具有α‑葡萄糖苷酶抑制作用的短果杜鵑提取物及其製備方法和應用與流程

2023-06-05 10:51:16 2

本發明涉及本發明涉及植物提取技術領域，尤其涉及一種具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的短果杜鵑提取物及其製備方法和應用。

背景技術：

糖尿病是一類代謝性疾病，它的特徵是血糖長時間高於標準值。高血糖會造成三多一少的症狀：吃多、喝多、尿多、以及體重下降。如果未經治療，糖尿病可能引發許多併發症。急性併發症包括糖尿病酮酸血症與高滲透壓高血糖非酮酸性昏迷；嚴重的長程併發症則包括心血管疾病、中風、慢性腎臟病、糖尿病足、以及視網膜病變等。據who的統計，到2030年，糖尿病患者將會有3.66億之多，因此降低餐後血糖是預防糖尿病，減少其併發症的重要措施。

α-葡萄糖苷酶抑制劑是一類以延緩腸道碳水化合物吸收而達到治療糖尿病的口服降糖藥物。α-葡萄糖苷酶抑制劑是比較成熟的治療糖尿病藥物，已廣泛應用於臨床。從藥用植物中分離純化出的活性成分對α-葡萄糖苷酶的抑制作用大都比市場上的降糖藥物強，如阿卡波糖、野尻毒素等。然而由於分離純化技術的限制，這些成分還不能大規模生產，該類產品產量低、價格高，因此需要研究創新技術運用到工業化中生產質優價廉的降糖產品。

短果杜鵑(rhododendronbrachycarpum)為杜鵑花科多年生常綠小灌木，株高10-25cm，徑橫臥。主要生長於長白山海拔1300-2650m，屬長白山高山苔原帶生態系統中的優勢種群。目前，對短果杜鵑大多集中在遺傳結構、組織培養和植株解剖等方面的研究。關於短果杜鵑提取物生理活性方面鮮有報導。

技術實現要素：

本發明要解決的技術問題是克服現有技術的不足，提供一種製備工藝簡單的具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的短果杜鵑提取物的製備方法，製得的提取物對α-葡萄糖苷酶有較好的抑制作用。

為解決上述技術問題，本發明採用以下技術方案：

一種具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的短果杜鵑提取物的製備方法，包括以下步驟：

(1)將短果杜鵑植株浸入甲醇溶液中，超聲提取，過濾；

(2)將步驟(1)得到的提取液經過減壓蒸餾，得到具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的短果杜鵑提取物。

優選地，所述步驟(1)還包括：將濾渣浸入乙醇溶液中，超聲，過濾；重複濾渣浸沒-超聲-過濾過程多次，合併濾液得到提取液。

優選地，所述步驟(1)中，所述甲醇溶液的質量濃度為55％～95％。

優選地，所述步驟(1)中，所述短果杜鵑植株為乾燥後的短果杜鵑植株，所述乾燥後的短果杜鵑植株與甲醇溶液的質量比為1∶5。

優選地，所述步驟(1)中，所述步驟(1)中，超聲提取功率為100w，提取時間為1h。

優選地，所述步驟(2)中，所述減壓蒸餾的真空度0.04～0.06mpa，溫度為43℃～48℃；減壓蒸餾至無醇味。

優選地，濾渣浸沒-超聲-過濾過程的重複次數為3次。

作為一個總的發明構思，本發明還提供一種具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的短果杜鵑提取物，所述具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的短果杜鵑提取物由上述的製備方法所製得。

優選地，所述具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的短果杜鵑提取物中的主要活性成分包括杜鵑素、蘆丁、槲皮素和單寧酸。

作為一個總的發明構思，本發明還提供一種上述的製備方法所製得的具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的短果杜鵑提取物在製備α-葡萄糖苷酶抑制劑中的應用。

與現有技術相比，本發明的優點在於：

本發明短果杜鵑提取物的製備工藝簡單實用，製得的提取物對α-葡萄糖苷酶有較好的抑制作用；實驗結果顯示：95％甲醇超聲提取得到的短果杜鵑提取物對α-葡萄糖苷酶的抑制活性高於現有藥物阿卡波糖，且對α-葡萄糖苷酶的抑制率均呈劑量依賴性。

附圖說明

圖1為實施例1的具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的短果杜鵑提取物與阿卡波糖對α-葡萄糖苷酶的抑制活性的對照圖。

圖2為實施例2的具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的短果杜鵑提取物與阿卡波糖對α-葡萄糖苷酶的抑制活性的對照圖。

圖3為實施例3的具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的短果杜鵑提取物與阿卡波糖對α-葡萄糖苷酶的抑制活性的對照圖。

具體實施方式

以下結合具體優選的實施例對本發明作進一步描述，但並不因此而限制本發明的保護範圍。

實施例1：

一種本發明的具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的短果杜鵑提取物的製備方法，包括以下步驟：

(1)將乾燥後的40g短果杜鵑植株(包括根莖和枝葉部分)浸入200g質量百分比濃度95％的甲醇溶液中超聲提取，超聲功率為100w，時間為1h，過濾，濾渣中再添加200g甲醇溶液超聲提取1h，重複提取3次後，合併濾液得到提取液；

(2)提取液在45℃、真空度0.05mpa條件下減壓蒸餾濃縮至無醇味，得到具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的短果杜鵑提取物。

實施例2：

一種本發明的具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的短果杜鵑提取物的製備方法，包括以下步驟：

