總番荔素在製備抗腫瘤藥物中的用途的製作方法

2023-06-04 21:24:16

專利名稱：總番荔素在製備抗腫瘤藥物中的用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及總番荔素在製備抗腫瘤藥物中的用途，尤其涉及總番荔素在製備抗乳腺癌、鼻咽癌、胃癌、前列腺癌或成骨肉瘤藥物中的用途，屬於總番荔素的抗腫瘤藥理用途領域。
背景技術：
總番荔素(Total Annonaceous Acetogenins, TAAs)是從番荔枝科植物番荔枝種子中所 取白勺有效部位，其主要含有 squamocin> bullatacin> annonacin> cherinolin-l> cherinolin-2、squamostatin-B等多種番荔素內酯類化合物。公開號為CN12M016A，發明名稱為「抗腫瘤藥和殺蟲劑總番荔素及其製造方法」的中國發明專利申請公開了總番荔素對於肝癌、肺癌、卵巢癌、子宮頸癌、黑色素瘤、口腔上皮癌、結腸癌、肉瘤、艾氏癌等腫瘤細胞株的體外或體內的抑制活性試驗；其體外抗腫瘤作用實驗結果發現，總番荔素對於肝癌、結腸癌和卵巢癌具有一定的抑癌活性；體內對動物移植性腫瘤生長的作用試驗表明，總番荔素對於肝癌、黑色素瘤和子宮頸癌具有一定的抑癌活性。迄今為止，尚未有文獻報導總番荔素對於乳腺癌、鼻咽癌、胃癌或前列腺癌是否具有確切的抑癌活性。

發明內容
本發明通過大量的體外或體內的抑制腫瘤活性試驗，最終發現，總番荔素對於乳腺癌、鼻咽癌、胃癌、前列腺癌或成骨肉瘤具有顯著的抑癌活性。本發明應用SRB法研究了總番荔素對人乳腺癌耐藥株MCF-7/Adr、人鼻咽癌 CNE-2Z、人乳腺癌MCF-7、人胃癌細胞BGC、人前列腺癌PC-3M的殺傷作用。實驗結果發現，總番荔素對這5種人癌細胞株均有一定的抑制腫瘤細胞生長的作用，其中對乳腺癌耐藥株MCF-7/Adr抑瘤效應尤為明顯，IC50為0. 167 μ g/mL ；其次為鼻咽癌CNE-2Z，IC50為 6. 484 μ g/mL,抑瘤效應也十分顯著。另外，總番荔素對乳腺癌MCF-7、胃癌BGC以及前列腺癌 PC-3M 的 IC5tl 分別為 25. 62 μ g/mL,26. 321 μ g/mL 和 44. 613 μ g/mL,表現出了一定的抑瘤效果。此外，本發明實驗結果發現，總番荔素對卵巢癌SK0V3細胞株抑瘤效應較差，IC50為 56. 972μ g/mL。總番荔素對小鼠移植性乳腺癌EMT6生長抑制作用觀察實驗結果表明，總番荔素的低、中、高劑量對乳腺癌EMT6細胞生長均有顯著的抑制作用。將有效量的總番荔素與藥學上可接受的載體或輔料組合在一起後可得到抗腫瘤的藥物組合物。將總番荔素中加入製備不同劑型時所需的各種輔料和藥學上可接受的賦形劑或載體後，以常規的中藥製劑方法將其製備成任何一種臨床可接受的適宜製劑，例如，可以是注射製劑(粉針、凍乾粉針、水針、輸液等)、片劑、口服液、顆粒劑、膠囊劑、軟膠囊或滴丸等；其中，所述的輔料可以是抗氧絡合劑、填充劑、骨架材料等；所述的藥學上可接受的載體是木糖醇、甘露醇、乳糖、果糖、葡聚糖、葡萄糖、聚乙烯吡咯烷酮、低分子右旋糖酐、氯化鈉、葡萄糖酸鈣或磷酸鈣中的一種或幾種。本發明中所述的「總番荔素」可按照公開號為CN 1224016A，發明名稱為「抗腫瘤藥和殺蟲劑總番荔素及其製造方法」的中國發明專利申請所公開的方法提取並富集得到總番荔素，其具體的提取和富集方法可參考如下總番荔素的提取將番荔枝種子破碎為粗粉，室溫下以己烷或石油醚浸泡脫脂，溶劑揮發後用95%醇溶液(甲醇、丙醇、異丙醇或丙酮)滲漉，減壓回收溶劑得醇提取物；將醇提取物在水中以氯仿(或二氯甲烷、二氯乙烷、乙醚或乙酸乙酯)等有機溶劑進行分配處理，萃取得到的有機溶劑中含有總番荔素。