雙波長酶免疫化學發光底物及其應用的製作方法
2023-06-11 22:16:16 1
雙波長酶免疫化學發光底物及其應用的製作方法
【專利摘要】本發明雙波長酶免疫化學發光底物及其應用，一種利用酶免疫化學發光來測試或分析材料的組合物應用。其目的是為了提供一種製備方法簡單、使用方便，樣品檢測準確性和精密度高，保存時間長的酶免疫雙波長酶免疫化學發光底物及其應用。本發明的酶免疫化學發光底物製備簡單、使用方便；本發明製得的發光底物不僅檢測數據的準確性、精密度和重複性高，且成本低。本發明用於酶免疫化學發光分析領域。
【專利說明】雙波長酶免疫化學發光底物及其應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種利用化學發光來測試或分析材料的組合物及其應用，特別是涉及 一種雙波長免疫化學發光底物及其應用。
【背景技術】
[0002] 化學發光免疫分析（chemiluminescence immunoassay, CLIA)是將具有高靈敏度 的化學發光測定技術與高特異性的免疫反應相結合的分析方法，用於各種抗原、半抗原、抗 體、激素、酶、脂肪酸、維生素和藥物等的檢測分析，也是繼放射免疫分析、酶聯免疫分析、時 間分辨螢光免疫分析之後發展起來的一項最新免疫測定技術，廣泛應用於醫學臨床檢驗等 領域中。
[0003] 化學發光免疫分析包含兩個部分，即免疫反應系統和化學發光分析系統。免疫反 應系統是將發光物質或酶直接標記在抗原或抗體上（免疫標記物），再與相應的抗原或抗 體特異性結合，作用於底物發光。免疫標記物作用於底物發光是利用化學發光物質經催化 劑的催化和氧化劑的氧化，形成一個激發態的中間體，當這種激發態中間體回到穩定的基 態時，同時發射出光子（hM)，利用發光信號測量儀器測量光量子產額，根據光量子的數量， 可對待測物質進行高靈敏度和特異性的定量。
[0004] 化學發光免疫分析已成為當今世界和我國醫學臨床檢驗中必備的分析方法之一， 其化學發光酶免疫分析底物的研製引起國內外的廣泛關注。
[0005] 目前，我國醫學臨床上，應用的化學發光免疫分析儀器和其診斷試劑，基本來自於 國外，如德國的羅氏（Roche)、美國的貝克曼（Beckman)、德國的西門子（Siemens)、德國的 索林（Liaison)、美國的雅培（Abbott)、日本的東曹（AIA)等，雖化學發光免疫分析診斷試 劑的底物各異，但其價格均較昂貴，特別是日本東曹（AIA)的化學發光酶（鹼性磷酸酶）免 疫分析診斷試劑的基質液（底物）一套（200ml)約需3000元左右，其基質液是雙波長底物 (專利保密）。雙波長底物即在底物中除含有能發出待測的特異性激發螢光物，還加入能發 出非特異性激發螢光參照物，以消除非特異性激發螢光等其它幹擾，降低儀器讀數帶來的 誤差，保證實驗數據的準確性，雙波長底物具有靈敏度高、穩定、可重複性強等特點。
【發明內容】
[0006] 本發明要解決的技術問題是提供一種製備方法簡單、使用方便，樣品檢測準確性 和精密度高，成本低、保存時間長的雙波長酶免疫化學發光底物及其應用。
[0007] 本發明雙波長酶免疫化學發光底物，包括兩部分：A組分和B組分；其中，所述A組 分按以下步驟製備：將5g甘露醇和60mg 4-甲基傘形酮磷酸酯加入IOmL的0. 01mol/L、PH 9. 5的碳酸鹽緩衝液中，混勻後進行真空冷凍乾燥，即製得A組分，4°C保存；所述B組分按 以下步驟製備：將4. 5ml 2-氨基-2-甲基-1-丙醇、30mg 5-羥色胺、20mg MgCl2. 6H20和 IOOmg NaN3加入IOOml的0. 01mol/L、PH 9. 5的碳酸鹽緩衝液，混勻，即製得B組分。
