一種預防和治療老年痴呆症的組合物的製作方法

2023-06-06 21:17:26

專利名稱：一種預防和治療老年痴呆症的組合物的製作方法
技術領域：
本發明涉及生物醫藥領域。更具體而言，本發明涉及能夠預防和治療老年痴呆症
的組合物、藥盒或保健盒，它們包含吡咯並喹啉醌(PQQ)以及乙醯膽鹼酯酶等作為主要活 性成分。本組合物的各成分分別通過不同的機制發揮作用，各成分間有顯著的相互協同促 進作用，具有改善記憶、認知能力的效果。
背景技術：
目前，老年性痴呆患病率約佔60歲人口的10 %左右，其中阿爾茨海默病 (Alzheimer Disease, AD)約佔5%左右。而且，隨著年齡每增加5歲，AD的患病率將增加 兩倍，在80-85歲的病人中有20%的老年人患有老年性痴呆。 據統計，美國2000年的阿爾茨海默病(Alzheimer Disease,AD)例數為450萬例。 如果治療方法不能取得進展，則美國在2050年時，有症狀的AD病例數預期將上升至1320 萬例。 目前我國已有1.29億人口超過60歲，老年人佔總人口的比例已達到10. 15%，人 口老齡化的日益嚴重，從而使我國提前成為老年型人口的國家。因此，老年性痴呆將日漸成 為一個嚴重的社會問題，將極大地阻礙社會的發展。 並且，老年性痴呆已經成為繼心臟病、腫瘤和腦卒中之後的第四位死因，給患者家 庭、社會造成了很大的負擔及壓力。 所謂的"老年性痴呆"是指老年期出現的已獲得的智能在本質上出現持續的損害， 智能缺失和社會適應能力降低，是一種隱襲發病、逐漸發病、以智能障礙為主的慢性進行性 疾病。其臨床表現主要為在智能方面出現抽象思維能力喪失、推理判斷與計劃不足、注意 力缺失；在人格方面出現興趣與始動性喪失、情緒遲鈍或難以抑制、社會行為不端、不拘小 節；在記憶方面出現遺忘，不能學習，時間、地形、視覺與空間定向力差；在言語與認知功能 方面出現說話不流利，綜合能力缺失等。 目前，老年性痴呆的病因尚不明了。近年來，國外大量研究的重點集中在遺傳學、 免疫學、病毒感染、神經遞質和神經內分泌等方面，研究結果表明許多因素與該病發病機制 和病因有關。 總的說來，在複雜的AD病因學研究中，增齡性改變及遺傳因素二者比較明確。大 量神經纖維纏結(neurofibrillary tangle, NFT)及老年斑(senile plaques, SP)的存在 是其重要病理特徵。 而在疾病發生發展的過程中，包括氧化和脂質過氧化、穀氨酸能興奮性毒性反應、 病毒感染、炎症等在內的多種因素最終可導致腦海馬和皮層部位的大量膽鹼能神經元丟 失，對學習和記憶功能受影響，從而導致痴呆。 對於老年性痴呆的治療，目前尚無肯定的十分有效或治癒的方法。治療AD的藥物 主要分為二類 第一類增加腦內膽鹼能神經系統功能，主要為膽鹼酯酶抑制劑和M-膽鹼受體激動劑。前者主要包括安理申、他克林等，這類藥物有助於改善輕度到中度病人的臨床症狀， 但是，當神經元丟失到一定程度之後，這種藥物的維持也是有限的。 第二類作用於神經傳遞系統的細胞保護劑，以延緩腦神經元變性過程，從理論上 講，阻斷P-澱粉樣蛋白形成，抑制e-澱粉樣蛋白的神經毒性和保護或修復神經元，達到 防治AD的目的。包括抗氧化劑，非甾體抗炎藥、激素替代療法、神經營養因子、抗神經細胞 凋亡劑及促神經細胞代謝藥，鈣通道阻滯劑、糾正鈣穩態失調藥物，抗澱粉樣肽形成藥，代 謝增強劑，細胞膜調節劑，腦活素，穀氨酸鹽受體拮抗劑等藥物。其中，抗氧化劑主要通過減 少AD患者腦內自由基的形成，減少氧化應激發揮保護作用。 本領域迫切需要開發出可安全、有效地預防和治療老年性痴呆(尤其是AD)的藥 物。

發明內容
本發明的目的之一正是提供一種可安全、有效地預防和治療老年性痴呆(尤其是 AD)的藥物組合物。
在本發明的第一方面，提供了一種組合物，其包含 (a)吡咯並喹啉醌、其藥學上或生理學上可接受的鹽和/或酯； (b)乙醯膽鹼酯酶抑制劑；以及 (c)藥學上或生理學上可接受的載體， 其中，組分(a)和組分(b)的摩爾比為i : ioo ioo : i。 在本發明一個實施方式中，所述組合物是藥物組合物或保健組合物。
在一個優選例中，所述組合物是藥物組合物。 在另一個優選例中，所述組合物的形式為片劑、顆粒劑、粉劑、膠囊、注射劑、溶液 劑或糖漿劑。 在一個優選例中，所述組合物為口服製劑或注射用製劑。
在本發明另一個實施方式中，所述組合物用於改善記憶和認知能力。 在一個優選例中，所述組合物用於預防或治療老年性退行性神經疾病，優選用於
預防或治療老年性痴呆，更優選用於預防或治療阿爾茨海默病或帕金森病。 在本發明另一個實施方式中，所述組分(b)乙醯膽鹼酯酶抑制劑為選自下組中的