總番荔素的富集用90%的乙醇(或者是甲醇、丙醇、異丙醇、己烷或石油醚)分配處理含有總番荔素的有機萃取物，將90%的乙醇提取物以矽膠吸附層析，用氯仿(二氯甲烷、二氯乙烷、乙醚或乙酸乙酯)/甲醇洗脫，收集最先洗出部分，可使總番荔素的含量富集至90%。


圖1總番荔素對小鼠移植性乳腺癌EMT6生長抑制作用的實驗結果。
具體實施例方式下面結合具體實施例來進一步描述本發明，本發明的優點和特點將會隨著描述而更為清楚。但這些實施例僅是範例性的，並不對本發明的範圍構成任何限制。本領域技術人員應該理解的是，在不偏離本發明的精神和範圍下可以對本發明技術方案的細節和形式進行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發明的保護範圍內。實驗例1、總番荔素體外抗腫瘤實驗1、實驗材料1. 1人癌細胞株MCF_7 (人乳腺癌細胞株)、BGC (人胃癌細胞株)、PC_3M(人前列腺癌高轉移細胞株)、CNE-2Z (人鼻咽癌細胞株)、SK0V3 (人卵巢癌細胞株)購自中國醫學科學院基礎醫學研究所基礎醫學細胞中心。MCF-7/Adr (人乳腺癌耐藥株)購自中國醫學科學院腫瘤醫院。1. 2總番荔素的配製精確稱取總番荔素裝於4mL離心管中，加一定量 Cremophor )。IOOOrpm離心3 4min後將離心管放入40_45°C水浴中溶解20_40min， 待整個溶液呈淡黃色均勻液體後在超淨工作檯中加入無菌水，配置成濃度為lmg/mL溶液。 加入無菌水後放置15-20分鐘，或在超聲儀中超聲20-30分鐘，待完全溶解呈現澄清狀態後進行細胞試驗，現配現用。1.3 陽性藥順鉬，lmg/mL，50mL 裝，澳大利亞 Hospira Australia Pty Ltd 公司生產,批號W071881AB。1.4試劑磺基羅丹明B :Sigma公司，批號MW09213。Cremopher :Sigma公司，批號 CH09103。DMEM 培養基=Gibco 公司，批號NVC0247。RPMI 1640 培養基Gibco 公司，批號 NVD0249。胎牛血清杭州四季青生物工程材料有限公司，批號090702。乙酸北京化工廠分析純，批號20080415。三羥甲基甲烷北京康特理化高技術公司，批號AT007-91。三氯乙酸天津市科密歐化學試劑開發中心，批號20040524。 1. 5儀器XSZ-D2型倒置顯微鏡重慶光學儀器廠。SKF-Ol型恆溫箱湖北省黃石市依賴器械廠。3111型二氧化碳培養箱美國Thermc^orma公司。PTO-I型超淨工作檯北京昌平長城空氣淨化工程公司。移液器(100-1000 μ L，20-200 μ L，2-20 μ L)德國 Eppendorf。；3599型96孔細胞培養板美國Costar。BI0-RAD550型酶標儀美國BIO-RAD 伯樂公司。AL204型精密電子天平上海託利多儀器有限公司。MDF-U333型超低溫冰箱 (-700C )日本SANYO公司。LD4-2型離心機北京醫用離心機廠。
