一種用於牙垢標本的牙齦卟啉菌培養基的製作方法
2023-06-11 17:45:51 1
一種用於牙垢標本的牙齦卟啉菌培養基的製作方法
【專利摘要】本發明公開了一種用於牙垢標本的牙齦卟啉菌培養基及其製備方法。其特徵在於，配製1000ml培養基的配方中含有：麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化血紅素溶液；維生素K1乙醇溶液；枸櫞酸鎂；瓊脂；共殺素；泰利黴素；利奈唑胺；天門冬素；蒸餾水加至1000ml。最佳優化配方製備方法為：取麥芽浸粉、雞蛋蛋白液、氯化血紅素、瓊脂、枸櫞酸鎂、四水檸檬酸鈣、共殺素、大蒜榨出汁、L-半胱氨酸溶於黃精水煮液中，混勻，定容，滅菌後分裝。本發明與現有技術相比較，具有檢出可靠、牙齦卟啉菌分離率高的特點。
【專利說明】一種用於牙垢標本的牙齦卟啉菌培養基
【技術領域】
[0001]本發明涉及檢驗微生物培養領域，具體涉及一種用於牙垢標本的牙齦卟啉菌培養基。
【背景技術】
[0002]牙周炎是口腔中的常見病和多發病，屬於細菌感染性疾病。流行病學研究表明，牙銀口卜啉菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)與牙周炎的發生、發展顯著相關,是牙周炎的優勢致病菌。牙周炎發病後期引起的牙齦萎縮、牙槽骨喪失一般難以再生，因此，牙周炎的早期診斷、P.gingivalis的早期檢出至關重要。目前的P.gingivalis檢驗手段主要是銀下菌斑採樣進行聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction, PCR),該種方法需要對樣本進行DNA提取和PCR引物設計，且需要配備PCR相關儀器設備，成本昂貴，操作複雜。微生物培養是一種用人工方法使微生物生長繁殖的技術，而選擇性培養基是用來促進或抑制一定類型的生物體(如細胞或細菌等)而設計的培養基，利用這種培養基可以將所需要的微生物從混雜的微生物中分離出來。人類口腔中寄居著500多種細菌，其中定植在齦下的就有300多種，正是由於這種複雜的樣本環境，使得牙垢標本P.gingivalis的培養分離率低，口腔主流菌群中的鏈球菌、表皮葡萄球菌、奈瑟氏菌、乳桿菌、螺旋體、假絲酵母在目前的培養基中比牙齦卟啉菌生長更快，很快覆蓋了培養基，牙齦卟啉菌無法生長。
【發明內容】
[0003]本發明的技術任務是針對以上現有技術的不足，提供一種能夠用於牙垢標本的，對牙齦卟啉菌分離率高的培養基。
·[0004]本發明解決其技術問題的技術方案是:一種用於牙垢標本的牙齦卟啉菌培養基，其特徵在，配製1000ml培養基的配方中含有:麥芽浸粉15~30g ;雞蛋蛋白液150~200ml ;濃度為5mg/ml的氯化血紅素溶液2.5ml ;濃度為10mg/ml的維生素Kl乙醇溶液
0.5ml ;枸櫞酸鎂0.1~0.4g ;瓊脂15~20g ;共殺素15~20mg ;泰利黴素8~12mg ;利奈唑胺5~IOmg ;天門冬素3.6g ;四水檸檬酸鈣0.01~0.2g ;蒸懼水加至1000ml。
[0005]優化方案中，每1000ml培養基還含有大蒜榨出汁0.05~0.5g。
[0006]優化方案中，每1000ml培養基還含有L-半胱氨酸0.01~0.lg。
[0007]優化方案中，每1000ml培養基還含有濃度200g/L的黃精水煮液200~300ml。
[0008]最優化方案中，每1000ml培養基還含有大蒜榨出汁0.05~0.5g ;L_半胱氨酸
0.01~0.1g ;濃度200g/L的黃精水煮液200~300ml。
[0009]一種用於牙垢標本的牙齦卟啉菌培養基的製備方法，其特徵在於包括以下步驟:
[0010](I)取黃精加水煮沸I小時，過濾，取濾液，調整體積到濃度為200g/L，得黃精水煮液；
[0011](2)取去皮新鮮大蒜洗淨後，粉碎機榨汁並過濾，得大蒜榨出汁；
