右旋西布曲明及其相應的鹽在製備減肥藥物中的用途的製作方法

2023-06-05 10:29:51 2

專利名稱：右旋西布曲明及其相應的鹽在製備減肥藥物中的用途的製作方法
技術領域：
本發明屬化學藥物領域，涉及西布曲明及其在製藥中的用途，具體涉及右旋鹽酸西布曲明及其相應的鹽在製備減肥藥物中的用途。
背景技術：
肥胖是一種發病率逐年增加的常見慢性疾病，該病會增II型糖尿病、高血壓、高脂血症、冠心病等疾病的發病危險，是人類健康的潛在威脅，自1972年以來，美國FDA批准了2個減肥藥上市。其一是1996年批准的芬氟拉明，該藥由於嚴重的不良反應已從市場撤消。另一個就是1997年12月上市的西布曲明(sibutramine，Sib)。文獻報導，Sib其作用機制為抑制中樞神經細胞對5-羥色胺和去甲腎上腺素再攝取，降低食慾；同時，可通過增加機體產熱，促進脂肪組織消耗，從而降低體重(Yoshida T，NishiokoH，Nakamura Y et al.Reduced norepinephrine turnover in brown adipose tissue of pre-obesemice treated with monosodium L-glutamate.Life Sciences，1985；36(10)931-938.Glick SD，Haskew RE，Maisonneuve IM，et al.Enantioselective behavioral effects of sibutraminemetabolites.Europen Journal of Pharmacology.2000；397(1)93-102.Terutake NAKAGAWA，Kiyoharu UKAI，Tadashi OHYAMA，et al.Effects of chronic Administration of Sibutramine onbody weight，food intake and motor activity in neonatally monosodium glutamate-treatedobese female ratsrelationship of antiobesity effect with monoamines.Exp.Anim.2000；49(4)239-249.Carol N.Boozer，Rudolph L.Leibel，Robert J，et al.Synergy of sibutramine andlow-dose leptin in treatment of diet-induced obesity in rats.Metabolism.2001；50(8)889-893.)。
目前，市場銷售的減肥藥成分多為鹽酸Sib的消旋體，有關專利(US 6,552,087)用右旋西布曲明於治療抑鬱症、肥胖和帕金森氏病，該專利涉及到右旋西布曲明對5-羥色胺和去甲腎上腺素的再攝取的抑制作用，以及產生生理性的飽食感、減少食物的攝取量以達到減肥的作用。該藥最初是作為第二代抗抑鬱藥而進行臨床試驗的，臨床實驗中最常見的不良反應為頭痛、口乾、厭食、失眠等、高血壓、心悸、心動過速，具統計，不良反應發生率為安慰劑組的2.4～4倍。

發明內容
本發明的目的是提供右旋鹽酸西布曲明及其相應的鹽在製藥中的用途，具體是提供右旋鹽酸西布曲明及其相應的鹽在製備減肥藥物中的用途。
本發明對西布曲明進行了拆分，得到Sib的R和S型光學異構體，製備右旋西布曲明鹽及其相應的鹽，並經動物實驗證實，藥物的光學異構體可在保證藥效的同時，減少藥物的用量和副作用。鑑於R-西布曲明是目前使用的西布曲明消旋體的主要活性成分，本發明用R-西布曲明作為藥物給藥，能減少用藥劑量，降低藥物的副作用，也同時消除了S-西布曲明可能引起的副作用。
本發明以動物模型為基礎，證實右旋西布曲明能減少大鼠的攝食量、體重、腎周脂肪和甘油三脂，並不減少膽固醇，主要是通過減少甘油三脂，來抑制其脂肪組織增長，從而減輕其體重。
本發明採用大鼠營養性肥胖模型和下丘腦性肥胖模型，以消旋鹽酸Sib為陽性對照藥，採用Lee’s指數、進食量與體重變化、腎周脂肪重量與病理切片觀察、血脂變化、空腸絨毛掃描電鏡觀察及血壓變化的指標，檢驗鹽酸Sib消旋體與其R、S型拆分體的減肥作用。結果證實Sib消旋體及其R型光學異構體能通過減少甘油三脂，抑制其脂肪組織增長，從而減輕其體重。其中R-西布曲明的減肥作用更強。