2、實驗方法(SRB法檢測)取對數生長的細胞用胰蛋白酶消化，按細胞特性配成一定濃度的細胞懸液，再將其接種至96孔培養板中，每孔200μ L，於37°C，5% CO2的培養箱內培養Mh ；待細胞完全貼壁達到生長對數期後進行給藥。實驗組每孔加入含不同濃度(lyg/mL、5yg/mL、15yg/ mL、30 μ g/mL、50 μ g/mL)番荔素溶液配製的培養液200 μ L ；每一個濃度設4個平行孔，培養 4 後各孔分別加入50% (質量/體積)的三氯乙酸(TCA) 50 μ L固定細胞。培養板各孔用去離子水洗滌多次後，在空氣中乾燥後，每孔加0. 4%的SRBlOOy L，室溫放置20min後， 用乙酸洗滌，空氣中乾燥後用pH為10. 5，IOmmol 'I/1三羥甲基胺基甲烷溶解，在平板振蕩器上振蕩20min，在酶標儀以490nm波長測定OD值。按照公式腫瘤細胞生長抑制率 (%) = 1"(實驗組光密度值/對照組光密度值)X 100 %，計算藥物對腫瘤細胞生長的抑制率，採用改良寇氏法計算IC5tl值。3實驗結果本實驗應用SRB法研究了總番荔素對人乳腺癌耐藥株MCF-7/Adr、人鼻咽癌 CNE-2Z、人乳腺癌MCF-7、人胃癌細胞BGC、人前列腺癌PC-3M的殺傷作用，結果發現總番荔素對這5種人癌細胞株均有一定的抑制腫瘤細胞生長的作用(表1)。其中對乳腺癌耐藥株MCF-7/Adr抑瘤效應尤為明顯，IC5tl為0. 167 μ g/mL，其次為鼻咽癌CNE-2Z，IC50為 6. 484 μ g/mL,其抑瘤效應也十分顯著。另外，總番荔素對乳腺癌MCF-7、胃癌BGC以及前列腺癌 PC-3M 的 IC5tl 分別為 25. 62 μ g/mL,26. 321 μ g/mL 和 44. 613 μ g/mL,也表現出了較好的抑瘤效果(表2-5)。對卵巢癌SK0V3細胞株抑瘤效應較差，IC50為56. 972 μ g/mL (表6)。表1總番荔素對體外人癌細胞殺傷作用結果(SRB法)
細胞株總番荔素IC5Q (Mg/mL)MCF-7/Ad「(人乳腺癌耐藥株)0.167CNE-2Z (人鼻咽癌細胞株)6.484MCF-7 (人乳腺癌細胞株)25.62BGC (人胃癌細胞株)26.321PC-3M (人前列腺癌細胞株)44.613SKOV3 (人卵巢癌細胞株)56.972 表2總番荔素對人鼻咽癌CNE-2Z的生長抑制作用
權利要求
1.總番荔素在製備抗腫瘤藥物中的用途。
2.按照權利要求1所述的用途，其特徵在於所述的腫瘤是乳腺癌、鼻咽癌、胃癌、前列腺癌或成骨肉瘤。
3.一種抑制腫瘤的藥物組合物，其特徵在於由治療上有效量的總番荔素和藥學上可接受的載體組成。
4.按照權利要求3所述的藥物組合物，其特徵在於所述的腫瘤是乳腺癌、鼻咽癌、胃癌、前列腺癌或成骨肉瘤。
5.按照權利要求3所述的藥物組合物，其特徵在於以常規的中藥製劑方法將所述的藥物組合物製備成任何一種臨床上適宜的製劑。
6.按照權利要求5所述的藥物組合物，其特徵在於所述的製劑包括注射劑或口服製劑。
全文摘要
本發明公開了總番荔素在製備抗腫瘤藥物中的用途。本發明通過體外或體內的抑制腫瘤活性試驗發現，總番荔素對於乳腺癌、鼻咽癌、胃癌、前列腺癌或成骨肉瘤具有顯著的抑癌活性。將總番荔素中加入製備不同劑型時所需的各種輔料或藥學上可接受的載體後，再按照常規的中藥製劑方法將其製備成任何一種臨床上適宜的抗腫瘤製劑，包括注射製劑或口服製劑。
文檔編號A61K131/00GK102552349SQ20121004458
公開日2012年7月11日 申請日期2012年2月23日 優先權日2012年2月23日
發明者餘競光, 朱春燕, 李雯敏, 郭寶林, 高南南, 黃文華 申請人:中國醫學科學院藥用植物研究所