液。
[0038](3)將Ig標準金黃色葡萄球菌NICPBP26112、大腸埃希菌標準菌株AMMS8099、銅綠假單胞菌菌株NICPBP10211、白色念珠菌菌株ATCC10231和酵母菌標準菌株加入到100mlSCDLP增菌液的玻璃瓶中，充分混勻，製得陽性對照液。
[0039](4)取2g/ml高濃度的化妝品樣品備檢溶液、0.2g/ml低濃度的化妝品樣品備檢溶液、陽性對照液及空白對照液各5ml分別加入到不同的含有虎紅瓊脂的培養皿中，將培養皿置入28°C恆溫生化培養箱培養48h，然後進行菌落計數。
[0040]經過培養後，含有空白對照液的培養皿、含有lg/ml高濃度的化妝品樣品備檢溶液的培養皿、含有0.lg/ml低濃度的化妝品樣品備檢溶液的培養皿均未培養出菌株,含有陽性對照液的培養皿有菌落，說明化妝品樣品中無細菌。
[0041]實施例5:
(I)無菌稱取15g親水性樣品加入到100ml S⑶LP增菌液的玻璃瓶中，充分混勻，製得
1.5g/ml高濃度的化妝品樣品備檢溶液；無菌稱取1.5g親水性樣品加入到100ml S⑶LP增菌液的玻璃瓶中，充分混勻，製得0.15g/ml低濃度的化妝品樣品備檢溶液。
[0042](2)將100ml S⑶LP增菌液加入玻璃瓶中，製得空白對照液。
[0043](3)將Ig標準金黃色葡萄球菌NICPBP26112、大腸埃希菌標準菌株AMMS8099、銅綠假單胞菌菌株NICPBP10211、白色念珠菌菌株ATCC10231和酵母菌標準菌株加入到100mlSCDLP增菌液的玻璃瓶中，充分混勻，製得陽性對照液。[0044](4)取1.5g/ml高濃度的化妝品樣品備檢溶液、0.15g/ml低濃度的化妝品樣品備檢溶液、陽性對照液及空白對照液各5ml分別加入到不同的含有卵磷脂-吐溫80營養瓊脂的培養皿中，將培養皿置入37°C恆溫生化培養箱培養48h，然後進行菌落計數。
[0045]經過培養後，含有空白對照液的培養皿、含有1.5g/ml高濃度化妝品樣品備檢溶液的培養皿、含有0.15g/ml低濃度化妝品樣品備檢溶液的培養皿中均未培養出菌株，含有陽性對照液的培養皿中有菌落，說明樣品中無細菌。
[0046]以上所述實施例只是本發明的較佳實例，並非來限制本發明實施範圍，故凡依本發明申請專利範圍所述的構造、特徵及原理所做的等效變化或修飾，均應包括本發明專利申請範圍內 。
【權利要求】
1.一種化妝品微生物的檢測方法，包括以下步驟: (1)分別配製高濃度的化妝品樣品備檢溶液、低濃度的化妝品樣品備檢溶液、不含樣品的空白對照液和含微生物的陽性對照液； (2)將步驟(1)中製得的高濃度的化妝品樣品備檢溶液、低濃度的化妝品樣品備檢溶液、空白對照液和陽性對照液分別注入四個含有培養基的培養皿中進行培養並進行菌落計數，仔細觀察細菌培養結果，通過對比對細菌進行鑑定。
2.根據權利要求1所述的一種化妝品微生物的檢測方法，其特徵在於，所述的高濃度的化妝品樣品備檢溶液由以下方法製備:無菌稱取l(T20g親水性樣品加入到100ml S⑶LP增菌液的玻璃瓶中，充分混勻，製得高濃度的化妝品樣品備檢溶液； 或無菌稱取l(T20g疏水性樣品加入到100ml S⑶LP增菌液的玻璃瓶中，加入5ml吐溫80，充分混勻，製得高濃度的化妝品樣品備檢溶液。