[0008] 本發明雙波長酶免疫化學發光底物中所述的4-甲基傘形酮磷酸酯（4-MUP)作為 特異性激發螢光物，5-羥色胺作為發出非特異性激發螢光的參照物，甘露醇作為乾燥賦形 劑。
[0009] 本發明雙波長酶免疫化學發光底物的應用，用於化學發光酶免疫分析。
[0010] 本發明雙波長酶免疫化學發光底物的應用，作為化學發光酶免疫分析儀中的基質 液。
[0011] 本發明雙波長酶免疫化學發光底物的應用，所述的化學發光酶免疫分析儀為日本 東曹AIA化學發光酶免疫分析儀。
[0012] 本發明雙波長酶免疫化學發光底物的應用，作為日本AIA化學發光酶免疫分析中 的AIA基質液，按以下步驟進行：將本發明的B組分直接加入A組分中，混均後，置於日本 AIA化學發光酶免疫分析儀放基質液的位置，檢測步驟按日本AIA化學發光酶免疫分析儀 說明書要求進行。
[0013] 本發明雙波長酶免疫化學發光底物的應用，作為日本AIA化學發光酶免疫分析中 的AIA基質液，按以下步驟進行：
[0014] 一、在室溫條件下，將所述B組分直接加入盛放所述A組分的容器中，混均後即為 基質液，室溫條件下靜置3-5分鐘；
[0015] 二、將步驟一中製得的基質液放置在日本AIA化學發光酶免疫分析儀的基質液位 置上；
[0016] 三、將待測樣本和診斷試劑放在日本AIA化學發光酶免疫分析儀的指定位置上， 啟動日本AIA化學發光酶免疫分析儀的自動檢測程序，進行檢測；
[0017] 四、檢測完畢，讀取結果。
[0018] 鹼性磷酸酶化學發光免疫分析系統中是將鹼性磷酸酶直接標記在抗原或抗體上 (免疫標記物），再與相應的抗原或抗體特異性結合，作用於底物發光，鹼性磷酸酶標記物 作用的底物有3- (2-螺旋金剛烷）-4-甲氧基-(3-磷氧醯）-苯基1，2-二氧環乙烷（AMPro) 和4-甲基傘形酮磷酸酯（4-MUP)等。本發明是採用4-MUP作為鹼性磷酸酶標記物的特異 性底物，同時還加入5-羥色胺作為發出非特異性激發螢光的參照物，在350-380nm同一個 波長的激發光作用下，可同時發射出420_485nm和525_630nm2種突光光束，即鹼性磷酸酶 的雙波長免疫化學發光底物，可以消除非特異性激發螢光等其它幹擾，降低儀器讀數帶來 的誤差，保證實驗數據的準確性。
[0019] 本發明的雙波長免疫化學放光底物與現有技術的不同之處在於：
[0020] 1、本發明的雙波長免疫化學發光底物製備方法簡單、使用方便。
[0021] 2、本發明的雙波長免疫化學放光底物，可替代日本東曹（AIA)的化學發光酶（鹼 性磷酸酶）免疫分析診斷試劑中的基質液（底物），亦可應用於化學發光酶（鹼性磷酸酶） 免疫分析，不僅檢測數據的準確性、精密度和重複性高，且成本也僅是日本東曹的化學發光 酶（鹼性磷酸酶）免疫分析底物的1/10。
[0022] 3、本發明的雙波長免疫化學放光底物保存時間長，可達到6個月以上。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0023] 圖1為實施例3中採用雙波長免疫化學發光底物使用螢光光度儀對血清雌二醇 (E2)進行檢測的流程圖。
【具體實施方式】
[0024] 結合以下實施例和驗證試驗對本發明的雙波長免疫化學放光底物作進一步的說 明。
[0025] 實施例1
[0026] 本實施例鹼性磷酸酶的雙波長免疫化學放光底物的製備按以下步驟進行：
[0027] -、製備A組分：將甘露醇（乾燥賦形劑）5g、4_甲基傘形酮磷酸酯（4_MUP)60mg和 0. Olmol/L PH 9. 5的碳酸鹽緩衝液IOml混合均勻，進行真空冷凍乾燥，乾燥後4°C保存；
[0028] 二、製備B組分：將2-氨基-2-甲基-1-丙醇4. 5ml、5-輕色胺（Serotonin) 30mg、 MgCl2. 6H20 20mg、NaN3100mg 和 0? 01mol/L、PH 9. 5 碳酸鹽緩衝液 100ml，混合致全部溶解 後，待用。