一種或多種石杉鹼甲、他克林或其鹽、多奈哌齊、毒扁豆鹼氨基甲酸酯或氫溴化加蘭他敏。
在一個優選例中，所述組分(b)為石杉鹼甲、他克林、多奈哌齊、毒扁豆鹼氨基甲
酸酯或氫溴化加蘭他敏，更優選石杉鹼甲。
在本發明另一個實施方式中，所述組合物中組分(a)和組分(b)的摩爾比為
i : 50 50 : i。 在一個優選例中，組分(a)和組分(b)的摩爾比為，更優選l : 25 25 : l，更優
選i : i 25 : i。 在另一個優選例中，組分(a)和組分(b)的重量之和佔組合物總重量的0. 1 % 99. 9%，更優選1% 99%，再優選10% 90%。 在另一個優選例中，組分(a)和組分(b)的重量比為1 : 50 50 : l，更優選
i : 25 25 : i，更優選i : 20 20 : i，再優選i : 1 20 : i。
在本發明另一個實施方式中，所述組合物中還含有輔酶Q10。 在一個優選例中，組分(a)與輔酶QIO的摩爾比為1 : 50 50 : 1，更優選
i : 25 25 : i，更優選i : 25 i : i。 在另一個優選例中，所述組合物還含有預防或治療老年性退行性神經疾病的其它 活性物質，優選所述活性物質為M-膽鹼受體激動劑、抗氧化劑、非甾體抗炎藥、神經營養
因子、抗神經細胞凋亡劑、促神經細胞代謝藥、鈣通道阻滯劑、抗澱粉樣肽形成藥、代謝增強 劑、細胞膜調節劑、腦活素、穀氨酸鹽受體拮抗劑，更優選穀氨酸鹽受體拮抗劑。 在本發明的第二方面中，提供了一種製備組合物的方法，所述方法包括將組分
(a)、 (b)和(c)混合在一起，製得組合物的步驟，其中: (a)吡咯並喹啉醌、其藥學上或生理學上可接受的鹽和/或酯； (b)乙醯膽鹼酯酶抑制劑； (c)藥學上或生理學上可接受的載體， 其中，組分(a)和組分(b)的摩爾比為1 : 100 100 : 1. 在一個優選例中，組分(a)和組分(b)的摩爾比為i : 50 50 : i，優選i : 25 25 : i，更優選1 : 1 n 1。
在本發明的第三方面中，提供了一種藥盒或保健盒，其包含 (A)裝有有效量吡咯並喹啉醌、其藥學上或生理學上可接受的鹽和/或酯的容器；
和 (B)裝有有效量乙醯膽鹼酯酶抑制劑的容器。 在一個優選例中，所述吡咯並喹啉醌與所述乙醯膽鹼酯酶抑制劑的摩爾比為
1 : 100 100 : 1，優選1 : 10 50 : 1，更優選1 : 1 25 : 1。
在另一個優選例中，所述藥盒或保健盒用於改善記憶和認知能力。 在另一個優選例中，所述藥盒或保健盒用於預防或治療老年性退行性神經疾病，
優選用於預防或治療老年性痴呆，更優選用於預防或治療阿爾茨海默病或帕金森病。 在另一優選例中，在給予吡咯並喹啉醌之前、之後或同時給予有效量的乙醯膽鹼
酯酶抑制劑。 在另一優選例中，所述乙醯膽鹼酯酶抑制劑為選自下組中的一種或多種石杉鹼 甲、他克林或其鹽、多奈哌齊、毒扁豆鹼氨基甲酸酯、氫溴化加蘭他敏，優選為石杉鹼甲、他 克林、氫溴化加蘭他敏，更優選石杉鹼甲。 在另一優選例中，所述藥盒或保健盒還含有輔酶Q10，優選吡咯並喹啉醌與輔酶
Qio的摩爾比為i : ioo 25 : i，更優選i : 25 i : i。 在本發明的第四方面中，提供了一種製備藥盒或保健盒的方法，所述方法包括
(I)將有效量的吡咯並喹啉醌、其藥學上或生理學上可接受的鹽和/或酯裝入第 一容器內； (II)將有效量乙醯膽鹼酯酶抑制劑裝入第二容器內；禾口 (III)將第一容器和第二容器置於同一外包裝中，形成藥盒或保健盒。 在本發明的第五方面中，提供了吡咯並喹啉醌、其藥學上或生理學上可接受的鹽
或酯和乙醯膽鹼酯酶抑制劑在用於製備改善記憶和認知能力的組合物、藥盒或保健盒中的用途。
在一個優選例中，所述組合物、藥盒或保健盒用於預防或治療老年性退行性神經 疾病，優選用於預防或治療老年性痴呆，更優選用於預防或治療阿爾茨海默病或帕金森病。
在本發明的另一方面中，提供了以下組合物在改善記憶和認知能力中的用途，優 選在預防或治療老年性退行性神經疾病中的用途，更優選在預防或治療老年性痴呆中的用 途，更優選在預防或治療阿爾茨海默病或帕金森病中的用途，上述組合物包含
(a)吡咯並喹啉醌、其藥學上或生理學上可接受的鹽和/或酯；
(b)乙醯膽鹼酯酶抑制劑；以及
(c)藥學上或生理學上可接受的載體， 其中，組分(a)和組分(b)的摩爾比為i : ioo ioo : i。 在一個優選例中，組分(a)和組分(b)的摩爾比為l : 50 50 : l，優選l : 25