本發明通過下述方法和步驟實現，1，拆分西布曲明手性異構體，製備右旋西布曲明鹽採用相應的手性酸試劑對含氮化合物西布曲明進行拆分，所述試劑可以選擇酒石酸及其衍生物，包括D-(+)-酒石酸、L-(-)-酒石酸、D-(+)-二苯甲醯酒石酸、L-(-)-二苯甲醯酒石酸、D-(+)-二對甲基苯甲醯酒石酸和L-(-)-二對甲基苯甲醯酒石酸，其中D-(+)-二苯甲醯酒石酸和L-(-)-二苯甲醯酒石酸為優選。製備的右旋西布曲明鹽酸鹽包括鹽酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、醋酸鹽、馬來酸鹽、(+)/(-)酒石酸鹽、(+)/(-)酒石酸衍生物的鹽。
2，建立肥胖大鼠模型按已知方法建立肥胖大鼠模型(中國藥理學通報。1993；9(1)75-769；中藥藥理與臨床。1988；4(2)9-13)模型1——營養性肥胖模型3周齡SD大鼠50g±5g，，隨機分為正常飼料組和營養飼料組；營養飼料組第1、2周每天每隻給13g營養飼料，以後每周增加2g，連續飼養8周，然後隨機分為NS組、RS組、R組、S組，每組12隻，雌雄各半。
模型2——下丘腦性肥胖模型SD大鼠出生一天，背部皮下注射15％穀氨酸鈉生理溶液，3mg/g體重/d，連續5天。3周後斷乳、分罐，用營養飼料飼養，不限量，自由飲水，連續8周，然後隨機分為NS組、RS組、R組、S組，每組12隻，雌雄各半。
營養飼料配方86％基礎飼料、5％奶粉、7％豬油、1.5％蛋黃粉、0.5％魚肝油(上海海軍醫學研究所實驗動物部飼料廠)。
3，動物實驗Sib 24h攝食抑制ED50為5～8mg/kg，最大抑制量為10mg/kg。本實驗採用8mg/kg的劑量，其光學異構體採用半量，為4mg/kg，每日上午給藥，連續2周，觀察其生物等效性。
給藥過程中，觀察各組大鼠進食量與體重變化。2周後，測定Lee’s指數、血壓、和血脂包括總膽固醇、甘油三脂，及腎周脂肪。
實驗結果證明西布曲明的有效部分為R-西布曲明；RS與R表現出明顯的降低其腎周脂肪和甘油三脂的作用。
本發明所述鹽酸西布曲明消旋體表示為RS，右旋鹽酸西布曲明表示為R，左旋鹽酸西布曲明表示為S，用前用生理鹽水(NS)溶解，RS80mg/dl；R40mg/dl；S40mg/dl，穀氨酸鈉生理鹽水溶解，濃度為15mg/dl。
所述實驗動物SD大鼠，由上海復旦大學實驗動物部提供，動物合格證號醫動字第02-22號。
所用實驗器材FA2104電子天平(上海天平儀器廠)，BPM-1插入式血壓儀(寶雞市無線電二廠)，電子掃描電鏡(日立公司)、光學顯微鏡(Nikon)。
營養飼料組第1、2周每天每隻給予13g營養飼料，以後每周增加2g，連續飼養8周，然後隨機分為NS組、RS組、R組、S組，每組12隻，雌雄各半。
具體實施例方式
實施例1 拆分西布曲明手性異構體選擇手性酸試劑D-(+)-二苯甲醯酒石酸和L-(-)-二苯甲醯酒石酸按本發明所述方法對含氮化合物西布曲明進行拆分後，確定西布曲明光學異構體平面結構，通過對元素分析、核磁共振譜的分析，證實得到的2個西布曲明光學異構體與西布曲明消旋體完全一致，說明它們的分子平面結構是完全相同的，拆分前後未發生變化。西布曲明光學異構體絕對構型的判斷，根據文獻報導用手性分離柱，使用同樣的色譜柱，確定了所拆分到的化合物的絕對構型及其光學純度，用HPLC法對得到的2個光學異構體進行了定量分析，色譜條件如下色譜柱Daicel公司OD-H手性色譜柱流動相正己烷∶乙醇∶三氟乙酸(930∶70∶0.5)流速0.5ml/min檢測波長225nm檢測結果R-西布曲明99.6％，S-西布曲明99.8％實施例2 製備右旋西布曲明鹽30克西布曲明鹽酸鹽(消旋體)中加入NaOH溶液至pH＝8.5～9.0，用氯仿萃取3次共300ml，回收氯仿，游離的西布曲明用150ml乙酸乙酯溶解，加入含35.6克L-(-)-二苯甲醯酒石酸的乙酸乙酯溶液150ml，攪拌回流30分鐘，冷卻至室溫，析出固體，過濾。母液減壓蒸去乙酸乙酯，滴加NaOH溶液至pH＝8.5～9.0用氯仿萃取3次，回收氯仿，殘留物用乙酸乙酯溶解，加入D-(+)-二苯甲醯酒石酸的乙酸乙酯溶液，攪拌回流30分鐘，冷卻至室溫，析出固體，為R-(+)-西布曲明-D-(+)-二苯甲醯酒石酸鹽粗品，過濾後，用異丙醇重結晶，得R-(+)-西布曲明-D-(+)-二苯甲醯酒石酸鹽純品18.5克(光學純度＞99.5％，HPLC。用NaOH水溶液處理R-(+)-西布曲明-D-(+)-二苯甲醯酒石酸鹽，並用萃取，回收氯仿，得R-(+)-西布曲明游離鹼，用乙醚/HCl處理，得右旋西布曲明鹽酸鹽。