[0012](3)取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化血紅素溶液；維生素Kl乙醇溶液；枸櫞酸鎂；瓊脂；共殺素；泰利黴素；利奈唑胺；天門冬素；四水檸檬酸鈣；L-半胱氨酸及大蒜榨出汁溶於步驟I所得黃精水煮液中，混勻過濾後，蒸餾水定容，850C間歇滅菌2次，每次45min，滅菌後分裝。
[0013]其中所述的麥芽浸粉提供碳氮源和能量；枸櫞酸鎂和四水檸檬酸鈣為緩衝劑，並可以抑制雜菌生長；氯化血紅素和維生素Kl為營養劑；瓊脂是培養基的凝固劑；共殺素可以抑制革蘭氏陽性菌蛋白質的合成，對於廣泛耐藥的革蘭氏陽性菌也有效；泰利黴素對於奈瑟氏菌、乳桿菌、假絲酵母具有一定的抑菌作用；利奈唑胺對耐藥性金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、釀膿鏈球菌、溶血性鏈球菌、肺炎鏈球菌、無乳鏈球菌和腸球菌屬等均具有良好活性；天門冬素、L-半胱氨酸屬胺基酸類，為營養劑；雞蛋蛋白液含有各種多肽、脂肪、生長因子、激素等，這些物質對促進牙齦卟啉菌的繁殖和生長都是很重要的因素，此外雞蛋蛋白液還具有維持培養基PH值恆定的作用。大蒜榨出汁所含的蒜酶、過氧化酶、磷酸酯酶及水解酶等，有氧化和水解作用，可以致使牙垢標本中的核梭桿菌、脆弱類桿菌胞壁消失或變薄，核糖體聚集成團塊，最終導致細菌變形及破裂，達到抑制核梭桿菌、脆弱類桿菌的作用。黃精為百合科植物黃精、多花黃精和滇黃精的根莖，含有蔗糖、葡萄糖、葉酸、多種胺基酸等成分，可以提供能量代謝、細胞發育、新陳代謝因子，且水煮液對堇色毛癬菌、紅色表皮癬菌、石膏樣毛癬菌、考夫曼-沃爾夫氏表皮癬菌、螺旋體、皰疹病毒均有抑制作用。
[0014]本發明與現有技術相比較，具有檢出可靠、牙齦卟啉菌分離率高的特點。
【具體實施方式】
[0015]以下結合實際情況，對本發明的【具體實施方式】作詳細說明。
[0016]實施例1，配製1000ml培養基的配方中含有:麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;濃度為5mg/ml的氯化血紅 素溶液2.5ml ;濃度為10mg/ml的維生素Kl乙醇溶液0.5ml ;枸櫞酸鎂0.1g ;瓊脂15g ;共殺素15mg ;泰利黴素8mg ;利奈唑胺IOmg ;天門冬素3.6g ;四水朽1檬酸鈣0.2g ;蒸懼水加至1000ml。製備方法:取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化血紅素溶液；維生素Kl乙醇溶液；枸櫞酸鎂；瓊脂；共殺素；泰利黴素；利奈唑胺；天門冬素；四水檸檬酸鈣溶於蒸餾水中，混勻，蒸餾水定容至1000ml，85°C間歇滅菌2次，每次45min，滅菌後分裝。
[0017]實施例2，配製1000ml培養基的配方中含有:麥芽浸粉30g ;雞蛋蛋白液200ml ;濃度為5mg/ml的氯化血紅素溶液2.5ml ;濃度為10mg/ml的維生素Kl乙醇溶液0.5ml ;枸櫞酸鎂0.4g ;瓊脂2(^ ;共殺素20mg ;泰利黴素12mg ;利奈唑胺5mg ;天門冬素3.6g ;四水朽1檬酸鈣0.01g ;蒸懼水加至1000ml。製備方法:取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化血紅素溶液；維生素Kl乙醇溶液；枸櫞酸鎂；瓊脂；共殺素；泰利黴素；利奈唑胺；天門冬素；四水檸檬酸鈣溶於蒸餾水中，混勻，蒸餾水定容至1000ml，85°C間歇滅菌2次，每次45min，滅菌後分裝。