25 : i，更優選i : i n i。 在一個優選例中，上述組合物還含有輔酶Q10，優選吡咯並喹啉醌與輔酶Q10的摩
爾比為i : ioo 25 : i，更優選i : 25 i : i。 本發明的其它方面由於本文的公開內容，對本領域的技術人員而言是顯而易見的。


圖1 :通過Morris水迷宮試驗，測試PQQ對大鼠認知和記憶能力水平的影響，橫座
標中的1-5分別代表組1-組5 ;縱坐標表示各組大鼠的記憶保持水平(％ )。 圖2 :通過Morris水迷宮試驗，測試ChEI對大鼠認知和記憶能力水平的影響，橫
座標中的1-5分別代表組1-組5 ;縱坐標表示各組大鼠的記憶保持水平(％ )。 圖3 :通過Morris水迷宮試驗，測試PQQ與ChEI的組合或PQQ與ChEI及CoQIO的
組合對大鼠認知和記憶能力水平的影響，橫座標中的1-5分別代表組1-組5 ;縱坐標表示
各組大鼠的記憶保持水平(％ )。 圖4 :通過Morris水迷宮試驗，測試PQQ對AD模型小鼠認知和記憶能力水平的影 響，橫座標中的1-5分別代表組1-組5 ;縱坐標表示各組小鼠的記憶保持水平(％ )。
圖5 :通過Morris水迷宮試驗，測試ChEI對AD模型小鼠認知和記憶能力水平的 影響，橫座標中的1-5分別代表組1-組5 ;縱坐標表示各組小鼠的記憶保持水平(％ )。
圖6 :通過Morris水迷宮試驗，測試PQQ與ChEI的組合或PQQ與ChEI及CoQIO的 組合對AD模型小鼠認知和記憶能力水平的影響，橫座標中的l-5分別代表組l-組5 ;縱坐 標表示各組小鼠的記憶保持水平(％ )。
具體實施例方式
本發明人經過長期而深入的研究發現妣咯並喹啉醌與乙醯膽鹼酯酶抑制劑的組
合或聯合使用，對於改善記憶和認知能力具有協同作用，延緩老年痴呆模型小鼠發病時間，
因此可用於預防和治療老年性退行性神經疾病(尤其是老年性痴呆症)。 並且，發明人還進一步發現在組合或聯合使用吡咯並喹啉醌和乙醯膽鹼酯酶抑
製劑的基礎上，加入輔酶Q10可進一步顯著提高改善記憶和認知能力的效果，因此可將這
三種活性物質組合使用或聯用以預防和治療老年性退行性神經疾病(尤其是老年性痴呆症)。 在此基礎上，發明人完成了本發明。
相關定義 本文中，術語"含有"表示各種成分可一起應用於本發明的組合物中。因此，術語"主要由...組成"和"由...組成"包含在術語"含有"中。 本文中，術語"有效量"指按本發明的方式使用時足以獲得需要的效果而無過度不良副反應(如毒性、剌激和變態反應)，即有合理的效益/風險比的成分的量。顯然，具體的"有效量"因各種因素而異，如所需給予的對象的年齡、病況等。 本文中，術語"PQQ"指妣咯並喹啉醌或其鹽或酯，代表性的鹽包括(但並不限於)鈉鹽、鉀鹽、鋅鹽等。本文中，術語"PQQ活性物質"或"妣咯並喹啉醌活性物質"可互換使用，都包括吡咯並喹啉醌、PQQ的保健品學、生理學或藥學上可接受的鹽、酯、水合物、溶劑化物、異構體或其它衍生物形式、或它們的混合物。術語"PQQ衍生物"是指含有吡咯並喹啉醌作
為主要結構或通過吡咯並喹啉醌的代謝獲得的產物，只要其還具有吡咯並喹啉醌在本發明中的功效。卩比卩各鵬麵(PQQ)白膽,P雄肯p匕 吡咯並喹啉醌(pyrroloquinoline quinone，PQQ)呈紅褐色粉末狀，是一種水溶性
化合物，其存在於我們的日常飲食中，並廣泛分布於人體各組織器官，並在母乳中存在。PQQ
的分子式如下
COOH 1979年，PQQ被確認為是氧化還原反應的 一 種輔酶。2003年，Nature雜誌(Nature. 2003年4月24 ;422(6934) :832)報導PQQ具有維生素活性，認為其可能是一種新型的B族維生素。 研究證實，PQQ是一種對人體健康非常有利的物質。已通過動物實驗觀察到PQQ的多種功能純化的PQQ作為一種抗氧化劑能夠保護肝臟免受CC14或酒精損傷。純化的PQQ減少雞胚發育過程中糖皮質激素誘導的白內障形成，可能是通過恢復穀胱甘肽水平從而降低對皮質激素的反應性來發揮作用。PQQ直接氧化受體的NMDA氧化還原位點，保護細胞免受NMDA毒性影響，從而防止腦部缺血缺氧，避免動物模型發生嚴重的休克。同時，PQQ還可以保護心臟防止心肌缺血及心肌梗死。 對神經系統而言，PQQ具備抗氧化能力和神經保護作用，主要體現在以下幾個方面 1.抗氧化作用 PQQ能有效調節氧化還原反應。它能抑制1)脂質的過氧化；2)蛋白的羰基化；3)氧化應激對線粒體內呼吸鏈的失活(Stites TE等，J Nutr. 2000Apr ;130(4) :719-27)
2.神經保護作用