元素分析C17H26ClN·HCI理論值C＝64.55；H＝8.60；N＝4.43；CI＝22.45％，實驗值C＝64.49；H＝8.78；N＝4.55；Cl＝22.68％旋光度[α]D＝+4.47(c＝2.44，乙醇)。
實施例3 肥胖模型動物實驗Sib 24h攝食抑制ED50為5～8mg/kg，最大抑制量為10mg/kg。本實驗採用8mg/kg的劑量，其光學異構體採用半量，為4mg/kg，每日上午給藥，連續2周，觀察其生物等效性。
給藥過程中，觀察各組大鼠進食量與體重變化。2周後，測定Lee’s指數、血壓、和血脂(包括總膽固醇、甘油三脂等)、及腎周脂肪。
結果表明，給藥前，各組的體重無顯著性差異。給藥2周後，在營養性肥胖大鼠模型中，與NS組相比較，RS組和R組體重均有明顯下降，R與RS具有生物等效性，R組體重下降較RS組更為明顯，而S組與R組相比，存在顯著性差異，證明S無減肥作用。在下丘腦性肥胖模型上，雌性RS與R組體重較NS組有所降低，S組體重有所增加，各組雄性大鼠無明顯差異。各給藥組攝食量與NS組比較均有明顯下降，其中以R組最為明顯，其次為RS組。兩模型比較，營養性肥胖模型S組攝食量的減少較下丘腦性肥胖模型小。各組動物Lee’s指數均無明顯差異。
試驗證實，兩種模型比較，下丘腦模型各組腎周脂肪明顯高於營養性肥胖大鼠模型。與NS組比較，營養性肥胖模型和下丘腦性肥胖模型RS、R組腎周脂肪均明顯減少，R組腎周脂肪減少較RS組更為明顯。各組給藥後甘油三脂均有下降，以R組最為明顯。給藥後各組間的總膽固醇的含量未顯示明顯差異。模型組脂肪細胞體積增大，單位視野下脂肪細胞數減少，RS組、R組脂肪細胞體積縮小，單位視野下細胞數增多，R組更為明顯，而S組脂肪細胞體積未見明顯縮小，細胞數相對較少。兩模型組相比，Sib對實驗性肥胖大鼠模型的作用更為明顯。掃描電鏡結果，各組大鼠微絨毛數量及直徑均未顯示明顯差異。結果說明Sib主要作用於脂肪組織，通過減少甘油三脂的含量來減輕體重。2個光學異構體的活性不同，其中R-西布曲明具有減肥作用，而S-西布曲明幾乎沒有。
表.1 實驗性肥胖大鼠模型給藥後各組體重(x±s，n＝6)組別 營養性肥胖模型 下丘腦性肥胖模型♀ ♂ ♀ ♂NS276.50±13.18453.80±38.10219.25±25.89364.70±53.69RS254.75±12.55408.75±31.20210.17±5.20 385.50±77.60(*p＝0.020) (*p＝0.049) (*p＝0.292) (*p＝0.318)R 236.50±15.75386.75±43.99203.00±18.68353.80±73.42(*p＝0.002) (*p＝0.022) (*p＝0.174) (*p＝0.398)(#p＝0.060) (#p＝0.222) (#p＝0.277) (#p＝0.263)S 263.17±11.09468.33±22.23239.67±28.10333.00±48.09(*p＝0.098) (*p＝0.288) (*p＝0.182) (*p＝0.194)(#p＝0.028) (#p＝0.017) (#p＝0.045) (#p＝0.321)(△p＝0.028)(△p＝0.017)(△p＝0.045)(△p＝0.321)*vs NS組；#vs RS組；△vs R組表2.