[0018]實施例3，配製1000ml培養基的配方中含有:麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;濃度為5mg/ml的氯化血紅素溶液2.5ml ;濃度為10mg/ml的維生素Kl乙醇溶液0.5ml ;枸櫞酸鎂0.1g ;瓊脂15g ;共殺素15mg ;泰利黴素8mg ;利奈唑胺IOmg ;天門冬素3.6g ;四水朽1檬酸鈣0.2g ;大蒜榨出汁0.05g，L-半胱氨酸0.1g ;蒸餾水加至1000ml。製備方法:取去皮新鮮大蒜洗淨後，粉碎機榨汁並過濾，得大蒜榨出汁；取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化血紅素溶液；維生素Kl乙醇溶液；枸櫞酸鎂；瓊脂；共殺素；泰利黴素；利奈唑胺；天門冬素；四水檸檬酸鈣；L-半胱氨酸；大蒜榨出汁溶於蒸餾水中，混勻，蒸餾水定容至1000ml，85°C間歇滅菌2次，每次45min，滅菌後分裝。
[0019]實施例4，配製1000ml培養基的配方中含有:麥芽浸粉30g ;雞蛋蛋白液200ml ;濃度為5mg/ml的氯化血紅素溶液2.5ml ;濃度為10mg/ml的維生素Kl乙醇溶液0.5ml ;枸櫞酸鎂0.4g ;瓊脂2(^ ;共殺素20mg ;泰利黴素12mg ;利奈唑胺5mg ;天門冬素3.6g ;四水朽1檬酸鈣0.01g,大蒜榨出汁0.5g, L-半胱氨酸0.01g ;蒸懼水加至1000ml。製備方法:取去皮新鮮大蒜洗淨後，粉碎機榨汁並過濾，得大蒜榨出汁；取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化血紅素溶液；維生素Kl乙醇溶液；枸櫞酸鎂；瓊脂；共殺素；泰利黴素；利奈唑胺；天門冬素；四水檸檬酸鈣；L-半胱氨酸；大蒜榨出汁溶於蒸餾水中，混勻，蒸餾水定容至1000ml，85°C間歇滅菌2次，每次45min，滅菌後分裝。
[0020]實施例5，配製1000ml培養基的配方中含有:麥芽浸粉25g ;雞蛋蛋白液170ml ;濃度為5mg/ml的氯化血紅素溶液2.5ml ;濃度為10mg/ml的維生素Kl乙醇溶液0.5ml ;枸櫞酸鎂0.3g ;瓊脂18g ;共殺素18mg ;泰利黴素IOmg ;利奈唑胺8mg ;天門冬素3.6g ;四水朽1檬酸鈣0.1g,大蒜榨出汁0.3g, L-半胱氨酸0.05g ;蒸懼水加至1000ml。製備方法:取去皮新鮮大蒜洗淨後，粉碎機榨汁並過濾，得大蒜榨出汁；取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化血紅素溶液；維生素Kl乙醇溶液；枸櫞酸鎂；瓊脂；共殺素；泰利黴素；利奈唑胺；天門冬素；四水檸檬酸鈣；L-半胱氨酸；大蒜榨出汁溶於蒸餾水中，混勻，蒸餾水定容至1000ml，85°C間歇滅菌2次，每次45min，滅菌後分裝。
[0021]實施例6，配製1000ml培養基的配方中含有:麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;濃度為5mg/ml的氯化血紅素溶液2.5ml ;濃度為10mg/ml的維生素Kl乙醇溶液0.5ml ;枸櫞酸鎂0.1g ;瓊脂15g ;共殺素15mg ;泰利黴素8mg ;利奈唑胺IOmg ;天門冬素3.6g ;四水朽1檬酸鈣0.2g，大蒜榨出汁0.05g，L-半胱氨酸0.lg，濃度200g/L的黃精水煮液200ml ;蒸餾水加至1000ml。製備方法:
[0022](I)取黃精加水煮沸I小時，過濾，取濾液，調整體積到濃度為200g/L，得黃精水煮液；`
[0023](2)取去皮新鮮大蒜洗淨後，粉碎機榨汁並過濾，得大蒜榨出汁；
[0024](3)取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化血紅素溶液；維生素Kl乙醇溶液；枸櫞酸鎂；瓊脂；共殺素；泰利黴素；利奈唑胺；天門冬素；四水檸檬酸鈣；L-半胱氨酸及大蒜榨出汁溶於步驟I所得黃精水煮液中，混勻過濾後，蒸餾水定容，85 0C間歇滅菌2次，每次45min，滅菌後分裝。
[0025]實施例7，配製1000ml培養基的配方中含有:麥芽浸粉30g ;雞蛋蛋白液200ml ;濃度為5mg/ml的氯化血紅素溶液2.5ml ;濃度為10mg/ml的維生素Kl乙醇溶液0.5ml ;枸櫞酸鎂0.4g ;瓊脂2(^ ;共殺素20mg ;泰利黴素12mg ;利奈唑胺5mg ;天門冬素3.6g ;四水朽1檬酸鈣0.01g，大蒜榨出汁0.5g，L-半胱氨酸0.01g，濃度200g/L的黃精水煮液300ml ;蒸餾水加至1000ml。製備方法:
[0026](I)取黃精加水煮沸I小時，過濾，取濾液，調整體積到濃度為200g/L，得黃精水煮液；
[0027](2)取去皮新鮮大蒜洗淨後，粉碎機榨汁並過濾，得大蒜榨出汁；
[0028](3)取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化血紅素溶液；維生素Kl乙醇溶液；枸櫞酸鎂；瓊脂；共殺素；泰利黴素；利奈唑胺；天門冬素；四水檸檬酸鈣；L-半胱氨酸及大蒜榨出汁溶於步驟I所得黃精水煮液中，混勻過濾後，蒸餾水定容，85 0C間歇滅菌2次，每次45min，滅菌後分裝。
[0029]實施例8，配製1000ml培養基的配方中含有:麥芽浸粉25g ;雞蛋蛋白液170ml ;濃度為5mg/ml的氯化血紅素溶液2.5ml ;濃度為10mg/ml的維生素Kl乙醇溶液0.5ml ;枸櫞酸鎂0.3g ;瓊脂18g ;共殺素18mg ;泰利黴素IOmg ;利奈唑胺8mg ;天門冬素3.6g ;四水朽1檬酸鈣0.lg，大蒜榨出汁0.3g，L-半胱氨酸0.05g，濃度200g/L的黃精水煮液250ml ;蒸餾水加至1000ml。製備方法:
[0030](I)取黃精加水煮沸I小時，過濾，取濾液，調整體積到濃度為200g/L，得黃精水煮液；
[0031](2)取去皮新鮮大蒜洗淨後，粉碎機榨汁並過濾，得大蒜榨出汁；
[0032](3)取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化血紅素溶液；維生素Kl乙醇溶液；枸櫞酸鎂；瓊脂；共殺素；泰利黴素；利奈唑胺；天門冬素；四水檸檬酸鈣；L-半胱氨酸及大蒜榨出汁溶於步驟I所得黃精水煮液中，混勻過濾後，蒸餾水定容，850C間歇滅菌2次，每次45min，滅菌後分裝。
[0033]所述的黃精水煮液濃度為200g/L，指的是每升黃精水煮液中含有生藥200g。
[0034]本發明所得牙齦卟啉菌培養基用於牙垢標本具有檢出可靠、牙齦卟啉菌分離率高的特點，為臨床資料充分證明，有關資料如下。
[0035]I對象與方法
[0036]1.1培養基製備:共設4組，分別為實施例8方案組、實施例5方案組、實施例2方案組和對照組,對照組為·巧克力瓊脂培養基。
[0037]1.2齦下菌斑採集培養方法:隔溼唾液，齦上刮治器去除齦上牙石，碘酊消毒後，用無菌Gracey刮治器採集2顆下頜中切牙唇側近中至遠中的齦下菌斑。將採集的菌斑懸浮於Iml生理鹽水，用接種環分區劃線接種，厭氧環境下37°C培養24h，挑取細小菌落進行菌屬鑑定。
[0038]1.3統計學分析用SPSS 13.0進行統計分析，P < 0.05表示有顯著性意義。
[0039]2結果:在84份經由PCR確定牙齦卟啉菌陽性的牙垢標本，細菌培養分離並鑑定為牙齦卟啉菌的，實施例8方案組為79例，實施例5方案組為78例，實施例2方案組為74例，對照組巧克力瓊脂培養基為24例，經統計學處理，本發明各實施例組與對照組比較具有明顯差異(P <0.001)。結果表明，本發明實施例牙齦卟啉菌分離率明顯高現有的培養基。
【權利要求】
1.一種用於牙垢標本的牙齦卟啉菌培養基，其特徵在，配製1000ml培養基的配方中含有: 麥芽浸粉15~30g ； 雞蛋蛋白液150~200ml ； 濃度為5mg/ml的氯化血紅素溶液2.5ml ； 濃度為10mg/ml的維生素Kl乙醇溶液0.5ml ； 共殺素15~20mg ； 泰利黴素8~12mg ； 利奈唑胺5~IOmg ; 天門冬素3.6g ； 四水檸檬酸鈣0.01~0.2g ; 蒸餾水加至1000ml。
【文檔編號】C12Q1/04GK103789391SQ201210595174
【公開日】2014年5月14日 申請日期:2012年12月24日 優先權日:2012年12月24日
【發明者】武改蓮 申請人:武改蓮