1)改善線粒體的機能；2)抑制NMDA受體介導的神經毒性作用；3)神經元的保護作用；4)上調神經生長因子；及5)抑制纖維樣蛋白的形成(Scanlon JM， EurJPharmacol. 1997 May 12 ;326(1) :67-74 ;Urakami T等，Biofactors. 1995-1996，5(3):139-46 ;Liu S等，Microsurgery. 2005 ;25(4) :329-37) 然而，在本發明之前，本領域從未對PQQ活性物質與其它改善記憶和認知能力、預防或治療老年性退行性神經疾病(尤其是阿爾茨海默病)的組合使用或聯合使用做出研允。 ZJ先月日鹼鵬翻齊ll 如本文所用，術語"乙醯膽鹼酯酶抑制劑"是指對乙醯膽鹼酯酶的乙醯膽鹼降解活性具有抑制作用的物質，其通過抑制神經鍵內部乙醯膽鹼的降解起到改善記憶、緩解老年痴呆的作用。 本發明中的"乙醯膽鹼酯酶抑制劑"包括抑制乙醯膽鹼酯酶活性的任何物質，包括但不限於他克林(Tacrine)、多奈哌齊(Don印ezil)、利斯的明(Rivastigmine)、高蘭它明(Galantamine)、石杉鹼甲(Huperzine A)、香豆素衍生物(例如Anseoulin等)、植物或微生物來源的乙醯膽鹼酯酶抑制劑(例如當歸根的甲醇提取物、淡紫灰鏈黴菌中分離的cyclophostin等)。關於乙醯膽鹼酯酶抑制劑的種類和用途，可參見例如鄒磊等的綜述(食品禾鬥學，2005， Vol. 26增刊，ppl05-108)。 乙醯膽鹼酯酶抑制劑雖然是目前用於治療老年痴呆症的主要藥物，但其只能緩解AD的徵狀，而不能完全保護神經元不被破壞。因此，本領域仍然迫切需要提高此類藥物效果，甚至可治癒AD的藥物組合物。
組合物 本發明提供了一種組合物，其包含(a)吡咯並喹啉醌、其藥學上或生理學上可接受的鹽和/或酯；(b)乙醯膽鹼酯酶抑制劑；以及(c)藥學上或生理學上可接受的載體。
該組合物可用於改善記憶和認知能力、延長對象預期壽命、減少腦內13澱粉樣蛋白的產生，從而預防或治療老年性退行性神經疾病，優選用於預防或治療老年性痴呆，更優選用於預防或治療阿爾茨海默病、帕金森病。本發明組合物中，活性成分(a)和(b)存在的
摩爾比為i : ioo-ioo : i，優選i : 1-25 : i，從而相互間起到協同作用。 在本發明的一個優選實施方式中，本發明的組合物中還優選含有輔酶Q10。本發明人通過試驗證實了輔酶Q10可進一步增強本發明含PQQ和ChEI的組合物在改善記憶和認知能力、延長對象預期壽命、減少腦內P澱粉樣蛋白中的效果。組合物中，PQQ與輔酶Q10
的摩爾比為i : 100-25 : i，更優選i : 25-1 : 5。 如本文所用，術語"藥學上或生理學上可接受的載體"指用於保健品或藥物製劑
的載體，包括各種賦形劑和稀釋劑，它們本身並不是必要的活性成分，且施用後沒有或沒有過分的毒性。合適的載體是本領域普通技術人員所熟知的。例如，藥學上可接受的載體
詳細記載於《雷明頓藥物科學》(Remington' sPharmaceutical Sciences, Mack Pub. Co.，N. J. 1991)。 在組合物中藥學上可接受的載體可含有液體，如水、鹽水、甘油和乙醇。另外，這些載體中還可能存在輔助性的物質，如填充劑、崩解齊IJ、潤滑齊IJ、助流齊IJ、泡騰齊IJ、潤溼劑或乳化劑、矯味劑、PH緩衝物質等。通常，可將這些物質配製於無毒的、惰性的和藥學上可接受的水性載體介質中，其中pH通常約為5-8，較佳地，pH約為6-8。 本發明的組合物中活性物質(a)和(b)佔組合物總重量的0. 001-99. 9wt% ;優選為組合物總重量的l-95wt^，較優選為5-90wt^，更優選10-80wt%。餘量為載體以及其它添加劑等物質。 在本發明的另一優選實施方式中，所述組合物為單位劑型或多劑型。如本文所用，
術語"單位劑型"是指為了服用或使用方便，將本發明的組合物製備成單次服用或使用所需
的劑型，包括但不限於各種固體劑(如片劑)、液體劑、膠囊劑、緩釋劑。 在本發明的另一個優選例中，每天施用1-6劑本發明的組合物，優選施用1-3劑；
在高劑量時優選每天服用1齊U。在本發明的一個優選例中，每天給對象施用0. 001-10mg/kg
體重的本發明組合物，優選0. 01-5mg/kg體重，更優選0. 01-lmg/kg體重。 應理解，所用活性物質的有效劑量可隨需預防或治療的對象的個體情況(例如對
象體重、年齡、身體狀況、所需達到的效果)來決定，這在熟練醫師或營養師可以判斷的範圍內。 本發明的組合物，可以為固態(如顆粒劑、片劑、凍乾粉、栓劑、膠囊、舌下含片)或液態(如口服液、溶液劑或糖漿劑)或其它合適的形式。