實驗性肥胖大鼠模型給藥2周的飼料總消耗量(n＝6)組別 營養性肥胖模型(g)下丘腦性肥胖模型(g)♀ ♂ ♀ ♂NS228.14 322.67 181.16 281.08RS192.5 270.61 130.07 225.6(*p＝0.025)(*p＝0.028)(*p＝0.003)(*p＝0.128)R 186.93 231.28 129.02 207.38(*p＝0.065)(*p＝0.001)(*p＝0.013)(*p＝0.001)(#p＝0.335)(#p＝0.019)(#p＝0.312)(#p＝0.007)S 205.38 311.45 145.7 232.7(*p＝0.036)(*p＝0.148)(*p＝0.022)(*p＝0.003)(#p＝0.217)(#p＝0.127)(#p＝0.183)(#p＝0.059)(△p＝0.400) (△p＝0.001) (△p＝0.355) (△p＝0.118)*vs NS組；#vs RS組；△vs R組表.3 實驗性肥胖大鼠模型給藥後各組腎周脂肪重量(x±s，n＝6)組別營養性肥胖模型下丘腦性肥胖模型♀ ♂ ♀ ♂NS2.97±1.33 3.61±0.82 4.34±3.28 5.16±0.96RS1.06±0.24 2.07±0.47 2.38±1.20 3.64±0.95(*p＝0.007)(*p＝0.185)(*p＝0.012)(*p＝0.033)R 0.97±0.49 1.84±0.62 1.74±0.87 2.91±0.93(*p＝0.013)(*p＝0.085)(*p＝0.020)(*p＝0.013)(#p＝0.367)(#p＝0.220)(#p＝0.301)(#p＝0.179)S 1.72±0.46 2.79±0.36 3.14±1.07 3.76±0.61(*p＝0.088)(*p＝0.254)(*p＝0.064)(*p＝0.039)(#p＝0.017)(#p＝0.210)(#p＝0.025)(#p＝0.428)(△p＝0.048) (△p＝0.044) (△p＝0.024) (△p＝0.128)*vs NS組；#vs RS組；△vs R組表.4.1營養性肥胖大鼠模型給藥前後血脂變化

□vs給藥前；*vs NS組；#vs RS組；△vs R組表.4.2 下丘腦性肥胖大鼠模型給藥前後血脂變化

□vs給藥前；*vs NS組；#vs RS組；△vs R組表.5實驗性肥胖大鼠模型給藥後各組單位視野下脂肪細胞數變化(×400)組別 營養性肥胖模型下丘腦性肥胖模型♀ ♂ ♀ ♂NS25.33±1.2531.00±2.1617.67±1.2525.33±2.87RS36.00±2.4541.33±2.1523.00±2.1635.33±3.86R 40.33±1.2545.67±3.3023.33±2.8745.33±3.40S 27.67±2.0526.67±2.8718.33±1.2527.00±2.4權利要求
1.右旋鹽酸西布曲明及其相應的鹽，在製備減肥藥物中的用途。
2.權利要求1所述的右旋鹽酸西布曲明及其相應的鹽，其特徵是所述(+)-西布曲明的鹽包括鹽酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、醋酸鹽、馬來酸鹽、(+)/(-)酒石酸鹽、(+)/(-)酒石酸衍生物的鹽。
3.權利要求1所述的右旋鹽酸西布曲明及其相應的鹽，其特徵是所述鹽是(+)-西布曲明鹽酸鹽。
4.(+)-西布曲明鹽酸鹽在製備減肥藥物中的用途。
5.權利要求4所述的用途，其特徵是減少甘油三脂。
6.權利要求4所述的用途，其特徵是減少腎周脂肪。
7.權利要求4所述的用途，其特徵是減少脂肪和脂肪組織引起體重減輕產生減肥。
8.權利要求4所述的用途，其特徵是減少攝食量引起體重減輕。
9.權利要求4所述的用途，其特徵是用於所述用途的劑量為1～30mg/天。
10.權利要求4所述的用途，其特徵是用於所述用途的劑量為2～15mg/天。
11.權利要求4所述的用途，其特徵是用於所述用途的劑量為3～10mg/天。
12.權利要求4所述的用途，其特徵是用於所述用途的劑量為4～8mg/天。
全文摘要
本發明屬化學藥物領域，涉及右旋鹽酸西布曲明及其相應的鹽在製備減肥藥物中的用途。本發明拆分西布曲明得Sib的R和S型光學異構體，並製備右旋西布曲明鹽及其相應的鹽。經動物模型實驗證實，用R－西布曲明作為藥物給藥，能減少用藥劑量，降低藥物的副作用，同時消除S－西布曲明引起的副作用。本發明右旋西布曲明能減少大鼠的攝食量、體重、腎周脂肪和甘油三脂，並不減少膽固醇，可用於製備減少甘油三脂、腎周脂肪，抑制脂肪組織增長及減少攝食量減輕體重的減肥藥物。
文檔編號A61P3/00GK1554333SQ20031012286
公開日2004年12月15日 申請日期2003年12月26日 優先權日2003年12月26日
發明者俞培忠, 王偉芳, 潘家祜 申請人:復旦大學