(1)將乾燥後的40g短果杜鵑植株(包括根莖和枝葉部分)浸入200g質量百分比濃度75％的甲醇溶液中超聲提取，超聲功率為100w，時間為1h，過濾，濾渣中再添加200g甲醇溶液超聲提取1h，重複提取3次後，合併濾液得到提取液；

(2)提取液在45℃、真空度0.05mpa條件下減壓蒸餾濃縮至無醇味，得到具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的短果杜鵑提取物。

實施例3：

一種本發明的具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的短果杜鵑提取物的製備方法，包括以下步驟：

(1)將乾燥後的40g短果杜鵑植株(包括根莖和枝葉部分)浸入200g質量百分比濃度55％的甲醇溶液中超聲提取，超聲功率為100w，時間為1h，過濾，濾渣中再添加200g甲醇溶液超聲提取1h，重複提取3次後，合併濾液得到提取液；

(2)提取液在45℃、真空度0.05mpa條件下減壓蒸餾濃縮至無醇味，得到具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的短果杜鵑提取物。

實施例4：

本發明的具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的短果杜鵑提取物對α-葡萄糖苷酶的抑制活性測定

儀器以及試劑來源為：multiskanmk3酶標儀(thermoelectron)；lrh-150恆溫培養箱(上海一恆科技有限公司)；delta320型ph計(mettler-toledo)；電子天平(mettler-toledo)；旋轉蒸發儀(heidolph)。α-葡萄糖苷酶(sigma公司，ec3.2.1.20)，4-硝基苯基-α-d-吡喃葡萄糖苷(pnpg，sigma公司，批號：026k1516)，磷酸鉀緩衝液(ph6.8)，阿卡波糖(卡博平，杭州中美華東製藥有限公司，批號：110704)，其他試劑均為分析純。

測試方法如下：

將實施例1所得的具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的短果杜鵑提取物溶於二甲基亞碸(dmso)，得到三組濃度為10μg/ml、30μg/ml和50μg/ml的短果杜鵑提取物溶液作為實驗組，另外採用三組10μg/ml、30μg/ml和50μg/ml的阿卡波糖溶液(溶劑同為二甲基亞碸)作為對照組。取3組(每組兩個)96孔板，每孔加入80μl濃度為2.0mmol/l的pnpg溶液(pbs溶解)，第1組其中一個96孔板每孔再加入10μl上述濃度為10μg/ml的短果杜鵑提取物溶液，另一個96孔板每孔再加入10μl上述濃度為10μg/ml的阿卡波糖溶液作為對照；第2組其中一個96孔板每孔再加入10μl上述濃度為30μg/ml的短果杜鵑提取物溶液，另一個96孔板每孔再加入10μl上述濃度為30μg/ml的阿卡波糖溶液作為對照；第3組其中一個96孔板每孔再加入10μl上述濃度為50μg/ml的短果杜鵑提取物溶液，另一個96孔板每孔再加入10μl上述濃度為50μg/ml的阿卡波糖溶液作為對照；另外再取1個96孔板，每孔加入80μl濃度為2.0mmol/l的pnpg溶液(pbs溶解)，每孔再加入10μldmso作為空白對照組。每組設3個平行孔，在酶標儀400nm下測定背景組吸光度(a值)。然後每個96孔板的上述3個平行孔中再加入10μl濃度為1.62u/ml的α-葡萄糖苷酶溶液(pbs溶解)，置於恆溫培養箱中，在37℃下恆溫孵育30min，測定試驗組吸光度(a值)。抑制率(％)用以下公式計算：

抑制率(％)＝(δa空白-δa樣品)/δa空白×100％

δa空白為空白對照組酶與底物反應後a值-背景a值

δa樣品為樣品組(包括實驗組和對照組)酶與底物反應後a值-背景a值

結果見圖1，結果表明，95％甲醇超聲提取得到的短果杜鵑提取物對α-葡萄糖苷酶有較好的抑制作用，優於陽性對照藥阿卡波糖的活性。

實施例5：

本發明的具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的短果杜鵑提取物對α-葡萄糖苷酶的抑制活性測定方法與實施例4基本相同，其不同點僅在於：本實施例採用的具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的短果杜鵑提取物為實施例2的75％甲醇超聲提取得到的短果杜鵑提取物。

結果見圖2，結果表明，75％甲醇超聲提取得到的短果杜鵑提取物對α-葡萄糖苷酶有較好的抑制作用。

實施例6：

本發明的具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的短果杜鵑提取物對α-葡萄糖苷酶的抑制活性測定方法與實施例4基本相同，其不同點僅在於：本實施例採用的具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的短果杜鵑提取物為實施例3的55％甲醇超聲提取得到的短果杜鵑提取物。

結果見圖3，結果表明，55％甲醇超聲提取得到的短果杜鵑提取物對α-葡萄糖苷酶有較好的抑制作用。

從圖1～3可知，不同濃度甲醇超聲提取得到的短果杜鵑提取物對α-葡萄糖苷酶均有較好的抑制作用，其中95％甲醇提取物的活性最強，優於陽性對照藥阿卡波糖的活性。

最後有必要在此說明的是：以上實施例只用於對本發明的技術方案作進一步詳細地說明，不能理解為對本發明保護範圍的限制，本領域的技術人員根據本發明的上述內容作出的一些非本質的改進和調整均屬於本發明的保護範圍。