総gg備^ 本發明還提供了一種藥盒或保健盒，其中含有(A)裝有有效量吡咯並喹啉醌、其藥學上或生理學上可接受的鹽和/或酯的容器；和(B)裝有有效量乙醯膽鹼酯酶抑制劑的容器。所述藥盒或保健盒用於改善記憶和認知能力、延長對象預期壽命、減少腦內P澱粉樣蛋白的產生，從而預防或治療老年性退行性神經疾病，優選用於預防或治療老年性痴呆。
如本文所用，術語"保健盒"是指裝有可對對象提供具有保健作用的活性物質的容器的組合，其可作為保健品提供給需要的對象。 在本發明的實施方式中，在給予吡咯並喹啉醌之前、之後或同時給予有效量的乙
醯膽鹼酯酶抑制劑。 施用方式 本發明的組合物、藥盒或保健盒可以通過常規途徑施用，其中包括(但並不限於)口服、噴塗、鼻腔內、或透皮等途徑。優選口服。組合物形式應與施用方式相匹配。本
發明組合物的施用量，按活性物質PQQ重量計，通常為每天約0. 001-5mgPQQ/kg體重，較佳地約0. 01-lPQQ/kg體重，優選0. 01-0. 5mgPQQ/kg體重。 本發明的組合物、藥盒或保健盒可直接使用，也可與其它治療劑或輔劑聯合使用。
在本發明的優選實施方式中，在用於預防和治療老年性痴呆中時，本發明的組合物、藥盒
或保健盒還可與有效量(如0. 0005-0. 1克/kg體重/天；優選0. 001-0. 05克/kg體重/
天)的選自下組的物質聯合施用M-膽鹼受體激動劑、抗氧化劑、非甾體抗炎藥、神經營養
因子、抗神經細胞凋亡劑、促神經細胞代謝藥、鈣通道阻滯劑、抗澱粉樣肽形成藥、代謝增強
劑、細胞膜調節劑、腦活素、穀氨酸鹽受體拮抗劑，更優選穀氨酸鹽受體拮抗劑。 當三種或三種以上的物質組合或聯合給藥時，優選具有優於分別單獨給予這些物
質的效果。本發明的優點 本發明的優點包括但不限於
(a)首次發現了 PQQ與乙醯膽鹼酯酶抑制劑的聯合使用或組合使用對於改善記憶和認知能力、延長對象預期壽命、減少腦內P澱粉樣蛋白的產生，從而預防或治療老年性退行性神經疾病具有協同作用，可用於相關疾病或徵狀的預防或治療； (b)PQQ在生物體內存在，是天然的化合物，無毒副作用；而乙醯膽鹼酯酶抑制劑
是本領域中已用於老年性痴呆症治療的現有藥物，兩者的組合具有高安全性； (c) PQQ的添加還可補充了體內的內源性吡咯並喹啉醌，緩解了體內因吡咯並喹啉
醌的缺乏所引起的症狀。 實施例 下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用於說明本發明而不用於限制本發明的範圍。下列實施例中未註明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件中所述的條件，或按照製造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則百分比和份數按重量計算。 除非另行定義，文中所使用的所有專業與科學用語與本領域熟練人員所熟悉的意義相同。此外，任何與所記載內容相似或均等的方法及材料皆可應用於本發明中。文中所述的較佳實施方法與材料僅作示範之用。
Morris水迷宮試驗 Morris水迷宮是1981年由比利時科學家Morris發明的，是用來檢測齧齒動物空間學習記憶能力的比較理想的實驗系統。實驗中的記憶相當於人類的近期記憶，在AD患者中這種近期記憶損害更嚴重。本實驗採用Morris水迷宮了解治療對大鼠或小鼠動物模型學習記憶能力的影響，實驗動物逃避潛伏期縮短說明其學習記憶障礙改善。
設計特製的水迷宮主要由一個圓柱型水池和一個可移動位置的站臺組成。水池高70cm，直徑80cm，站臺直徑8cm，水池上空通過一個數字攝相機與計算機相連接。預先在水池中注入清水，水深15cm，加入碳素墨水使池水變為不透明的黑色，站臺表面為黑色，使實驗動物不能看到，水面高出站臺表面0. 5cm。水溫控制在22±0. 5°C ，在水池上標定相同一點作為每次實驗動物的入水點。站臺置於離入水點較遠的象限中間，實驗過程保持站臺位置不變。每次實驗以120s為限，紀錄動物從入水點到達站臺所需時間以及在這段時間內的遊泳路程和速度，以所需時間作為學習和記憶成績，若設定時間內未找到站臺，計算機停止跟蹤，記錄時間為120s。 每次實驗在隔音的房間內進行，水池，光源，鼠籠等實驗室各物件的位置保持不變。造模後第3天訓練，若動物在120s內找到站臺，讓其在站臺上停留20s，若動物未找到站臺，將其放在站臺上使其停留20s。於造模第4天，第5天，第7天，第11天進行MORRIS水迷宮學習和測試。 實施例1.吡咯並喹啉醌(PQQ)對大鼠認知和記憶能力水平的影響