3.根據權利要求1所述的一種化妝品微生物的檢測方法，其特徵在於，所述的低濃度的化妝品樣品備檢溶液由以下方法製備:無菌稱取Hg親水性樣品加入到100ml SCDLP增菌液的玻璃瓶中，充分混勻，製得低濃度的化妝品樣品備檢溶液； 或無菌稱取廣3g疏水性樣品加入到100ml S⑶LP增菌液的玻璃瓶中，加入5ml吐溫80，充分混勻，製得低濃度的化妝品樣品備檢溶液。
4.根據權利要求1所述的一種化妝品微生物的檢測方法，其特徵在於，所述的空白對照液由以下方法製備:將100ml SCDLP增菌液加入玻璃瓶中，製得空白對照液。
5.根據權利要求1所述的一種化妝品微生物的檢測方法，其特徵在於，所述的陽性對照液由以下方法製備:將f 3g標準菌株加入到100ml S⑶LP增菌液的玻璃瓶中，充分混勻，製得陽性對照液。
6.根據權利要求5所述的一種化妝品微生物的檢測方法，其特徵在於，所述的標準菌株為金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌或酵母菌標準菌株中的一種或幾種。
7.根據權利要求6所述的一種化妝品微生物的檢測方法，其特徵在於，所述的大腸埃希菌為大腸埃希菌標準菌株AMMS8099、所述的白色念珠菌為白色念珠菌ATCC10231、所述的金黃色葡萄球菌為金黃色葡萄球菌菌株NICPBP26112、所述的銅綠假單胞菌為銅綠假單胞菌標準菌株NICPBP10211。
8.根據權利要求1所述的一種化妝品微生物的檢測方法，其特徵在於，所述的培養基為卵磷脂-吐溫80營養瓊脂或虎紅瓊脂。
9.根據權利要求1所述的一種化妝品微生物的檢測方法，其特徵在於，所述的步驟(2)具體為:取高濃度的化妝品樣品備檢溶液、低濃度的化妝品樣品備檢溶液、陽性對照液及空白對照液各2~5ml分別加入到不同的培養皿中，所述培養皿中加入卵磷脂-吐溫80營養瓊脂作為培養基，將培養皿置入37°C恆溫生化培養箱培養48h，然後進行菌落計數； 或取高濃度的化妝品樣品備檢溶液、低濃度的化妝品樣品備檢溶液、陽性對照液及空白對照液各2-5ml分別加入到不同的培養皿中，所述的培養皿中含有虎紅瓊脂作為培養基，將培養皿置入28°C恆溫生化培養箱培養72h，然後進行菌落計數。
10.根據權利要求1所述的一種化妝品微生物的檢測方法，其特徵在於，所述的對細菌進行鑑定的具體方法為:經過培 養後，高濃度的化妝品樣品備檢溶液和/或低濃度的化妝品樣品備檢溶液與陽性對照液中同時培養出特定特徵的菌落，且空白對照液中未培養出特定特徵的菌落說明待測樣品中含有和具有所述特定特徵的菌落； 所述特定特徵菌落的具體特徵為:糞大腸菌群菌落呈中等大小、灰白的半透明、中間凸起有菌心，溼潤菌落； 銅綠假單胞菌在卵磷脂吐溫80營養瓊脂平板上菌落比糞大腸菌群小，呈白色不透明較溼潤，可產生綠色的綠膿菌素； 金黃色葡萄球菌在卵磷脂吐溫80營養瓊脂培養基上菌落周圍可產生與平板相似的透明暈圈； 酵母菌在虎紅瓊脂平板上菌落大而厚，圓形，光滑溼潤，粘性，顏色單調，多為白色、土黃色或紅色。
【文檔編號】C12R1/19GK103614451SQ201310618267
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年11月29日 優先權日:2013年11月29日
【發明者】郭狄 申請人:中山鼎晟生物科技有限公司