[0029] 實施例2
[0030] 本實施例的雙波長免疫化學發光底物的使用方法，按以下步驟進行：
[0031] 將本發明的B組分直接加入A組分中，混均後，替代日本東曹（AIA)的基質液（底 物），使用時將A和B混合液，放置在日本AIA化學發光酶免疫分析儀的基質液位置上，，檢 測步驟按日本AIA化學發光酶免疫分析儀說明書要求進行。
[0032] 具體包括以下步驟：
[0033] -、在室溫條件下，將實施例1中的B組分直接加入盛放A組分的瓶子中，混均後 即為基質液，室溫條件下靜置3-5分鐘；
[0034] 二、將步驟一中製得的液體放置在日本東曹AIA化學發光酶免疫分析儀的基質液 位置上；
[0035] 三、將待測樣本和診斷試劑放在日本東曹AIA化學發光酶免疫分析儀的指定位置 上，啟動日本東曹AIA化學發光酶免疫分析儀的自動檢測程序，進行檢測；
[0036] 四、檢測時間約20分鐘，報告結果。
[0037] 本實施例中所述的日本東曹AIA化學發光酶免疫分析儀（型號360)購自合肥博 氏生物科技有限公司。
[0038] 實施例3
[0039] 本實施例採用實施例1中的雙波長免疫化學發光底物使用螢光光度儀對血清雌 二醇（E2)進行檢測，其操作步驟如圖1所示。
[0040] 驗證試驗1
[0041] 標準曲線的比較：
[0042] 在日本AIA化學發光免疫分析儀（型號360)上，分別使用AIA基質液（底物液） 和本發明雙波長免疫化學發光底物液，同時進行E2標準曲線的製備，並進行相關係數的數 學統計，結果見表1。
[0043] 表IAIA基質液（底物液）與實施例雙波長底物液製備E2標準曲線的比較
[0044]
【權利要求】
1. 一種雙波長酶免疫化學發光底物，其特徵在於包括兩部分：A組分和B組分；其 中，所述A組分按以下步驟製備：將5g甘露醇和60mg 4-甲基傘形酮磷酸酯加入10mL的 0. 01mol/L、PH 9. 5的碳酸鹽緩衝液中，混勻後進行真空冷凍乾燥，即製得A組分，4°C保存； 所述B組分按以下步驟製備：將4.5ml 2-氨基-2-甲基-1-丙醇、30mg 5-羥色胺、20mg MgCl2. 6H20和100mg NaN3加入100ml的0. 01mol/L、PH 9. 5的碳酸鹽緩衝液，混勻，即製得 B組分。
2. -種權利要求1所述的雙波長酶免疫化學發光底物的應用，其特徵在於：用於化學 發光酶免疫分析。
3. 根據權利要求2所述的雙波長酶免疫化學發光底物的應用，其特徵在於：作為化學 發光酶免疫分析儀中的基質液。
4. 根據權利要求3所述的雙波長酶免疫化學發光底物的應用，其特徵在於：所述的化 學發光酶免疫分析儀為日本東曹AIA化學發光酶免疫分析儀。
5. 根據權利要求4所述的雙波長酶免疫化學發光底物的應用，其特徵在於：按以下步 驟進行： 一、 在室溫條件下，將所述B組分直接加入盛放所述A組分的容器中，混均後即為基質 液，室溫條件下靜置3-5分鐘； 二、 將步驟一中製得的基質液放置在日本東曹AIA化學發光酶免疫分析儀的基質液位 置上； 三、 將待測樣本和診斷試劑放在日本東曹AIA化學發光酶免疫分析儀的指定位置上， 啟動日本東曹AIA化學發光酶免疫分析儀的自動檢測程序，進行檢測； 四、 檢測完畢，讀取結果。
【文檔編號】G01N33/531GK104391110SQ201410709518
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2014年11月28日 優先權日:2014年11月28日
【發明者】劉軍, 田恩江, 張靜, 李小永 申請人:天津華信康達科技有限公司, 張靜, 李小永