試驗動物及分組 4周齡的Wistar大鼠(購自中科院動物所)，共60隻，平均分為5組，每組12隻，雌雄各半。 給藥方法和劑量 按照如下的設定劑量，對分組的大鼠口服給藥8周(每日2次)
組1 :對照給予生理鹽水；
10:0129] 組2 :PQQ 3. 3mg/kg/d(通過PQQ的生理鹽水溶液形式給藥)；
:0130] 組3 :PQQ 5. 0mg/kg/d (通過PQQ的生理鹽水溶液形式給藥)；
:0131] 組4 :PQQ 10mg/kg/d(通過PQQ的生理鹽水溶液形式給藥)；
:0132] 組5 :PQQ 20mg/kg/d(通過PQQ的生理鹽水溶液形式給藥)。
:0133] 評估方法
:0134] 大鼠腹腔注射戊巴比妥鈉40mg/kg，建立痴呆大鼠模型。採用Morris水迷宮試驗 重複3次)，檢測PQQ對大鼠認知和記憶能力水平的影響。
:0135] 試驗結果及討論
:0136] 各組大鼠的記憶保持百分比數值如圖1所示。
:0137] 試驗結果顯示3. 3mg/kg/d的PQQ僅使得大鼠記憶保持有微弱提高，隨著PQQ劑 量的提高，記憶保持百分比逐步提高，20mg/kg/d的PQQ可使得大鼠記憶保持提高到 上。
:0138]
依賴性-
該試驗結果表明PQQ可提高大鼠的認知和記憶能力水平，該提高作用具有劑:
x司(取膠囊內容物溶於生理
:0139] 輔你l 2. ZJ先,酉旨,製劑石纏附杖鼠認船口iP雄力餅白條卩向 0140] 試驗動物、分組及藥物
0141] 4周齡的Wistar大鼠(購自中科院動物所)，共60隻，平均分為5組，每組12隻， 雌雄各半。
0142] 石杉鹼甲石杉鹼甲膠囊，購自復旦復華藥業有限公 鹽水進行實驗)。 0143] 給藥方法和劑量
按照如下的設定劑量，對分組的大鼠口服給藥8周(每日2次) 組1 :對照給予生理鹽水；
組2 :ChEI0. lmg/kg/d(以石杉鹼甲的生理鹽水溶液形式給藥)
組3 :ChEI 0. 2mg/kg/d(以石杉鹼甲的生理鹽水溶液形式給藥) 組4 :ChEI 0. 5mg/kg/d(以石杉鹼甲的生理鹽水溶液形式給藥) 組5 :ChEI 1. Omg/kg/d(以石杉鹼甲的生理鹽水溶液形式給藥)
0144] 0145] 0146] 0147] 0148] 0149] 0150] 0151]
評估方法
大鼠腹腔注射戊巴比妥鈉40mg/kg，建立痴呆大鼠模型。採用Morris水迷宮試驗 重複次數3次)，檢測ChEI對大鼠認知和記憶能力水平的影響。 0152] 試驗結果及討論
0153] 各組大鼠的記憶保持百分比數值如圖2所示。
0154] 試驗結果顯示0. lmg/kg/d的ChEI可使得大鼠記憶保持水平略有提高，隨著ChEI 劑量的提高，記憶保持百分比逐步提高，1. Omg/kg/d的ChEI可使得大鼠記憶保持提高到 60%。
0155] 該試驗結果表明ChEI可提高大鼠的認知和記憶能力水平，該提高作用具有劑量 農賴性。
0156] 實施例3.吡咯並喹啉醌(PQQ)與乙醯膽鹼酯酶抑制劑(ChEI)石杉鹼甲的組合或 i亥飽合與輔酶Q10(CoQ10)的飽合對大鼠認知和記憶能力水平的影響
110157] 試驗動物及分組
0158] 4周齡的Wistar大鼠(購自中科院動物所)，共60隻，平均分為5組，每組12隻， 雌雄各半。 0159] 給藥方法和劑量
0160] 按照如下的設定劑量，對分組的大鼠口服給藥8周(每日2次) 0161] 組l:對照給予生理鹽水；
0162] 組2 :PQQ3. 3mg/kg/d(以生理鹽水溶液形式給藥)； 0163] 組3 :ChEI 0. 2mg/kg/d(以生理鹽水溶液形式給藥)； 0164] 組4 :PQQ3. 3mg/kg/d+ChEI 0. 2mg/kg/d(以生理鹽水溶液形式給藥)； 0165] 組5:PQQ 3. 3mg/kg/d+ChEI 0. 2mg/kg/d+CoQ10 100mg/kg/d(以生理鹽水溶液 形式給藥)。 0166] 評估方法
0167] 大鼠腹腔注射戊巴比妥鈉40mg/kg，建立痴呆大鼠模型。採用Morris水迷宮試驗 重複次數3次)，檢測上述給藥對大鼠認知和記憶能力水平的影響。 0168] 試驗結果及討論
0169] 各組大鼠的記憶保持百分比數值如圖3所示。
0170] 圖3的結果顯示採用低劑量的PQQ (3. 3mg/kg/d)與ChEI (0. 2mg/kg/d)的聯合給 藥即可使得大鼠的記憶保持水平顯著提高到60%以上。而在低劑量PQQ與ChEI組合的基 礎上，再加入CoQlO更可使得大鼠記憶保持水平達到約80%。
0171] 按照金氏公式計算藥物之間的協同作用，發現聯合使用PQQ和ChEI較分別單獨使 用PQQ或ChEI可顯著提高大鼠的記憶保持水平，且兩種藥物之間具有協同作用 0172] 金式公式判斷藥物之間的協同效果(參考文獻金正均，合併用藥中的相加。中國
藥理學報1980 ;1 :70-76):
0173] q值二 EA+B/(EA+EB-EAXEB)， q值〉1. 15時，兩藥有協同作用。
0174] 在本實施例中，E值為與對照組(1)相比，各實驗組(2、3、4)記憶保持能力的增 加百分比。
0175]E(PQQ 3.3mg/kg) = (43. 13% -37. 00% ) /37. 00% = 16. 57% 0176]E(chEI 02mg/kg) = (44. 00% -37. 00% )/37. 00%= 18. 92% 0177]E(PQQ+chEI) = (64. 00% -37. 00% ) /37. 00% = 72. 97%
0178] q值二 72. 97% /(16. 57% +18. 92% —16. 57% X 18. 92% ) = 2. 255 > 1. 15
0179] 上述結果表明PQQ與ChEI的聯用可顯著提高大鼠的認知和記憶能力水平，且兩 種活性成分具有協同作用。在該組合中進一步加入CoQlO(主要為抗氧化的作用)，則可進 一步顯著提高保持記憶的效果。
0180] 並且，由於PQQ以及ChEI提高大鼠的認知和記憶能力水平的作用具有劑量依賴性 參見實施例1和實施例2的結果)，可合理預期聯合使用比本實施例中所用PQQ和ChEI 組合中的濃度更高的PQQ與ChEI可獲得更佳的效果。
0181] 實施例4.吡咯並喹啉醌(PQQ)對AD模型小鼠老年痴呆形成時間的影響 0182] 試驗動物及分組
0183] APP轉基因小鼠模型能夠較好地模擬老年痴呆的疾病進程，APP轉基因小鼠在3月
12齡時水迷宮實驗與對照組(C57BL/6J小鼠)比較有統計學意義(P < 0. 01)，且隨著時間的 延長，APP轉基因小鼠行為缺陷日漸明顯，該現象符合由輕度認知損害向老年痴呆發展的規 律。而在APP轉基因小鼠中使用相關藥物治療，顯著改善小鼠的記憶能力，有助於延緩疾病 進程。 4月齡APP轉基因小鼠(AD模型小鼠，購自中科院上海藥物所)共30隻，平均分為
5組，每組6隻，雌雄各半。 給藥方法和劑量
按照如下的設定劑量，對分組的小鼠口服給藥8周(每日2次) 組1 :對照給予生理鹽水；
組2 :PQQ3. 3mg/kg/d (以PQQ的生理鹽水溶液形式給藥)； 組3 :PQQ5. Omg/kg/d (以PQQ的生理鹽水溶液形式給藥)； 組4 :PQQ 10mg/kg/d (以PQQ的生理鹽水溶液形式給藥)； 組5 :PQQ20mg/kg/d (以PQQ的生理鹽水溶液形式給藥)。






的影響
評估方法
採用Morris水迷宮試驗(重複次數3次)，檢測AD模型小鼠認知和記憶能力水平 記憶能力的逐漸喪失是老年痴呆最早也是時間最長的病程，在此過程中患者記憶 能力逐漸降低，如能延緩記憶能力降低，延長記憶保持時間，則對於延緩老年痴呆的發病， 預防和治療老年痴呆具有良好的效果。
試驗結果及討論 各組小鼠的記憶保持百分比數值如圖4所示。 試驗結果顯示低、中劑量(3. 3、5、10mg/kg/d)的PQQ使得AD模型小鼠記憶保持
水平逐步，而20mg/kg/d的高劑量PQQ可使得大鼠記憶保持提高到接近60% 。 該試驗結果表明PQQ可提高老年痴呆模型小鼠的認知和記憶能力水平，並且，該
提高作用具有劑量依賴性。 實施例5.乙醯膽鹼酯酶抑制劑(ChEI，石杉鹼甲)對AD模型小鼠老年痴呆形成時 間的影響 試驗動物及分組 4月齡APP轉基因小鼠(AD模型小鼠，購自中科院上海藥物所)共30隻，平均分為
5組，每組6隻，雌雄各半。 給藥方法和劑量
按照如下的設定劑量，對分組的小鼠口服給藥8周(每日2次) 組1 :對照給予生理鹽水；
0. lmg/kg/d(以生理鹽水形式給藥) 0. 2mg/kg/d(以生理鹽水形式給藥)
0. 5mg/kg/d(以生理鹽水形式給藥)
1. Omg/kg/d(以生理鹽水形式給藥)






組2 :ChEI 組3 :ChEI 組4 :ChEI 組5 :ChEI
評估方法
採用Morris水迷宮試驗(重複3次)，檢測AD模型小鼠認知和記憶能力水平的影
響。記憶能力的逐漸喪失是老年痴呆最早也是時間最長的病程，在此過程中患者記憶能力逐漸降低，如能延緩記憶能力降低，延長記憶保持時間，則對於延緩老年痴呆的發病，預防 和治療老年痴呆具有良好的效果。 按照金氏公式計算藥物之間的協同作用 E值與對照組(1)相比各實驗組(2、3、4)記憶保持能力的增加百分比。
E(PQQ 3.3mg/kg) = (36. 00% -27. 00% ) /27. 00% = 33. 33%
E(chEI 02mg/kg) = (36. 00% -27. 00% )/27. 00%= 33. 33%
E(PQQ+chEI) = (58. 00% —27. 00% )/27. 00%= 114. 81% q值二 114. 81% /(33. 33% +33. 33% —33. 33% X33. 33% ) = 2. 067 > 1. 15(提 示二者為協同作用) 上述結果表明PQQ與ChEI的聯用可顯著提高AD模型小鼠的認知和記憶能力水 平，且兩種活性成分具有協同作用。在該組合中進一步加入CoQlO (抗氧化作用)，則可進一 步顯著提高保持記憶的效果，從而延遲老年痴呆的形成時間。
並且，由於PQQ以及ChEI提高AD模型小鼠的認知和記憶能力水平的作用具有劑 量依賴性(參見實施例4和實施例5的結果)，可合理預期聯合使用比本實施例中所用PQQ 和ChEI組合中的濃度更高的PQQ與ChEI可獲得更佳的效果。 在本發明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻被單獨 引用作為參考那樣。此外應理解，在閱讀了本發明的上述講授內容之後，本領域技術人員可 以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落於本申請所附權利要求書所限定的範 圍。
權利要求
一種組合物，其包含(a)吡咯並喹啉醌、其藥學上或生理學上可接受的鹽和/或酯；(b)乙醯膽鹼酯酶抑制劑；以及(c)藥學上或生理學上可接受的載體，其中，組分(a)和組分(b)的摩爾比為1∶100～100∶1。
2. 如權利要求1所述的組合物，其特徵在於，所述組合物是藥物組合物或保健組合物。
3. 如權利要求1所述的組合物，其特徵在於，所述組合物用於改善記憶和認知能力。
4. 如權利要求1所述的組合物，其特徵在於，所述組合物用於預防或治療老年性退行性神經疾病，特別是老年痴呆。
5. 如權利要求l所述的組合物，其特徵在於，所述組分(b)乙醯膽鹼酯酶抑制劑為選自下組中的一種或多種石杉鹼甲、他克林或其鹽、多奈哌齊、毒扁豆鹼氨基甲酸酯或氫溴化加蘭他敏。
6. 如權利要求1所述的組合物，其特徵在於，所述組合物中還含有輔酶Q10。
7. —種製備組合物的方法，所述方法包括將組分(a)、 (b)和(c)混合在一起，製得組 合物的步驟，其中(a) 吡咯並喹啉醌、其藥學上或生理學上可接受的鹽和/或酯；(b) 乙醯膽鹼酯酶抑制劑；(C)藥學上或生理學上可接受的載體，其中，組分(a)和組分(b)的摩爾比為i : ioo ioo : i.
8. —種藥盒或保健盒，其包含(A) 裝有有效量吡咯並喹啉醌、其藥學上或生理學上可接受的鹽和/或酯的容器；禾口(B) 裝有有效量乙醯膽鹼酯酶抑制劑的容器。
9. 一種製備藥盒或保健盒的方法，所述方法包括(I) 將有效量的吡咯並喹啉醌、其藥學上或生理學上可接受的鹽和/或酯裝入第一容器內；(II) 將有效量乙醯膽鹼酯酶抑制劑裝入第二容器內；禾口(III) 將第一容器和第二容器置於同一外包裝中，形成藥盒或保健盒。
10. 吡咯並喹啉醌、其藥學上或生理學上可接受的鹽或酯和乙醯膽鹼酯酶抑制劑在用 於製備改善記憶和認知能力的組合物、藥盒或保健盒中的用途。
全文摘要
本發明提供了一種預防和治療老年痴呆症的組合物。具體而言，本發明提供了一種可用於改善記憶和認知能力的組合物，其包含(a)吡咯並喹啉醌、其藥學上或生理學上可接受的鹽和/或酯；(b)乙醯膽鹼酯酶抑制劑；以及(c)藥學上或生理學上可接受的載體，其中組分(a)和組分(b)的摩爾比為1∶100～100∶1。本發明還提供了製備本發明組合物的方法、該組合物的用途及含該組合物的試劑盒或藥盒及其製備方法。本發明的組合物可用於有效、安全地改善記憶和認知能力，優選用於預防或治療老年性退行性神經疾病。
文檔編號A61K31/122GK101757624SQ200910200639
公開日2010年6月30日 申請日期2009年12月24日 優先權日2009年12月24日
發明者周蕾, 惲小婧, 顧建新 申請人:上海醫學生命科學研究中心有限公司